川楝素诱导K562细胞凋亡及其与自噬关系的体外研究

目的 研究川楝素诱导人慢性髓系白血病K562细胞发生凋亡,并探讨凋亡与自噬的关系.方法 采用MTT比色法,检测不同浓度川楝素对K562细胞增殖抑制率的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率,透射电镜观察K562细胞超微结构的改变,免疫细胞化学法检测蛋白Apaf-1、LC3-Ⅱ的表达.结果 川楝素对K562细胞有明显增殖抑制作用,呈时间和浓度依赖性(P＜0.01).50nmol/L川楝素处理细胞72h后,K562细胞早期凋亡率为54.20％,与川楝素处理组相比,3-MlA预处理组,凋亡率为68.30％.透射电镜下可见典型的凋亡小体和自噬体.免疫细胞化学法结果显示,K562细胞Apaf-1、LC3-Ⅱ蛋白表达较对照组增强(P＜0.01).结论 川楝素能够有效诱导K562细胞同时发生凋亡和自噬性死亡,当阻断自噬的发生,加速了凋亡的进程,在此过程中Apaf-1、LC3-Ⅱ蛋白上调.     

通心络对缺血再灌注损伤大鼠脑组织细胞因子EPO mRNA变化的影响

目的 探讨促红细胞生成素(EPO) mRNA在缺血/再灌注损伤大鼠脑组织的表达情况以及通心络对EPO mRNA的影响.方法 采用大鼠缺血/再灌注损伤(MCAO)模型并予通心络灌胃,应用逆转录集合酶链式反应(RT-PCR)检测缺血再灌注损伤后3、5、7、14 d神经干细胞增殖分化相关细胞因子EPOmRNA的变化.结果 缺血再灌注模型组EPOmRNA在不同时间段均有表达,EPOmRNA从造模后第3天表达增强,第5天表达最高;给予通心络处理后,第3天开始,缺血侧EPO mRNA表达增强,第5、7、14天PCR表达灰度值均高于模型组.结论 大鼠脑缺血再灌注后,缺血区脑组织细胞因子EPO mRNA表达增强,通心络可强化其反应,进而可能诱导神经干细胞增殖和分化.     

藤黄酸对K562细胞hERG 钾通道蛋白的调控作用

目的 探讨藤黄酸对白血病细胞系K562增殖、凋亡、细胞周期的影响.并观察藤黄酸对hERG钾通道蛋白的调控作用.方法 K562细胞以不同浓度藤黄酸(0.125～8.0 μmol/L)处理0～72 h后,MTT法观察藤黄酸对K562细胞生长抑制的情况,Annexin-Ⅴ/PI双标法及透射电镜检测细胞凋亡,PI 单染法检测细胞周期分布,Western blotting、RT-PCR法分别检测藤黄酸对K562细胞内hERG通道的调控作用.结果 藤黄酸能明显抑制K562细胞增殖,具有时间-剂量依赖性,其24 h的IC50 为(2.637±0.208)μmol/L.此外,藤黄酸以浓度依赖性方式诱导K562细胞凋亡,并伴随明显的凋亡细胞形态学改变.而藤黄酸的凋亡诱导效应可能与其诱导K562细胞周期阻滞于G0/G1期有关.hERG钾通道蛋白在人白血病K562细胞中表达量较高,藤黄酸对hERG钾通道蛋白及其表达水平均有不同程度的抑制作用,该抑制作用呈明显的量效关系(P＜0.01).结论 藤黄酸可通过下调hERG钾通道蛋白的表达发挥较强的抗白血病效应,hERG钾通道有望成为白血病诊治的新靶标.     

白藜芦醇通过下调 mdr1/P - gp表达逆转 K562/ADM细胞凋亡抑制

目的：研究白藜芦醇对多药耐药K562/ADM细胞的诱导凋亡效应及其分子机制。方法：以白血病多药耐药细胞K562/ADM为白藜芦醇作用的靶细胞,用MTT比色法检测细胞增殖活性,形态学和DNA片段化观察细胞凋亡;RT-PCR检测mdr1基因和Caspase-3基因mRNA的表达;FCM测定P-gp蛋白表达水平;比色法测定Caspase-3活性。结果：白藜芦醇显著抑制K562/ADM细胞增殖,白藜芦醇诱导后K562/ADM细胞出现典型的凋亡形态学变化和DNA片段化等特征性改变。白藜芦醇下调K562/ADM细胞mdr1基因表达、抑制P-gp合成,并上调caspase-3基因表达、增强caspase-3活性。结论：白藜芦醇通过下调mdr1/P-gp表达逆转K562/ADM多药耐药细胞的凋亡抑制。     

人参皂苷Rh2通过GATA-1诱导K562细胞红系分化作用的研究

目的 了解人参皂苷Rh2是否通过GATA-1蛋白诱导白血病细胞株K562的分化作用.方法 利用凝胶集落生成实验检测不同浓度人参皂苷Rh2对白血病细胞株K562的增殖抑制作用;采用免疫细胞化学法和Western-blot法检测不同浓度人参皂苷Rh2处理前后K562细胞株中GATA-1蛋白表达情况.结果 凝胶集落生成实验结果显示人参皂苷Rh2对K562细胞有明显的增殖抑制作用,且呈剂量依赖性;免疫细胞化学法和Western-blot法提示人参皂苷Rh2可诱导K562细胞内GATA-1表达,且呈剂量依赖性.结论 人参皂苷Rh2可显著抑制白血病细胞株K562的生长,其作用呈浓度依赖性;人参皂苷Rh2在体外可通过上调GATA-1蛋白表达诱导K562向红系细胞方向分化.     

苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的:研究苦瓜蛋白对诱导K562细胞凋亡相关基因P53和Bcl-2表达的影响。方法:采用CCK-8法检测苦瓜蛋白对K562细胞体外生长的影响;采用Giemsa染色和电镜观察细胞形态学变化;利用流式细胞仪,采用Anexinn-V法检测苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡的作用;采用流式细胞仪检测苦瓜蛋白对Bcl-2和突变型P53蛋白表达的影响。结果:K562细胞经苦瓜蛋白处理后,细胞生长受到明显抑制,光镜和电镜下见到典型的细胞凋亡形态学变化;Anexinn-V法检测到细胞凋亡,凋亡率随药物作用时间延长而升高,5μg/ml苦瓜蛋白诱导凋亡效果最明显;Bcl-2和突变型P53表达下降。结论:苦瓜蛋白能够诱导K562细胞凋亡,发生机理与其调控Bcl—2和突变型P53的表达有关。     

士的宁对K562/A02细胞经典及非经典多药耐药机制作用的实验研究

目的:研究士的宁(Strychnine)对K562/A02细胞经典及非经典多药耐药机制的逆转作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测士的宁的细胞毒作用;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western Blot)分别检测非细胞毒浓度(IC10)的士的宁对K562/A02细胞MDR1基因、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)基因、拓扑异构酶Ⅱ(topoi-someraseⅡ,TopoⅡ)基因、谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione s-transferase,GST-π)基因及其表达产物的影响。结果:非细胞毒浓度(IC10)的士的宁作用后,K562/A02细胞的MRP基因及其表达产物表达降低;而MDR1、TopoⅡ、GST基因及其蛋白的表达无明显变化。结论:士的宁能部分逆转K562/A02细胞的耐药性,其作用机制可能与下调K562/A02细胞MRP基因及其蛋白的表达有关。     

人参总皂苷诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的：研究人参总皂苷诱导白血病细胞凋亡及其机制，为进一步开发人参总皂苷提供实验依据。方法：采用细胞体外培养，图像分析技术、流式细胞术、形态学观察与免疫细胞化学等方法，研究人参总皂苷诱导K562细胞凋亡。结果：人参总皂苷对K562细胞有增殖抑制作用，并可诱导K562细胞凋亡明显增加，同时K562细胞癌基因产物C－MYC，BCL－2表达明显降低。结论：人参总皂苷能诱导K562细胞凋亡，其机制可能与调控癌基因产物的表达有关。     

MAPK信号转导通路在人参多糖诱导白血病K562细胞凋亡中的作用

目的 探讨人参多糖诱导白血病K562细胞凋亡的机制.方法 将对数生长期K562细胞分成对照组和人参多糖组,对照组细胞常规培养,人参多糖组细胞培养体系中加入人参多糖0.4 g/L.各组细胞培养48 h后,流式细胞术和Hoechst33258染色法检测K562细胞凋亡情况;RT-PCR检测细胞p38、JNK基因表达;采用免疫荧光实验检测细胞中p-p38、p-JNK蛋白表达,测定Caspase-3的活性;Western blotting检测细胞中p38、JNK、p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3蛋白的变化.结果 与对照组比较,人参多糖组K562细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),出现明显的细胞核固缩现象,K562细胞p38 mRNA与JNK mRNA明显增多.免疫荧光检测显示,p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3表达明显增强且向胞核转移;Western blotting检测显示,人参多糖组K562细胞p38、JNK总蛋白无明显变化(P＞0.05); p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3有增加的趋势(P＜0.05).结论 人参多糖能促进K562细胞凋亡,其作用可能是通过影响MAPK信号传导通路实现的.     

复方君子汤诱导白血病K562细胞凋亡的机制研究

目的本研究探讨复方君子汤(FFJZ)对抑制白血病K562细胞生长增殖和诱导凋亡的作用机制。方法用不同浓度复方君子汤作用于K562细胞,应用MTT法观察复方君子汤对K562细胞生长增殖的影响,Annexin V/PI染色和流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-8蛋白及Fas蛋白的表达。结果在一定浓度的复方君子汤作用后的K562细胞的增殖被抑制,随着浓度的增加及使用时间的延长,K562细胞的增殖抑制率及凋亡比例明显增加;同时,Caspase-8蛋白及Fas蛋白的表达明显上升。结论一定浓度的复方君子汤可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase-8蛋白及Fas蛋白的表达有关。     

吴茱萸碱逆转K562/Adr细胞多药耐药的实验研究

目的 探讨吴茱萸碱(evodiamine,EVO)对白血病K562细胞及其耐药株K562/Adr的增殖、细胞周期及多药耐药性(MDR)的影响。方法用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)检测EVO和/或柔红霉素(DNR)对细胞增殖的影响,并计算耐药指数(RI)和逆转倍数(RF);流式细胞仪检测EVO和/或DNR对K562及K562/Adr细胞周期的影响;流式细胞仪检测K562及K562/Adr细胞内DNR的荧光强度;定量PCR检测K562及K562/Adr细胞中MDR1基因的表达;Western blotting检测K562及K562/Adr细胞中MDR1、BCRP蛋白的表达。结果EVO、DNR作用于K562和K562/Adr细胞后,细胞增殖受到抑制,且呈剂量和时间依赖性;与K562细胞相比,K562/Adr细胞对DNR的RI为30.54,K562/Adr细胞对EVO的RI为19.09。当EVO(0.125 gmol/L)与不同浓度DNR联合作用后,能使DNR对K562/Adr细胞的IC_(50)明显下降,DNR+EVO对K562/Adr细胞的RF为12.07;EVO、DNR单独或联合作用于K562及K562/Adr细胞后,能够使K562/Adr细胞BCRP、MDR1蛋白及mRNA表达水平均明显下降。结论EVO能有效逆转白血病K562/Adr细胞对DNR的耐药现象,而这种作用可能与EVO通过减少细胞膜上多药耐药蛋白MDR1的表达有关。     

芒果苷对白血病K562细胞周期分布及细胞周期素A、细胞周期素B1表达的影响

目的：观察芒果苷对白血病K562细胞周期分布及细胞周期素A（CyclinA）、细胞周期素B（CyclinB1）表达的影响,以进一步探讨芒果苷抗白血病的分子作用机制。方法：应用流式细胞仪检测细胞周期的分布,用RT-PCR方法检测Cyclin A及Cyclin B1 mRNA表达水平。结果：芒果苷作用24 h后,K562细胞G2/M期细胞增多,出现G2/M期阻滞,并呈现剂量依赖性;Cyclin A mRNA和Cyclin B1 mRNA的表达随作用浓度的增加而逐渐增强,呈显著的剂量依赖性。结论：芒果苷阻滞白血病K562细胞周期于G2/M期,明显上调K562细胞Cyclin A和Cyclin B1 mRNA表达水平,芒果苷诱导K562细胞G2/M期阻滞可能是其抗白血病作用的分子机制之一。     

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??OBJECTIVE To investigate the effects of interferon-??(IFN-??) and all-trans retinoic acid(ATRA) on multidrug resistance reversal effect and mechanism of human leukemia K562/ADM cells. METHODS The cytotoxicity and reversal times of IFN-?? and ATRA were detected by CCK-8 method. Apoptosis rate and cell cycle were detected by flow cytometry. PI3K, Akt and Bad mRNA were detected by RT-PCR method. Western blot method was used to detect the expression of PI3K, AKt, P-AKt and Bad protein.RESULTS The drug resistance of K562/ADM cells to adriamycin(ADM) was 54 times. ADM, respectively, with IFN-??, ATRA or combined application, the drug resistance of K562/ADM cells to ADM was 1.24, 2.34 and 8.14, respectively. The apoptosis rate of K562/ADM cells was significantly increased by using ADM 4 mg??L^-1alone or in combination with IFN-?? 2.5??10⁶ U??L^-1, ATRA 7.5 ??mol??L^-1, and the cell cycle was blocked in G₀/G₁ phase. PI3K mRNA and protein expression were significantly lowered, Akt mRNA and protein has no obvious change, Bad mRNA and protein expression are raised, phosphorylated Akt protein expression decreased, the expression is more obvious when the two drug combination. CONCLUSION IFN-?? and ATRA can reverse the multidrug resistance of K562/ADM cells, its mechanism may be the inhibition of the PI3K/Akt pathway.     

Hematopoietic effect of fractions from the enzyme-digested colla corii asini on mice with 5-fluorouracil induced anemia

Effects of fractions A and B from enzyme-digested traditional Chinese medicine colla corii asini on mice with 5-fluorouracil-induced anemia were investigated. The purpose of this study was to further understand the hematopoietic activities and mechanisms of colla corii asini. The fractions A and B were administered to anemic mice for 12 days. After confirming the anti-anemic effect of fractions A and B, we examined the effects of fractions A and B on immature granulocyte and erythroid cell activity and plasma cytokine level. Fraction A administration at 2 g/kg and 1 g/kg and fraction B administration at 1.6 g/kg and 0.8 g/kg activated granulocyte and erythrocyte progenitor cells in bone marrow and erythrocyte progenitors in spleen, led to the recovery of white blood cell and red blood cell counts, and increased the percentage of peripheral reticulocytes in red cells. The GM-CSF and EPO production determined by examining GM-CSF mRNA and EPO mRNA in the kidney and liver of the anemic mice were also enhanced. This treatment significantly increased serum GM-CSF and EPO level and lowered serum transforming growth factor (TGF-beta) level. These results suggested that fractions A and B promoted hematopoiesis by activating immature granulocyte and erythroid cells, partly by stimulating GM-CSF and EPO secretion and suppressing TGF-beta release. Identification of a specific peptide or protein is still required for the development of a novel medicine for anemia caused by malignancy or chemotherapy.     

补骨脂素加长波紫外线诱导K562细胞凋亡时对FasL表达的影响

目的探讨补骨脂素（PSO）加长波紫外线（UVA）光化学疗法（PUVA）诱导人白血病细胞K562凋亡时对FasL表达的影响。方法以K562细胞为研究对象，以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞FasL基因表达水平、蛋白表达水平为检测指标，观察中药补骨脂中提取的PSO加波长为360nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径，并采用多因素方差分析法进行统计学处理。结果单纯PSO、单纯UVA照射及PUVA均可诱导K562细胞发生凋亡，PUVA的作用显著强于前两者；电镜下观察经PUVA处理后的K562细胞超微结构，可见明显的凋亡形态学改变；单纯PSO、单纯UVA照射及PUVA均可下调FasL基因表达水平，PUVA的作用显著强于前两者；单纯PSO、单纯UVA照射及PUVA均可下调FasL蛋白表达水平，PUVA的作用显著强于前两者。结论PUVA可诱导白血病细胞K562发生凋亡，作用强于单纯PSO及单纯UVA照射。PUVA诱导K562凋亡的途径之一为下调FasL基因表达水平。     

尼洛替尼诱导K562/A02细胞凋亡及对HO-1基因表达的影响

 目的 研究尼洛替尼(nilotinib,AMN107诱导K562/A02细胞凋亡及对血红素加氧酶-1(HO-1基因表达的影响。方法 采用荧光原位杂交(FISH法检测K562/A02细胞中的BCR-ABL融合基因;用不同浓度的AMN107分别处理K562/A02细胞24 h后,通过实时荧光定量PCR(RQ-PCR法检测BCR-ABL融合基因mRNA的表达水平;采用MTT法观察细胞增殖变化;通过Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡和细胞周期;采用RT-PCR法和Western Blot法检测HO-1基因的表达。 结果 FISH法分析结果显示,K562/A02细胞BCR-ABL融合基因阳性细胞占细胞总数98%;RQ-PCR法检测结果显示,0,5,10,20 μmol·L-1 AMN107作用于K562/A02细胞24 h后BCR-ABL融合基因表达随AMN107浓度增加而逐渐下降;MTT法和Annexin V/PI法显示与对照组相比,细胞存活率随AMN107浓度升高而下降,凋亡率逐渐增加;细胞周期分析显示,经AMN107处理的细胞,G₀/G₁期和S期细胞明显减少,细胞阻滞在G₂/M期;RT-PCR法和Western blot法均检测到HO-1基因表达随AMN107浓度升高而降低。结论 AMN107可抑制BCR-ABL融合基因和HO-1基因表达,从而诱导慢性粒细胞白血病（CML耐药细胞的凋亡,说明HO-1是CML细胞生长以及BCR-ABL基因存在的一个相关因子,HO-1基因是克服慢性粒细胞白血病耐药的一个潜在靶向。     

赤芍总苷非受体依赖途径诱导K562肿瘤细胞凋亡及相关基因变化的实验研究

目的:研究赤芍总苷诱导K562肿瘤细胞凋亡的信号途径及相关基因变化。方法:通过MTT,流式细胞仪,实时定量PCR,Western-blot等方法研究caspase-3 mRNA,caspase-9 mRNA,caspase-8 mRNA,细胞色素C,Bcl-2,Bcl-Xl,Bax蛋白水平的表达。结果:MTT法显示赤芍总苷可抑制K562细胞生长,具有量效-时效关系,caspase-3 mRNA,caspase-9 mRNA增加,细胞色素C含量增加,caspase-8 mRNA无显著变化。调节基因蛋白表达也有所变化,Bcl-2,Bcl-Xl下调,Bax上调。结论:TGC主要通过线粒体途径,当细胞受到死亡信号刺激,与Bcl-2或Bcl-Xl蛋白相结合的Bax蛋白就会被置换出来,线粒体膜通透性增加,释放出一系列物质,导致K562肿瘤细胞凋亡。     

解毒化瘀方含药血清对K562/A02细胞凋亡抑制蛋白及核周因子κB表达的影响

目的 探讨解毒化瘀方含药血清对白血病K562/A02细胞凋亡抑制蛋白survivin基因和核周因子κB（NF κB）信号基因表达的影响。方法 将K562/A02细胞分为6个组,分别加入等体积牛血清,兔血清,高、中、低剂量中药血清和干扰素,并设K562敏感细胞株为对照。采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT PCR）法检测解毒化瘀方含药血清处理后K562/A02细胞survivin的表达;Western blot法检测NF κB/P65、NF κB/P50、IκBα的表达。结果 survivin耐药基因在K562/A02细胞中高表达,加用解毒化瘀含药血清处理后,高、中剂量中药血清组和干扰素对照组能够survivin的表达明显降低。NF κB在K562/A02耐药细胞亦呈高表达,加用解毒化瘀含药血清处理后,P65、P50和IκBα的表达均有不同程度下降,以高、中剂量组最明显,且高剂量组P65、P50表达下降优于干扰素对照组（P<005）,IκBα下降与干扰素对照组相当（P>005）。结论 解毒化瘀方能够降低K562/A02细胞NF κB信号基因的表达,影响NF κB survivin途径逆转耐药。