肿瘤分子靶向治疗进展(二)临床常用分子靶向药物

单克隆抗体 1975年Koehler等采用细胞融合技术,使小鼠免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,形成杂交瘤细胞, 后者产生的抗体,称为单克隆抗体 (monoclonal antibody,MoAb),简称单抗,由于单抗具有性质纯、效价高、特异性强,少或无血清交叉反应等特点,已被广泛应用于肿瘤的治疗。     

载脂蛋白H单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备及鉴定载脂蛋白H Aport单克隆抗体。方法从人血清中分离纯化Aport免疫小鼠后取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合，经筛选出两株杂交瘤细胞株2C5和3H4，制备腹水后，用硫酸胺沉淀等方法纯化。获得Aport单抗。结果两株细胞产生的单抗皆属于IgG1，与其它载脂蛋白无交叉反应，细胞株连续传代3个月仍能稳定分泌Aport单抗，且效价稳定。结论2C5和3H4两株细胞能分泌合格的Aport单抗。     

抗HER2/neu单克隆抗体的制备及其对乳腺癌细胞生长的抑制性

目的 制备抗HER2／neu的特异性单克隆抗体，筛选出能够分泌抑制p185 HER2／neu蛋白过表达的肿瘤细胞生长的单抗杂交瘤细胞株。方法 原核表达含全长neu蛋白的融合蛋白，免疫Balb／c雌性小鼠后取效价高的小鼠尾静脉加强后行脾细胞与SP2／0细胞进行细胞融合。以ELISA、免疫细胞化学、免疫组织化学、细胞免疫荧光和MTT法进行筛选。结果 共获得8株稳定分泌HER2／neu单抗的杂交瘤细胞株，其中5株细胞产生的抗体体外实验能够抑制乳腺癌细胞HBT133的生长。结论 能够抑制HBT133细胞生长的5株杂交瘤细胞株可以用作人源化，具有较高的临床应用价值。     

抗HLA-B27单克隆抗体的制备鉴定及初步应用

目的：制备HLA－B27单克隆抗体。方法：用HLA－B27抗原免疫小鼠，取脾细胞与骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞，用ELISA法筛选分泌该单抗的细胞株。结果：建立了分泌该单抗的细胞系3B3和4F2，抗体均为IgG2b,3B3细胞分泌的单抗只与B27反应，而4F2细胞分泌的单抗与B7有交叉反应。结论：建立了高特异性分泌抗B27单抗的细胞株，具有潜在的应用价值。     

B细胞杂交瘤技术制备抗同种特异T细胞膜抗原单克隆抗体

目的：为进一步分析ＴＣＶ免疫诱导同种免疫反应低下的机制。方法：采用Ｂ细胞杂交瘤技术获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞。结果：两次的细胞融合中共得到１２株稳定分泌单抗的杂交瘤细胞，为分析抗体在ＴＣＶ中的作用提供条件。结论：ＴＣＶ免疫可引起抗ＴＣＶ细胞抗体的产生，以同系免疫的方法得到的活化Ｂ细胞用于Ｂ细胞杂交生产单抗是可行的。     

抗人中性粒细胞单克隆抗体的筛选、鉴定和抑制调理吞噬活性的检测

用淋巴细胞分离液梯度离心法,自健康人血液中分离出中性粒细胞,作为颗粒抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得分泌抗细胞膜单克隆抗体(单抗)杂交瘤细胞。用调理吞噬抑制试验,初步筛选出1株分泌抑制补体介导的吞噬功能的单抗杂交瘤细胞。单抗亚类检定结果为IgG_(2a)。     

抗人滋养层细胞表面抗原-2单抗的制备及免疫学特性分析

目的:利用杂交瘤技术制备抗人滋养层细胞表面抗原-2(trophoblast cell-surface antigen 2,Trop2)单克隆抗体并鉴定其免疫学特性?方法:以胰腺癌细胞系BxPC3免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合后制备单抗?通过酶联免疫法?免疫荧光?免疫沉淀和质谱分析?流式细胞术?免疫组织化学等方法,鉴定单抗的免疫学特性?结果:通过细胞的融合与筛选,获得了持续分泌抗Trop2单抗的杂交瘤细胞株,该抗体可以识别细胞表面的Trop2膜蛋白,也可用于免疫组化识别人肿瘤组织中的Trop2蛋白,同时该抗体对乳腺癌细胞的生长具有一定的抑制作用?结论:该单抗具有作为Trop2阳性表达肿瘤靶向治疗的潜在应用价值?     

抗纤维蛋白—抗尿激酶双特异性单克隆抗体的体内外溶栓？…

研究抗纤维蛋白－抗尿激酶双特异性单克隆抗体在体内外的溶栓效力。方法 通过分泌抗纤维蛋白单抗的杂交瘤细胞与尿激酶免疫小鼠的脾细胞融合，获得分泌双特异性单抗杂交－杂交瘤细胞。采用ＥＬＩＳＡ法检测该ｂｓＭｃＡｂｓ与纤维蛋白和尿激酶的结合力。用＾１３１Ｉ血浆－血浆凝块溶解率法测定体外溶栓效力。     

重组人3型腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备抗人3型腺病毒六邻体蛋白的单克隆抗体并对单抗进行鉴定.方法 用纯化的重组六邻体蛋白免疫BALB/c小鼠.取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合.经ELISA间接法筛选和克隆化培养,获得4株分泌抗腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,纯化其腹水获得单抗.使用ELISA、Western blot和中和实验等方法鉴定单抗的敏感性、特异性以及中和活性.结果 ELISA和免疫印迹结果表明这4株单抗与腺病毒六邻体蛋白可以特异性结合.而且,4C6株单抗具有中和活性.结论 获得了4个单抗为腺病毒六邻体蛋白的单克隆抗体,可用于3型腺病毒的早期诊断和药物治疗的研究.     

抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备及筛选

目的获得稳定、高效分泌抗氯霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法以CAP-HS-BSA免疫BALB/c小鼠,用细胞融合技术筛选抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞,体内诱生腹水法大量制备单抗。捕获ELISA法测定小鼠免疫球蛋白亚型,间接ELISA法测定腹水效价;用两步硫酸铵法和G蛋白亲和层析法来纯化腹水。结果成功建立了一株分泌抗CAP单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞4D10。经检测,其分泌的抗体亚类为IgG1,杂交瘤染色体数目90-110条,间接ELISA检测诱生小鼠腹水的抗体效价达1∶2.56×105,纯度达95%,该细胞连续培养生物学性状稳定。结论成功制备的抗氯霉素单克隆抗体4D10效价高、纯度高,为利用该单抗研制检测氯霉素残留试剂盒提供原材料。     

基因重组人睫状神经营养因子单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的　制备基因重组人睫状神经营养因子 (rhCNTF)单克隆抗体。方法利用rhCNTF免疫BALB/C小鼠 ,取其脾细胞与小鼠NS -1骨髓瘤细胞融合 ,制备 3株抗rhCNTF的单克隆抗体 ,分别命名为CA2 、CA6 和BB11。结果 3株抗体类型均为IgG2a,免疫印迹试验证明为特异性抗CNTF的单克隆抗体 ;抗体相加试验表明 3株单抗是针对CNTF两个不同的抗原决定簇。     

抗人FXYD6特异性多肽单克隆功能性抗体制备及生物学作用鉴定

目的 研制抗人转运调节因子(FXYD)6功能区单克隆抗体库,筛选分泌胞内、胞外区单克隆抗体的杂交瘤细胞株并对鉴定胞外区单克隆抗体生物学作用.方法 原核表达并纯化去除跨膜区域FXYD6功能区重组蛋白,FXYD6重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,多次筛选及克隆化,建立稳定分泌抗人FXYD6胞外区或胞内区的单克隆抗体杂交瘤.分别应用间接酶联免疫吸附法(ELISA)、Western blot和免疫组织化学法鉴定抗体特异性及亚型,细胞流式技术筛选可识别天然构象的胞外区单克隆抗体,用腹水诱导法对胞外区单抗进行制备、纯化并检测亲和常数,高表达FXYD6的HepG2细胞系检测胞外区单抗的功能.结果 成功获得分泌抗人FXYD6胞外区或胞内区单克隆抗体的杂交瘤细胞库,制备出具有功能阻断性的胞外区单抗.结论 制备的抗人FXYD6胞外区单抗可抑制HepG2细胞的增殖.     

分泌抗B型流感病毒抗体杂交瘤细胞的制备及鉴定

目的 制备抗B型流感病毒的单克隆抗体，用以建立特异、灵敏、简便的B型流感金标试纸检测方法。方法 将B型流感病毒为完全抗原免疫BALB/c小鼠，得到的脾细胞与SP2／0细胞融合，获得稳定分泌抗流感B单抗的杂交瘤细胞株，对抗体进行鉴定。结果 用杂交瘤技术，得到了3株可稳定分泌抗流感B单抗的杂交瘤细胞株，能分泌高滴度的针对B型流感病毒的特异单抗。结论 所获抗B型流感病毒杂交瘤细胞株单克隆抗体，为金标法快速诊断B型流感感染奠定了基础。     

α—CD3单克隆抗体对肿瘤特异性T细胞的扩增和杀瘤活性的影响

为寻找更有效的肿瘤过继性免疫治疗的方案，用α－ＣＤ３单克隆抗体（单抗）激活ＦＢＬ－３红白血病肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞获取肿瘤特异性Ｔ细胞，并观察α－ＣＤ３单抗对肿瘤特异性Ｔ细胞的增殖、杀瘤活性及表型影响，体外实验结果显示，免疫小鼠脾细胞经α－ＣＤ３单抗激活后，采用低剂量ＩＬ－２即可维持其长期高度的、持续的增殖；又培养过程中α－ＣＤ３单抗持续存在可大大促进其对肿瘤的特异性杀伤。细胞分型分析结果也支持     

大鼠抗小鼠重组膜联蛋白A2单克隆抗体的制备与鉴定

目的 建立能够分泌特异性抗小鼠膜联蛋白A2( AnxA2)的大鼠—小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系.方法 利用重组小鼠AnxA2蛋白作为抗原免疫Wistar大鼠,通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立特异分泌抗小鼠AnxA2蛋白的大鼠—小鼠融合单抗杂交瘤细胞株.采用酶联免疫吸附方法确定单克隆抗体亚型,免疫印迹和流式细胞术验证所筛选的单克隆抗体的特异性.结果 通过对30多个分泌抗体的融合细胞克隆的筛选,获得一株分泌特异性抗小鼠AnxA2的大鼠—小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系SZ-158,连续培养传代后染色体分析证实,Wistar大鼠脾细胞与小鼠SP2/0细胞稳定融合;免疫印迹和流式细胞术显示该单克隆抗体可以特异识别小鼠AnxA2重组蛋白.结论 该研究所获得的大鼠—小鼠融合单克隆抗体特异性针对小鼠AnxA2蛋白,可用于AnxA2转基因小鼠中AnxA2表达的检测,为深入研究AnxA2的功能提供了物质保障.     

抗日本血吸虫童虫表膜单克隆抗体的制备

目的为制备分泌抗日本血吸虫感染保护性单克隆抗体细胞株。方法应用杂交瘤技术，将照射致弱尾蚴免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤的细胞融合。结果经两次以上有限稀释克隆化后，抗日本血吸虫童虫表膜抗原阳性率为１００％，建立了５株稳定分泌抗童虫表膜单抗的细胞株。杂交瘤细胞诱生腹水，ＥＬＩＳＡ效价达１０．６４×１０５～１１．２８×１０５。初步鉴定单克隆抗体类型分别为ＩｇＭ、ＩｇＧ２ａ和ＩｇＧ２ｂ。抗原抗体定位于童虫表膜。结论该单抗的制备为进一步研制抗日本血吸虫童虫表膜分子疫苗奠定基础。     

大鼠抗小鼠重组膜联蛋白A2单克隆抗体的制备与鉴定

目的建立能够分泌特异性抗小鼠膜联蛋白A2（AnxA2）的大鼠-小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系。方法利用重组小鼠AnxA2蛋白作为抗原免疫Wistar大鼠,通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立特异分泌抗小鼠AnxA2蛋白的大鼠-小鼠融合单抗杂交瘤细胞株。采用酶联免疫吸附方法确定单克隆抗体亚型,免疫印迹和流式细胞术验证所筛选的单克隆抗体的特异性。结果通过对30多个分泌抗体的融合细胞克隆的筛选,获得一株分泌特异性抗小鼠AnxA2的大鼠-小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系SZ-158,连续培养传代后染色体分析证实,Wistar大鼠脾细胞与小鼠SP2/0细胞稳定融合;免疫印迹和流式细胞术显示该单克隆抗体可以特异识别小鼠AnxA2重组蛋白。结论该研究所获得的大鼠-小鼠融合单克隆抗体特异性针对小鼠AnxA2蛋白,可用于AnxA2转基因小鼠中AnxA2表达的检测,为深入研究AnxA2的功能提供了物质保障。     

小鼠胸腺基质细胞单抗特性及生物功能研究

应用细胞ＥＬＩＳＡ用间接荧光染色技术，分析多种胸腺基质细胞（ＴＳＣ）单克隆抗体，结果表明不同的抗与不同ＴＳＣ呈不同的阳性反应，其中Ｐｆ１８－３和Ｒｓ２１－Ｃ６单抗与小鼠胸腺基质细胞１－７（ＭＴＳＣ１－７）等多种细胞均呈强阳性反应，但荧光染色显示Ｐｆ１８－３和Ｒｓ２１－Ｃ６染色特征不一。将Ｐｆ１８－３或Ｒｓ２１－Ｃ６单抗加入ＴＳＣ与胸腺细胞共培养，发现两种单克隆抗体对胸腺基质细胞和胸腺细胞结合有明显     

与海洛因有完全交叉反应的抗吗啡单抗的制备

目的制备吗啡的单克隆抗体(mAb)并鉴定抗体的特性。方法6-琥珀酰化吗啡与Bluecarrier(BC)载体蛋白交联制备6-琥珀酰化吗啡酯(M-6-S-BC)，用其免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与Sp2／0骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤，经筛选和3次克降化，从制备的腹水中纯化单克隆抗体。结果获得4株杂交瘤细胞G1、G3、H4和B1，其分泌单抗的亚型均为IgC1型．经ELISA鉴定，该单克隆抗体可结合游离的吗啡、海洛因及可待因，而且对海洛因的结合优于吗啡，该单抗不与非阿片类药物结合结论所制备的吗啡单克隆抗体可特异性结合吗啡等阿片类药，将为建立体外吗啡及海洛因的非同位素检测方法奠定基础。     

应用Protein A亲和层析法制备及纯化R1JHL单克隆抗体

[目的]制备、纯化N-甲基D-门冬氨酸受体（NMDAR，NR）主亚基RIJHL单克隆抗体。[方法]NR1杂交瘤细胞腹腔注射BalB／C小鼠制备抗体，Protein A-Sepharose CL-4B亲和层析纯化单抗，Western-blot鉴定该单抗特异性。[结果]纯化后单抗识别大鼠脑组织膜蛋白中约115kD大小的单一条带。[结论]制备、纯化了具有高度特异性的抗NR1单克隆抗体，为进一步研究NMDA受体提供了工具。