PCR在猴B病毒鉴定中的应用研究

目的为鉴定新分离毒株是否为B病毒.方法根据ScinicarielloF报道的引物,用PCR方法扩增BV147、HSV-1、HSV-2,对扩增产物进行SacⅡ内切酶消化.结果这一对引物可同时对这3种病毒进行扩增,但只有BV147的扩增产物可被SacⅡ内切酶切开.对BV147扩增片段克隆测序的结果证实,其与美国B病毒E2490株部分基因(UL27)相对应位置的核苷酸同源性为100%.结论初步建立了检测B病毒DNA的PCR方法并测定了新分离病毒毒株的部分基因序列,证明新分离的病毒为B病毒.     

灭活前后HIV-1包膜基因变异的研究

目的 深入了解ＨＩＶ在灭活因素作用下包膜基因变异。方法 对ＨＩＶ－１Ｂ３亚型毒株在Ｓ／Ｄ法及低ｐＨ法灭活作用前后的样品,套式ＰＣＲ扩增其民膜基因Ｃ２￣Ｃ３区５６４ｂｐ的核酸自段,进行核苷酸序列测定和分析。结果 两种方法活前后,包膜基因变异均不显著,核苷酸同源性均为９８％。结论 Ｓ／Ｄ法及低ｐＨ法灭活作用前后ＨＩＶ包膜基因变异不显著。体外传代ＨＩＶ包膜基因趋于稳定。     

维生素C对人类免疫缺陷病毒灭活作用的研究

目的验证维生素C对人类免疫缺陷病毒(HIV)的灭活作用,为生物制品提供一种安全可行的HIV灭活的方法。方法通过测半数组织培养感染剂量(TCID50),检测不同浓度维生素C在不同温度和作用时间下对HIV的灭活作用,并对有效剂量组进行MT4细胞毒性试验。结果500μg/ml维生素C在无血清状态下有灭活HIV作用,而此剂量对MT4细胞有不可逆转的毒性作用。结论维生素C不适宜用于血及血制品的HIV灭活。     

灭活前后HIV-1生物学性状改变的研究

S/D法及低 p H法是常用的血制品灭活病毒的有效方法。在评价 S/D法及低 p H法灭活 HIV试验中 ,发现不病变样品经盲目传代可以传出病变 ,说明 HIV在灭活因素作用下发生变异。 HIV具有高度的变异性 ,不同地区不同机体 ,同一机体不同病程 ,甚至同一机体一次取样均可分离到不同基因型不同生物学性状的 HIV株 [1 ]。我们曾在 MT4细胞长期自然传代培养 HIV,分析 HIV包膜基因变异及生物学性状改变 ,获得体外传代 HIV包膜基因变异不显著 ;病毒感染毒力及病毒产量上升 ;亚型不变 ,生物学性状相对稳定的结论。为了进一步了解灭活作用下 H…     

艾乃吉Ⅰ号抗艾滋病的实验研究

目的:观察艾乃吉Ⅰ号促进免疫功能及体外抑制HIV作用。方法:采用腹腔注射环孢酶素法建立免疫抑制模型小鼠,给药两周后取血,流式细胞仪上检测外周血淋巴细胞亚群;采用CPE法测定HIV对MT-4细胞的感染性滴度,MMT法测定药物对MT-4细胞的半数毒性浓度,CPE法测定药物的抗病毒活性,计算治疗指数。结果:艾乃吉Ⅰ号对提高免疫抑制小鼠CD3T细胞百分率和CD4T细胞百分率有一定作用,其中低剂量组与模型组比较CD4T细胞百分率的提高较为明显(P<0.05);在MT-4细胞/HIV-1ⅢB和实验系统,艾乃吉Ⅰ号抑制病毒复制的治疗指数是2.6。结论:艾乃吉Ⅰ号具有一定的促进免疫功能恢复及体外抑制HIV作用。     

HIV-1的耐药基因突变

人免疫缺陷病毒(HIV)耐药,是影响艾滋病抗病毒治疗效果的主要因素。随着抗病毒治疗的发展及新型靶点抗病毒药物的临床应用,已确定了200多个各种类型HIV耐药相关的基因突变,它们对于耐药及病毒的生物学特性产生不同程度的影响。该文对HIV的耐药基因突变,及其对耐药的作用和对复制适应性的影响进行了综述,并分析了今后耐药性研究应关注的重点。     

~(60)钴辐照法对生物羊膜中人类免疫缺陷病毒灭活效果的研究

目的研究60钴辐照法对生物羊膜中污染的人免疫缺陷病毒灭活效果。方法采用细胞培养法,对辐照法灭活生物羊膜中人工污染HIV-1ⅢB病毒效果进行观察。结果经辐照剂量为25 k Gy处理,可使污染在生物羊膜制品的HIV-1ⅢB病毒滴度下降6.5个log以上。处理后生物羊膜制品经细胞培养盲传三代,均未出现细胞病变。结论 25 k Gy辐照法能够完全灭活生物羊膜产品中污染的人免疫缺陷病毒。     

桂林市经性传播的HIV-1的流行特征和亚型分析

目的：了解桂林市2008年及以后确诊的经性传播的人类免疫缺陷病毒1型( HIV-1)感染者的流行病学及亚型的分布情况。方法选取样本100例,收集流行病学资料,采集抗凝全血,提取病毒RNA,RT-PCR法行gag基因扩增,对产物进行测序和分析。结果100例样本中男女比例为2．125∶1;青壮年年龄组(20~49岁)患者为54%,>50岁年龄组患者为45%;职业为农民的患者为40%,学生为6%;初中及以下文化水平患者占69%;经异性和同性性接触途径传播的分别为93%、7%。100例样本最终成功扩增得到61例样本的 gag 基因序列, CRF01-AE 重组亚型48例, CRF07-BC重组亚型8例,B亚型5例。结论应更加重视婚检、孕检的艾滋病抗体筛查;关注老年人群经性接触途径感染艾滋病的现象;采取针对低素质人群的有效防治措施;随着主要传播途径和主要亚型的变化,迫切需要对高危人群进行宣传教育和行为干预以阻断HIV/AIDS的流行和传播。     

吗啡对拉米夫定抗HIV-1药效影响的体外MT2细胞实验研究

目的 探讨吗啡是否影响拉米夫定(3TC)抗HIV-1的抗病毒效果.方法 MT2细胞随机分为吗啡+3TC、吗啡+纳洛酮+3TC、纳洛酮+3TC处理组及3TC对照组和病毒对照组;用纳洛酮处理相应组的MT2细胞0.5 h后,加入吗啡处理细胞24 h,然后每组细胞加入等量的HIV-1ⅢB病毒和3TC溶液;病毒感染细胞第3、4、5和6天,取培养上清,用ELISA法检测培养上清的HIV-1 p24抗原,根据p24抗原表达量,计算各个处理组的3TC抗HIV-1 p24抗原抑制率.结果 HIV-1感染细胞第3和第4天,吗啡+3TC处理组的3TC抗HIV-1 p24抗原抑制率最低,与3TC对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);吗啡+纳洛酮+3TC处理组和纳洛酮+3TC处理组的3TC抗HIV-1 p24抗原抑制率相当,两组差异无统计学意义(P>0.05),这两组分别与3TC对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);病毒感染细胞第5和第6天,各处理组的3TC抗HIV-1 p24抗原抑制率与3TC对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);各个处理组的3TC抗HIV-1 p24抗原抑制率随感染时间延长而降低,呈现时间一效应关系.结论 吗啡在病毒感染初期能降低3TC 的抗HIV-1药效;纳洛酮能够阻滞吗啡降低3TC的抗HIV-1药效作用.

Abstract：

Objective To determine whether morphine having the ability to influence the antiviral effect of lamivudine(3TC)in vitro study.Methods MT2 cells were randomly assigned into morphine+3TC treatment group,morphine+naloxone+3TC treatment group,naloxone+3TC treatment group.Both 3TC and virus control groups were set up.The corresponding MT2 cells were treated with opiates antagonist(naloxone)for 0.5 hours before the 24-hours morphine treatment program was implemented while all of the groups were then infected with equal amounts of cell-free HIV-1 ⅢB strain and 3TC.HIV-1 p24 antigen in culture supernatants collected at days 3,4,5 and 6after infection status was tested and the inhibition of 3TC anti-HIV-1 p24 antigen of various treatment groups calculated.Results Inhibition of 3TC anti-HIV-1 p24 antigen of Morphine+3TC treatment group was the lowest when HIV-1 infected cells at 3rd and 4th day and showed significant difierence (P<0.05)when compared to the 3TC control.However,there was no statistically significant difference among them(P>0.05),when virus was infected the cells at 5th and 6th day.The difference of 3TC anti-HIV-1 p24 antigen inhibition between the morphine+naloxone+3TC treatment group and the naloxone+3TC treatment group was not significant(P>0.05).Similar results were obtained when these two groups were compared to the 3TC control group(P>0.05),respectively.The 3TC anti-HIV-1 p24 antigen inhibition of each treatment group reduced as the time of infection prolonged,showing a significant and time-course effbct.Conclusion The 3TC antiviral effect was reduced by morphine in the early stage of infection,and could be blocked by naloxone.     

北京男男性行为人群HIV-1序列和流行趋势分析

目的 分析北京MSM人群HIV序列特征,预测北京该人群中HIV流行趋势。方法 汇总本实验室获得的北京MSM人群HIV序列,下载Los Alamos HIV Database中我国MSM人群及其他人群中流行的HIV序列,利用PhyML 3.0、BEAST等软件重建北京MSM人群系统发育树、估算突变速率、推断tMRCA、重建群体流行动态参数、计算再生指数R₀值,分析北京MSM人群与其他人群HIV流行的相关关系,推断进化和流行特征。结果 北京MSM人群中流行的HIV-1亚型包括B、CRF01_AE和CRF07_BC。在全国HIV毒株ML进化树中,北京MSM簇(北京MSM人群所占比例≥40%)共有3簇,即B-1簇、CRF01_AE-1簇、CRF01_AE-2簇。B1簇毒株是由至少3次传入事件进入北京MSM人群的,传入时间分别为1991年3月(1984年7月至1997年2月)、1994年1月(1989年1月至1998年1月)、1991年4月(1984年8月至1996年8月)。CRF01_AE毒株由2次传入事件进入北京MSM人群,传入时间分别为2000年12月(1998年3月至2003年1月)和2001年12月(2000年1月至2003年7月)。流行特征重塑分析显示,CRF01_AE-1簇近年来增长速度较快、突变速率较高。结论 北京MSM人群中存在多种HIV亚型毒株流行,其中B亚型毒株传入时间最早,但增长趋势趋于平稳;CRF01_AE毒株传入时间较晚、但增长迅速,对HIV在北京地区的流行具有明显的推动作用,因此对CRF01_AE毒株的防控有助于减少该地区HIV的流行。