风疹病毒在BALB/c小鼠体内的感染与分布

用BALB/c小鼠形成风疹病毒感染模型,小鼠经尾静脉感染RVGOS_(-10)株10~6TCID_(50),每只0.5ml,病毒血症持续约一周,感染后第4天达最高滴度,为10~(6.3)TCID_(50)/0.25ml,间接免疫荧光及间接酶标染色法观察小鼠组织切片,感染后不同时间,病毒对小鼠各脏器可形成广泛的侵害,抗原主要分布于胞桨,病毒分离结果与之吻合,感染后第18天,心、眼、肺中的病毒滴度分别为10~(5.2),10~(5.6),10~(5.5)TCID_(50)。     

重组集成干扰素α体外抗病毒的药效学研究

目的：观察一种新型重组集成干扰素α(NIFN con α)对流感病毒甲型和乙型、单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型、柯萨奇病毒B1和B3的抑制作用。方法：应用细胞病变抑制法，以已上市的重组集成干扰素α(干复津)及干扰素α作为阳性对照，观察不同浓度的NIFN con α对不同病毒感染绿猴肾细胞(Vero)和狗肾细胞(MDCK)的抑制作用。结果：NIFN con α对MDCK细胞和Vero细胞的TD50分别为(>250±0)μg/ml和(>192±0)μg/ml。对单纯疱疹Ⅰ型和Ⅱ型病毒的IC50分别是(2.8×10-4±8.5×10-5) 和(1.8×10-4±8.5×10-5)μg/ml；对柯萨奇病毒B1和B3的IC50分别是(8.8×10-8±1.4×10-8)和(1.5×10-7±4.2×10-8)μg/ml，抑制流感病毒甲型和乙型的IC50分别是(2.5×10-2±1.2×10-2)和(＞10±0)μg/ml。结论：NIFN con α与干复津一样对单纯疱疹病毒、柯萨奇病毒和流感病毒均具有明显的抑制作用，与干扰素α相比，对流感病毒的抑制作用较弱，但对单纯疱疹病毒和柯萨奇病毒的抑制作用优于干扰素α。     

树鼩原代细胞的分离及感染甲型流感病毒模型的构建

目的建立甲型流感病毒PR8株(A/PR/8/34,H1N1)对树鼩原代气管内皮细胞、树鼩原代肺细胞及树鼩原代肾细胞的体外感染模型。方法胶原酶蛋白消化法获得树鼩原代气管内皮细胞、树鼩原代肺细胞及树鼩原代肾细胞,用流感病毒PR8株感染树鼩原代细胞,测定24、48和72 h培养上清病毒载量,并观察细胞感染流感病毒后的形态变化,以确定流感病毒PR8株体外对树鼩原代气管内皮细胞、树鼩原代肺细胞及树鼩原代肾细胞的感染性。结果分离到的树鼩原代细胞经传代培养纯化和形态鉴别,对树鼩原代气管内皮细胞、原代肺细胞、原代肾细胞和犬肾传代细胞(MDCK)进行流感病毒易感性比较,培养48 h时显微镜下均能观察到明显的细胞病变(CPE);培养72h时病毒滴度可分别达到2.40×10~5 TCID_(50)/mL、1.20×10~3 TCID_(50)/mL、1.74×10~4 TCID_(50)/mL和1.79×10~7 TCID_(50)/mL。结论流感病毒可有效感染树鼩原代气管内皮细胞、原代肺细胞、原代肾细胞并有效增殖,且流感病毒对树鼩原代气管内皮细胞感染性最强,与流感病毒易感细胞MDCK相比具有统计学意义。确立了树鼩原代细胞的分离与培养方法,初步建立了流感病毒感染树鼩原代细胞的体外模型。     

HBV-DNA荧光定量PCR检测的临床意义

目的 探讨荧光定量PCR检测HBV-DNA在乙型肝炎的诊断、治疗及判断病情、预防 等方面的临床应用价值。方法 运用荧光定量PCR和ELISA法同时检测了180例乙型肝炎患者和56 例正常献血员血清中HBV-DNA的含量及其免疫标志物,并对结果进行了对比分析。结果 乙肝大 三阳患者HBV-DNA阳性率达100％(95／95),显著高于其他各组(P<0．01),HBV-DNA含量平均 为4．8×10~7copy／ml;小三阳患者HBV-DNA阳性率低于大三阳组(P<0．01),但平均病毒含量与大 三阳组无差异(P>0．05),高达2．1×10~7copy／ml;单独HBsAg阳性和单独HBsAb阳性组HBV- DNA阳性率分别为54％、33％,平均病毒含量分别为5．6×10~5copy／ml、3．8×10~4copy／ml;56例献血员 血清仍有3例HBV-DNA阳性,其病毒含量低于其他组。结论 荧光定量PCR检测HBV-DNA含 量比ELISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HBV在体内的复制情况,这对临床上抗病毒药 物的选择和判断疾病的预后意义重大。     

家兔绿脓杆菌败血症时血浆TNF的改变

给正常家兔静脉注射不同剂量绿脓杆菌活菌(7×10~9、2×10~(10)/kg)造成败血症后,外周血中TNF水平明显升高,其变化特征与内毒素休克并不相同,2×10~(10)/kg组血浆TNF水平显著高于7×10~9/kg组(P<0.01)。输注绿脓杆菌活菌后,与对照组相比,血浆胰高血糖素呈持续升高(P<0.05～0.01),胰岛素和血糖有短暂升高(P<0.05～0.01),血浆乳酸和β-G水平呈持续增高(P<0.05～0.01),上述改变在2×10~(10)/kg组要甚于7×10~9/kg组(P<0.05～0.01),此外2×10~(10)/kg组动物死亡率和MABP的下降较之7×10~9/kg组也更为严重。这些结果表明输注绿脓杆菌活菌后血浆TNF水平的升高与败血症的发生发展以及病变严重程度有密切关系。     

重组集成干扰素α体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型的药效学研究

目的探讨重组集成干扰素α(IFN-Conα)在体外对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)和Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的抑制作用.方法应用细胞病变抑制法,观察不同浓度的重组集成干扰素α对HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ型病毒感染Vero细胞的抑制作用.结果IFN-Con α对Vero细胞无明显细胞毒作用,其中度毒性浓度(TC50)＞3μg/ml.对HSV-Ⅰ型和HSV-Ⅱ型的50%的抑制浓度(IC50)分别是(1.8×10-4±0.3×10-4)μg/ml和(3.5×10-4±1.5×10-4)μg/ml.其结果显著优于阳性对照药物阿昔洛韦和干扰素α(IFN-α),其IC50阿昔洛韦对HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ分别为(6.4×10-1±0.6×10-1)μg/ml和(19.1±2.42)μg/ml;IFN-α则分别为(1.6×10-2±1.0×10-2)μg/ml和(3.7×10-2±7.04×10-3)μg/ml.结论IFN-Con α抗HSV-Ⅰ型和HSV-Ⅱ型的有效剂量明显低于阳性对照药阿昔洛韦和干扰素α(P＜0.01).     

水疱性口炎病毒对肝癌细胞的选择性感染和溶解作用

目的 :研究水疱性口炎病毒 (VSV)对肝癌细胞感染和溶解的选择性。 方法 :将 VSV分别感染 5种经过或未经过干扰素预处理的肝癌细胞系 (Hep3B、Hep G2、SMMC- 772 1、BBEL- 74 0 2和 BEL- 74 0 4细胞 )、正常传代肝细胞 (L- 0 2细胞 )和正常原代培养肝细胞 ,应用标准噬斑测定技术滴定病毒在各类细胞中的产量 ,锥虫蓝染色排除试验检测细胞活力 ,亚甲蓝和伊红染色观察细胞溶解动力学。 结果 :0 .1pfu/细胞的 VSV与上述 5种肝癌细胞、正常传代和正常原代人肝细胞共同培养 18h后 ,各细胞 VSV的产量分别为 1.8× 10 9、1.5× 10 8、8.0× 10 7、5 .6× 10 8、7.7× 10 8、6 .5× 10 7、2 .3× 10 5pfu/ m l;而经 10 0 0 U/ m l干扰素预先处理后 ,上述细胞 VSV的产量分别降至 2 .4× 10 4 、3.8× 10 4 、6 .9× 10 5、4 .2× 10 3、8.3× 10 5、5 .3× 10 4 、<10pfu/ ml。无论是否经干扰素 α- 2 b(10 0 0 U/ m l)预处理 ,除正常原代培养肝细胞外 ,VSV感染后 2 4 h其他细胞被大量溶解。结论 :VSV可迅速感染并溶解肝癌细胞及正常传代肝细胞 ,干扰素虽能完全保护正常原代肝细胞 ,但仅能部分降低 VSV在肝癌细胞和正常传代肝细胞中的增殖和溶细胞速率。说明有干扰素存在时 ,VSV能够选择性地感染和溶解肝癌细胞 ,提     

流行性出血热病毒在MA_(104)、BSC细胞培养中的生长特性

将EFIFV_(114)株感染MA_(104)、BSC细胞获得成功,病毒抗原检出时间分别在病毒感染细胞后第一代的第4天和第6天,病毒抗原在 MA_(104)细胞上的检出时间较 Vero-E。细胞早两天,并且具有与 Vero-E_6细胞相同的生长特性。病毒释放商峰在其感染细胞后第9～13天,病毒在两株细胞中的效价均可达到 TCID_(50)10~(-6)/0.1ml,这一研究为 EHFV 提供了新的细胞系统。     

脐带血造血干细胞的采集、浓缩与低温冷冻保存

目的 :探讨脐带血造血干细胞库建立中的脐带血采集、分离、低温冻存的方法。方法 :自 1997年 7月至2 0 0 0年 7月已冻存经过HLA配型的脐带血 (cordblood ,CB) 3 74 4份。CB采自经检查符合要求的足月顺产或剖宫产新生儿 ,经 (citratephosphateadeninedextnse ,CPD A)抗凝 ,用密闭式血袋采集法采集。采集后置于室温保存 ,18h内处理。用羟乙基淀粉 (hydroxythylstarch ,HES)沉降后一次分离方法去除绝大多数红细胞及大部分血浆。采用以二甲亚砜 (dimethylsulfoxide ,DMSO)为主的冷冻保剂 ,冷冻保存CB。DMSO的终质量分数为 10 %。经序控降温后 ,置于 - 196℃液氮中保存。结果 :分析了 3 74 4份冻存CB ,平均采集量为 (93± 2 2 )ml(45～ 198ml)。浓缩后平均体积为 (3 8± 8)ml(3 0～ 60ml) ;浓缩前后有核细胞数 .浓缩前平均有核细胞数为 11.2× 10 8± 5 .3× 10 8(4.5× 10 8～ 4 5 .1× 10 8) ;采用HES沉降一次离心浓缩去除红细胞后的平均有核细胞数为 9.7× 10 8± 4 .6× 10 8(3 .1× 10 8～ 3 0 .5× 10 8) ;平均有核细胞回收率为 79%。质控检测 4 0份标本细胞活率为 88.2 % ,CFU GM回收率和CD3 4 +细胞计数分别为 97.6%和 86.4 %。结论 :本研究采用的CB采集、冻存及造血干细胞和病原生物检测的方法是安     

山莨菪碱(654-2)抑制M-、α1-及α2-受体结合(简报)

临床经验提示,山莨菪碱(654-2)对心血管系统功能有比较明显的影响,但确切的作用机理尚未充分阐明。鉴于654-2的结构与经典的M-阻断剂阿托品相似,我们应用放射性配基结合试验检测了654-2对M-;α_1-、α_2-及β-受体结合的影响,并与阿托品,酚妥拉明,心得安等进行了比较。实验结果经计算机拟合,654-2阿托品及酚妥拉明抑制~3H-QNB与鼠心M-受体结合的IC_(50)分别为4.41×10~(-7),1.44×10~(-8)及2.60×10~(-8)抑制~3H-Prazosin与鼠心α_1-受体结合的IC_(50)分别为2.34×10~(-5),1.20×10~(-5)及5.70×10~(-8)M;抑制~3H-yohimbine     

双黄连粉针剂体外抗病毒药效学研究

目的 :明确双黄连粉针剂抗病毒作用谱及体外抗病毒作用机理。方法 :采用组织细胞培养法、染料摄入法检测双黄连粉针剂对各种病毒的作用 ,改变给药时间、途径 ,探讨双黄连粉针剂抗病毒作用环节。结果 :双黄连粉针剂具有明显抗流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒 型、单纯疱疹病毒 、 型、柯萨奇病毒 B3 、柯萨奇病毒 B4 、柯萨奇病毒 A16、新型肠道病毒 71型的作用 ;对脊髓灰质炎病毒 型、埃可病毒 6型、麻疹病毒、水泡性口炎病毒有一定的抑制作用 ;双黄连粉针剂与鱼腥草针剂相比 ,其抗病毒效果显著。结论 :双黄连粉针剂是一种较广谱的抗病毒针剂 ,抗病毒作用广泛。     

寨卡病毒基因序列分析及核酸检测方法

目的 分析寨卡病毒基因组序列特征,建立寨卡病毒的核酸检测方法.方法 构建81种虫媒传播黄病毒和寨卡病毒的系统进化树,比较寨卡病毒与登革病毒4型、日本脑炎病毒的核酸和氨基酸序列差异,分析亚洲型和非洲型寨卡病毒基因变异位点,尤其是中国的4株输入性寨卡病毒基因序列.通过比较亚洲型和非洲型寨卡病毒全基因组核酸序列,设计一组寨卡病毒实时荧光定量PCR检测的引物和探针,并检测其敏感性与特异性.结果 81种虫媒传播黄病毒中,寨卡病毒与Spondweni、Kedougou病毒同源性最近.全基因组核酸序列比较结果显示寨卡病毒与登革病毒4型的同源性比日本脑炎病毒更近,而氨基酸序列比较结果显示寨卡病毒与日本脑炎病毒的同源性更近.与传统亚洲型寨卡病毒比较,广东GD01株有5个氨基酸突变位点,广东GDZ16001株有3个,浙江ZJ03株有6个,赣县VE Ganxian株有33个.所设计的PCR引物和探针对质粒标准品检测呈阳性,检测下限为100拷贝/mL,对细胞培养的寨卡病毒RNA检测呈阳性,而对登革病毒1～4型和日本脑炎病毒检测呈阴性.结论 寨卡病毒与Spondweni病毒同源性最近,赣县VE Ganxian株的高变异显示寨卡病毒正在快速变异.本研究设计的PCR引物和探针可用于亚洲型和非洲型寨卡病毒株检测,具有较高的敏感性和特异性.     

Production of cattle immunotolerant to bovine viral diarrhea virus

Inoculation of bovine virus diarrhea virus into 58 to 125 day old fetuses of bovine virus diarrhea virus seropositive pregnant cows, or inoculation of bovine virus diarrhea virus into seronegative cows 42 to 114 days pregnant, may produce clinically normal calves which are persistently infected with the specific isolate of bovine virus diarrhea virus yet seronegative to the homologous and heterologous isolates. Reinoculation of these persistently infected cattle with their homologous isolate produced no neutralizing antibody response to bovine virus diarrhea virus. These persistently infected cattle were immunocompetent as they developed neutralizing serotiters to infectious bovine rhinotracheitis, parainfluenza-3 viruses and agglutinating serotiters to Pasteurella hemolytica .     

PCR在猴B病毒鉴定中的应用研究

目的为鉴定新分离毒株是否为B病毒.方法根据ScinicarielloF报道的引物,用PCR方法扩增BV147、HSV-1、HSV-2,对扩增产物进行SacⅡ内切酶消化.结果这一对引物可同时对这3种病毒进行扩增,但只有BV147的扩增产物可被SacⅡ内切酶切开.对BV147扩增片段克隆测序的结果证实,其与美国B病毒E2490株部分基因(UL27)相对应位置的核苷酸同源性为100%.结论初步建立了检测B病毒DNA的PCR方法并测定了新分离病毒毒株的部分基因序列,证明新分离的病毒为B病毒.     

RNA病毒性脑膜炎的实验诊断研究

目的:研究探索RNA病毒所致毒性脑膜炎(病脑)的临床实验诊断方法。方法:病毒性脑膜炎患者(病脑组)和非病毒性脑膜炎患者(对照组)为对象,应用反转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测脑脊液标本中RNA病毒(包括肠道小RNA病毒组、柯萨奇病毒及风疹病毒),应用酶联免疫分析技术(ELISA)检测脑脊液和血液中柯萨奇病毒-IgM和风疹病毒-IgM。结果:RT-PCR方法的特异性为100%,阳性率分别为肠道小RNA病毒组35.3%、柯萨奇病毒29.8%、风疹病毒9.7%;而ELISA方法检测血清标本的特异性为93.7%(COX-IgM)和95.2%(RV-IgM),敏感性分别为38.2%和8.4%,检测脑脊液则无阳性发现。结论:RT-PCR是一种临床实验确证诊断病脑的有效而实用的方法,与ELISA方法(检测血清标本)联合应用,可以进一步提高实验诊断资料的质量。     

肝功能异常患者肝炎病毒标志物检测结果分析

目的探讨肝功能异常者肝炎病毒标志物的检查结果。方法选取肝功能异常患者542例检测肝炎病毒标志物,主要包括抗-HEV-IgM、乙型肝炎病毒抗体、丙型肝炎病毒抗体、抗HAV-IgM以及乙型肝炎病毒表面抗原,统计检出率。结果 542例肝功能异常患者检测肝炎病毒标志物402例,乙型肝炎病毒表面抗原的阳性率最高。30～50岁年龄段患者检出率最高。结论肝炎病毒主要以乙型以及甲型病毒的检出率最高,因此需要对患者进行甲型肝炎和乙型肝炎疫苗接种的宣传,提高个人的卫生习惯,降低肝炎病毒的传播几率。     

南昌地区冬春季呼吸道感染儿童流感病毒的检测分析

了解南昌地区冬春季呼吸道感染儿童甲型流行性感冒(流感)病毒、乙型流感病毒的检出率、构成等流行病学特征。方法对6 130例于2010年10月至2011年3月来江西省妇幼保健院就诊的被诊断为呼吸道感染的儿童,用间接免疫荧光法检测流感病毒IgM抗体。结果甲型流感病毒检出率为0.75%,乙型流感病毒检出率为10.39%,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。乙型流感病毒检出率在2010年10-12月较低,在2011年1月呈爆发态势,检出率上升5倍。结论引起南昌地区2010-2011年冬春季呼吸道感染患儿的主要流感病毒为乙型流感病毒,且其在2011年1月有爆发流行的趋势。更多还原     

猴疱疹病毒(B病毒)抗体检测方法的比较研究

目的 对HSV-1作抗原的玻片酶免疫法（EIA）用于B病毒抗体检测的可靠性进行研究。方法 用HSV-1为抗原的玻片酶免疫法（EIA）和酶联免疫吸附法（ELISA）与B病毒为抗原的斑点酶免疫法（DIA）、免疫荧光法（IFA）及酶联免疫吸附法（ELISA）对猕猴血清进行B病毒抗体检测的比较分析。结果 HSV-1为抗原的EIA与B病毒为抗原的DIA、IFA和ELISA检测结果的符合率分别为100％、95．6％和97．4％；HSV-1为抗原的EIA检测确定的阴性血清样本，经B病毒抗原的IFA检测均为阴性；在HSV-1为抗原的EIA确定的779份阴性血清中，经B病毒抗原的ELISA检测，有2．6％（20份）为阳性；HSV-1抗原的EIA和HSV-1为抗原的ELISA检测均为阴性的20份血清样本，经B病毒抗原的ELISA检测，18份仍为检出阴性，2份为阳性。结论 HSV-1为抗原的EIA的检测结果与B病毒抗原的DIA、IFA和ELISA的检测结果一致性较好。同时，用HSV-1抗原进行B病毒抗体检测，存在极少数阳性动物漏检的可能。     

H7N9禽流感病毒与其他流感病毒对雪貂致病性与传播力的比较

目的 针对2013年3月中国爆发的人感染H7N9禽流感病毒,在雪貂体内进行致病性及传播力的研究,并与甲型H1N1流感病毒、H5N1禽流感病毒进行比较。方法 对新发H7N9毒株、甲型H1N1流感病毒、H5N1禽流感病毒感染雪貂后的临床症状、体征,呼吸道排毒情况,组织病理学变化等进行评价和比较,并对H7N9毒株在雪貂群体中的传播力进行研究。结果 雪貂模型的临床症状、死亡率、病毒传播以及组织病理学分析显示：H7N9病毒的致病性低于H5N1,与2009年起源于北美的甲型H1N1流感病毒相当。新发H7N9禽流感病毒可以在雪貂的呼吸道、心脏、肝脏以及嗅球进行复制。值得注意的是H7N9禽流感可以通过飞沫在雪貂间进行低水平的传播,并且在传播过程中,病毒基因组内有多个位点的氨基酸发生了替换。结论 H7N9禽流感病毒对雪貂的致病性较H5N1禽流感病毒低,与甲型H1N1流感病毒对雪貂的致病性相当,H7N9禽流感病毒可在雪貂间进行传播。     

恒河猴B病毒阳性率随季节变化的研究

目的 研究恒河猴BV感染率随季节变化的增长规律。方法 采用BV全病毒为抗原的ELISA试剂盒对两批离乳后群养的54只恒河猴仔猴每月采血检测BV感染情况,连续检测13个月。结果 12月、1月、2月、3月、4月B病毒阳性猴数量相对增加较明显,其他月份BV阳性猴数量相对稳定。结论 BV的感染受季节影响,春季BV的感染率相对较高,可在高发季节加强有关的预防措施或调控可改变的环境因素,降低BV的感染,提高猴群质量。