胃癌及癌前组织中端粒酶RNA与端粒酶活性检测及其临床意义

目的：研究胃癌及癌前病变胃粘膜端粒酶RNA与端粒酶活性检测及其意义。方法：选取经病理组织学证实的有粘膜活检标本共150例，包括慢性浅表性胃炎（CSG）32例、肠上皮化生（IM）36例、不典型增生（AH）34例、胃癌（GC）48例，分别采用原位逆转录聚合酶链反应（PCR）、端粒酶重复序列扩增法（TRAP）检测上述胃粘膜端粒酶RNA与端粒酶活性。结果：原位逆转录PCR检测胃粘膜活检标本的端粒酶RNA阳性率为55．3％（83／150），显高于TRAP法检测端粒酶活性检出率（40．0％、60／150，P＜0．05）。在不同胃粘膜病变中，IM、AH及GC的端粒酶RNA阳性率分别为47．2％、52．9％、100％，而CSG胃粘膜中未检出端粒酶RNA；IM、AH组端粒酶RNA阳性率亦明显低于GC组（P＜0．05）。端粒酶RNA主要分布于胃粘膜癌细胞及癌前病变上皮细胞的胞核内。结论：端粒酶RNA与胃癌的发生密切相关。原位逆转录PCR检测胃粘膜端凿酶RNA对胃粘膜癌变的早期诊断和预测有重要价值，而且可能是较端粒酶活性更灵敏的生物学指标。     

胃癌活检标本端粒酶检测结果分析

目的 探讨胃癌活检标本端粒酶检测在原发性胃癌诊断中应用的意义。方法 采用端粒重复序列扩增法（TRAP法）检测胃癌活检标本端粒酶活性。结果 我们对71例胃癌和胃十二指肠溃疡活检标本进行了端粒酶活性检测并作了病理确诊,15例非胃癌标本未见端粒酶阳性结果;56例胃癌标本,阳性率为73．21％;胃腺癌标本52例,阳性率为73．08％;低分化腺癌34例,阳性率76．47％,低中分化腺癌16例,阳性率68．75％,中分化腺癌2例,阳性率50％。结论 胃癌组织端粒酶检测阳性率高,检测胃癌活检组织端粒酶活性对胃癌的辅助诊断有重要意义。     

TRAP法测定胃癌端粒酶的意义

目的　观察良恶性胃病端粒酶活性的表达。方法　TRAP法测定端粒酶活性。结果　胃癌组端粒酶阳性率为80 8%(2 1/2 6 ) ,慢性萎缩性胃炎伴中、重度不典型增生端粒酶阳性率为 44 4 %(8/18) ,慢性浅表性胃炎组无端粒酶表达 (0 /13) ,三组间差异显著 (P >0 0 5 )。结论　胃癌端粒酶活性高度表达 ,癌前病变组已有表达端粒酶活性 ,而正常组织不表达端粒酶活性 ,提示端粒酶可作为胃肠道肿瘤诊断的有力生物标志 ,对端粒酶活性阳性癌前病变进行监测有助于早期发现胃癌。     

胃癌活检标本端粒酶检测结果分析

目的探讨胃癌活检标本端粒酶检测在原发性胃癌诊断中应用的意义.方法采用端粒重复序列扩增法(TRAP法)检测胃癌活检标本端粒酶活性.结果我们对71例胃癌和胃十二指肠溃疡活检标本进行了端粒酶活性检测并作了病理确诊,15例非胃癌标本未见端粒酶阳性结果;56例胃癌标本,阳性率为73.21%;胃腺癌标本52例,阳性率为73.08%;低分化腺癌34例,阳性率76.47%,低中分化腺癌16例,阳性率68.75%,中分化腺癌2例,阳性率50%.结论胃癌组织端粒酶检测阳性率高,检测胃癌活检组织端粒酶活性对胃癌的辅助诊断有重要意义.     

反义端粒酶RNA抑制肝癌细胞生长的机制

目的：观察反义端粒酶RNA对SMMC－7721肝癌细胞系的作用,探讨抗端粒端治疗在原发性肝癌治疗中的意义。方法：采用脂质体介导的方式将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212/hTP转入SMMC7721细胞中,经潮霉素筛选,克隆细胞株扩增鉴定后,采用TRAP－PCR－ELISA,FCM及电镜检测反义端粒酶RNA对转染细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响;同时进行裸鼠荷瘤生长实验观察。结果：TRAP－PCR－ELISA法检测细胞端粒酶活性的结果为：实验组吸光度值为0．980,对照组吸光度值为2．861;FCM检测细胞凋亡结果为：实验组13．8％,对照组未见有凋亡峰形成,电镜观察发现转染细胞表现出典型的凋亡细胞形态。裸鼠移植瘤生长实验发现,转染细胞生长明显受到抑制作用,说明反义端粒酶RNA显抑制SMMC7721细胞的端粒酶活性,并且对其有显的促凋亡作用。结论：反义端粒酶RNA能有效地抑制肝癌细胞端粒酶活性,同时显促进癌细胞凋亡。     

反义端粒酶RNA对肺癌细胞A549抑制作用研究

目的 探讨反义人端粒酶RNA(human telomeric,RNA,hTR)对肺癌细胞A549端粒酶活性和细胞增殖的抑制作用，研究以端粒酶为靶的肺癌基因治疗的可能性。方法 将端粒酶hTR的cDNA反向插入到逆转录病毒载体pLXRN中，转染包装细胞PT67后获得反义hTR重组病毒，感染肺癌细胞A549。处理前后采用TRAP法检测端粒酶活性，光镜观察细胞形态，DNA电泳观察凋亡情况。结果 作用后端粒酶活性和细胞增殖受到明显抑制，并出现明显的细胞凋亡。结论 反义hTR 对肺癌细胞A549端粒酶活性具有明显的抑制作用，使肺癌细胞A549生长抑制，促进细胞凋亡。     

端粒酶调节相关基因TRAP与肿瘤生物学特性的关系

目的：研究TRAP基因在人肿瘤组织中的表达及其与人端粒酶逆转录酶(hTERT)的作用相关性，探讨其在人肿瘤发生中的作用。方法：通过原核表达TRAP蛋白免疫新西兰白兔，制备特异性多克隆抗体；免疫组化检测TRAP及hTERT在人肿瘤组织中的表达；通过构建TRAP真核表达载体、基因转染，观察TRAP对细胞hTERT转录、端粒酶活性和癌细胞生长及成瘤性的影响。结果：通过大肠杆菌表达的TRAP蛋白免疫、制备多克隆抗体，经Westem blot鉴定与TRAP具有特异结合性；免疫组化显示247例恶性肿瘤中有213例TRAP阳性，表达率为86．2％，而在所有癌旁组织中TRAP为阴性。另外，交界性及癌前病变与良性病变组织中TRAP表达差异也有显著性：进一步检测卵巢生发上皮肿瘤、乳腺癌、肝癌及中枢神经系统肿瘤组织hTERT表达，显示hTERT与TRAP表达的结果相一致。TRAP正义转染使hTERT及端粒酶活性升高，细胞增殖加快；而反义转染时，两者均下降，细胞增殖受抑。裸鼠成瘤性实验表明：正义TRAP使癌细胞成瘤性增强，而反义则抑制移植瘤的生长。结论：TRAP表达存在于人癌组织及部分癌前病变，与癌细胞恶性表型相关，并与hTERT表达一致。TRAP基因参与对端粒酶的调节作用，可能与人肿瘤发生有关。     

端粒酶反义RNA对人髓性白血病细胞系HL-60的作用

目的 探讨抗端粒酶在急性白血病治疗中的意义。方法 用脂质体介导法将pBBS212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体）导入人髓性白血病细胞系HL-60中,采用TRAP法测定端粒酶活性,细胞生长动力学检测,电镜,DNA片段分析等方法观察其对HL-60细胞的端粒酶活性、细胞增殖及细胞凋亡影响。结果 端粒酶反义RNA能显抑制HL-60细胞的端粒酶活性,抑制HL-60细胞的增殖并促进其凋亡。结论 以端粒酶反义RNA抑制端粒酶活性是治疗白血病的潜在途径。     

端粒酶在宫颈癌中的表达及意义

目的探讨端粒酶与宫颈癌及与淋巴结转移的关系。方法采用银染色端粒酶重复扩增法(TRAP)检测各类宫颈组织中端粒酶活性。结果正常宫颈、慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变组织端粒酶的阳性表达率分别为6．67％、8．57％、26．32％，与宫颈癌组织阳性表达率(78．85％)比较具有非常显著性差异(P＜0．01)；宫颈癌组织无或有淋巴结转移其端粒酶活性阳性表达率分别为69．70％、94．74％，两者之间比较亦有显著性差异(P＜0．05)。结论端粒酶活性在宫颈癌组织中增高且与淋巴结转移相关。     

胃癌及癌前状态端粒酶活性的研究

为探讨端粒酶活性异常在胃癌发生及发展中的作用,采用TRAP银染法对胃粘膜端粒酶活性进行检测:结果端粒酶阳性率胃癌组织为100％(8/8),胃癌前状态组织为400％(4/10),浅表性胃炎为阴性(0/9)。胃癌组织阳性率最高(与其他组织比较,均P<0.05),而胃癌前状态与浅表性胃炎无显著性差异(P>0.05)。提示端粒酶激活参与胃癌的形成和发展,检测端粒酶活性可能有助于胃癌的早期诊断。     

端粒酶基因hTR在大肠癌中的表达及其临床意义

目的　探讨大肠癌中端粒酶基因hTR表达与临床参数的关系 ,评价hTR表达检测在大肠癌诊断中的价值。方法　用原位杂交的方法检测端粒酶基因hTR在大肠癌、癌旁组织和大肠良性病变中的表达和分布情况。结果　结果 5 1例大肠癌中hTR基因表达阳性率为 94 .1% (48 5 1) ,5 1例癌旁组织中hTR基因表达阳性率为 0 (0 5 1) ,31例大肠良性病变中hTR基因表达阳性率为 3.2 % (1 31)。大肠癌组织中hTR基因的表达与癌旁组织、大肠良性病变比较差异有显著性 (P均 <0 .0 1)。大肠癌组织中hTR的表达与患者性别、病变部位、病理分类大体类型、淋巴结转移和临床分期无相关性 (P均 >0 .0 5 ) ,但与肿瘤病理分级相关 (P <0 .0 5 )。结论　端粒酶基因hTR表达检测在大肠癌诊断中可能有一定的价值。     

Stable expression of antisense hTR inhibits in vitro pancreatic cancer cell growth

目的：为探讨抑制人端粒酶的模板RNA成分（hTR）能否抑制人胰腺癌细胞的端粒酶活性及细胞生长能力。方法：用分子克隆方法将593bp的hTR全长cDNA反向亚克隆到哺乳细胞表达载体pcDNA3.1（-）的多克隆位点上,以构建hTR反义表达质粒。酶切及序列分析证实此质粒为hTR反义表达质粒。此重组表达质粒与空质粒一起,通过脂质体法转导到人胰腺癌panc1细胞,并用G418筛选抗性克隆,所产生的稳定生长克隆用位于pcDNA3.1多克隆位点两侧的T7及GBH引物进行PCR扩增以证实外源hTR的存在。最后,对这些细胞的生长曲线、内源性hTR的表达、端粒酶活性及锚着非依赖性生长特性进行了分析。结果：转导有反义hTR重组质粒的人胰腺癌细胞与转导空载体及未转导任何质粒的对照细胞相比,Northern Blot及RT-PCR方法证实其内源性hTR的表达明显下调,TRAP方法证实其端粒酶活性明显下降。而且,其细胞增殖速度和软琼脂集落形成能力亦较对照组细胞明显减慢。但没有观察到明显的细胞衰老或凋亡现象。结论：上述结果表明hTR是人端粒酶复合物的关键组成部分,提示抑制端粒酶的hTR组分可能是抗肿瘤治疗的有效靶点。     

人类端粒酶基因反义核酸对Hep-2细胞端粒酶活性的影响

目的 :研究人类端粒酶RNA(hTR)的反义核酸对Hep 2细胞端粒酶活性的影响。方法 :采用TRAP法检测Hep 2细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化。结果 :hTR反义核酸能有效抑制Hep 2细胞的端粒酶的活性。结论 :hTR反义核酸能显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性 ,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径     

人端粒酶RNA在成釉细胞瘤中的表达

目的:研究人端粒酶RNA(hTR)在成釉细胞瘤(AB)中的表达和分布.方法:采用原位杂交方法对AB、牙源性角化囊肿(OKC)和口腔正常黏膜进行hTRmRNA检测.并分析hTR与AB临床病理特征关系.结果:AB、OKC、口腔正常黏膜hTR阳性率分别为94.4%、81.2%、28.6%,有显著性差异(P＜0.01).AB中原发、复发、恶变3组比较hTR mRNA表达也有统计学意义(P＜0.05).hTR mRNA表达与AB临床病理特征无关(P＞0.05).结论:AB的发生、发展可能与hTR的过量表达有关,hTR可能成为判断AB预后的可靠指标.     

Expression of telomerase and its RNA in nasopharyngeal carcinoma

Ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ,ａｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎｔｈａｔｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｓｉｎｔｈｅｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅｏｆｔｅｌｏｍｅｒｅｌｅｎｇｔｈ ,ｈａｓｂｅｅｎｆｏｕｎｄｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｃｅｌｌｉｍｍｏｒｔａｌｉｔｙａｎｄｍａｌｉｇｎａｎｃｙ Ｒｅｃｅｎｔｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｉｓａｈｉｇｈａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｅｌｏｍｅｒａｓｅｉｎｍｏｓｔｈｕｍａｎｃａｎｃｅｒｓａｓｗｅｌｌａｓｉｎｉｍｍｏｒｔａｌａｎｄｔｕｍｏｒｃｅｌｌｌｉ…     

Telomerase expression in sebaceous carcinoma of the eyelid

Background In humans telomerase is expressed in most cancers and immortal cell lines, and astivation of telomerase may play important roles in tumorigenesis and immortalization. This study was to investigate the roles of telomerase activity (TA) and human telomerase RNA (hTR) in sebaceous carcinoma of the eyelid.Methods The telomerase repeated amplification protocal (TRAP) was used to demonstrate telomerase activity in 12 cases of sebaceous carcinoma of the eyelid. In situ hybridization (ISH) was used to demonstrate the expression of hTR in 55 cases of paraffin-embedded sebaceous carcinoma of the eyelid, and the results were compared with the proliferative index determined by Mib-1 immuno-labeling, histological patterns and recurrence of the tumor.Results Different telomerase activity was shown in the 12 cases of sebaceous carcinoma of the eyelid. The positive expression of hTR was 85.5% (47/55) in tumor cells, but not in the adjacent tissues. The positive expression of hTR was correlated with the proliferative activity (as assessed by Mib-1 immunolabelling, r=0.942, P&lt;0.001) and the differentiation of sebaceous carcinoma of the eyelid (χ2=17.621, P&lt;0.001), but not significantly related to tumor recurrence. The level of hTR expression increased with the decrease of differentiation of sebaceous carcinoma of the eyelid.Conclusions The results suggest that the up-regulation of telomerase expression plays some roles in tarsal gland carcinogenesis, and the expression of hTR is a useful marker for malignant degree of sebaceous carcinoma of the eyelid.     

恶性黑色素瘤人端粒酶RNA原位杂交研究及意义

应用原位杂交法检测恶性黑色素瘤,黑色素细胞痣和正常皮肤中的ｈＴＲ表达。结果显示：①恶性黑色素瘤,黑色素细胞痣和正常皮肤的ｈＴＲ阳性表达率分别为８６３％,６２５％和１６７％;恶性黑色素瘤的ｈＴＲ阳性表达率显著高于黑色素细胞痣和正常皮肤的阳性表达率（Ｐ＜０．０１）。②转移性恶性黑色素瘤的ｈＴＲ阳性表达强度显著强于原发性恶性黑色素瘤者（Ｐ＜０．０５）。提示ｈＴＲ能间接地反映端粒酶的活性。ｈＴＲ可作为恶性黑色素瘤的诊断和转移预测的新标志物。     

恶性黑色素瘤人端粒酶RNA原位杂交研究及意义

应用原位杂交法检测恶性色素瘤,黑色素痣和正常皮肤中的ｈＴＲ表达。结果显示：（１）恶性黑色素瘤,黑色素细胞痣和正常皮肤ｈＴＲ阳性表达率分别为８６．３％,６．２５％和１６．７％;恶性黑色素瘤的ｈＴＲ阳性表率显著高于黑色素细胞痣和正常皮夫的阳性表达率。（２）转移性黑色素瘤的ｈＴＲ阳表达强度显著强于原发性恶性黑色素瘤。提示ｈＴＲ能间接地反映端粒酶的活性,ｈＴＲ可作为恶性黑色瘤的诊预测的新标志物。