补肾调冲方含药血清对高雄激素培养大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌的影响

目的 运用血清药理学方法观察补肾调冲方对高雄激素培养的大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌功能的影响。方法 根据血清药理学方法,用6周龄的未成年SD大鼠制备促卵泡生成素（FSH）及大、中、小剂量补肾调冲方含药血清,分别加入过量丙酸睾丸酮处理的颗粒细胞培养体系中。培养48h后,测定^3H-TdR掺入DNA的量,并用流式细胞仪检测细胞周期分布及增殖指数（PI）,放免法测定颗粒细胞培养液中雌二醇（E2）、孕酮（P）水平及细胞内环磷酸腺苷（cAMP）含量。结果 高雄激素明显抑制颗粒细胞的增殖与分泌功能,并明显降低了细胞内cAMP的含量;而补肾调7中方含药血清可改善高雄激素对颗粒细胞功能的抑制状态,促进细胞增殖及E2、P的分泌,其作用呈剂量依赖性。结论 补肾调冲方含药血清可有效拮抗高雄激素对颗粒细胞功能的抑制作用,推测补肾调冲方通过促卵泡发育、提高雌、孕激素水平,改善雌／雄激素比值来调节卵巢功能。     

补肾调冲方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌及其FSHR mRNA表达的影响

目的：运用血清药理学方法观察补肾调冲方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖与分泌功能及其FSHR mRNA表达的影响.方法：在大鼠卵巢颗粒细胞培养体系中加入空白或含药血清,培养48小时后,用放免法测定各组颗粒细胞培养液中E2、P含量,流式细胞仪测定各组颗粒细胞的细胞周期分布及增殖指数（PI）,用Real-time RT-PCR方法实时定量测定颗粒细胞FSHR mRNA的表达量.结果：补肾调冲方血清组E2、P含量较空白血清组均明显升高,G0/G1期细胞均明显减少,而S期细胞及PI值则明显增高;颗粒细胞FSHR mRNA表达量明显增多,且随剂量增加而作用增强.结论：补肾调冲方含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞的增殖与甾体激素分泌功能以及FSHR mRNA的表达,从而增强含药血清中所含促性腺激素对颗粒细胞的作用及颗粒细胞对促性腺激素的反应性.这也是补肾调冲方调节卵巢功能的作用机理之一.     

补肾调冲方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖、激素分泌和mRNA表达的影响

目的 运用血清药理学方法观察补肾调冲方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖、激素分泌功能以及抑制素B (INHB)、胰岛素样生长因子-1 (1GF-1) mRNA表达的影响.方法向培养的SD大鼠卵巢颗粒细胞中分别加入10％空白血清(对照组)、人转基因重组促卵泡激素(hFSH)含药血清(阳性对照组)、补肾调冲方含药血清(补肾调冲方组),培养48 h,以闪烁计数器测定3H-TdR掺入DNA的量,流式细胞仪测定细胞周期分布,放射免疫法测定培养液中雌二醇(E2)和孕激素(P)水平,并采用RT-PCR法测定1NHB、IGF-1 mRNA的表达量.结果补肾调冲方含药血清可剂量相关地促进3H-TdR掺入颗粒细胞DNA的量.与对照组相比,补肾调冲方各含药血清组G0/G1期细胞均明显减少,而S期细胞则明显增多;E2、P的量明显升高;颗粒细胞INHB、IGF-1 mRNA表达量均明显增多,且呈剂量相关性.结论补肾调冲方含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞的增殖、增强甾体激素的分泌功能,该作用可能通过增强INHB、IGF-1基因的表达,从内分泌和自分泌两条途径调节卵巢功能而实现的.     

补肾调冲方含药血清对高雄激素培养的卵巢颗粒细胞IGF-1 StAR mRNA表达的影响

目的:运用血清药理学方法观察补肾调冲方对高雄激素培养的大鼠卵巢颗粒细胞(GC)IGF-1、StARmRNA表达的影响。方法:根据血清药理学方法,用6周龄的未成年SD大鼠制备FSH及大、中、小剂量补肾调冲方含药血清,分别加入到过量丙酸睾丸酮处理的GC培养体系中。培养48h后,用实时荧光定量RT-PCR(Real-timeRT-PCR)方法检测GCIGF-1、StARmRNA的表达量。结果:高雄激素抑制GCIGF-1、StARmRNA的表达,补肾调冲方及FSH含药血清可拮抗高雄激素的抑制作用,促进IGF-1、StARmRNA的表达。结论:补肾调冲方含药血清可有效拮抗高雄激素对IGF-1、StARmRNA表达的抑制作用,推测补肾调冲方通过促进IGF-1、StARmRNA的表达,改善雌/雄激素比值来调节卵巢功能。     

补肾调冲含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞体外分泌功能的影响

目的探讨补肾调冲方对大鼠离体卵巢颗粒细胞分泌功能的影响。方法采用血清药理学的方法,以不同含药量的大鼠血清,与体外培养的颗粒细胞共同孵育24 h,用放免法测定培养液中E2,P,IGF-I,TNF-α的浓度。结果补肾调冲含药血清可升调颗粒细胞E2及IGF-I的分泌量。降调P,TNF-α的分泌量。结论补肾调冲方可通过调节卵巢颗粒细胞的分泌功能,进而改善卵巢功能。     

中药补肾调冲方对卵巢储备功能低下大鼠的影响

目的:观察中药补肾调冲方对环磷酰胺所致卵巢储备功能低下(DOR)大鼠性激素水平和免疫因子TNF-α、IFN-γ含量的影响,探讨补肾调冲方对DOR的预防、改善和调节作用。方法:将SD雌性大鼠40只,随机分为对照组、模型组、补肾调冲方预防组、补肾调冲方治疗组各10只。运用ELISA法检测大鼠血清中雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)与黄体生成素(LH)比值、抗苗勒激素(AMH)水平。采用Real Time PCR法检测大鼠卵巢组织相关细胞因子TNF-α、IFN-γmRNA转录水平的变化情况。结果:补肾调冲方可升高DOR大鼠的E2、AMH水平,降低FSH/LH比值和TNF-α、IFN-γmRNA表达,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:中药补肾调冲方对卵巢损伤具有一定的预防保护作用,可以预防DOR的发生,其作用机制可能与补肾调冲方中某些中药能够调节卵巢性激素水平,抑制TNF-α、IFN-γ分泌,降低卵泡闭锁的速度,抑制卵泡过度凋亡,进而改善卵巢功能。     

补肾调冲方对去卵巢大鼠性激素水平及下丘脑雌激素受体α、雌激素受体β mRNA表达的影响

[目的]探讨补肾调冲方对去卵巢大鼠血清性激素水平及下丘脑雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)mRNA表达的影响。[方法]以假手术组为对照,将去卵巢大鼠随机分为去卵巢空白组,补肾调冲方高、中、低剂量组,已烯雌酚组。采用放射免疫分析法测定血清雌二醇(E2)、促卵泡生成激素(FSH)、促黄体生成激素(LH)水平,采用逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)检测下丘脑ERα、ERβmRNA表达。[结果]去卵巢大鼠血清FSH、LH水平升高,E2及下丘脑ERα、ERβmRNA水平降低,补肾调冲方大鼠血清E2有升高趋势,FSH有降低趋势,补肾调冲方能降低去卵巢大鼠血清LH水平,升高下丘脑ERα、βmRNA的表达。[结论]补肾调冲方在改善去卵巢大鼠性激素水平同时,可能通过影响ERα、ERβmRNA的表达,提高ER的生物效应,从而降低更年期综合征的发生。     

补肾调经方含药血清对体外培养的人卵巢颗粒细胞FSH/cAMP-PKA通路的影响

目的通过补肾调经方含药血清对体外培养的人卵巢颗粒细胞卵泡刺激素／环磷酸腺苷-蛋白激酶A（follicle stimulating hormone／cyclic adenosine monophosphate-protein kinaseA,FSH／cAMP-PKA）通路的影响,探讨补肾调经方改善卵巢内分泌功能可能的分子机制。方法收集行体外受精一胚胎移植（In vitro fertilization-embryo transfer,IVF．ET）患者卵泡液,提取颗粒细胞进行原代细胞培养24h,以低、中、高剂量补肾调经方人、大鼠含药血清以及正常人、大鼠血清分别与体外培养的人卵巢颗粒细胞共同孵育48h,分为补肾调经方低、中、高剂量组以及对照组。采用放射免疫方法测定培养液中雌二醇（estrogen,E2）、孕酮（progesterone,P）、环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）的水平,采用蛋白印迹法和Real-timePCR分别检测卵泡刺激素受体（follicle stimulating hormone receptor,FSHR）蛋白和FSHR、P450芳香化酶（P450 aromatase,P450arom）mRNA在颗粒细胞的表达。结果人含药血清组：与对照组比较,补肾调经方中、高剂量组培养液中E2、cAMP水平均明显升高（P〈0．05）,补肾强经方中剂量纽P明显降低（P〈0．01）;补肾调经方中、高剂量组卵巢颗粒细胞FSHR蛋白及其mRNA表达均明显增高（P〈0．01）,P450芳香化酶mRNA表达显著升高（P〈0．05,P〈0．01）。大鼠含药血清组：与对照组比较,补肾调经方中、高剂量组E2均升高（P〈0．01）,cAMP明显升高（P〈0．05,P〈0．01）,补肾调经方中剂量组P明显降低（P〈0．01）;补肾调经方中、高剂量组人卵巢颗粒细胞FSHR蛋白及其mRNA表达均增高（P〈0．01）,P450芳香化酶mRNA表达明显升高（P〈0．05,P〈0．01）。结论补肾调经方可能通过调节卵巢颗粒细胞FSH／cAMP-PKA通路的主要效应分子FSHR、cAMP、P450arom、E2,促进卵巢颗粒细胞的内分泌功能。     

补肾化痰方对卵巢颗粒细胞脂联素依赖p38MAPK途径及增殖分化相关信号分子的调控作用

目的观察补肾化痰方对脂联素依赖p38MAPK途径及细胞增殖分化相关信号分子的调控作用,探讨该方促进颗粒细胞增殖,调控卵泡发育的机制。方法采用雌性SD大鼠,体外培养大鼠卵巢颗粒细胞,行Western-blotting检测颗粒细胞AdipoR1/2的蛋白表达水平,Realtime PCR检测颗粒细胞p38MAPK、smad1/3、C/EBP-β、Ki67、CCND2的mRNA表达水平。结果大鼠卵巢颗粒细胞可表达AdipoR1/2;与空白对照组比较,补肾化痰方各剂量组AdipoR1/2表达量均增高(P0.05或P0.01);补肾化痰方各剂量组p38MAPK、Ki67、smad1/3、C/EBP-β、Ki67、CCND2的mRNA表达量也明显高于空白组(P0.05或P0.01);C/EBP-β与AdipoR2、p38MAPK呈显著正相关(P0.01),C/EBP-β与AdipoR1正相关(P0.05)。结论补肾化痰方可能通过APN/p38MAPK途径促进卵巢颗粒细胞增殖的作用。     

补肾调冲法治疗卵巢功能失调性不孕的实验研究

目的：探讨补肾调冲法治疗卵巢功能失调性不孕症的作用机理。方法：选择雌性小白鼠72只，大白鼠38只，各随机分4组，分别予以补肾方、调冲方、补肾调冲方及生理盐水灌胃。观察排卵和黄体情况、血清E2、LH含量及卵巢环磷酸腺苷(cAMP)水平。结果：补肾调冲方具有明显的促卵泡发育、促黄体生成功能；可使脑垂体前叶促性腺激素细胞分泌颗粒增多及卵泡颗粒层细胞处于活跃状态，使大鼠卵巢cAMP含量增加。结论：补肾调冲法对垂体－卵巢生死分泌系统具有良好的调节作用。     

卵泡膜细胞胰岛素抵抗及隐丹参酮的调控

目的:探索胰岛素抵抗的卵泡膜细胞对腺苷酸环化酶激活剂(Forskolin)的反应变化以及中药隐丹参酮对卵泡膜细胞甾体激素合成的调控作用。方法:采用猪卵巢卵泡膜细胞进行体外培养,应用渥漫青霉素(Wortmannin)诱导构建胰岛素抵抗的细胞模型,并应用隐丹参酮和Forskolin处理各组细胞,检测中药隐丹参酮和/或Forskolin作用后各组的培养液葡萄糖浓度和激素水平的变化以及胰岛素信号分子和甾体激素合成关键酶的mRNA表达变化。结果:卵泡膜细胞发生胰岛素抵抗后,睾酮(T)、孕酮(P)合成能力明显增强,17α羟化酶(CYP17)、3β-羟基甾脱氢酶(3β-HSD)、过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)、细胞色素芳香化酶(P450arom)和类固醇激素合成急性调节蛋白(STAR)的mRNA表达量增加,胰岛素抵抗卵泡膜细胞对Forskolin的生物效应反应性增强。中药隐丹参酮能够缓解卵泡膜细胞胰岛素抵抗,同时也降低了培养液中睾酮的水平和甾体激素合成酶CYP17和STAR的mRNA水平。结论:中药隐丹参酮能够降低由于卵泡膜细胞胰岛素抵抗所产生的功能异常,提示中药增敏剂可以用于多囊卵巢综合征的治疗,可以起到改善生殖功能的作用。     

逍遥散加减方对高催乳素血症大鼠卵巢自分泌及旁分泌机制的影响

目的:探讨逍遥散加减方对高催乳素血症大鼠模型卵巢自分泌及旁分泌机制的影响。方法:采用腹腔注射甲氧氯普胺制成高催乳血症大鼠模型,随机分为6组:空白组、模型组、逍遥散加减方高、中、低剂量组(分别予以逍遥散加减方60、30、15g·kg^-1·d^-1)、溴隐亭组0.001g·kg^-1·d^-1,药物治疗30d后通过免疫组化检测大鼠卵巢组织胰岛素样生长因子1(IGF-1)、胰岛素样生长因子2(IGF-2)阳性结果的表达;采用MTT检测卵巢颗粒细胞存活率及增殖率;采用ELISA法测定卵巢抗苗勒试管激素(AMH)的含量;采用PCR检测血清促卵泡激素受体(FSHR)的含量。结果:与空白组比较,模型组IGF-1、AMH、FSHR、卵巢颗粒细胞存活率、细胞增殖显著减少(P<0.05,P<0.01);逍遥散加减方中、低剂量组IGF-1显著降低(P<0.01),逍遥散加减方低剂量组AMH及卵巢颗粒细胞存活率显著降低(P<0.05),溴隐亭组IGF-1、卵巢颗粒细胞存活率显著降低(P<0.05);与模型组比较,逍遥散加减方高剂量组AMH、IGF-1、卵巢颗粒细胞存活率显著升高(P<0.01,P<0.05),逍遥散加减方高剂量组细胞增殖率及FSHR升高(P<0.05,P<0.01)。结论:逍遥散加减方高剂量组通过提高IGF-1、FSHR及AMH的含量调节卵巢自分泌/旁分泌机制,进而提高动物模型卵巢颗粒细胞存活率。     

参麦注射液对加入IL-1β诱导下软骨细胞Bcl-2/Bax mRNA表达的影响

目的:观察参麦注射液(SMI)对加入IL-1β诱导下软骨细胞Bcl-2/Bax mRNA表达的影响,探讨其防治软骨退变的作用机制。方法:分离培养体外软骨细胞,随机分成3组:空白组、IL-1β诱导组和参麦组,空白组采用含10%胎牛血清的培养基培养,IL-1β诱导组采用含浓度为10ng/mL IL-1β的培养基培养,参麦组采用含浓度为10ng/mL IL-1β和10%参麦注射液的培养基培养,采用反转录/聚合酶链反应(RT-PCR)法检测参麦注射液对软骨细胞Bax和Bcl-2 mRNA的表达情况。结果:与空白组比较,IL-1β诱导组Bcl-2 mRNA表达明显减少(P0.01),Bax mRNA表达增多(P0.01),均有统计学意义;与IL-1β诱导组比较,参麦组Bcl-2 mR-NA表达明显增多(P0.01),Bax mRNA表达减少(P0.01)。结论:参麦注射液可能通过降低促凋亡基因BaxmRNA表达,增加凋亡抑制基因Bcl-2mRNA的表达,从而调节Bcl-2/Bax mRNA的比例,抑制软骨细胞凋亡。     

桂枝茯苓丸调节PI3K/Akt/mTOR通路对PCOS-IR大鼠排卵障碍的影响

目的:探讨桂枝茯苓丸对来曲唑联合高脂乳剂导致的多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗(PCOS-IR)大鼠排卵障碍的影响.方法 :将72只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、二甲双胍组和桂枝茯苓丸低、中、高剂量组,每组12只.除空白组外,其余大鼠每日予来曲唑0.001 g·kg1结合高脂乳剂15 mL?kg1连续灌胃30 d建立P...     

乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞INHB、FSHR mRNA及分泌功能的影响

[目的]运用血清药理学方法观察乌萸汤含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞抑制素(INHB)、促卵泡激素受体(FSHR)mRNA的表达及其分泌功能的影响。[方法]在大鼠卵巢颗粒细胞培养体系中加入乌萸汤、尿促卵泡激素(FSH)及正常大鼠含药血清,培养48h后,分别用酶联免疫吸附法(ELISA),逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及放免法测定颗粒细胞INHB、FSHR、mRNA及培养液中雌二醇(E2)含量。[结果]各用药血清组E2含量较对照组均明显升高;颗粒细胞INHB、FSHRmRNA表达量明显增多,其中乌萸汤中剂量血清组效果优于西药组。[结论]乌萸汤含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞INHB、FSHRmRNA的表达以及E2分泌,说明乌萸汤可以通过调控卵巢局部因子、增强FSHRmRNA的表达从而提高卵巢对促性腺激素的反应性,改善下丘脑-垂体-卵巢轴,促进E2的分泌,以促进卵泡发育成熟及排出。     

六味地黄丸含药血清对MC3T3-E1细胞增殖以及对Runx2、FOXO1 mRNA表达的影响

目的探讨六味地黄丸含药血清对MC3T3-E1细胞增殖以及对Runx2、FOXO1 mRNA表达的影响。方法制作六味地黄丸混悬液,对成年Wistar大鼠进行灌胃,获取六味地黄丸含药血清。常规培养MC3T3-E1细胞24 h后更换含10%不同浓度含药血清的培养基,分别培养48 h和72 h后用CCK-8法检测MC3T3-E1细胞的增殖;对MC3T3-E1细胞进行诱导培养22天后进行饥饿培养24h,随后更换含10%不同浓度的含药血清,培养72 h后检测Runx2、FOXO1 mRNA表达。结果六味地黄丸含药血清能促进MC3T3-E1细胞增殖,并且呈现一定的剂量依赖性;同时六味地黄丸含药血清各剂量组均能明显促进Runx2 mRNA的表达(P0.01),高剂量组的表达明显高于低剂量组(P0.01)。高剂量组的FOX01 mRNA表达明显高于其他3组(P0.01)。结论六味地黄丸含药血清能促进MC3T3-E1细胞增殖,同时能促进Runx2、FOXO1 mRNA表达。     

针刺对围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞Fas、Bcl-2 mRNA表达的影响

目的从细胞凋亡角度研究针刺治疗围绝经期综合征的作用机制。方法将围绝经期大鼠随机分为围绝经期组、针刺组和药物组,并设青年对照组。围绝经期组大鼠不治疗,作为空白对照;针刺组大鼠针刺肾俞、足三里、三阴交治疗;药物组大鼠采用更年安药物治疗;青年对照组大鼠不治疗。应用原位杂交法检测卵巢颗粒细胞Fas、Bcl-2 mRNA表达,并进行图像分析。结果与青年对照组比较,围绝经期组大鼠卵巢颗粒细胞Fas mRNA表达明显升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达明显降低(P<0.01);针刺治疗后围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞Fas mRNA表达明显降低(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达明显提高(P<0.01)。结论针刺能够下调围绝经期大鼠卵巢颗粒细胞Fas mRNA表达,上调Bcl-2 mRNA表达。     

育麟方对卵巢储备功能降低大鼠颗粒细胞分泌功能的影响

目的: 研究育麟方影响环磷酰胺致卵巢储备功能降低大鼠模型卵巢颗粒细胞的分泌功能的机制。 方法: 性成熟雌性SD大鼠参考文献制备卵巢储备功能降低大鼠模型,分为育麟方高、中、低剂量组,补佳乐组,模型组,正常组。正常组,模型组予蒸馏水20 mL ·kg^-1,补佳乐组予戊酸雌二醇片0.21 mg ·kg^-1,育麟方低、中、高组分别予育麟方生药15.2,30.4,60.8 g ·kg^-1 ig 21 d后,予动情前期处死,放射免疫法测定大鼠血清卵泡刺激素(FSH),黄体生成素(LH)水平及抗苗勒管激素(AMH)表达水平,光镜下观察卵巢组织形态学变化,卵泡数目及黄体数目。 结果: 与正常组比较,模型组FSH,LH含量明显升高(P<0.05),AMH含量明显降低(P<0.05),各级卵泡数目,黄体数目明显减少(P<0.05);与模型组比较,育麟方治疗组大鼠血清FSH,LH水平明显减少(P<0.05),育麟方中剂量组及补佳乐组血清AMH水平明显增高(P<0.05),育麟方中、高剂量组的各级卵泡及黄体数量明显增多(P<0.05)。 结论: 育麟方可能通过影响卵巢储备功能降低模型鼠的颗粒细胞内分泌功能而改善其卵巢储备功能。