β1整合素与卵巢癌细胞凋亡关系的实验研究

目的 研究β1整合素及纤维黏连蛋白在人卵巢癌HO-8910细胞增殖、凋亡中的作用及其意义.方法 以培养在包被纤雏黏连蛋白底物上的人卵巢癌HO-8910细胞为靶细胞,用不同浓度抗β1整合素单克隆抗体阻断β1整合素与纤维黏连蛋白的相互作用.用MTT法测定细胞增殖抑制率;吖啶橙(acridine orange,AO)染色观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率.结果 抗β1整合素单克隆抗体能抑制人卵巢癌HO-8910细胞的增殖,并有明显的时间和剂量依赖性(P＜0.05).荧光显微镜观察到细胞凋亡的形态学改变;流式细胞术检测结果显示实验组S期上升,细胞凋亡率上升.结论 抗β1整合素单克隆抗体可抑制卵巢癌细胞的增殖,β1整合素抗体与卵巢癌细胞凋亡密切相关,阻断β1整合素与其特意配体纤维黏连蛋白的相互作用可诱导卵巢癌细胞凋亡.     

人绒毛膜促性腺激素对顺铂介导的卵巢癌3AO细胞凋亡的影响

目的 分析HCG对卵巢癌细胞株3AO凋亡的影响，探讨HCG在卵巢癌发生发展中的作用。方法 首先用顺铂诱导3AO细胞凋亡，然后在顺铂处理前后用不同浓度的HCG作用48h，采用丫啶橙(AO)和溴化乙锭(EB)荧光双染色法对凋亡细胞计数。结果 HCG能抑制3AO细胞凋亡，而且这种抑制作用具有浓度依赖性，随着HCG浓度的增加抑制作用加强。结论 HCG可以通过抑制顺铂介导的凋亡而影响卵巢癌细胞的化疗敏感性。     

β1整合素过表达抑制顺铂诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨β1整合素过表达对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响及其机制。方法功能性β1整合素稳定过表达Hep3B细胞系用于实验。采用WST-1细胞增殖实验试剂盒检测细胞增殖,DNA梯形条带和Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡。结果与亲株、空载体转染Hep3B细胞相比,β1整合素过表达明显抑制顺铂诱导的肝癌细胞凋亡。细胞外信号调节激酶(ERK)抑制物PD98059和p38促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制物SB203580能够明显减弱β1整合素对细胞凋亡的保护作用,但Jun激酶抑制物SP600125不能减弱β1整合素的保护作用。结论β1整合素能够通过ERK和p38MAPK信号通路抵抗顺铂诱导的肝癌细胞凋亡。β1整合素介导的细胞外基质信号与肝细胞肝癌化疗耐药有关。     

人绒毛膜促性腺激素抑制卵巢癌细胞株3AO凋亡

目的　分析hCG对卵巢癌细胞株 3AO凋亡的影响 ,探讨hCG在卵巢癌发生、发展中的作用。方法　首先用顺铂诱导 3AO细胞凋亡 ,然后在顺铂处理前后用不同浓度的hCG作用 48h ,采用丫啶橙 (AO)和溴化乙锭 (EB)荧光双染色法对凋亡细胞计数。结果　hCG能显著地抑制 3AO细胞凋亡 (P <0 .0 5 ) ,而且这种抑制作用具有浓度依赖性 ,随着hCG浓度的增加抑制作用加强。结论　hCG可以通过抑制顺铂介导的凋亡而影响卵巢癌细胞的化疗敏感性。     

bcl-2基因表达在人卵巢癌多药耐药现象中的作用

为探讨凋亡抑制基因bcl-2的表达在人卵巢癌顺铂耐药现象中的作用,采用DNA电泳,流式细胞仪技术及逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,分别对顺铂诱导的人卵巢癌细胞敏感株COC1及耐药株COC1/DDP的细胞凋亡及其bcl-2基因表达进行研究.结果发现①不同浓度顺铂作用下敏感细胞株和耐药细胞株中均见凋亡梯度,且随顺铂浓度的增加凋亡梯度增大.②不同浓度顺铂作用下流式细胞仪分析结果显示耐药细胞株中凋亡率明显低于敏感细胞株(P＜0.05).③耐药细胞株中bcl-2基因表达明显强于敏感细胞株.在顺铂作用下敏感细胞株和耐药细胞株中bcl-2基因表达下调.结果表明顺铂可诱导卵巢癌细胞凋亡;凋亡抑制基因bcl-2在人卵巢癌多药耐药细胞中高表达,是导致其细胞凋亡受抑制的重要原因.     

促卵泡激素对顺铂诱导卵巢癌细胞株凋亡的保护作用

目的 探讨促卵泡激素(FSH)对顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的保护作用。方法 MTT比色法检测人卵巢上皮性癌细胞系OVCAR3转染FSH受体(OVCAR3-FSHR)细胞活性,流式细胞术分析细胞周期变化及细胞凋亡率。结果 促卵泡激素能降低顺铂对细胞生长的抑制作用,同时降低S期的比例和凋亡率。结论 促卵泡激素对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡有保护作用。     

糖原合酶激酶-3β磷酸化抑制顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的 探讨增加糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)的磷酸化状态对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的作用.方法 体外培养人卵巢癌细胞株OV2008细胞,运用GSK-3β特异性抑制剂LiCl增加磷酸化GSK-3β的表达,应用流式细胞仪检测不同浓度顺铂诱导的细胞凋亡,Western blot检测GSK-3β及磷酸化GSK-3β蛋白的表达.结果 流式细胞仪检测结果显示,梯度增加的顺铂(40、80、120 μmol/L)作用于OV2008细胞24 h,其凋亡率不断增加,分别为(4.55±1.64)%、(25.50±0.94)%和(53.80±1.62)%;而应用抑制剂预孵育的细胞,不同浓度顺铂作用24 h后凋亡率分别为(2.10±0.80)%、(15.75±0.97)%和(20.45±0.87)%;Western blot显示,抑制剂LiCl作用后,细胞的磷酸化GSK-3β表达明显增加,并且顺铂作用亦可引起磷酸化GSK-36表达上调;流式结果还显示,P13K的特异性抑制剂LY294002作用后使顺铂诱导的细胞凋亡率从(18.75±0.70)%增加至(28.40±1.50)%.结论 磷酸化GSK-3β表达增加可抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞的凋亡.     

重组可溶性TRAIL联合顺铂诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的研究

目的 研究重组可溶性TRAIL(rsTRAIL)与化疗药物顺铂 (CDDP)单独及联合使用诱导骨肉瘤细胞MG-63的凋亡作用.方法 常规培养骨肉瘤细胞系MG-63,用不同浓度rsTRAIL、CDDP和两药联用处理细胞,于处理后的不同时间观察细胞形态变化.应用四氮唑蓝(MTT)比色法和吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双重荧光染色法检测两药单独使用和联合使用诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的作用.结果 rsTRAIL对MG-63细胞的生长有明显的抑制作用,可见典型的细胞凋亡特点,细胞抑制率从6 μg/L的10.1%上升到800 μg/L的84.6%,细胞凋亡率从3 μg/L的19%提高到25 μg/L的69.7%,均具显著的剂量效应;亚毒性剂量的CDDP与低浓度的rsTRAIL合用,明显提高了MG-63细胞的生长抑制率和凋亡率(P＜0.05).结论 rsTRAIL具有诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的作用,并通过诱导凋亡的方式有效地杀伤肿瘤细胞;化疗药物CDDP能加强rsTRAIL的抗肿瘤活性.     

bFGF对成骨细胞整合素β1亚单位表达和细胞黏附的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对成骨细胞整合素81亚单位表达的影响,探讨纤维黏连蛋白(FN)与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单独或联合应用时对成骨细胞在生物衍生骨支架上黏附的影响.方法:培养成骨细胞,以bFGF(100 ng/ml)刺激,接种于FN(10μg/ml)修饰的生物衍生骨支架上,Western blot检测bFGF对FN受体整合素β1亚单位表达的影响,MTT检测组间细胞黏附效率差异,电镜观察细胞密度与形态.结果:Western blot检测发现应用bFGF刺激后,成骨细胞整合素β1亚单位表达增强;MTT检测发现单独应用FN与bFGF均可增加细胞在生物衍生骨上的黏附效率(P＜0.01),但二者联合应用时,产生的效应进一步增强,二者存在统计学上的交互作用(P＜0.01);电镜观察也证明,二者联合应用时细胞密度、铺展效果均优于单独应用.结论:bFGF可以显著增强成骨细胞FN受体整合素β1亚单位的表达,明显提高成骨细胞在FN修饰生物衍生骨支架上的黏附效率,bFGF与FN对于促进成骨细胞的黏附具有交互作用.     

顺铂对人卵巢癌CAOV3细胞端粒酶活性和凋亡的影响

目的研究顺铂作用于卵巢癌CAOV3细胞后，端粒酶活性、细胞凋亡和细胞周期变化与细胞耐药性的关系。方法用顺铂处理卵巢癌CAOV3细胞，端粒酶重复序列扩增(TRAP)一银染法测定端粒酶活性，流式细胞仪观察细胞凋亡和细胞周期的改变。结果顺铂(DDP)处理卵巢癌CAOV3细胞后，CAOV3细胞端粒酶活性受到抑制，细胞周期受阻于G2／M期，未见细胞凋亡峰改变。结论CAOV3细胞对顺铂的耐药性通过多因素起作用，DDP对端粒酶活性具有抑制作用，可以改变细胞周期，但对细胞凋亡无明显影响。     

凋亡抑制基因在人卵巢癌细胞敏感株及耐药株中的表达

目的 探讨凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌细胞敏感株(A2780)及耐药株(AD6)中的表达及其在卵巢癌多药耐药发生中的分子机制.方法 采用DNA电泳、流式细胞技术及半定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,检测不同浓度(3.0、6.0、9.9μg/ml)顺铂诱导的人卵巢癌细胞敏感株A2780及耐药株AD6的细胞凋亡及其Bcl-2和Bcl-XL基因的表达水平.结果 ①DNA凝胶电泳显示,不同浓度的顺铂均能诱导A2780和AD6细胞产生凋亡,呈现典型的凋亡梯度(DNA Ladder).②流式细胞仪分析结果显示,不同顺铂浓度作用下A2780和AD6细胞凋亡率不同,AD6明显低于A2780(P＜0.05).③RT-PCR结果显示,A2780和AD6细胞均表达Bcl-2、Bcl-XL,但在AD6细胞株中2基因的表达明显强于A2780.在6.0μg/ml顺铂作用下A2780和AD6细胞株中2基因表达下调,但仍以在AD6的表达强于A2780.结论 顺铂可诱导卵巢癌细胞凋亡,凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌多药耐药细胞株中高表达,是导致其细胞凋亡受抑制和对药物敏感性降低的重要原因.     

β1整合素及纤维粘连蛋白与肺癌细胞凋亡关系的实验研究

目的 研究β1整台素及纤维粘连蛋白与人肺癌细胞凋亡之间的关系．方法 体外无血清培养条件下，以培养在包被纤维粘连蛋白底物上的人肺腺癌SPC-A-1细胞为靶细胞、用不同浓度抗β1，整台素单克隆抗体阻断β1整合素与纤维粘连蛋白相互作用，采用苏木素-伊红(HF)染色．吖啶橙荧光染色，DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况，并计算凋亡指数。结果 抗β1整合素单克隆抗体列SPC-A-1细胞凋亡有明显的促进作用，在一定的范围内，呈时间、剂量依赖性。结论 肺癌细胞凋亡与β1整合素受体有密切关系，且β1整台素受体与其特异配体纤维粘连蛋白的相互作用能促进细胞生存，当二者作用阴断导致肺癌细胞凋亡。     

P5增强卵巢癌细胞顺铂敏感性的体外研究

目的:探讨凋亡诱导核苷P5增强卵巢癌细胞顺铂(DDP)敏感性的作用,为临床改善卵巢癌患者的预后提供新方法.方法:选择卵巢癌细胞株COC1,以MTT法、Hoechst染色法,观察P5对卵巢癌细胞的生长抑制作用及其对DDP化疗的增敏作用.结果:小剂量P5(25 μg/mL)和大剂量P5(200 μg/mL)分别联合DDP共同作用于COC1细胞,DDP IC50值由2.51 μg/mL降至1.56～1.52 μg/mL.Hoechst染色法观察,小剂量P5和大剂量P5联合DDP作用于COC1细胞株,细胞凋亡明显增加.结论:小剂量P5与大剂量P5均能增加COC1细胞对DDP的敏感性,P5 DDP化疗增敏作用与其增加肿瘤细胞凋亡有关.     

紫杉醇与顺铂诱导下的凋亡卵巢癌细胞对树突细胞提呈功能的研究

目的探讨紫杉醇与顺铂诱导下的凋亡卵巢癌细胞对树突细胞提呈功能的研究。方法联合应用巨噬细胞集落刺激因子及白介素24刺激人外周血单核细胞诱导分化为树突状细胞（DC）,然后将树突状细胞和经紫杉醇联合顺铂在体外诱导发生凋亡的人卵巢癌细胞株共同培养,并共培养DC组为治疗组,生理盐水组和单独DC组作对照,分别注射于人卵巢癌移植瘤裸鼠尾部,2周后剥取瘤组织,计算抑瘤率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,观察裸鼠人卵巢癌移植瘤的发生率及治疗效果。结果紫杉醇、顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞对DC提呈功能显著增强,其诱导的CTL对卵巢癌细胞具有显著的杀伤作用。DC激活的CTL具有抑制移植瘤生长,促进肿瘤细胞凋亡的作用（P〈0．05）。结论紫杉醇、顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞对树突细胞提呈功能具有较强的免疫原性,可以在免疫治疗卵巢癌中发挥重要作用。     

青蒿琥酯联合奥沙利铂诱导胃癌细胞凋亡及对p38MAPK和Caspase-3表达的影响

目的 观察青蒿琥酯联合奥沙利铂对胃癌细胞SGC-7901生长的抑制作用,并探讨其可能的机制.方法 应用光学显微镜观察青蒿琥酯联合奥沙利铂对胃癌细胞形态学变化的影响;噻唑氮蓝(MTT),吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法检测细胞活力及细胞凋亡情况;RT-PCR及Western blot检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平.结果 (1)青蒿琥酯及奥沙利铂单独作用胃癌细胞后,其生长均明显被抑制,抑制率具有浓度依赖性(P＜0.05).(2)青蒿琥酯联合奥沙利铂对胃癌细胞的抑制率优于青蒿琥酯或奥沙利铂单药使用,两者具有协同作用.(3)胃癌细胞的凋亡率随药物作用浓度增加而增加.(4)青蒿琥酯及青蒿琥酯联合奥沙利铂作用于胃癌细胞后p38MAPK、Caspase-3表达量均明显增加(均P＜0.05).结论 青蒿琥酯联合奥沙利铂能有效抑制胃癌细胞增殖,诱导其凋亡.其机制可能是通过p38MAPK通路诱导p38MAPK和Caspase-3表达增加最终导致胃癌细胞凋亡有关.     

雌激素影响卵巢癌细胞系COC1顺铂耐药的相关机制

目的研究雌激素对顺铂诱导卵巢癌细胞系COC1和COC1／DDP凋亡的影响。方法运用细胞培养、MTT、原位标记法、流式细胞术和免疫组化等方法，采取雌激素预先作用卵巢癌COC1和COC1／DDP细胞16h，随后与顺铂共同培养诱导凋亡方式，动态地观察雌激素对顺铂诱导这两个细胞系凋亡影响和此过程中细胞周期分布和p53蛋白表达的改变。结果雌激素促进顺铂诱导的COC1和COC1／DDP细胞凋亡．引起细胞周期由G2到S期的转变，p53蛋白对雌激素作用无明显影响。结论处于细胞周期顺铂不敏感期的卵巢癌细胞可能与其耐药有关，雌激素可增加耐药的COC1／DDP细胞顺铂敏感性。     

三氧化二砷和顺铂对人卵巢癌细胞株3AO体外杀伤效应的对比研究

目的 :比较As2 O3 和顺铂 (cDDP)对卵巢癌细胞株的生长抑制作用和凋亡诱导作用。方法 :采用MTT测定法和流式细胞分析法 (FCM) ,检测As2 O3 对体外培养的人卵巢癌细胞株 3AO细胞的生长抑制率和诱导凋亡率及对细胞周期的影响 ,并与cDDP进行比较。采用吖啶橙染色 ,观察As2 O3 作用后 ,凋亡细胞的形态学变化。结果 :As2 O3 可以有效地抑制 3AO细胞生长并诱导其凋亡 ,具有量 效性及时 效性 ,与cDDP相比 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。As2 O3 作用后 ,S期细胞通过受阻 ,形态学观察发现细胞呈典型的凋亡细胞特征。结论 :与cDDP相比 ,As2 O3 对卵巢癌细胞株 3AO细胞具有更有效的生长抑制作用及诱导凋亡作用 ,并使S期细胞阻滞。     

Bcl-xL和Caspase3在人卵巢癌细胞株凋亡过程中的调节作用

目的 探讨Bcl-xL和Caspase3基因在顺铂诱导人卵巢癌细胞株凋亡过程中的表达及其在肿瘤细胞凋亡中的作用。方法 应用流式细胞术，RT—PCR技术和原位杂交技术，分别对顺铂诱导人卵巢癌敏感细胞株(COCl)及卵巢癌耐药细胞株(COCl／DDP)的细胞凋亡及其Bcl-xL和Caspase3表达进行研究。结果 ①不同顺铂浓度(3、6、9．9μg／m1)作用下COCl和COCl／DDP细胞凋亡率不同，COCl／DDP细胞明显低于COCl(P＜0．05)。②COCl和COCl／DDP细胞株中均有Bcl-xL基因表达，但COCl／DDP表达明显强于COCl。在6μg／m1顺铂作用下COCl和COCl／DDP细胞株中Bcl-xL基因表达下调，以COCl下降更明显。②原位杂交结果，6μg／m1顺铂作用后COCl和COCl／DDP细胞Cas—pase3呈阳性，可见到凋亡细胞特征性形态学变化。结论 凋亡抑制基因Bcl—xL在人卵巢癌多药耐药细胞株(COCl／DDP)中高表达，是导致其细胞凋亡受抑制和对药物敏感性降低的重要原因，Caspase3在顺铂诱导凋亡的过程中被激活，促进凋亡。     

凋亡素在体外对人卵巢癌细胞及正常卵巢细胞凋亡的影响

目的　探讨凋亡素基因 (VP3)表达对人卵巢癌细胞和正常卵巢细胞凋亡的影响。方法　采用LipofectamineTM2 0 0 0介导的基因转染方法将重组凋亡素真核表达质粒pcDNA3.1 -VP3 导入仓鼠正常卵巢细胞CHO -K1、人卵巢癌细胞CoC1及人卵巢癌细胞耐药亚株CoC1 DDP。结果　凋亡素基因已在转染细胞中存在并在转录水平表达 ;CHO -K1中凋亡素组与空质粒组凋亡率差异无显著性 (P >0 .0 5 )。CoC1和CoC1 DDP中 ,凋亡素组凋亡率明显高于空白对照组和空质粒组 (P <0 .0 1 ) ,且凋亡素更易诱导CoC1 DDP细胞凋亡 (P <0 .0 1 )。结论　在转染细胞中凋亡素基因在转录水平得到表达 ;凋亡素能特异性诱导人卵巢癌细胞CoC1及人卵巢癌细胞顺铂耐药亚株CoC1 DDP凋亡 ,不影响正常卵巢细胞CHO -K1 ;凋亡素更易诱导卵巢癌顺铂耐药亚株CoC1 DDP细胞的凋亡     

2-DG通过内质网应激增强人卵巢癌SKOV3细胞顺铂敏感性的研究

目的:顺铂作为传统的化疗药物被广泛应用于临床,但其较强的副作用限制了顺铂的临床应用。为了提高肿瘤细胞对顺铂的敏感,我们选择2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)进行细胞实验。方法:利用免疫荧光结合免疫印迹技术检测2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)体外抗卵巢癌SKOV3细胞的抗肿瘤作用。结果:2-DG可增强顺铂对卵巢癌SKOV3细胞的抗肿瘤作用,包括抑制SKOV3细胞的增殖、诱导凋亡小体的形成和促进细胞的凋亡。免疫荧光结合免疫印迹技术检测显示,2-DG增强了顺铂诱导的SKOV3细胞内质网应激相关蛋白--葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达;2-DG还上调顺铂诱导的SKOV3细胞内质网应激相关蛋白--凋亡蛋白153/C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达。结论:2-DG通过增强顺铂诱导的内质网应激增加SKOV3细胞对顺铂的敏感性。