爱罗咳喘宁对COPD大鼠肺组织炎症因子及氧化应激的影响

目的: 探讨爱罗咳喘宁方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺部炎症及氧化损伤作用及机制. 方法: 采用脂多糖(LPS)加烟雾诱导 COPD大鼠模型,大鼠随机分为正常组、模型组、爱罗咳喘宁低、中、高剂量组.正常组、模型组灌胃生理盐水(15.52 mL·kg^-1·d^-1), 爱罗咳喘宁低、中、高剂量组分别灌胃(7.75,15.52,31.04) g·kg^-1·d^-1,连续14 d.用比色法、酶联免疫法(ELISA)分别测定大鼠肺匀浆中磷酸化p38MAPK(mitogen activatein kinase,p-p38MAPK)、髓过氧化物酶(MPO)活性,白介素-17(IL-17)和C反应蛋白(CRP)含量;并测定肺匀浆超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量. 结果: 与正常组比较,模型组p-p38MAPK和MPO活性、IL-17和CRP含量均显著升高(均P<0.01);SOD和GSH-Px活性均显著降低、MDA含量显著升高(均P<0.01);与模型组相比,爱罗咳喘宁中剂量组p-p38MAPK(P<0.05)、MPO(P<0.01)活性与IL-17,CRP(均P<0.01)含量均显著降低,SOD和GSH-Px活性均显著升高、MDA含量显著降低(均P<0.01). 结论: 爱罗咳喘宁对COPD有抗炎作用,其机制可能与抑制p-p38MAPK,MPO活性,减少IL-17的释放有关;爱罗咳喘宁对COPD有抗抗氧化损伤作用,其机制通过提高SOD和GSH-Px活性,减少MDA生成,保护肺组织的结构与功能.     

花旗松素对β-淀粉样肽损伤神经元的保护作用及机制

目的: 研究花旗松素对 β-淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)损伤神经元的保护作用及其机制. 方法: 从新生乳鼠大脑皮层中分离纯化神经元,与Aβ(5 μmol·L^-1)、不同浓度花旗松素(20~100 μmol·L^-1)共同孵育24 h,CCK8法检测细胞存活率,Hoechst 33258染色和Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡,分光光度法检测半胱天冬酶-3(caspase-3)活性的变化. 结果: 在细胞活力实验中,与正常组相比,模型组细胞活力显著下降(49.2±1.3) %,不同浓度的花旗松素可以提高神经元活力,其中80 μmol·L^-1花旗松素给药组细胞活力增至(68.7±3.2) %,与模型组相比有极显著差异;细胞凋亡结果显示,与正常组相比较,模型组细胞凋亡率为(50.8±1.5) %(P<0.01),不同浓度的花旗松素给药组可以降低细胞凋亡率,其中40 μmol·L^-1 花旗松素凋亡率为(41.5±2.7) %,与模型组比较呈显著性差异(P<0.05);凋亡酶caspase-3的活性与正常组(0.12±0.02) U·μg^-1比较,模型组的caspase-3的活性升高(2.37±0.16) U·μg^-1,P<0.01),与模型组相比,40 μmol·L^-1花旗松素组caspase-3显著降低(1.77±0.07) U·μg^-1, P<0.01).花旗松素能明显提高Aβ损伤神经元的细胞活力,抑制神经元的凋亡,降低凋亡酶caspase-3的活性. 结论: 花旗松素对Aβ损伤神经元具有保护作用,其机制可能与抑制caspase-3活性从而实现抗凋亡作用有关.     

柴胡疏肝散对免疫损伤性肝纤维化的防治作用

目的: 探讨柴胡疏肝散对肝纤维化的防治作用. 方法: 70只Wistar大鼠随机分为7组:正常组、病理模型组、秋水仙碱治疗组、柴胡疏肝散低、中、高剂量组、柴胡疏肝散预防组.除正常组外,其余各组均采用猪血清腹腔注射诱发肝纤维化,0.5 mL/只,2次/周,连续10周,5周后即可形成肝纤维化.预防组于造模同时给药(以柴胡疏肝散6.3 g·kg^-1),各治疗组于造模第6周给药,持续至第10周.秋水仙碱治疗组剂量0.5 mL·kg^-1·d^-1,柴胡疏肝散低、中、高剂量组(3.5,6.3,12.6 g·kg^-1·d^-1).用全自动分析法测定各组血清肝功能、放射免疫法测定肝纤维化指标,采用酸性水解法检测肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量,并观察病理变化. 结果: 与模型组比较,柴胡疏肝散中剂量组血清丙氨酸转氨酶(ALT),(156.5±3.2) U·L^-1 VS (78.4±4.6) U·L^-1(P<0.01);天冬氨酸转氨酶(AST),(387.4±12.7) U·L^-1 VS (232.5±13.5) U·L^-1(P<0.01);r-谷氨酰转肽酶(GGT),(128.2±4.0) U·L^-1 VS (78.5±4.2) U·L^-1(P<0.01);碱性磷酸酶(ALP),(152.75±5.01) U·L^-1 VS(42.51±4.67) U·L^-1(P<0.01);透明质酸(HA),(337.2±22.1)VS(140.6±21.2) μg·L^-1(P<0.01);PCⅢ(145.31±17.14) μg·L^-1VS(85.5±19.7)μg·L^-1(P<0.05);Ⅳ型胶原(135.1±22.4)VS(88.37±21.09)(P<0.05);层黏连蛋白(LN),(317.5±21.3)VS(148.4±18.4),(P<0.05)含量均显著下降, 肝组织(HYP)(527.2±34.2)VS(346.2±43.1)(P<0.01)含量显著降低. 结论: 柴胡疏肝散有明显的抗肝纤维化作用.     

白花蛇舌草总黄酮对实验性溃疡性结肠炎的作用及免疫学机制研究

目的：观察不同剂量白花蛇舌草总黄酮（FOD）对溃疡性结肠炎（UC）模型小鼠结肠NF-κB及IL-8,TNF-α,IL-10表达的影响,探讨其抗UC的免疫学机制。方法：60只雄性昆明小鼠随机分成6组：对照组（Cont）蒸馏水灌胃,其余5组均自由饮用4%右旋葡聚糖硫酸钠（DSS）水溶液7 d以造成急性UC,同时给予下列药物灌胃：蒸馏水（DSS组）,柳氮磺胺吡啶（SASP）500 mg·kg^-1·d^-1（DSS+SASP组）,FOD 60 mg·kg^-1·d^-1（DSS+FOD-H组）,FOD 40 mg·kg^-1·d^-1（DSS+FOD-M组）,FOD 26.7 mg·kg^-1·d^-1（DSS+FOD-L组）。造模给药期间,每天对各组小鼠进行疾病活动指数（DAI）评分。造模7 d后处死小鼠,取结肠组织标本,对结肠黏膜进行病理组织学损伤评估;用免疫组化法检测NF-κB p65的表达,ELISA法检测结肠组织中IL-8,TNF-α及IL-10的表达。结果：自由饮用4%DSS水溶液7 d可成功造成小鼠急性UC,与对照组比较,DSS组小鼠的DAI、结肠病理组织学损伤评分明显上升,结肠组织中NF-κB p65及IL-8,TNF-α表达显著增多,IL-10表达明显降低（P<0.05）。 FOD可对抗DSS所致的小鼠急性UC,FOD以60,40 mg·kg^-1·d^-1预防给药7 d,可完全或部分对抗DSS引起的上述改变。与DSS组比较,DSS+FOD-H组、DSS+FOD-M组的DAI、结肠病理组织学损伤评分降低,IL-8,TNF-α及NF-κB p65表达下调,IL-10 表达上调（P<0.05）。结论：FOD有明显的抗小鼠UC的作用,其机制可能与抑制NF-κB p65激活,从而减少促炎因子IL-8,TNF-α的表达,增加抗炎因子IL-10表达有关。     

p38 MAPK通路在内脏脂肪素诱导HUVEC细胞分泌TNF-α的作用及定心方含药血清的影响

目的：观察相对分子质量为38 kD有丝分裂原活化蛋白质激酶（p38 MAPK）信号通路在内脏脂肪素（visfatin）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）作用以及定心方（Dingxin Recipe,DXR）的干预影响。方法：制备DXR含药血清;用不同质量浓度（0,50,100,200 μg·L^-1）及时间点（0,6,12,24,48 h）的visfatin和终浓度5%的DXR含药血清干预HUVEC,采用四氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖,酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定培养上清液中TNF-α含量,Western blotting方法检测细胞p38 MAPK及p-p38 MAPK蛋白表达。结果：与正常对照组相比,100 μg·L^-1的visfatin作用24 h能显著抑制细胞增殖,升高细胞上清液中TNF-α含量,增强p-p38 MAPK蛋白表达,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。DXR能降低HUVEC培养上清液中TNF-α含量,减弱细胞p-p38 MAPK表达,与visfatin组相比差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论：定心方通过调控p38 MAPK通路保护visfatin诱导的HUVEC损伤。     

京尼平苷对光老化HaCaT细胞的保护作用及机制

目的：研究京尼平苷对光老化HaCaT细胞的保护作用及其机制。方法：取对数生长期的HaCaT细胞,调整其密度为1×10⁶个/mL接种于6孔板、5×10⁴个/mL接种于96孔板,用总剂量64 mJ·cm^-2（照射强度0.61 mW·cm^-2×照射时间105 s）的紫外线B（UVB）照射细胞建立光老化模型,以5×10^-5,5×10^-6,5×10^-7mol·L^-1的京尼平苷处理光老化细胞24 h,分别检测细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性、丙二醛（MDA）含量,RT-PCR法检测细胞中P38、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素6（IL-6）mRNA的表达量,酶联免疫法检测细胞上清液中TNF-α和IL-6的含量。结果：UVB照射HaCaT细胞后,SOD活性、GSH-Px活性明显降低,MDA含量、p38 mRNA表达量、TNF-α和IL-6 mRNA及蛋白的表达量明显升高（P<0.01）;5×10^-5,5×10^-6mol·L^-1京尼平苷处理细胞后,SOD活性升高为（34.72±2.03）,（38.96±3.56） U·mg^-1;GSH-Px活性升高为（28.11±2.76）,（40.02±3.63）U·mg^-1;MDA含量下降为（4.82±0.42）,（4.60±0.41）nmol·mg^-1,p38 mRNA的相对含量下降为（0.97±0.09）,（0.94±0.09）;TNF-α mRNA的相对含量下降为0.57±0.05,0.53±0.05;IL-6 mRNA的相对含量下降为0.65±0.06,0.64±0.06;TNF-α蛋白的表达量降低为（34.05±2.43）,（25.55±1.84） ng·L^-1,IL-6蛋白的表达量降低为（28.51±1.95）,（19.32±1.55） ng·L^-1,与模型对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论：京尼平苷能抵抗UVB对HaCaT细胞的损伤,其机制可能与抑制氧化损伤,调控p38信号通路,调节TNF-α和IL-6的表达有关。     

侧柏酮对人γδT细胞功能的影响

目的: 探讨侧柏酮对人γδ T细胞功能的影响. 方法: 异戊烯焦磷酸/isopentenyl pyrosphate(IPP)法体外扩增人外周血γδ T细胞.各浓度侧柏酮作用人γδ T细胞48 h,CCK-8法检测其增殖力,流式细胞术测其表型、细胞周期、细胞凋亡及表达CD107a,穿孔素(perforin),粒酶B(granzyme B)的情况. 结果: 300～600 μmol·L^-1侧柏酮明显抑制人γδ T细胞生长(P<0.05);0.036 25～150 μmol·L^-1侧柏酮明显促进其生长(P<0.05),9.4 μmol·L^-1时达增殖最高峰(37.03±0.52)%,且穿孔素表达率明显升高(39.94±1.04)%(P<0.05),余与空白组相比无显著差异. 结论: 9.4 μmol·L^-1侧柏酮明显促进人γδ T细胞增殖并上调其穿孔素的表达.     

黄连素通过ERK1/2通路降低内脏脂肪素诱导HUVEC分泌TNF-α和IL-6的研究

目的： 观察细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）通路在内脏脂肪素（visfatin）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白介素-6（IL-6）中的作用及黄连素（berberine,Ber）的干预作用。 方法： 体外培养HUVEC,用visfatin不同质量浓度（0,50,100,200 μg·L^-1）、不同时间（0,6,12,24,48 h）作用HUVEC,MTT法测HUVEC增殖,ELISA法测HUVEC上清液中TNF-α及IL-6含量;Western blotting法测HUVEC中p-ERK1/2蛋白表达;并用50 μmol·L^-1 Ber及ERK1/2通路特异性抑制剂PD98059 20 μmol·L^-1干预HUVEC,检测Ber的干预作用。 结果： 与对照组相比,100 μg·L^-1 visfatin能显著抑制HUVEC增殖,升高HUVEC上清液中TNF-α及IL-6含量并能上调p-ERK1/2蛋白表达;与visfatin组比,Ber及PD98059均能显著减轻visfatin对HUVEC增殖的抑制,减少visfatin诱导HUVEC上清液中TNF-α及IL-6的含量并能下调HUVEC中p-ERK1/2蛋白的表达。 结论： Ber可通过抑制炎症因子TNF-α及IL-6的分泌,减轻visfatin诱导的HUVEC损伤,其机制可能与抑制ERK1/2通路的激活有关。     

五子承气汤对大鼠高尿酸血症的影响

目的: 研究五子承气汤对高尿酸血症大鼠的影响. 方法: 将雄性SD大鼠60只随机分为6组,即:正常组、模型组、五子承气汤高、中、低剂量组(104,52,26 g·kg^-1)、阳性对照苯溴马隆(10 mg·kg^-1)组,采用腺嘌呤(100 mg·kg^-1,ig,qd × 28 d)和氧嗪酸钾(250 mg·kg^-1,ip,1次/周,连续4周)制备高尿酸血症大鼠模型.造模4周后,检测各组大鼠尿尿酸(UA),血尿酸(UA),血黄嘌呤氧化酶(XOD),血肌酐(SCr),尿素氮(BUN). 结果: 与正常组相比,模型组大鼠的尿UA显著降低,血UA,XOD,Cre及BUN 明显升高,差异具有显著性(P<0.01);五子承气汤低、中、高剂量组尿UA分别为(146.3±22.5),(202.2±53.8),(218.1±62.6) μmol·L^-1,显著高于模型组(89.8±27.1)μmol·L^-1(P<0.01,P<0.05);血UA分别为(207.3±42.5),(177.1±50.5),(158.0±49.0)μmol·L^-1,显著低于模型组(285.0±54.1)μmol·L^-1(P<0.01,P<0.05);五子承气汤还显著降低高尿酸血症大鼠血清XOD活性,显著降低SCr,BUN含量( P<0.01,P<0.05). 结论: 五子承气汤明显促进尿UA排泄,降低血UA含量,抑制血清XOD活性,改善肾功能,对大鼠高尿酸血症有一定的防治作用.     

小檗碱对Aβ25-35致SH-SY5Y细胞株炎症反应中TNF-α及I型受体表达的干预作用

目的: 研究小檗碱对β淀粉样肽(Aβ)沉积导致SH-SY5Y细胞株炎症反应中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及Ⅰ型受体(TNFR1)表达的影响。 方法: 5 μmol·L^-1Aβ_25-35作用于SH-SY5Y细胞24 h,复制阿尔茨海默病(AD)细胞模型,造模前给予小檗碱预处理2 h。实验分为正常对照组、AD模型组、吲哚美辛组、小檗碱低、高剂量组。通过分光光度法检测培养液中LDH的活力,ELISA测定TNF-α的水平,RT-PCR检测TNFR1基因的表达,Western blot测定TNFR1蛋白的表达。 结果: 与对照组比较,AD细胞模型组培养液中LDH及TNF-α水平明显升高,TNFR1基因和蛋白的表达显著增加。小檗碱干预后细胞上清液中LDH活力及TNF-α水平下降。小檗碱干预可下调TNFR1基因和蛋白的表达,其中1×10^-5 mol·L^-1小檗碱对TNFR1的调节作用更加显著。 结论: 小檗碱对Aβ导致的SH-SY5Y细胞炎性损伤有保护作用,其机制可能与其抑制炎症因子TNF-α及其Ⅰ型受体的表达有关,其中对TNFR1的调节呈剂量依赖性。     

补肾活血汤对慢性心力衰竭患者免疫炎症反应的影响

目的: 观察补肾活血汤对慢性心力衰竭患者(CHF)临床疗效及对免疫炎症反应的影响。方法: 将60例患者按 随机数字表法分为两组,对照组30例用西医常规治疗,治疗组30例在对照组治疗基础上加服补肾活血汤,每日1剂,疗程14 d。观察两组临床症状积分、左室舒张末内径(LVED),左室射血分数(LVEF),血浆脑钠肽(BNP),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-6(IL-6),长正五聚蛋白3(PTX-3)水平的变化。结果: 治疗组临床症状积分改善的总有效率(90%)优于对照组(80%),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后 [BNP(1 058.72±575.62) ng·L^-1,IL-6(6.88±0.91) ng·L^-1,TNF-α(251.54±52.72) ng·L^-1,PTX-3(3.16±0.60) μg·L^-1]均较对照组[(1 542.26±732.18) ng·L^-1,(9.63±1.25) ng·L^-1,(283.24±48.58) ng·L^-1,(3.40±0.56) μg·L^-1]明显改善(P<0.05),两组患者LVED,LVEF均较治疗前好转,但差异无统计学意义。结论: 补肾活血汤可以显著改善CHF患者心功能,降低TNF-α,IL-6,BNP,PTX-3水平,抑制免疫炎症反应,改善预后。     

黑果枸杞含片体内抗氧化作用

目的: 研究黑果枸杞含片的体内抗氧化作用. 方法: 40 只小鼠随机分为4组:正常组、黑果枸杞含片低、高剂量组(0.08,0.16 mg·g^-1)和阳性药组(维生素C, 0.02 mg·g^-1).各组分别连续ig给药28 d后眼眶采血及取肝组织,试剂盒测定小鼠血清和肝脏中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、总抗氧化能力(T-AOC)和过氧化氢酶(CAT)活性. 结果: 与正常组比较,黑果枸杞含片低、高剂量组小鼠的体重没有明显变化,小鼠血清和肝组织中MDA分别为(5.97±2.53),(11.08±3.72) μmol·L^-1和(5.84±1.44),(10.79±2.06) μmol·L^-1与正常组(8.69±2.85) μmol·L^-1,(14.49±1.56) μmol·L^-1相比显著降低(P<0.05,P<0.01),T-AOC,SOD,GSH-Px和CAT 活性明显提高(P<0.05,P<0.01),尤其是高剂量组T-AOC,SOD,GSH-Px和CAT活性显著提高. 结论: 黑果枸杞含片具有显著的体内抗氧化活性.     

基于p38 MAPK信号通路探讨复方蛇龙胶囊对膜性肾病大鼠的作用

目的 探讨复方蛇龙胶囊对膜性肾病大鼠的肾保护和抗炎的作用，以及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号通路在其中的作用。方法 将SPF级雄性SD大鼠分为正常组和造模组，采用尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白复制膜性肾病大鼠模型，剔除不符合条件的大鼠后，将造模成功大鼠按照阳性药物组（雷公藤多苷片）、复方蛇龙胶囊低、中、高剂量组（0.375、0.75、1.5 g·kg^-1）对应剂量给药干预8周，期间检测尿蛋白变化，给药结束后进行肾功能以及炎症相关指标检测，检测24 h尿蛋白（24 h UP）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）及总胆固醇（TC）的变化；流式细胞术检测CD4⁺/CD8⁺的变化；留取肾脏组织在光镜及电镜下观察病理改变；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肾脏组织中p38 MAPK及磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）的蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠24 h UP显著升高（P<0.01），血清Cr、BUN、TC、IL-6、IL-8、TNF-α明显升高（P<0.05，P<0.01），血清Alb、TP水平明显下降（P<0.05，P<0.01），外周血中CD4⁺/CD8⁺结果显著升高（P<0.01），大鼠肾脏病理组织基底膜上皮侧可见免疫复合物沉积以及足突融合，并伴有炎性细胞的浸润；肾脏组织中p38 MAPK及p-p38 MAPK蛋白表达水平均有明显升高（P<0.05）。与模型组比较，给药组大鼠24 h UP在6周开始出现明显下降（P<0.05，P<0.01），血清Cr、BUN、TC、IL-6、IL-8、TNF-α明显降低（P<0.05，P<0.01），血清Alb、TP水平明显升高（P<0.05，P<0.01），外周血中CD4⁺/CD8⁺结果显著降低（P<0.01），治疗组大鼠肾脏病理损伤有所改善；肾脏组织中p38 MAPK及p-p38 MAPK蛋白表达水平降低（P<0.05，P<0.01）。结论 复方蛇龙胶囊能够通过抑制p38 MAPK信号通路表达从而减轻炎症因子的表达，减少蛋白尿，延缓肾损伤，从而起到保护肾功能作用。     

加味独活寄生汤对胶原诱导性关节炎大鼠关节滑膜及血清中炎症因子的影响

目的: 观察加味独活寄生汤对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠IL-6,IL-17及TNF-α表达的影响. 方法: 取雄性SD大鼠90只,正常组6只,其余大鼠尾根部按0.2 mg/只肌肉注射胶原乳剂制成关节炎大鼠模型,选择造模成功大鼠30只,随机等分为模型组,来氟米特组和加味独活寄生汤高、中、低剂量组.来氟米特组按10 mL·kg^-1灌胃给予来氟米特,加味独活寄生汤高、中、低剂量组分别按44,22,11 g·kg^-1灌胃给予加味独活寄生汤,模型组及正常组灌胃相同体积水,每天1次,连续12周.采用RT-PCR法检测关节滑膜IL-6,IL-17,TNF-α的mRNA表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清IL-6,IL-17,TNF-α的质量浓度.统计方法采用单因素方差分析. 结果: 与正常组比较,模型组IL-6,IL-17,TNF-α的mRNA及蛋白表达显著升高;与模型组比较,各治疗组IL-6,TNF-α的mRNA及蛋白表达显著降低;加味独活寄生汤组IL-17蛋白表达显著降低,基因表达无显著性差异. 结论: 加味独活寄生汤对CIA大鼠关节炎症具有明显改善作用,其抗炎作用机制可能是通过下调炎性细胞因子IL-6,IL-17,TNF-α的表达来实现.     

人参多糖介导Wnt/β-catenin信号转导诱导人鼻咽癌细胞CNE-2的凋亡

目的: 观察人参多糖(ginseng polysaccharide, GPS)对人鼻咽癌细胞CNE-2的增殖和凋亡的影响以及可能的机制探讨. 方法: CCK8法观察人参多糖对人鼻咽癌CNE-2细胞生长的影响.取对数生长期的CNE-2细胞,用不同质量浓度人参多糖(GPS)0,0.1,0.2,0.3,0.4 g·L^-1分别作用48 h后,流式细胞术检测其对CNE-2细胞凋亡的诱导作用;Hoechst-33258染色和电镜观察细胞的形态改变.Real-time PCR检测细胞β-catenin mRNA的表达.采用免疫荧光染色检测细胞中β-catenin,TCF4蛋白定位及表达量的变化.Western blot检测细胞中β-catenin,Bcl-2,Bax蛋白的变化. 结果: CCK8法测得人参多糖能明显抑制CNE-2细胞的增殖,其抑制作用呈剂量、时间依赖性,GPS处理细胞48 h的IC₅₀为0.39 g·L^-1;质量浓度分别为0.1,0.2,0.3,0.4 g·L^-1的GPS作用人鼻咽癌CNE-2细胞48 h后细胞凋亡率分别为(5.69±0.29)%,(10.3±0.63)%,(15.4±0.74)%,(35.7±1.86)%,与对照组(2.08±0.11)%比较均有显著性差异(P<0.05);Hoechst-33258染色结果显示细胞凋亡特征.电镜下可见0.4 g·L^-1GPS诱导48 h后可使CNE-2细胞出现凋亡小体.Real-time PCR显示β-catenin mRNA表达明显降低.激光共聚焦结果显示人参多糖作用48 h后β-catenin和TCF4在胞核中表达明显减少,β-catenin表达区域由胞核向胞膜转移.Western blot结果显示经浓度梯度增加的人参多糖作用CNE-2细胞48 h后,β-catenin和抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显减弱;而促凋亡蛋白Bax表达上调(P<0.05). 结论: 人参多糖可明显抑制CNE-2细胞增殖促进细胞凋亡.Wnt/β-catenin信号通路的受阻可能是GPS诱导人鼻咽癌细胞CNE-2凋亡的一个重要机制.     

肺肠合治法对支气管哮喘小鼠血管活性肠肽和p38 MAPK信号通路的影响

目的 观察中医治疗肺系疾病的常用治法肺肠合治法对支气管哮喘小鼠的治疗作用,进一步检测与哮喘发病机制密切相关的血管活性肠肽（VIP）和p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号通路相关蛋白的变化,以阐明肺肠合治法治疗支气管哮喘的作用机制。方法 将60只昆明种小鼠随机选12只作为正常组。其余小鼠通过卵清蛋白致敏复制小鼠支气管哮喘模型。分为正常组、模型组、地塞米松组（0.5 mg·kg^-1·d^-1）、中药治肺组（2.73 g·kg^-1·d^-1）、肺肠合治组（6.825 g·kg^-1·d^-1）,灌胃30 d后取血清及肺组织样本。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组小鼠血清中VIP、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）法检测各组小鼠肺组织中TNF-α、IL-6、p38 MAPK mRNA的表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠肺组织中TNF-α、IL-6、p38 MAPK,磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）蛋白的表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠血清VIP含量明显降低（P<0.05）,TNF-α、IL-6含量明显升高（P<0.05）,肺组织TNF-α、IL-6、p38 MAPK mRNA和TNF-α、IL-6、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白相对表达量明显升高（P<0.05）;与模型组比较,各治疗组小鼠血清VIP含量明显升高（P<0.05）,TNF-α、IL-6含量明显升高（P<0.05）,肺组织TNF-α、IL-6、p38 MAPK mRNA和TNF-α、IL-6、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白相对表达量明显降低（P<0.05）;与肺肠合治组比较,地塞米松组小鼠血清TNF-α、IL-6明显增高（P<0.05）,肺组织TNF-α、IL-6 mRNA和TNF-α、IL-6蛋白相对表达量明显降低（P<0.05）,肺组织p38 MAPK、VIP mRNA和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白相对表达量明显升高（P<0.05）,中药治肺组小鼠血清VIP、TNF-α、IL-6明显降低（P<0.05）,肺组织TNF-α、IL-6、p38 MAPK mRNA和TNF-α、IL-6、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白相对表达量均明显升高（P<0.05）,肺组织VIP mRNA表达水平明显降低（P<0.05）。结论 肺肠合治法可以增加内源性VIP,抑制p38 MAPK信号通路的过度活化,减少炎症因子释放,抑制肺部炎症反应,治疗支气管哮喘。     

扶正解毒颗粒对染镍大鼠肾组织核因子-κB活化的影响

目的: 研究中药扶正解毒颗粒(FJG)对硫酸镍(NiSO₄)染毒大鼠肾组织核因子-κB (NF-κB)活化的影响。方法: 50只Wistar大鼠采用NiSO₄ 2.5 mg ·kg^-1 ip(连续7 d,此后间日1次)制备肾损伤模型,随机分为NiSO₄组(模型组)、 FJG高、中、低剂量组(分别为20,10,5 g ·kg^-1 ·d^-1),二硫基丁二酸(DMSA),50 mg ·kg^-1 ·d^-1)组。另设NS组(空白对照)及FJG对照组(FJG 10 g ·kg^-1 ·d^-1)。各组大鼠ig 1次/d,共4周。测定各组大鼠血尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)及24 h尿蛋白定量(24 h-UP),免疫组化SP法观察肾组织NF-κB活化。结果: NiSO₄组大鼠出现肾功能损伤,NF-κB活化:肾小球(34.62±9.11)%,肾小管(62.45±14.78)%; FJG大剂量组NF-κB活化:肾小球(2.08±0.64)%,肾小管(11.48±3.39)%,明显低于NiSO₄组(P<0. 01),肾功能损伤亦明显减轻(P<0.05,P<0. 01)。结论: FJG可能通过抑制肾组织NF-κB活性的异常升高而发挥拮抗镍性肾损伤的作用。     

基于p38MAPK通路探讨丹蛭降糖胶囊对2型糖尿病模型大鼠血管病变的影响

目的:基于p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路观察丹蛭降糖胶囊对实验性2型糖尿病(T2DM)模型大鼠血管内皮功能受损的影响。方法:采用高脂高糖饮食及腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立T2DM大鼠模型,将104只大鼠随机分成正常组,模型组,丹蛭降糖胶囊高、中、低剂量(1.08,0.72,0.54 g·kg^-1·d^-1)组,吡格列酮(10 mg·kg^-1·d^-1)组,丹蛭-吡格列酮(1.08+0.01 g·kg^-1·d^-1)组。造模成功后分别按相应剂量ig药物,每日1次。给药8周后,所有大鼠麻醉后腹主动脉采集血液样本和处死剪取腹主动脉进行相关检测,分析其作用机制。结果:治疗8周后,与正常组相比,模型组磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK),MAPK激酶3/6(MKK3/6),核转录因子cAMP反应元件结合蛋白1(CREB1),环氧化酶-2(COX-2),细胞间黏附分子(ICAM-1)蛋白表达水平均有上调,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)蛋白表达水平下调;与模型组相比,给药组大鼠p-p38MAPK,MKK3/6,CREB1,COX-2,ICAM-1蛋白表达水平均有下调,MKP-1蛋白表达水平明显上调(P<0.05,P<0.01)。腹主动脉免疫组化示,给药组p38MAPK蛋白表达量与模型组相比明显降低。结论:丹蛭降糖胶囊能调节T2DM模型大鼠血管p38MAPK蛋白表达水平,并可能从而改善大鼠血管内皮功能受损。     

葛根芩连汤调控MMP-9/p38 MARK途径修复溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜上皮屏障功能

目的 探讨葛根芩连汤对溃疡性结肠炎（UC）小鼠肠黏膜上皮屏障功能的保护作用，并通过基质金属蛋白酶-9（MMP-9）/p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号通路探究其治疗UC的作用机制。方法 48只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组（0.3 g·kg^-1）及葛根芩连汤高、中、低剂量组（2.84，1.42，0.71 g·kg^-1）。采用3%葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液构建UC小鼠模型，葛根芩连汤和柳氮磺吡啶于造模后第8天灌胃给药，连续7 d，正常组给予等量生理盐水处理。末次给药后取结肠组织，苏木素-伊红（HE）染色观察结肠组织病理变化，免疫组化（IHC）观察结肠组织紧密连接（TJ）蛋白，如闭合蛋白（Occludin），闭锁连接蛋白-1（ZO-1）的表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测结肠组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α），白细胞介素-1β（IL-1β），MMP-9 mRNA表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织中磷酸化（p）-p38 MAPK，p38 MAPK和MMP-9蛋白的表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠体质量显著下降（P<0.01），疾病活动指数（DAI）评分显著升高（P<0.01），结肠黏膜上皮破损并可见黏膜和黏膜下层炎细胞浸润明显，Occludin，ZO-1蛋白表达显著降低（P<0.01），TNF-α，IL-1β，MMP-9 mRNA相对表达量显著升高（P<0.01），p-p38 MAPK和MMP-9蛋白表达显著升高（P<0.01）；与模型组比较，柳氮磺吡啶组、葛根芩连汤各剂量组小鼠体质量和DAI评分均有明显改善（P<0.05，P<0.01），结肠组织损坏明显改善，Occludin，ZO-1蛋白明显增多（P<0.05，P<0.01），TNF-α，IL-1β，MMP-9 mRNA相对表达量显著下降（P<0.01），p-p38 MAPK和MMP-9蛋白表达显著下降（P<0.01），其中葛根芩连汤各组中以中剂量组的变化最为明显。结论 葛根芩连汤能够通过抑制MMP-9和炎性细胞因子TNF-α，IL-1β的表达，阻断p38 MAPK信号通路的激活，增加TJ蛋白的表达，从而修复肠道黏膜屏障功能。     

胡柚皮黄酮对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝组织SIRT1/PGC-1α通路的影响

目的： 观察胡柚皮黄酮（PTFC）对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）小鼠肝组织脂肪变、炎症程度、氧化应激水平及SIRT1,PGC-1α表达的影响,探讨PTFC防治NASH的作用机制。方法： 以高脂饮食喂养16周诱导小鼠NASH模型,于造模第7周起以100,50,25 mg·kg^-1·d^-1的PTFC干预10周,HE染色观察肝组织病理学变化,生化法检测肝组织TG,CHOL含量和血清ALT,AST水平;Real-time PCR法检测肝组织SIRT1,PGC-1α,MnSOD mRNA表达;免疫组织化学法检测肝组织SIRT1, PGC-1α 蛋白及8-OHdG表达;黄嘌呤氧化酶法检测肝组织SOD水平;硫代巴比妥酸法检测肝组织MDA含量。结果： 高脂饮食诱导的NASH模型组小鼠肝组织TG,CHOL水平、NAFLD活动度积分、血清ALT较正常组显著增高（P<0.01）,肝组织SIRT1,PGC-1α,MnSOD mRNA和蛋白表达较正常组显著降低（P<0.01）,肝组织8-OHdG表达和MDA含量较正常组明显增高（P<0.01）;不同剂量PTFC干预后小鼠肝组织的NAFLD活动度积分、TG水平、血清AST较模型组显著降低（P<0.01,P<0.05）,肝组织SIRT1,PGC-1α,MnSOD mRNA和蛋白表达较模型组明显增高（P<0.01,P<0.05）,8-OHdG表达和MDA含量较模型组明显减少（P<0.01）。结论： 高脂饮食诱导小鼠NASH氧化应激/脂质过氧化增强可能与SIRT1/PGC-1α信号转导通路的改变有关;PTFC能通过调节SIRT1/PGC-1α信号通路,增强肝脏抗氧化能力,减少脂肪酸代谢过程中活性氧的损伤,防治NASH的发生发展。