脂质体莪术醇逆转卵巢癌顺铂耐药作用的机制

目的 研究脂质体莪术醇(LC)对人卵巢癌细胞顺铂耐药的逆转作用及其机制。方法 采用卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP,细胞分为5组：空白对照组、阴性对照组(含12.5μg/ml脂质体)、顺铂组(4μg/ml)、LC组(20μg/ml)、联合组[顺铂(4μg/ml)+LC(20μg/ml)],CCK-8检测各组细胞增殖能力,高效液相色谱-串联质谱法检测细胞内顺铂平均含量,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR检测P糖蛋白(P-gp)的mRNA相对表达量,免疫细胞化学和Western blot检测各组细胞P-gp蛋白的表达情况。结果 联合组细胞增殖能力最低,凋亡率最高(P<0.05);联合组细胞内顺铂平均含量大于顺铂组(P<0.05);联合组细胞的P-gp mRNA和蛋白相对表达量低于单用顺铂组(P<0.05)。结论 LC可通过抑制P-gp的表达,降低人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP对顺铂的耐药性。     

川芎嗪对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP的逆转作用研究

目的建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP,探讨川芎嗪对COC1/DDP顺铂耐药性的逆转作用及其机制。方法采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP;CCK-8(cell counting kit-8)检测川芎嗪对COC1/DDP细胞顺铂耐药性的逆转作用;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内GSH的水平,高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果历时5个月建立了在1.0μg/mL DDP作用下生长良好的耐药细胞株COC1/DDP,耐药指数为9.44,对卡铂、长春新碱和阿霉素有不同程度的交叉耐药性;川芎嗪0.25 mg/mL对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,逆转倍数达到3.76倍;与COC1比较,COC1/DDP细胞内GSH水平增高,顺铂含量下降,但经川芎嗪0.25 mg/mL干预后,COC1/DDP胞内的GSH水平降低,顺铂的含量增加(P<0.01)。结论川芎嗪对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,其机制可能与干预COC1/DDP细胞内GSH/GST-π解毒系统,增加细胞内顺铂的含量有关。     

米非司酮对卵巢癌细胞的增敏作用及其机制的研究

目的研究米非司酮对卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP的增敏作用及其作用机制。方法用卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP和敏感细胞系COC1为实验对象,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测米非司酮对COC1/DDP细胞的增敏作用,流式细胞仪检测米非司酮对凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达的影响。结果1.25μmol/L的米非司酮能够增强COC1/DDP对顺铂的敏感性,并使Bcl-2的阳性率从(23.80±0.44)%下降至(19.40±0.69)%(P=0.000),Bax从(12.75±0.25)%上升至(25.60±0.88)%(P=0.000),其逆转作用有剂量依赖性。结论米非司酮逆转卵巢癌COC1/DDP细胞对顺铂的耐药可能与下调Bcl-2的表达、上调Bax的表达、降低Bcl-2/Bax的比率有关。     

人肝癌顺铂耐药细胞株HepG2的建立

目的体外建立顺铂(DDP)诱导的人肝癌耐药细胞株(HepG2/DDP),研究其生物学特性。方法以采用药物大剂量冲击结合低剂量持续诱导方法诱导HepG2细胞株,建立人肝癌顺铂耐药细胞株HepG2/DDP;MTT法检测顺铂对HepG2和HepG2/DDP的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI),绘制细胞生长曲线及计算细胞倍增时间,并用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期。结果历时5个月成功建成HepG2/DDP细胞株,MTT法检测DDP对HepG2的IC50为1.35μg/ml,HepG2/DDP的IC50为23.35μg/ml,RI达17生长曲线表明其增殖速度明显低于亲本HepG2人肝癌细胞,且倍增时间增加;细胞周期分析发现相对于亲本HepG2细胞,G0/G1期细胞减少、S期与G2/M期细胞增多。结论成功建立稳定耐药细胞株HepG2/DDP。     

Mifepristone对卵巢癌细胞的单己糖神经酰胺表达及耐药性的影响

目的研究单己糖神经酰胺在卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP对顺铂耐药性中的作用,探索mifepristone对COC1/DDP细胞耐药性逆转的机制.方法将耐药细胞分为顺铂组、顺铂+mifepristone组,MTT方法检测各组细胞抑制率;采用改良的Hahomori方法分别提取、纯化耐药细胞COC1/DDP(用mifepristone处理前后)和敏感细胞COC1的中性鞘糖脂,高效薄层层析、凝胶光密度成像系统分析各组CMH的差异将耐药细胞分为三组顺铂组、mifepristone组、顺铂+mifepristone组,用透射电镜观察各组细胞的超微形态结构变化.结果mifepristone可以逆转COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性,1.25μmol/L的mifepristone与浓度为(0.1～1.25)μg/ml的顺铂联合应用,使细胞的抑制率从单用上述浓度顺铂时的(8.84±6.29)%～(17..71±8.00)%上升为(15.26±6.75)%～(27.15±7.69)%(P＜0.001),且有剂量依赖性.耐药细胞的CMH表达率为(37.14±3.34)%,明显高于敏感细胞的(14.05±1.44)%(P＜0.001),耐药细胞经1.25μmol/L、5μmol/L mifepristone处理后,CMH分别下降到(26.62±2.63)%(P＜0.05)和(17.50±0.67)%(P＜0.001).顺铂和mifepristone联合作用,透射电镜观察到耐药细胞出现异染色质浓缩、边聚,产生了凋亡小体.结论mifepristone在较低浓度即可逆转卵巢癌细胞COC1/DDP对顺铂的耐药性,其增敏机制可能与抑制单己糖神经酰胺的表达、促进细胞凋亡相关.     

人参皂苷Rg3通过下调PD-L1逆转胃癌细胞的顺铂耐药性

目的 探究人参皂苷Rg3对顺铂（DDP）耐药性胃癌细胞株SGC7901/DDP的逆转作用及机制。方法 CKK-8法鉴定Rg3对SGC7901/DDP细胞的毒性,筛选出合适浓度进行实验;将SGC7901/DDP细胞分为5组,空白对照组、Rg3低剂量组（10μg/ml）、中剂量组（20μg/ml）、高剂量组（40μg/ml）、维拉帕米组（10μg/ml）,CCK-8法检测Rg3对SGC7901/DDP细胞顺铂耐药性的逆转作用;实时定量PCR（qRT-PCR）和蛋白免疫印记（WB）检测PD-L1mRNA和蛋白表达;CCK-8法检测SGC7901/DDP细胞PD-L1过表达后,Rg3对细胞耐药性的作用。结果 5、10、20、40、80、160μg/ml Rg3均能抑制SGC7901、SGC7901/DDP细胞活性,呈剂量和时间依赖效应,选择5、10、20、40μg/ml作为人参皂苷Rg3实验浓度。与DPP组比较,Rg3处理后DDP对SGC7901/DDP细胞增殖的抑制作用明显增强（P<0.05）。与SGC7901细胞比较,SGC7901/DDP细胞中PD-L1蛋白显著高表达（P<0.05）;与DPP组比较,Rg3处理后细胞中PD-L1mRNA及蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）。SGC7901/DDP细胞PD-L1过表达可有效减弱Rg3对SGC7901/DDP细胞耐药性的逆转作用。结论 人参皂苷Rg3可有效抑制SGC7901/DDP细胞增殖,增加SGC7901/DDP对顺铂的敏感度,其机制可能通过下调PD-L1基因表达实现。     

P5增强卵巢癌细胞顺铂敏感性的体外研究

目的:探讨凋亡诱导核苷P5增强卵巢癌细胞顺铂(DDP)敏感性的作用,为临床改善卵巢癌患者的预后提供新方法.方法:选择卵巢癌细胞株COC1,以MTT法、Hoechst染色法,观察P5对卵巢癌细胞的生长抑制作用及其对DDP化疗的增敏作用.结果:小剂量P5(25 μg/mL)和大剂量P5(200 μg/mL)分别联合DDP共同作用于COC1细胞,DDP IC50值由2.51 μg/mL降至1.56～1.52 μg/mL.Hoechst染色法观察,小剂量P5和大剂量P5联合DDP作用于COC1细胞株,细胞凋亡明显增加.结论:小剂量P5与大剂量P5均能增加COC1细胞对DDP的敏感性,P5 DDP化疗增敏作用与其增加肿瘤细胞凋亡有关.     

功能蛋白在氯化镧逆转卵巢癌顺铂耐药中的差异表达分析

目的 从蛋白质水平研究氯化镧对人卵巢癌顺铂耐药细胞(COC1/DDP)功能蛋白表达的影响,为探讨氯化镧逆转卵巢癌顺铂耐药的机制提供实验依据.方法 取对数生长期COC1/DDP细胞分为4组,对照组只加入10%胎牛血清培养基培养,顺铂组加入23.08 μg/mL顺铂,氯化镧组和氯化镧+顺铂组分别加入1.5 μmol/L氯化镧,处理8 h后氯化镧+顺铂组加入23.08 μg/mL顺铂.采用蛋白印迹(Western blot)技术检测顺铂和氯化镧分别作用于COC1/DDP后,4组中ERCC1、Ki67、CDK6、HDAC2、c-Cbl和微管末端结合蛋白1(EB1)6种功能蛋白的表达变化.结果 与对照组相比,COC1/DDP的4种功能蛋白ERCC1、Ki67、CDK6、c-Cbl在顺铂组和顺铂+氯化镧组中表达显著下调,差异有统计学意义(P<0.05);且顺铂+氯化镧组较顺铂组表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05).与对照组比较,顺铂组中HDAC2和EB1表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05);顺铂+氯化镧组与顺铂组、氯化镧组中表达比较有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 氯化镧可能通过多种途径下调ERCC1、Ki67、CDK6和c-Cbl表达,从而介导逆转卵巢癌顺铂耐药.     

人卵巢癌顺铂耐药细胞株的建立及耐药机制研究

目的：建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP,探讨其耐药的机制。方法：采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导卵巢癌细胞系COC1,建立卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP;CCK-8试剂盒（Cell Counting Kit-8）检测各种抗癌药对COC1和COC1／DDP细胞增殖的抑制作用,并计算耐药指数;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）的水平;高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果：历时5个月建立COC1／DDP,对顺铂耐药性稳定,耐药指数为9．44;与COC1比较,COC1／DDP细胞内GSH的水平增高,顺铂含量下降（P〈0．01）。结论：入卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1／DDP耐药性稳定,耐药机制可能与GSH／GST-π解毒系统活性增强,减少细胞内顺铂含量有关。     

米非司酮调控卵巢癌细胞表达葡萄糖神经酰氨合成酶并逆转其多药耐药性

目的 观察米非司酮体外逆转COC1/DDP细胞对顺铂的多药耐药性(MDR)以及对细胞葡萄糖神经酰氨合成酶(GCS)表达的影响,初步探讨其增敏机制.方法 以米非司酮为MDR修饰剂,MTT法检测米非司酮对COC1/DDP的增敏效应.RT-PCR技术分析耐药株COC1/DDP的MDR逆转前后以及亲本株COC1细胞的GCS在mRNA水平的表达.结果 米非司酮增强COC1/DDP细胞对DDP敏感性;与COC1相比,COC1/DDP细胞的GCS在mRNA水平的表达增强;米非司酮使GCS表达降低,效应呈剂量依赖关系.结论 无毒性剂量米非司酮可以在体外增加卵巢癌COC1/DDP细胞对DDP的敏感性.作用机制与抑制GCSmRNA表达有关.     

葡萄籽原花青素对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用

目的 观察葡萄籽来源的原花青素(grape seed proanthoeyanidin extract,GSPE)对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用,并初步探讨其作用机制.方法 以MTT法检测不同浓度的GSPE(0、20、40、80、160、320μg/ml)不同时间(12、24、36、48、72 h)对COC1/DDP的增殖抑制作用,HE染色观察细胞形态变化,流式细胞仪和TUNEL检测细胞周期和凋亡,Western blot检测细胞内Caspase-3蛋白的表达.结果 GSPE对COC1/DDP具有明显的增殖抑制作用,且呈剂量-时间依赖性,不同浓度GSPE能引起细胞形态明显的凋亡改变.流式细胞术和TUNEL表明GSPE可以诱导细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率升高.Western blot检测显示随着药物浓度增加,Caspase-3蛋白表达增加.结论 原花青素可以在体外抑制人卵巢癌耐药细胞COCl/DDP的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达有关.     

米非司酮对卵巢癌细胞2的增敏作用及其机制的研究

OBJECTIVE: To observe the effect of mifepristone in enhancing chemosensitivity of drug-resistant ovarian cancer cell line to cisplatin and investigate its mechanism. METHODS: Human ovarian cancer cell lines COC1 (DDP-sensitive) and COC1/DDP (DDP-resistant) were incubated with or without mifepristone. The proliferation rate of the cells was determined by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay and positive expression of apoptosis-associated proteins Bcl-2 and Bax were observed by means of flow cytometry. RESULTS: It was observed that mifepristone at the dose of 1.25 micromol/L reversed the resistance of COC1/DDP cells to cisplatin, and Bcl-2 protein expression was deceased from (23.8067+/-0.4382)% to (19.3967+/-0.6866)% (P=0.000) while Bax protein expression increased from (12.75+/-0.2524)% to (25.5967+/-0.8834)% (P=0.000). CONCLUSION: Mifepristone may act to enhance the sensitivity of COC1/DDP cells to cisplatin, possibly through regulating Bcl-2 and Bax protein expressions.     

Gleevec诱导顺铂耐药卵巢癌细胞COC1凋亡的形态学研究

目的探讨Gleevec对顺铂耐药卵巢癌细胞COC1的诱导凋亡作用。方法用Gleevec处理COC1细胞，采用MTT法检测Gleevec联合顺铂对细胞增殖的影响。HE染色显微镜下观察细胞，电镜下观察细胞形态学的变化。结果Gleevec显著提高了COC1／DDP对顺铂的敏感性（P〈0．05）；2．5～10μg／ml顺铂与1．0μmol／L Gleevec合用表现为协同作用，2．5～10μg／ml顺铂与2．5～10μmol／L Gleevec合用表现为相加作用。在Gleevec的作用下COC1细胞呈现明显的凋亡改变，形成凋亡小体。结论Gleevec能够诱导顺铂耐药卵巢癌细胞COC1的凋亡。     

参芪化淤方对H22肝癌细胞survivin表达的影响

目的探讨参芪化淤方对H22肝癌细胞survivin基因表达的影响。方法将H22肝癌荷瘤小鼠60只随机分为6组,参芪化淤方高、中、低剂量组,环磷酰胺(CTX)对照组,模型组,阴性对照组。参芪化淤方低、中、高剂量组分别予以0.4mL参芪化淤方(低剂量组:1.04g/mL,中剂量组:2.08g/mL,高剂量组:4.16g/mL)灌胃,CTX对照组予以0.2mL CTX溶液(小鼠给药剂量为20mg.kg-1.d-1)腹腔注射,模型组予以0.4mL生理盐水灌胃,每日1次,给药14d。免疫组化法检测肿瘤组织sur-vivin基因的表达;同时观察脾、胸腺指数及肿瘤抑制率。结果参芪化淤方高、中、低剂量对小鼠的脾及胸腺均具有一定保护作用,能升高小鼠的脾、胸腺指数。其中低剂量组与CTX对照组对脾及胸腺的保护作用相当,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05),而中、高剂量组对脾及胸腺的保护作用更强(P<0.01)。与模型组比较,参芪化淤方中、高剂量组对H22型肝癌小鼠肿瘤抑制作用明显(P<0.01),低剂量组和CTX对照组也具有一定的抑制作用(P<0.05)。参芪化淤方高、中、低剂量组都能降低H22肝癌荷瘤小鼠癌组织中survivin基因的表达水平,其中CTX对照组及低剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),中、高剂量组的抑制作用更显著(P<0.01)。结论参芪化淤方对H22肝癌荷瘤小鼠癌组织中survivin基因的表达具有一定抑制作用,且能保护小鼠的免疫器官。     

升降散对内毒素刺激血管内皮细胞ET-1和NO表达的影响

目的:探讨升降散对内毒素(LPS)刺激下血管内皮细胞ET-1和NO表达的影响。方法:将内皮细胞传代培养后分为空白组、对照组(空白细胞+LPS 0.50 mg/ml)、低剂量升降散组(升降散5 mg/ml+LPS 0.50 mg/ml)、中剂量升降散组(升降散10 mg/ml+LPS 0.50 mg/ml)和高剂量升降散组(升降散30 mg/ml+LPS 0.50 mg/ml),观察各组ET-1和NO水平变化。结果:升降散作用细胞48 h后,内皮细胞在5～30 mg/ml范围内对内皮细胞贴壁无明显影响。LPS作用内皮细胞48 h后,NOi、NOS、NOS水平明显升高,与空白组比较有显著性差异(P<0.01);升降散作用细胞后ET-1、NOi、NOS、NOS水平有不同程度降低,与对照组比较有显著性差异(P<0.05,P<0.01),且中、高剂量升降散组诸指标的降低幅度较低剂量升降散组明显(P<0.05,P<0.01)。结论:升降散能抑制LPS诱导的VECs活性物质生成和释放,从而减轻对组织细胞的损伤,以中高剂量升降散效果更显著。     

桃红四物汤对产后血瘀证大鼠血清溶血磷脂酸的影响

目的探讨桃红四物汤对产后血瘀证大鼠血清溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)水平的影响。方法采用米非司酮(8.3mg/kg)和米索前列醇(0.1mg/kg)灌胃早孕鼠,复制血瘀证大鼠模型,将模型复制成功的大鼠随机分为模型组、益母草颗粒组(4.3g/kg)及桃红四物汤高(18.0g/kg)、中(9.0g/kg)、低(4.5g/kg)剂量组,并设立正常对照组;测定血液流变学指标以判定桃红四物汤治疗血瘀证的疗效,采用酶联免疫吸附试验测定血清LPA含量。结果模型组全血黏度、血浆黏度、血清LPA均较正常对照组显著增高(P0.05,或P0.01);桃红四物汤中剂量组及益母草颗粒组大鼠全血低切变率黏度和高切变率黏度显著降低(P0.05),各药物组大鼠血浆黏度显著降低(P0.05,或P0.01);桃红四物汤中剂量组及益母草颗粒组大鼠LPA水平显著降低(P0.05)。结论桃红四物汤祛瘀作用显著,其治疗作用可能与降低血清LPA的水平有关。     

三七总甙对糖尿病皮肤溃疡大鼠单核细胞趋化蛋白-1水平的影响

目的观察三七总甙(PNS)对糖尿病皮肤溃疡(DSU)大鼠单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响。方法选择成年Wistar大鼠50只,随机分为对照组、DSU模型组和PNS高、中、低剂量处理组,每组10只。放射免疫法检测大鼠血清MCP-1水平,反转录-聚合酶链反应、Western blotting检测大鼠溃疡处组织中MCP-1的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠血清MCP-1水平、溃疡处组织MCP-1 mRNA、蛋白水平显著升高(P<0.05);而PNS高、中、低剂量处理组血清MCP-1水平及溃疡处组织MCP-1 mRNA及蛋白水平均较模型组下降(P<0.05),且PNS高、中剂量处理组显著低于低剂量处理组(P<0.05),高剂量处理组显著低于中剂量处理组(P<0.05)。结论 PNS可降低MCP-1的表达,有效防治DSU的发生发展。