完全弗氏佐剂诱导脾脏T淋巴细胞凋亡预防非肥胖性糖尿病鼠1型糖尿病

为探讨脾脏T淋巴细胞凋亡在完全弗氏佐剂（CFA）预防非肥胖性糖尿病（NOD）鼠糖尿病中的作用，42只NOD雌鼠随机分成CFA组（21只）和磷酸盐缓冲盐水（PBS）组（21只），3周龄时于鼠后脚板注射CFA50μl/只和PBS50μl／只。按不同的观察时间分6周、12周和30周3个观察组。采用TUNEL末端标记法和免疫组织化学方法观察脾脏T淋巴细胞凋亡情况。结果显示：CFA诱导脾脏成熟的CD4^ T淋巴细胞凋亡，但不能诱导成熟的CD8^ T淋巴细胞凋亡；CFA能预防NOD鼠糖尿病的发生。提示CFA可通过诱导脾脏T淋巴细胞凋亡，以减少外周的CD4^ T淋巴细胞，达到预防NOD鼠1型糖尿病。     

谷氨酸脱羧酶对不同周龄的非肥胖型糖尿病小鼠发生1型糖尿病的影响

目的 谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase,GAD)对不同周龄非肥胖型糖尿病(non-obese diabetic,NOD)小鼠糖尿病免疫干预效果的影响. 方法 将3周龄NOD小鼠40只随机分为4组.3周龄组在3周龄时腹腔注射GAD 3 mU+不完全弗氏佐剂(IFA)50 μl,8周龄组在8周龄时腹腔注射GAD 3 mU+IFA 50 μl,12周龄组在12周龄时腹腔注射GAD 3 mU+IFA 50 μl,PBS为对照组.动态观察血糖、尿糖,并且眼内眦取血分离血清.28周龄时全部处死,取脾、胸腺检测淋巴细胞亚群的变化及胰腺作病理组织学检测. 结果 3周龄组胰岛个数最多,胰岛炎评分最低.在胸腺和脾脏中,CD8+/CD4+比率最大(P<0.05).各组小鼠随着周龄增加血清中IL-4水平总趋势增加,在同一时间点各组之间有差异(P<0.05).在12周和28周时,3周龄组γ-IFN水平比其他组显著降低. 结论 NOD小鼠在3周龄时腹腔注射GAD可以延缓小鼠1型糖尿病的发生,主要是通过诱导Th2类因子表达,抑制Th1类因子表达,调节CD8+/CD4+比率增加来实现.     

口服胰岛素抑制胰岛β细胞凋亡预防NOD鼠糖尿病

目的: 观察口服胰岛素免疫干预对非肥胖糖尿病(non-obese diabetic, NOD)鼠胰岛炎、β细胞凋亡和糖尿病的影响,并探讨其诱导免疫耐受的机制.方法: 86只NOD雌鼠随机分为胰岛素处理组(n=43)和磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline, PBS)对照组(n=43),从4周龄始每周灌胃人普通胰岛素1mg(70μL)2次,12周后改为每周灌胃1次至30周,对照组予等体积的PBS;于12周龄观察胰岛炎和胰岛β细胞凋亡;检测胰岛Fas和FasL的表达;测定血清IL-4和IFN-γ浓度,以及胰岛内I-Aβg7,IL-1β,IFN-γ,Fas,IL-4,TGF-β mRNA和小肠PP(Peyer's Patch)淋巴结IL-4,IFN-γ,TGF-β mRNA的表达水平.结果: NOD鼠口服胰岛素组30周龄和52周龄时发病率为55.6%和70.4%,分别比PBS对照组(85.7%和96.4%)低(P＜0.05).胰岛素组胰岛炎积分比对照组低,但差异无统计学意义(P＞0.05).胰岛素组胰岛Fas抗原表达和β细胞凋亡率均比PBS对照组低(均P＜0.05).胰岛素组胰岛内I-Aβg7,IFN-γ,IL-1β,Fas mRNA和PP淋巴结IFN-γ mRNA表达均较PBS对照组低(均P＜0.05),而IL-4,TGF-β mRNA表达较对照组高(均P＜0.05);胰岛素组血清IL-4比PBS组高,IFN-γ比PBS组低(均P＜0.05).结论:口服胰岛素能诱导NOD鼠的免疫耐受而预防糖尿病的发生,但不能阻断胰岛炎的进展.口服胰岛素能诱导调节性T细胞产生,使全身和胰岛局部T细胞由Th1向Th2转型,从而抑制Fas介导的β细胞凋亡而预防糖尿病.     

应用α-胞衬蛋白鼻黏膜免疫治疗干燥综合征的实验研究

目的 探讨α-胞衬蛋白鼻黏膜给药对干燥综合征自发鼠模型NOD小鼠SS病变的抑制作用及其机制.方法 以NOD小鼠作为干燥综合征自发鼠模型,8只1组,自4周龄开始分别鼻吸入法给予α-胞衬蛋白1 μg和1O μg,隔天给药1次,对照组分别给予磷酸盐缓冲液(PBS)10 μl及谷胱甘肽转移酶(GST)10 μg,观察小鼠饮水量的改变.测定血清中的抗α-胞衬蛋白及M3受体蛋白多肽(M3RP)抗体,抗干燥综合征抗原(SS)A抗体、SSB抗体、类风湿因子(RF)及抗核抗体(ANA)等自身抗体.酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定白细胞介素(IL)-10和干扰素-γ,流式细胞仪检测脾细胞FoxP3+ T细胞的表达,应用HE染色和免疫组化方法 分别检测小鼠颌下腺、腮腺的病理学改变及α-胞衬蛋白的表达.结果 (1)鼻吸入α-胞衬蛋白可以抑制NOD小鼠自身抗体的产生.α-胞衬蛋白鼻黏膜免疫组的α-胞衬蛋白抗体和M3RP抗体滴度较对照组减低.差异有统计学意义(P＜0.05).至小鼠17周龄,对照组分别有5只鼠出现ANA阳性,而1 μg组和10 μg组分别有2只和3只鼠ANA阳性.(2)鼻吸入α-胞衬蛋白可使NOD小鼠血清IFN-γ水平降低.α-胞衬蛋白1 μg组、10 μg组、PBS组及GST组小鼠血清干扰素-γ水平,分别为(42±16)、(37±15)、(87±18)及(72±11)pg/ml,α-胞衬蛋白给药组明显低于对照组(P＜0.05),而IL-10在各组间差异无统计学意义.(3)鼻吸入α-胞衬蛋白可上调NOD小鼠Foxp3+ T细胞的数量:1 μg、10 μg、PBS及GST组小鼠脾细胞的表达Foxp3+的CD4+ CD25+ T细胞占CD4+CD25+ T细胞的比例分别为(4.0±1.7)%、(4.3±1.0)%、(2.2±0.6)%、(2.3±0.7)%,α-胞衬蛋白治疗组较对照组明显提高(均P＜0.05).(4)鼻吸入α-胞衬蛋白可以抑制NOD小鼠腺体淋巴细胞浸润和α-胞衬蛋白的表达.α-胞衬蛋白给药组淋巴细胞浸润较对照组少,且应用α-胞衬蛋白多抗免疫组化的方法检测,α-胞衬蛋白给药组的α-胞衬蛋白表达明显减少.(5)鼻吸入α-胞衬蛋白可以降低NOD小鼠的饮水量.α-胞衬蛋白1 μg、10 μg、PBS及GST组的小鼠于16周龄时饮水量分别为(39.2±2.1)、(40.4±2.5)、(49.3±3.1)及(51.6±2.8)ml,与对照组相比,α-胞衬蛋白免疫诱导后可减少患鼠的饮水量(P＜0.05).结论α-胞衬蛋白是SS的致病性抗原,利用该蛋白鼻黏膜免疫可以上调调节性T细胞的数量,抑制SS动物自身抗体的产生及腺体中淋巴细胞浸润.     

人谷氨酸脱羧酶65 DNA疫苗预防非肥胖糖尿病小鼠糖尿病的机制探讨

目的　探讨人谷氨酸脱羧酶 6 5 (GAD6 5 )DNA疫苗预防非肥胖糖尿病 (NOD)小鼠糖尿病的作用机制。方法　 (1) 6 2只 4周龄NOD雌鼠分为PBS(2 1只 )、PcDNA(2 0只 )、GAD6 5 (2 1只 ) 3组 ,由胫前肌分别注射PBS、质粒PcDNA3 1、人GAD6 5DNA疫苗 5 0 μg ,1周后重复 1次。观察 30周龄的累积糖尿病发病率。 (2 )各组取 12周龄未发病NOD鼠 (n =10 )胰腺HE染色观察胰岛炎 ;并用末端脱氧核糖核酸缺口标记法 (TUNEL)加SABC法检测胰岛 β细胞凋亡 ;ELISA法测定血清、脾细胞培养上清干扰素γ(IFN γ)和白细胞介素 4 (IL 4 )水平 ;RT PCR半定量检测脾脏IL 4、IFN γ和核因子NF ATc、NF ATpmRNA表达水平。结果　 (1) 30周龄时 ,PBS、PcDNA、GAD6 5组发病率分别为 95 2 %、80 0 %、6 1 9%。GAD6 5组发病率低于PBS组 (P =0 0 0 8)。 (2 ) 12周龄时GAD6 5组胰岛炎积分 (0 99± 0 71)和胰岛 β细胞凋亡率 (0 75 % )均低于PBS组 (2 16± 0 78,P =0 0 0 1;8 97% ,P=0 0 14 )和PcDNA组 (1 72± 0 5 9,P =0 0 2 7;2 6 5 % ,P =0 0 2 3)。GAD6 5组脾脏NF ATc、IL 4mRNA相对吸光度值及血清IL 4水平分别为 1 93± 0 34、0 70± 0 16、36 pg/ml± 8pg/ml,显著高于PBS组 (0 79± 0 15、0 4 9± 0 11、19pg/ml     

孕鼠给予葡萄球菌肠毒素B对新生子代鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响

目的:观察妊娠期孕鼠给予葡萄球菌肠毒素B（SEB）对其新生子代鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响。方法:在SD大鼠妊娠第16天给予尾静脉注射15 μg SEB,同时设立磷酸盐缓冲液（PBS）对照组。获取出生后3d的新生鼠脾脏并分离淋巴细胞,将淋巴细胞与ConA或SEB共培养3 d,流式细胞仪检测新生鼠脾脏淋巴细胞亚群,液体闪烁仪测定细胞的增殖能力。结果:SEB组新生鼠脾脏中CD4+T细胞比例在ConA或SEB刺激第1天分别较PBS组明显增加,但在第2~3天却明显降低（P<0.05~P<0.01）;而SEB组新生鼠脾脏中CD4+TCR Vβ8.2+T细胞比例在ConA或SEB刺激的第1天及CD8+ TCR Vβ8.2+ T细胞比例分别较PBS组明显增加（P<0.05~P<0.01）。SEB组新生鼠脾脏淋巴细胞在ConA或SEB刺激后第1天增殖能力明显强于PBS组,但在第2~3天的增殖能力却又明显低于PBS组（P<0.05~P<0.01）。结论:妊娠期孕鼠给予SEB可以影响新生鼠脾脏淋巴细胞的体外增殖。     

普伐他汀对非肥胖糖尿病小鼠糖尿病预防作用的机制

目的 探讨普伐他汀对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠糖尿病的预防作用及机制.方法 3-4周龄NOD雌鼠分为4组,对照组(摄普通饲料,30只),小剂量组(普伐他汀1 mg·kg-1·d-1,29只),中剂量组(普伐他汀10 mg·kg-1·d-1,29只)和大剂量组(普伐他汀40 mg·kg-1·d-1,30只),观察糖尿病发病至30周龄.各组另取8只12周龄未患病NOD鼠,胰腺HE染色观察胰岛炎;制备脾细胞悬液后,流式细胞仪检测脾细胞中CD4+ CD25+ 调节性T细胞数量;氚-胸腺嘧啶核苷掺入法检测脾细胞对特异性抗原的刺激增殖反应;ELISA法测特异性抗原刺激后脾细胞培养上清干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平;RT-PCR检测脾脏IFN-γ、IL-4mRNA的表达水平.结果 30周龄时,大剂量普伐他汀组NOD鼠糖尿病的发病较对照组明显降低(P＜0.01).12周龄时,大剂量普伐他汀组胰岛炎严重程度低于对照组(P＜0.001);大剂量普伐他汀组脾细胞培养上清中IFN-γ水平(42±20)Pg/ml,脾脏IFN-γmRNA表达水平(0.24±0.10)pg/ml均低于对照组(157±32)pg/ml,(0.81±0.18)pg/ml,均P=0.000),IL-4水平(91±22)pg/ml,脾脏IL-4mRNA表达水平(0.39±0.18)pg/ml均高于对照组[(44±20)pg/ml,P=0.000;(0.20±0.08)pg/ml,P=0.002)];小、中、大剂量普伐他汀组和对照组特异性抗原增殖指数分别为3.85±0.35、3.53±0.82、3.32±0.44、3.70±0.62,各组间差异无统计学意义(均P＞0.05);小、中、大剂量普伐他汀组和对照组脾细胞中CD4+ CD25+调节性T细胞数量分别为(9.6±2.6)%、(10.2±2.4)%、(8.9±2.7)%、(10.0±2.4)%,各组间差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 早期使用大剂量普伐他汀进行干预,可以通过下调Th1细胞因子INF-γ,上调Th2细胞因子IL-4,促使免疫平衡向Th2方向偏移,从而减轻NOD鼠胰岛炎,预防NOD鼠糖尿病的发生.     

黄芪多糖对糖尿病鼠T细胞亚群的免疫调节作用

目的 探讨黄芪多糖（APS）对NOD小鼠T细胞亚群的免疫调节机制。方法 观察APS组和对照组NOD鼠胰岛浸润淋巴细胞免疫组化、脾T淋巴细胞CD4^＋／CD8^＋亚群比值，RT—PCR法检测两组胰岛中IL-1β、IL-2、IL-6、IL-12、TNF—α和INF-γ Th1型细胞因子的mRNA表达。结果 APS可以降低NOD小鼠1型糖尿病的发病率，下降胰岛浸润炎症细胞及脾脏中的CD4^＋／CD8^＋亚群比值。与对照组相比，APS组胰岛IL-1β、IL-2、IL-6、IL-12、TNF-α和INF-1的mRNA表达水平明显下调。结论 APS能纠正NOD小鼠Th1型细胞／细胞因子的免疫失衡状态，预防1型糖尿病的发生。     

Bc-tIGF-1对NOD 小鼠T细胞亚群的调节作用

目的　了解Bc tIGF 1是否能预防NOD小鼠糖尿病 (DM )的发生并探讨其免疫机制。方法　 4周龄时给NOD雌性小鼠腹腔注射 (ip)Bc tIGF 17.5 μg/ (kg·d) ,连续应用 2周 (n =10 ) ;同时等体积生理盐水ip 2周作为对照组 (n =10 )。 4 0周龄处死小鼠 ,测定血清C 肽和谷氨酸脱羧酶抗体 (GAD -Ab) ,并观察脾脏T细胞亚群、胰岛病理和淋巴细胞免疫组化变化。结果　Bc tIGF 1组DM发病率 ( 5 0 % )明显低于NS组 ( 90 % ,P <0 .0 5 ) ,且发病时间延缓 ,胰岛炎症程度也明显减轻 ;脾脏CD 4T淋巴细胞较NS组明显降低 ,CD 8细胞比例则显著升高 (P <0 .0 1)。免疫组化显示Bc tIGF 1组胰岛CD 4T细胞浸润较对照组减少且局限在胰岛周围。两组的GAD -Ab阳性率无显著性差异。结论　早期应用Bc tIGF 1可减少和延缓NOD小鼠糖尿病发病 ,其机制可能与恢复CD 4和CD 8T细胞亚群平衡、抑制CD 4T细胞活动有关     

皮下注射胰岛素抑制胰岛β细胞凋亡预防NOD鼠糖尿病

目的：观察皮下注射胰岛素免疫干预对非肥胖糖尿病（non-obese diabetic，NOD）鼠胰岛炎、B细胞凋亡和糖尿病的影响，并探讨其诱导免疫耐受的机制。方法：60只NOD雌鼠随机分为胰岛素处理组（n=34）和磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）对照组（n=28），分别于4周、12周、20周、28周皮下注射中效胰岛素优泌林N（Humulin N）6U（60μL）＋不完全弗氏佐剂（incomplete Freund＇s adjuvant，IFA）60μL，对照组予PBS（60μL）＋IFA（60μL）。于12周龄观察胰岛炎和胰岛B细胞凋亡；检测胰岛Fas和FasL的表达；测定血清IL-4和IFN-γ浓度，以及胰岛内I-Aβ^x7，IL-1β，IFN-γ，Fas，IL-4 mRNA的表达水平。结果：NOD鼠皮下注射胰岛素加IFA组30周龄和52周龄时发病率仅为21．4％和28．6％，而皮下PBS加IFA组为71．4％和85．7％（P〈0．05）。胰岛素组胰岛炎积分比对照组低，但差异无统计学意义（P〉0．05）。胰岛素组胰岛Fas抗原表达和B细胞凋亡率均比PBS对照组低（均P〈0．05）。胰岛素组胰岛内I-Aβ^x7，IFN-γ，IL-1β，FasmRNA表达较PBS对照组低（均P〈0．05），而IL-4mRNA表达较对照组高（P〈0．05）；胰岛素组血清IL-4比PBS组高，IFN-γ比PBS组低（均P〈0．05）。结论：皮下注射胰岛素能诱导NOD鼠的免疫耐受而预防糖尿病的发生，但不能阻断胰岛炎的进展。皮下注射胰岛素能诱导调节性T细胞产生，使全身和胰岛局部T细胞由，Th1向Th2转型，从而抑制Fas介导的B细胞凋亡而预防糖尿病。     

Effects of Ganoderma lucidum spores on sialoadenitis of nonobese diabetic mice

Background Sjǒgren syndrome （SS） is a systematic autoimmune disease, on which traditional therapeutic agents show limited effect. More effective agents with longer-lasting and fewer side effects are needed in the clinic. The aim of this study was to investigate the effects of Ganoderma lucindum spores （GLS） on sialoadenitis of nonobese diabetic （NOD） mice. Methods Thirty-two female NOD mice were assigned randomly into 4 groups： low-dose GLS-treated （L-GLS） group and high-dose GLS-treated （H-GLS） group, a dexamethasone group, and a normal saline （NS） control group. Stimulated total saliva flow rate （STFR）, area of lymphocytic infiltration in submandibular glands and ratios of CD4^＋ and CD8^＋ T lymphocytes and B lymphocytes in peripheral blood as well as apoptosis of these subsets and serum IgG level were tested after 10 weeks of treatments. Differences among the groups were analyzed by one-way analysis of variance （ANOVA）, Student-Newman-Keuls Test （SNK） was used between each two groups and a P 〈0.05 was considered statistically significant. Results STFR of the high-dose GLS group increased significantly after a 10-week treatment compared with those of the NS control group （P 〈0.05）. The incidence of sialoadenitis in GLS-treated NOD mice groups showed no significant difference compared with the control group （P 〉0.05）, but the area of lymphocytic foci in both the H-GLS and L-GLS groups decreased significantly to 50% of the NS control group （P 〈0.05）; the ratio of CD4^＋/CD8^＋ T lymphocytes and apoptosis of B lymphocytes of NOD mice with sialoadenitis were less and apoptosis of CD4^＋ and CD8^＋ T lymphocytes were significantly increased compared with the control group （P 〈0.05）. After pretreatment with H-GLS before sialoadenitis onset, the ratio of CD4^＋/CD8^＋ T lymphocyte and the serum IgG levels of NOD mice decreased significantly （P 〈0.05）. Conclusions Pretreatment with H-GLS can relieve symptoms of sialoadenitis in NOD mice. GLS has some protective effects on sialoadenitis in NOD mice through increasing STFR and decreasing the area of lymphocytic foci by regulating the ratio of CD4^＋/CD8^＋ T and apoptosis of B lymphocytes.     

异基因骨髓干细胞移植后重建NOD小鼠T淋巴细胞亚群比值的研究

目的：探讨骨髓干细胞移植对NOD小鼠免疫系统重建和预防糖尿病发生的机制。方法：①21只6周龄NOD雌性鼠接受9．5cGy全身照射后随机分为两组,移植组10只,对照组11只;②每周监测血常规和血糖的变化;③小鼠饲养至发生糖尿病时或至30周龄时处死,摘取脾脏分离淋巴细胞,通过流式细胞术检测移植鼠与非移植鼠脾脏CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋淋巴细胞;采用ELISA法测定血清中IFN-γ水平;吉姆萨染色法计数小鼠骨髓分裂相中Y染色体所占比例,检测嵌合程度并作为细胞植活标记。结果：①移植后NOD受鼠经骨髓细胞的性别染色体检测显示均植入成功;②实验组糖尿病发病率显著低于对照组（P〈0．05）,且发病时间与对照组比较明显延缓（P〈0．05）;③实验组和对照组CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞比较差异无统计学意义（P〉0．05）,但实验组CD8^＋T细胞显著高于对照组（P〈0．05）。实验组的CD4^＋／CD8^＋比值显著低于对照组（P〈0．05）,血清IFN7数值也显著低于对照组水平（P〈0．01）。结论：NOD鼠在通过异基因骨髓干细胞移植后,能降低糖尿病的发生率和延缓糖尿病的发生,可能与移植后免疫重建,下调CD4^＋／CD8^＋T细胞的比值,使Th1／Th2极化向Th2偏移等机制相关,异基因骨髓干细胞移植可能成为防治1型糖尿病的新途径。     

SiRNA-HDAC5 对非肥胖型糖尿病鼠组蛋白修饰异常的干预及其治疗作用

目的：通过小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)干预非肥胖型糖尿病(non-obese diabetic，NOD)鼠脾 CD4+ T细胞组蛋白去乙酰化酶5(histone deactylase 5，HDAC5)的表达，检测免疫、炎症及肾功能相关指标，评估siRNAHDAC5 对NOD鼠的治疗作用，探讨HDAC5与糖尿病肾病之间的关系。方法：随机将NOD鼠分为3组，在12周龄时分 别于尾静脉注射siRNA-HDAC5，siRNA-Control或生理盐水，于18，24和30周龄取样本检测，以血糖仪检测各组NOD 鼠血糖，ELISA检测尿白蛋白排泄率及血清细胞因子IL-1，IL-6，IL-18和TNF-α水平。实时定量PCR检测各组NOD鼠 CD4+ T细胞CD11a，CCR5以及CX3CR1 转录水平，Western印迹检测NOD鼠脾脏CD4+ T细胞HDAC5蛋白水平。结果： 与未干预对照组相比，HDAC5干预组小鼠血糖和尿白蛋白排泄率均显著降低，血清IL-1，IL-6，IL-18及TNF-α细胞因 子水平下降，脾CD4+ T细胞CD11a，CCR5以及CX3CR1明显降低。结论：阻断NOD鼠的HDAC5表达能减缓糖尿病鼠 肾损伤的发生和发展。     

脂质体与完全费氏佐剂预防NOD鼠胰岛炎探讨

OBJECTIVE: To explore the effects of complete Freund's adjuvant (CFA), incomplete Freund's adjuvant(IFA), large multilamellar liposome (LML) and small cationic liposome (DOTAP) on insulitis and diabetes. METHODS: 1. 3-week-old non-obese diabetic(NOD) female mice were randomly divided into 3 groups: CFA group (injected subcutaneously in the hind footpad, n = 16), IFA group (injected intraperitoneally, n = 16) and PBS group (injected subcutaneously in the hind footpad, n = 16). Three mice from each group (9 in total) were killed at the age of 12 weeks for the analysis of pancreatic pathology, and the others were not killed until they were 30 weeks old for diabetes incidence. 2. 3-week-old NOD female mice were randomly divided into 3 groups and injected intraperitoneally with LML (n = 13), DOTAP (n = 13) and PBS (n = 13), respectively. The insulitis score and diabetes incidence were estimated in the same way. RESULTS: 1. CFA injected subcutaneously in the hind footpad could significantly reduce the insulitis score and decrease diabetes incidence in NOD mice. At the age of 30 weeks, the incidence of diabetes in the CFA group was lower than that in the PBS group (injected subcutaneously in the hind footpad) (9.2% vs 81.8%, P = 0.001). At the age of 12 weeks, the insulitis score in the CFA group was lower than that in the control group [(0.05 +/- 0.02) vs (0.54 +/- 0.11), P < 0.001]. 2. LML injected intraperitoneally could significantly reduce the insulitis score in NOD mice. At the age of 12 weeks, the insulitis score in the LML group was lower than that in the PBS control group (injected intraperitoneally) [(0.16 +/- 0.02) vs (0.58 +/- 0.06), P < 0.001]. At the age of 30 weeks, there were no significant differences in the diabetes incidence between the LML group and the PBS group (60% vs 90%). 3. The protective effect of CFA was better than that of LML in NOD mice. CONCLUSION: CFA injected subcutaneously in the hind footpad may prevent NOD mice from developing diabetes and reduce the insulitis severity. Although the protective effect of CFA is better than that of LML, LML can lessen the insulitis severity and may become a new preventive strategy in NOD mice.     

完全弗氏佐剂抑制NOD鼠胰岛β细胞凋亡及其机制

目的:探讨完全弗氏佐剂( complete Freund’s adjuvant, CFA)对非肥胖糖尿病( nonobese dia-betic, NOD)鼠胰岛β细胞凋亡及凋亡相关基因Fas,FasL和Bcl-x表达的影响。方法:将4周龄NOD雌鼠随机分为CFA组(n=5)和生理盐水( NS)对照组(n=5 ) ,给CFA组鼠后脚板注射50μLCFA,对照者鼠后脚板注射等量NS。监测血糖,若血糖连续2 d≥11.1 mmol /L即诊断为糖尿病。当NOD鼠发生糖尿病或至30周龄时,处死动物,取胰腺组织制成薄切片,HE染色观察胰岛炎,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记( TUNEL)及ABC免疫组织化学双标记染色观察并计数凋亡的胰岛β细胞,ABC免疫组织化学法染色观察并记数Fas,FasL和Bcl-x表达阳性细胞。结果:至NOD鼠30周龄时,CFA处理组鼠无1只发生糖尿病,对照组鼠有3只发生糖尿病;CFA处理组的胰岛炎积分低于NS对照组(1.820±0.962 vs. 3.020±1.040,P<0.05 ) ;CFA处理组胰岛β细胞凋亡率、Fas阳性细胞率、FasL阳性细胞率均低于NS对照组[ (10.2±2.8) % vs. (15.9±6.5) %,(54.9±14.5)% vs.(75.7±12.9) %,(20.3±10.4) % vs. (27.9±12.0) %,P<0.05] ,Bcl-x阳性细胞率高于NS对照组[ (74.9±10.7) % vs. (66.0±18.3) %,P<0.05]。结论:CFA能够减轻NOD鼠胰岛β细胞凋亡,其机制与减少促凋亡基因Fas和FasL表达及增加抑制凋亡基因Bcl-x表达有关。     

脂质体与完全弗氏佐剂预防NOD鼠胰岛炎探讨

目的 :探讨完全弗氏佐剂 (CFA)、不完全弗氏佐剂 (IFA)、大复层脂质体 (LML)、小单层阳离子脂质体(DOTAP)对NOD鼠胰岛炎和糖尿病发病的影响。方法 :①将 3周龄的NOD雌鼠随机分为 3组 ,分别给予CFA后脚板注射 (n =16 ) ,IFA和PBS乳化后腹腔注射 (n =16 ) ,单独PBS后脚板注射 (n =16 )。观察 12周龄胰岛病理及 30周龄糖尿病发病情况。②将 3周龄的NOD雌鼠随机分为 3组 ,分别给予大复层脂质体 (LML) (n =13) ,小单层阳离子脂质体 (DOTAP) (n =13) ,单独PBS腹腔注射 (n =13) ,同上观察胰岛病理及糖尿病发病情况。结果 :①CFA后脚板注射能明显降低胰岛炎计分 ,减少糖尿病的发生。 30周龄时 ,CFA组的发病率明显低于PBS后脚板注射对照组 (分别为9 2 %和 81 8% ,P =0 .0 0 1)。 12周龄时 ,CFA组胰岛炎计分明显低于对照组 [分别为 (0 0 5± 0 0 2 )和 (0 5 4± 0 11) ,P<0 .0 0 1]。②LML腹腔注射能明显降低胰岛炎计分。 12周龄时 ,LML组胰岛炎计分明显低于PBS腹腔注射对照组 [分别为 (0 16± 0 0 2 )和 (0 5 8± 0 0 6 ) ,P <0 .0 0 1]。 30周龄时 ,LML组糖尿病发生率为 6 0 % ,对照组为 90 % ,两组间无统计学差异。③在预防胰岛炎的作用上 ,CFA优于LML。结论 :CFA后脚板注射可预防NOD鼠发生糖尿病并减     

NOD小鼠CD8α+抗原基因克隆载体的构建及其相关蛋白在树突状细胞中的表达

目的：构建NOD小鼠CD8α⁺抗原基因重组慢病毒载体,探讨其在树突状细胞（DCs）中的表达,阐明1型糖尿病（T1DM）的发病机理。方法：设计CD8α+基因特异性引物,从NOD小鼠胸腺淋巴细胞中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增CD8α⁺基因,与质粒载体pCDF1-MCS2-EF1-COPGFP进行连接重组,经过转化、筛选、鉴定和序列测定后,应用Western blotting法检测CD8α⁺基因的表达。应用Nanofectin脂质体转染试剂将含有目的基因的质粒转染HEK293细胞,进行重组慢病毒载体包装,将包装后的重组慢病毒颗粒感染DCs,采用Western blotting法检测CD8α⁺蛋白的表达。结果：成功构建了NOD小鼠CD8α⁺抗原基因的重组质粒载体,重组表达载体经转染HEK293细胞获得了重组病毒的原液,重组病毒扩增后感染DCs,免疫荧光下可见DCs内含有绿色荧光蛋白(GFP)表达。结论：NOD小鼠CD8α⁺抗原基因重组病毒载体构建成功,且有相关蛋白表达。
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Copolymer 1保护高眼压大鼠视神经的免疫学机制

目的 探讨Copolymer 1(Cop1)对实验性高眼压性青光眼视神经保护作用的相关免疫学机制.方法 对27只大鼠采用烧灼巩膜上静脉制作双眼高眼压模型,在眼压升高的第3周,取12只模型大鼠于后脚皮内注射100 μg Cop 1和等体积的完全弗氏佐剂(CFA)混合乳化液(实验组);另取12只模型大鼠作为对照组,后脚皮内注射等体积PBS和CFA的混合乳化液;其余3只模型大鼠作为空白对照组,不做任何处理.1周后取出大鼠脾淋巴细胞,采用流式细胞仪检测T细胞亚群的变化;ELISA法检测T细胞分泌细胞因子的变化;[3H] thymidine标记检测淋巴细胞的增殖.结果 实验组大鼠的CD4+ CD25+ Treg/CD4+比值显著高于对照组和空白对照组(P＜0.05).实验组IL-10分泌量和分泌浓度均显著高于对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),但三组间INF-γ分泌量和分泌浓度比较差异均无统计学差异(P＞0.05).三组间体外刺激淋巴细胞指数比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Cop 1能诱导CD4 +CD25-向CD4+ CD25+ Treg转化,促进Th1转化为Th2,并增加IL-10的分泌.