外周血CD4+CD25high调节性T细胞比例变化在肾移植受者移植后免疫监测中的应用术

背景:相关实验表明调节性T细胞在移植物免疫耐受中起重要作用.目的:观察外周血CD4+CD25high调节性T细胞比例变化与肾移植受者移植后免疫变化的相关性.设计、时间及地点:回顾性病例分析,于2007-09/2008-07在广东省第二人民医院器官移植中心及其实验室完成.参试者:52例病情稳定的维持性血液透析患者行同种异体肾移植治疗.方法:肾移植后患者均服用三联免疫抑制剂.所有患者移植后发生急性移植肾排斥反应以及感染均按照相应指南诊断及治疗.分别于移植前和移植后1,2,4,8,12周以及发生排斥反应和感染时抽血检测外周血CD4+CD25high调节性T细胞.按其免疫力恢复情况分为正常组26例,排斥反应组17例,感染组9例.主要观察指标:用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25high调节性T细胞的比例,所得结果进行相关分析.结果:与正常组比较:排斥反应组CD4+CD25highFoxP3/CD4+的比值降低(P<0.05),而感染组显著增高(P<0.01).与感染组比较:排斥反应组CD4+CD25highFoxP3/CD4+的比值显著降低(P<0.01).结论:肾移植后受者外周血CD4+CD25high调节性T细胞比例与受者免疫状态密切相关.CD4+CD25high调节性T细胞比例的变化可以反应机体的免疫状态的变化,其升高或降低可以作为预测肾移植受者移植后发生感染或排斥反应的指标之一.     

外周血CD4^＋CD25^high调节性T细胞比例变化在肾移植受者移植后免疫监测中的应用

背景：相关实验表明调节性T细胞在移植物免疫耐受中起重要作用。 目的：观察外周血CD4^＋CD25^high调节性T细胞比例变化与肾移植受者移植后免疫变化的相关性。 设计、时间及地点：回顾性病例分析,于2007-09／2008-07在广东省第二人民医院器官移植中心及其实验室完成。 参试者：52例病情稳定的维持性血液透析患者行同种异体肾移植治疗。 方法：肾移植后患者均服用三联免疫抑制剂。所有患者移植后发生急性移植肾排斥反应以及感染均按照相应指南诊断及治疗。分别于移植前和移植后1,2,4,8,12周以及发生排斥反应和感染时抽血检测外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞。按其免疫力恢复情况分为正常组26例,排斥反应组17例,感染组9例。 主要观察指标：用流式细胞仪检测外周血CD4^＋CD25^high调节性T细胞的比例,所得结果进行相关分析。 结果：与正常组比较：排斥反应组CD4^＋CD25^highFoxP3／CD4^＋的比值降低（P〈0．05）,而感染组显著增高（P〈0．01）。与感染组比较：排斥反应组CD4^＋CD25^highFoxP3／CD4^＋的比值显著降低（P〈0．01）。 结论：肾移植后受者外周血CD4^＋CD25^high调节性T细胞比例与受者免疫状态密切相关。CD4^＋CD25^high调节性T细胞比例的变化可以反应机体的免疫状态的变化,其升高或降低可以作为预测肾移植受者移植后发生感染或排斥反应的指标之一。     

肾移植患者外周血中的CD4+ CD25+ CD127low/-调节性T细胞

背景:越来越多的实验在分析免疫耐受标志,以期能够更好地辅助患者进行移植后免疫抑制治疗。目的:分析肾移植后患者外周血中CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞在肾移植免疫耐受中的作用。方法:采集62例肾移植后患者(急性排斥反应组22例,移植稳定组40例)及20例健康对照者的外周抗凝血,经免疫染色,应用流式细胞仪分析CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞所占CD4+T细胞百分含量,同时采用ELISA方法检测患者血清中白细胞介素2和白细胞介素10的质量浓度。结果与结论:移植稳定组中CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞所占CD4+T细胞百分含量显著高于健康对照组和急性反应排斥组(P<0.01);CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞百分含量与白细胞介素2呈显著负相关(P<0.05),与白细胞介素10呈显著正相关(P<0.01)。提示CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞在肾移植后免疫耐受的机制中发挥了一定作用。     

尿CD54~+淋巴细胞在肾移植急性排斥反应中的变化

背景:正常肾脏、肾小管上皮和血管内皮细胞仅有少量CD54表达,当发生急性排斥反应时,肾小管上皮细胞和血管内皮细胞CD54表达明显增加,同时大量白细胞浸润;间质浸润细胞和肾小管上皮细胞CD54表达增加。目的:探讨流式细胞仪检测尿CD54+淋巴细胞对移植肾急性排斥反应的诊断价值。方法:来自解放军成都军区总医院的肾移植后恢复正常者(n=18)、出现急性排斥反应者(n=8)、移植肾功不全者(n=9)以及健康志愿者(n=10)。流式细胞仪比较各组移植前后尿液中CD54+淋巴细胞比率变化。结果与结论:尿CD54+淋巴细胞在肾移植患者出现排斥反应时明显增加(P<0.01),抗排斥治疗后逐渐下降。移植肾功能正常者和移植肾功不全者CD54轻度升高。提示尿液中CD54+淋巴细胞水平能准确反映肾移植物移植后患者的免疫状态,可作为肾移植后急性排斥反应的特异标志。     

单倍体相合造血干细胞移植术后早期肺部感染患者CD4~+T细胞功能的分析

为探讨单倍体相合造血干细胞移植(hi-HSCT)术后早期肺部感染患者的免疫状态,监测25例患者在移植前及移植术后6个月内不同时间点CD4+T细胞功能,了解其在肺部感染组和非肺部感染组患者间的差异,为调整免疫抑制剂用量提供参考,以减少肺部感染的发生。采用ImmuKnow方法检测患者外周血CD4+T细胞的ATP含量,评估T细胞功能。结果表明:移植后早期肺部感染组患者移植前CD4+T细胞ATP含量较低,为(179.88±65.41)ng/ml,移植后1个月降至(172.69±118.81)ng/ml,其后逐渐增高,但移植后3个月仍未达正常水平,为(218.15±124.26)ng/ml,移植后6个月升至正常,为(313.42±116.29)ng/ml。无肺部感染组患者移植前CD4+T细胞ATP含量也偏低,为(210.44±94.71)ng/ml,移植后1个月降至(193.66±133.69)ng/ml,其后逐渐上升,移植后3个月升至(355.02±43.38)ng/ml,移植后6个月为(355.73±93.85)ng/ml。结论:移植前后CD4+T细胞ATP含量均可提示移植后感染并发症的发生,可作为临床经验性抗生素应用的参考指标。     

低剂量西罗莫司协同CD4~+CD25~+ T-reg诱导大鼠肝移植免疫耐受的实验研究

目的我们通过体外诱导、扩增并分选出CD4+CD25+T-reg回输入受体大鼠,并协同低剂量西罗莫司去诱导大鼠肝移植免疫耐受,研究探讨CD4+CD25+T-reg细胞亚群在移植免疫耐受过程中扮演的角色。方法将实验动物分为急性排斥组(DA→LEW)、免疫耐受组(LEW→DA)、低剂量西罗莫司(0.1 mg·kg-1·d-1)和CD4+CD25+T-reg协同作用组(实验组)。每组8只实验动物。各组肝移植大鼠的存活率比较,应用HE染色法观察移植肝术后7 d组织病理学变化,检测CD4+CD25+Foxp3+T-reg细胞亚群在各组大鼠移植肝脏、外周血总单核细胞数中所占的百分比。RT-PCR检测术后7 d移植肝脏Foxp3 m RNA的表达水平。用ELISA检测血浆中细胞因子IL-10、TGF-β的水平。结果实验组对比排斥组,能够长期存活,获得免疫耐受(P<0.05)。实验组移植肝脏中CD4+CD25+Foxp3+T-reg细胞亚群所占的比例明显高于排斥组(P<0.001),且在移植肝脏中,实验组Foxp3 m RNA表达含量明显增加(P<0.001)。实验组血浆中细胞因子IL-10、TGF-β的表达水平高于排斥组(P<0.001)。结论我们通过流式细胞分选技术将体外扩增诱导成熟的受体大鼠CD4+CD25+T-reg细胞分离收集,然后回输受体协同低剂量的西罗莫司能够成功地诱导了长期肝移植免疫耐受。从而为临床应用CD4+CD25+T-reg细胞抑制免疫排斥反应,诱导移植免疫耐受提供了一条新思路和理论实验依据。     

单倍体相合骨髓移植后CD4~+CD25~+ T细胞免疫恢复的临床研究

本研究探讨单倍体相合骨髓移植后CD4+CD25+T细胞免疫恢复及其与移植物抗宿主病(GVHD)和复发的关系。采集27例单倍体相合骨髓移植患者在移植后不同时间内的外周血标本,用流式细胞仪检测分析CD4+CD25+T细胞百分比和绝对数,同时比较该细胞亚群恢复与GVHD和白血病复发的关系。结果表明:经过G-CSF动员后供者外周血中CD4+CD25+细胞百分比明显增高(p0.05)。移植后30天CD4+CD25+细胞恢复到正常水平的20%,但在移植后3个月内恢复颇为缓慢,直到180天才恢复到正常水平的50%。CD4+CD25+细胞恢复与急性GVHD的发生无关,但是在慢性GVHD组CD4+CD25+显著增高。移植后1年内未发现复发与CD4+CD25+细胞绝对计数有关。结论:在骨髓移植后给予抗CD25抗体预防GVHD的治疗模式下,CD4+CD25+细胞恢复与急性GVHD的发生无关,但与慢性GVHD的发生似乎有关,而与白血病的复发的关系不明确。     

再生障碍性贫血外周血Th17和CD4~+ CD25~+ Treg细胞表达情况研究

本研究旨在探讨成人再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)外周血Th17和CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)表达情况。45例初发AA患者分为轻型AA(n=25)和重型AA(n=25)两组,15例正常人作为对照。应用流式细胞术检测AA患者外周血中Th17和CD4+CD25+Treg的比例,ELISA检测血清及刺激后外周血单个核细胞(PBMNC)上清液中的白介素(IL-17)、γ干扰素(IFN-γ)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并与正常对照组比较。结果表明:重型AA(SAA)组外周血Th17细胞比例,血清中IL-17及IFN-γ表达高于轻型AA(MAA)和正常人组,而重型AA组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例降低。与轻型AA和正常对照相比,重型AA患者单个核细胞培养后上清液中IL-17及IFN-γ表达水平显著增加。AA患者血红蛋白计数与Th17细胞及血清IL-17表达呈负相关,与CD4+CD25+Treg表达成正相关。结论:重型AA患者外周血Th17细胞应答增强,而CD4+CD25+Treg细胞缺乏,贫血的严重程度与外周血Th17/Treg免疫应答失衡密切相关。     

肾移植患者外周血中的CD4~＋ CD25~＋ CD127~（low/-）调节性T细胞

背景：越来越多的实验在分析免疫耐受标志,以期能够更好地辅助患者进行移植后免疫抑制治疗。目的：分析肾移植后患者外周血中CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞在肾移植免疫耐受中的作用。方法：采集62例肾移植后患者（急性排斥反应组22例,移植稳定组40例）及20例健康对照者的外周抗凝血,经免疫染色,应用流式细胞仪分析CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞所占CD4＋T细胞百分含量,同时采用ELISA方法检测患者血清中白细胞介素2和白细胞介素10的质量浓度。结果与结论：移植稳定组中CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞所占CD4＋T细胞百分含量显著高于健康对照组和急性反应排斥组（P〈0.01）;CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞百分含量与白细胞介素2呈显著负相关（P〈0.05）,与白细胞介素10呈显著正相关（P〈0.01）。提示CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞在肾移植后免疫耐受的机制中发挥了一定作用。     

CD3~+ CD4~+ T细胞计数在重型再生障碍性贫血患者异基因造血干细胞移植术后病毒感染的预示价值

目的:探讨重型再生障碍性贫血(SAA)患者在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后CD3~+ CD4~+ T细胞对预测病毒感染的价值。方法:选广州市第一人民医院血液内科2014年1月至2016年5月SAA行allo-HSCT患者78例。用流式细胞术检测移植后第1、2、3、6、12个月外周血CD3~+ CD4~+ T细胞计数,并根据结果分为50/μl(n=120)、50-100/μl(n=48)和100/μl 3个组(n=123)。在时间点的前后2周,监测巨细胞病毒、EB病毒DNA的感染情况,计算各类感染发生率。移植后3个月,按移植患者的CD3~+ CD4~+ T细胞计数分为2组,100/μl组(n=30)及≤100/μl组(n=48),计算2组的CMV和EBV感染率、持续时间及发病情况,并进行随访,行生存情况比较。结果:CD3~+ CD4~+ T细胞计数100/μl组较50-100/μl和50/μl组的CMV、EBV感染率下降。移植后第3个月,CD3~+ CD4~+ T细胞计数100/μl组CMV及EBV感染率较≤100/μl组低,CMV感染持续时间缩短;移植后3月,CD3~+ CD4~+ T细胞绝对数100/μl组生存情况优于≤100/μl组。结论:SAA患者allo-HSCT后,CD3~+ CD4~+ T细胞数恢复至100/μl以上时,CMV及EBV感染率明显下降。移植后第3个月,CD3~+ CD4~+ T细胞绝对数100/μl时CMV及EBV感染率明显下降,CMV感染持续时间缩短,生存率较高。CD3~+ CD4~+ T细胞绝对数是SAA患者alloHSCT后良好的CMV及EBV感染的一个预示指标。     

SARS患者外周血CD4+CD8+T淋巴细胞的变化

目的 观察严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome，SARS)患者外周血CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞的变化，探讨SARS患者机体的免疫状况。方法 10位健康人(对照组)和13例确诊为SARS患者于发病第1、2、3、4周采静脉血，用流式细胞仪检测CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞。结果 与对照组比较，SARS患者从发病1至4周外周血CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞百分比均有不同程度的降低，以病程发展的2周左右为最明显。结论 SARS患者外周血CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞有不同程度的降低，机体呈异常的免疫反应。     

Quantitative changes in T helper inducer (CD4+ CD45RA-), T suppressor inducer (CD4+ CD45RA+), T suppressor (CD8+ CD11b+), and T cytotoxic (CD8+ CD11b-) subsets in human immunodeficiency virus infection

To determine changes in subsets of CD4 and CD8 in relation to HIV infection and progression to AIDS, we quantitated peripheral blood lymphocytes obtained from 17 heterosexual controls, 22 asymptomatic HIV-seronegative and 18 HIV-seropositive intravenous drug users. 50 patients with AIDS-related complex (ARC), and 9 patients with AIDS using an EPICS "C" flow cytometer by two-color analysis. Both T helper inducer (CD4+ CD45RA-) and suppressor inducer (CD4+ CD45RA+) lymphocytes were decreased significantly in patients with ARC or AIDS. In contrast, T cytotoxic (CD8+ CD11b-) cells were significantly increased and accompanied by a significant decrease in the T suppressor (CD8+ CD11b+) subset in patients with ARC or AIDS. These results suggest that both T helper inducer and T suppressor inducer subsets of the CD4+ population and the T suppressor subset of CD8+ are depleted after HIV infection, while the T cytotoxic subset of CD8+ was increased after HIV infection.     

粒系集落刺激因子对外周血T淋巴细胞亚群的影响及与CD34+细胞动员效果的相关性

本研究观察粒系集落刺激因子(G—CSF)作为造血干细胞动员剂对外周血T淋巴细胞亚群的影响及与CD34^ 细胞动员效果的关系。对26例行自体造血干细胞移植患在G—CSF动员前后收集外周血标本，用流式细胞术检测动员前后CD3^ 、CD3^ CD4^ 、CD3^ CD8^ 、CD3^ CD4^ CD8^ 及CD3^ CD4^-CD8细胞绝对数量的变化并与外周血CD34^ 细胞的动员效果进行相关性分析。结果表明：GCSF动员后外周血CD3^ 、CD3^ CD4^ 、CD3^ CD4^ CD8^ 及CD3^ CD4^-CD8细胞的绝对数量分别增加2.23，2．62，2.99及10．96倍，而CD3^ CD4^ CD8^ 细胞的变化无统计学意义(P=0．243)。各亚群细胞的变化与CD34^ 细胞动员效果比较，仅CD3^ CD4 CD8细胞的变化与CD34^ 细胞动员效果间具有良好的相关性，r=0．796，P=0.000。结论：G—CSF将造血干细胞由骨髓动员到外周血的同时，使外周血中T细胞亚群的绝对数量发生不同程度的变化。在各T淋巴细胞亚群中CD3^ CD8^-细胞的增加与CD34^ 细胞的动员效果间具有统计学意义的相关性。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在HLA-B27阳性患者中的表达及其对免疫功能的影响

目的了解CD4+CD25+调节性T细胞在HLA-B27阳性患者外周血中的表达水平及其对患者细胞免疫和体液免疫的影响。方法用流式细胞仪采用直接免疫荧光法测定37例HLA-B27阳性患者和20例健康对照者外周血淋巴细胞表面CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD19+及CD4+CD25+细胞的表达情况。用颗粒增强散射免疫比浊法测定血清中免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的水平。结果 (1)HLA-B27阳性患者CD3+、CD3+CD4+、CD19+细胞较正常对照组显著增高(P0.05),CD3+CD8+细胞较正常对照组显著降低(P0.05);(2)HLA-B27阳性患者CD4+CD25+调节性T细胞较对照组显著降低(P0.01);(3)HLA-B27阳性患者血清中2种免疫球蛋白IgG、IgA的水平均较对照组显著增高(P0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞数量明显减少,对CD4+和CD8+T细胞活化和增殖的抑制能力下降,是HLA-B27阳性患者体内细胞免疫和体液免疫亢进的原因之一。     

急性发作期和缓解期哮喘患者外周血CD4^＋CD25^＋CD127^lo/-Treg的检测和意义

目的：通过检测健康人、急性发作期和缓解期哮喘患者外周血CD4^＋CD25^＋CD127^lo/-Treg细胞的表达水平,探讨该细胞表达水平的变化与哮喘患者病情严重程度的关系。方法：采集急性发作期、缓解期哮喘患者及健康人外周抗凝血,用流式细胞术检测其外周血中CD4^＋CD25^＋CD127^lo/-Treg细胞占CD4^＋T细胞的比例。结果：哮喘急性发作组和缓解组患者外周血中CD4^＋CD25^＋CD127^lo/-Treg细胞占CD4^＋T细胞的百分比低于健康对照组（P〈0.05）;哮喘急性发作期组CD4^＋CD25^＋CD127^lo/-Treg细胞占CD4^＋T细胞的百分比低于哮喘缓解组（P〈0.05）。结论：CD4^＋CD25^＋CD127^lo/-Treg细胞数量减少可能参与了哮喘的发病过程。     

肾移植受者并发重症巨细胞病毒感染时T淋巴细胞亚群动态变化

目的探讨外周血T淋巴细胞亚群的动态变化与肾移植受者并发重症巨细胞病毒（CMV）感染之间的关系。方法采用COULTER公司鼠抗人T淋巴细胞亚群单克隆抗体OKT系列及ELITE型流式细胞仪,测定肾移植术后稳定、并发重症CMV感染或急性排斥患者外周血T淋巴细胞亚群。结果术后无急性排斥组与急性排斥组,其CD     

女性供者特征对粒细胞集落刺激因子动员的骨髓和外周血混合采集物中造血和免疫细胞组份的影响

目的 探讨女性健康供者特征对粒细胞集落刺激因子（G CSF）预激的骨髓和外周血混合采集物造血细胞和免疫细胞组份的影响。方法 111名健康女性供者应用G CSF动员,用流式细胞仪测定骨髓和外周血混合采集物中的CD34+细胞和T细胞亚群的数量,并分析怀孕、年龄、身高等供者特征对骨髓和外周血采集物中细胞组份的影响。结果 111例女性健康供者骨髓和外周血混合采集物中的CD34+细胞、CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞和CD3+CD4-CD8-调节性T细胞的数量以每公斤供者体重计算的中位值分别为2.39×106/kg、226.57×106/kg、120.80×106/kg、89.99×106/kg和15.05×106/kg。①年龄对混合移植物中CD3+CD4-CD8-调节性T细胞的数量有影响。②体重指数（BMI）对混合采集物中的CD3+T细胞以及CD3+CD4-CD8-T细胞的数量有影响;③外周血干细胞采集当天的淋巴细胞（LYM）对混合采集物中的CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞的数量有影响;④骨髓干细胞采集当天的LYM对混合采集物中CD3+T细胞和CD3+CD4-CD8-调节性T细胞的数量有影响;⑤与怀孕供者相比,未怀孕供者混合采集物中含有更高数量的CD3+CD8+ T细胞。结论 供者年龄、BMI、是否怀孕以及骨髓干细胞和外周血干细胞采集当天的LYM是骨髓免疫组份的主要影响因素。     

结核病患者T细胞亚群检测临床意义分析

目的 探讨结核病患者外周血T细胞亚群检测的临床意义.方法 采用流式细胞术检测196例健康者、84例结核病患者及100例呼吸系统非结核杆菌感染患者外周血T细胞亚群、CD3+CD4-CD8-双阴性细胞(DNT)和CD3+CD4+CD8+双阳性细胞(DPT)百分含量和绝对含量,并进行比较分析.结果 与健康者相比,结核病患者DNT、DPT百分含量减少(P＜0.05),总T细胞、T4细胞、T8细胞、DNT、DPT绝对含量均减少(P＜0.05).结论 T细胞亚群,尤其是DNT和DPT可作为判断结核患者免疫状态、指导用药和疗效观察的指标.