益肺活血汤对大鼠慢性阻塞性肺疾病模型肺组织氧化抗氧化失衡的影响

[目的]观察益肺活血汤对大鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型病理和肺功能的影响,评价其在氧化/抗氧化失衡机制方面的干预效应。[方法]采用SPF级雄性SD大鼠40只随机分为对照组10只、COPD组15只、益肺活血汤组15只。COPD组采用气管内注射脂多糖联合香烟烟雾吸入法制备大鼠COPD模型同时给予生理盐水灌胃。益肺活血汤组在COPD组制备方法基础上同时给予益肺活血汤灌胃治疗。对照组则采用室内环境喂养,气管内注射液生理盐水,同时给予生理盐水灌胃。模型制备及治疗过程结束后检测各组大鼠肺功能,并检测肺组织中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量,转录因子红细胞系-2p45(NF-E2)相关因子-2(Nrf2)和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)蛋白及m RNA表达。[结果]与对照组比较,模型组肺功能及肺组织病理切片提示COPD模型制备成功,MDA、GSH增高,SOD下降,NRF2和γ-GCS的蛋白及m RNA表达增高。与模型组比较,治疗组肺功能和肺组织病理变化减轻,MDA、GSH下降,SOD增高,NRF2和γ-GCS的蛋白及m RNA表达下降。[结论]益肺活血汤能有效减轻气管内注射脂多糖联合香烟烟雾吸入所造成的大鼠肺功能下降和肺组织病理变化。其机制应与通过提高肺组织SOD的含量从而减轻氧化应激有关,与激活Keap1-Nrf2-ARE通路引起γ-GCS基因和蛋白水平上调、GSH增多相关可能性小。     

糖络宁对糖尿病周围神经病变大鼠Nrf2/ARE通路的影响

目的探讨糖络宁对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠Nrf2/ARE通路相关蛋白的影响。方法将SD雄性大鼠随机分为空白对照组和链脲佐菌素(STZ)组,STZ组大鼠一次性腹腔注射60 mg/kg STZ,造模1周后,将空腹血糖浓度≥16.7 mmol/L的大鼠稳定1个月后,随机分为模型对照组、α-硫辛酸组、糖络宁低剂量组和糖络宁高剂量组,并给予相应药物12周。麻醉取大鼠坐骨神经,采用免疫组织化学方法检测大鼠坐骨神经Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1),核转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、及谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的表达。结果与空白对照组比较,模型对照组大鼠坐骨神经髓神经纤维排列紊乱,脱髓鞘严重,坐骨神经中Keap1、Nrf2、HO-1和γ-GCS的表达增加,差异有统计学意义(P0.05);与模型对照组比较,糖络宁低、高剂量组大鼠坐骨神经髓神经纤维排列紊乱和脱髓鞘现象得到改善,其中糖络宁低剂量组Keap1、Nrf2表达增加,糖络宁高剂量组HO-1、γ-GCS表达增加,差异均有统计学意义(P0.05)。结论糖络宁能够改善DPN大鼠坐骨神经的病理状态,上调Nrf2/ARE信号通路中Keap1、Nrf2、HO-1及γ-GCS的表达,增强机体抗氧化应激的能力。     

基于Keap1-Nrf2/ARE信号传导通路探讨黄芪多糖改善干燥综合征模型大鼠心功能的机制

目的基于Keap1-Nrf2/ARE信号传导通路探讨黄芪多糖改善干燥综合征（Sjogren′s syndrome,SS）模型大鼠心功能变化的机制。方法将48只Wistar雄性大鼠按随机数字表法分为4组：空白对照组（空白组）、模型对照组（模型组）、黄芪多糖组（中药组）和羟氯喹组（西药组）,每组12只,分别向每只大鼠（空白组除外）两后足跖部注射与弗氏完全佐剂充分乳化后的颌下腺蛋白混合抗原0.1 mL,诱导SS模型。致炎后第19天开始干预,空白组及模型组均给予等量生理盐水（1 mL/100 g）,其余组分别给予黄芪多糖（1 mg/100 g）、羟氯喹（0.031 25 g/kg）,各组每天干预1次,连续干预30天。给药结束后观察大鼠的体质量变化、饮水量变化、颌下腺指数、脾指数、腺体组织学变化;采用有创血流动力学监测SS模型大鼠心功能的变化;采用ELISA法检测血清中活性氧（reactive oxygen species,ROS）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、总抗氧化能力（total antioxidant capacity,TAC）、TNF-α、IL-35;HE染色观察心肌组织的病理学改变;免疫组化染色观察ROS、活性氮自由基（reactive nitrogen species, RNS）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）、硫氧还蛋白（thioredoxin,TRX）表达;实时荧光定量PCR（real time fluorescence quantitative PCR,RTFQ-PCR）检测Keap1、Nrf2、ARE mRNA蛋白的表达;Western blot方法测定大鼠心肌组织γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-glutamic acid and a half long glycine synthetase,γ-GCS）、血红素氧合酶1（heme oxygenase-1,HO-1）蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠饮水量、颌下腺指数、脾指数、HR、 心脏指数（HI）、左室收缩期压（LVSP）、左室舒张期压（LVEDP）、MDA、ROS、TNF-α、ROS蛋白表达、RNS蛋白表达、Keap1 mRNA、MafmRNA、Nfr2 mRNA、HO-1蛋白表达、γ-GCS蛋白表达升高（P〈0.01）,体质量、左室内压上升下降最大速率（±dp/dtmax）、SOD、TAC、IL-35、GSH、TRX蛋白表达降低（P〈0. 01）。与模型组比较,两个给药组干预后大鼠饮水量、颌下腺指数、脾指数、LVEDP、MDA、ROS、TNF-α、ROS蛋白表达、RNS蛋白表达、Keap1 mRNA、Maf mRNA、Nfr2 mRNA、HO-1蛋白表达、γ-GCS蛋白表达均降低（P〈0. 05）,而大鼠的体质量、±dp/dtmax、SOD、TAC、 IL-35、GSH蛋白表达、TRX蛋白表达升高（P〈0.05,P〈0. 01）;西药组HR升高（P〈0.05）;中药组HR、LVSP降低（P〈0.05,P〈0.01）。与西药组比较,中药组HR、LVEDP、±dp/dtmax、γ-GCS蛋白表达降低（P〈0.05,P〈0. 01）,SOD、TAC、GSH、TRX、HO-1蛋白表达升高（P〈0.01）。HI与ROS呈正相关（P〈0.05）;LVSP、LVEDP与Keap1-Nrf2/ARE信号传导通路呈正相关（P〈0.01）,与TAC呈负相关（P〈0.05,P〈0.01）;±dp/dtmax与Keap1-Nrf2/ARE信号传导通路呈负相关（P〈0.05）,与TNF-α呈正相关（P〈0.05）。结论干燥综合症大鼠存在心功能下降,黄芪多糖改善心功能的机制可能是与Keap1-Nrf2/ARE信号传导通路活化密切相关。     

加味天雄散对少弱精子症模型大鼠附睾氧化损伤的保护作用

目的:观察加味天雄散对少弱精子症模型大鼠附睾内细胞氧化应激损伤的影响并研究其作用机制。方法:将腺嘌呤按80mg/ml浓度配制,并对Wistar大鼠进行灌胃,每日1次,连续灌胃2周,造模成功后按随机数字表法将大鼠分为模型组、中药组、正常对照组,中药组连续给药加味天雄散汤剂4周,实验结束后检测各组大鼠附睾精子密度和活率,取经固定的睾丸组织石蜡包埋切片,检测附睾组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。结果:与模型组比较,加味天雄散能显著改善大鼠睾丸组织病理状态,显著提高生精障碍大鼠模型的精子密度和精子活率,同时提高生精障碍大鼠附睾内SOD活性,降低附睾组织中MDA水平。结论:加味天雄散能够提高附睾组织中的抗氧化水平,对腺嘌呤导致的大鼠生精功能障碍具有保护作用。     

石甘散对戊四氮致痫大鼠氧化应激反应及Nrf2、HO-1因子影响的研究

目的观察石甘散及其主要药物甘松、石菖蒲对戊四氮致痫大鼠氧化应激反应的影响,并根据核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)因子的变化研究石甘散可能的抗氧化作用机制。方法除空白组外,将点燃成功的戊四氮致痫大鼠随机分为模型组、西药组(丙戊酸钠灌胃治疗)、甘松组、石菖蒲组和石甘散组。所有大鼠经14 d干预后处死,取大鼠脑部海马组织,考马斯亮蓝法测定海马组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)蛋白含量,Western bloting法测定海马组织Nrf2和HO-1蛋白含量,RT-PCR法测定海马组织Nrf2 m RNA表达、HO-1 m RNA表达。结果 1)癫痫模型点燃成功后,大鼠海马组织SOD、GSH-Px含量明显降低,MDA含量明显升高(P0.01)。丙戊酸钠、甘松、石菖蒲、石甘散均可以增加致痫大鼠SOD、GSH-Px含量、降低MDA含量,丙戊酸钠、石甘散作用效果强于甘松、石菖蒲单独应用(P0.05或P0.01),且两组间差异无统计学意义(P0.05);2)癫痫模型点燃后,大鼠海马组织Nrf2、HO-1蛋白含量均升高(P0.05或P0.01)。丙戊酸钠、甘松、石菖蒲、石甘散均能进一步增加Nrf2、HO-1蛋白含量,西药组、石甘散组Nrf2、HO-1蛋白的增加明显高于甘松、石菖蒲单独应用(P0.05或P0.01),且两组间效果差异无统计学意义(P0.05);3)癫痫模型点燃后,大鼠海马组织Nrf2 m RNA表达、HO-1 m RNA含量升高,丙戊酸钠、甘松、石菖蒲、石甘散均可以进一步使Nrf2 m RNA表达、HO-1 m RNA表达增加(P0.05或P0.01),且各治疗组间提高m RNA表达效果差异无统计学意义(P0.05)。结论石甘散及其配方组成甘松、石菖蒲均具有抗戊四氮致痫大鼠氧化应激损伤、清除自由基的作用,其作用效果可能与激活Nrf2/HO-1信号通路中Nrf2因子并促进下游HO-1因子表达相关,甘松、石菖蒲的合成方石甘散作用效果最显著。     

牡荆苷调控Nrf2/ARE通路减轻急性脑缺血再灌注大鼠氧化应激反应研究

目的探讨牡荆苷通过调控核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路对急性脑缺血再灌注大鼠氧化应激反应的作用。方法 54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照依达拉奉(0.56 mg/kg)组和牡荆苷低、中、高剂量(10、20、40mg/kg)组,除假手术组外均制备急性脑缺血大鼠模型,再灌注后假手术组、模型组大鼠ip生理盐水,依达拉奉组和牡荆苷各剂量组按照相应剂量ip给药,8 h给药1次,共3次。对比干预前后大鼠神经行为学评分;HE染色检测大鼠大脑皮质病理变化;试剂盒检测大鼠大脑皮质组织氧化应激指标丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测大鼠大脑皮层Nrf2/ARE通路相关基因mRNA与蛋白表达水平。结果干预前后假手术组大鼠神经行为学评分无明显变化,模型组较干预前增高(P0.01),依达拉奉组、牡荆苷各剂量组均较干预前降低(P0.01),且干预后各组间神经行为学评分比较差异显著(P0.01)。假手术组大鼠大脑皮质组织神经细胞分布均匀、密集,神经细胞的胞体、胞核形态正常;模型组、依达拉奉组和牡荆苷各剂量组大鼠脑组织神经细胞排列均有紊乱、疏松,其中模型组可见液化性坏死、细胞结构消失等表现;牡荆苷低剂量组可见细胞排列严重紊乱、疏松,部分液化性坏死、细胞结构消失;牡荆苷中剂量组和依达拉奉组液化性坏死部分面积小,大多细胞结构正常;牡荆苷高剂量组仅可见极少液化性坏死,细胞结构基本正常,细胞排列轻微紊乱。与假手术组比较,模型组大鼠大脑皮质MDA和NO水平显著升高(P0.01),SOD和GSH水平显著降低(P0.01),Nrf2、γ-GCSmRNA表达水平显著升高(P0.01),细胞质Nrf2、γ-GCS蛋白表达水平均显著升高(P0.01),细胞核Nrf2、HO-1蛋白表达水平均显著降低(P0.01)。与模型组比较,依达拉奉组和牡荆苷低、中、高剂量组大鼠大脑皮质MDA和NO水平均显著降低(P0.01),SOD和GSH水平显著升高(P0.01),Nrf2、γ-GCS mRNA表达水平显著降低(P0.01),细胞质Nrf2、γ-GCS蛋白表达水平均显著降低(P0.01),细胞核Nrf2、HO-1蛋白表达水平均显著升高(P0.01)。且牡荆苷各剂量组大鼠大脑皮质MDA、NO、SOD、GSH水平及Nrf2、γ-GCS、HO-1m RNA和蛋白表达水平均呈剂量依赖性,组间差异显著(P0.01)。结论牡荆苷可减轻急性脑缺血再灌注大鼠氧化应激反应,推测与调控Nrf2/ARE信号通路,上调Nrf2基因与蛋白表达,促进其由细胞质向细胞核移动,上调HO-1表达,抑制γ-GCS表达,增强机体的抗氧化应激反应能力有关。     

补肾活血方对环磷酰胺所致小鼠睾丸氧化应激损伤及生精损伤的影响

目的观察补肾活血方对环磷酰胺所致小鼠睾丸氧化应激损伤及生精损伤的影响,探讨其可能的作用机制。方法将50只8～9周龄雄性Balb/C小鼠随机分为空白组、模型组和补肾活血方低、中、高剂量组,每组10只。空白组小鼠腹腔注射生理盐水,其余各组小鼠腹腔注射环磷酰胺50 mg/kg造模。空白组和模型组给予蒸馏水灌胃,补肾活血方低、中、高剂量组给予相应浓度补肾活血方灌胃,每日1次,连续30 d。检测各组小鼠体质量、睾丸和附睾脏器指数、精子浓度和活力,睾丸组织匀浆检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量,RT-PCR和Western blot分别检测小鼠睾丸组织Nrf2 mRNA和蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、睾丸和附睾脏器指数、精子浓度和活力及睾丸组织SOD、CAT活性均显著降低,MDA含量显著升高,睾丸组织Nrf2m RNA和蛋白表达均显著降低;与模型组比较,补肾活血方组小鼠精子浓度和活力,睾丸组织SOD、CAT活性明显增加,MDA水平显著降低,睾丸组织Nrf2m RNA和蛋白表达均显著升高。结论补肾活血方可能通过激活Nrf2/ARE信号通路,改善环磷酰胺所致小鼠睾丸氧化应激损伤及生精损伤。     

温肾醒脑方对血管性痴呆大鼠认知功能的影响及机制研究

目的:研究温肾醒脑方对血管性痴呆(Vascular dementia,VD)大鼠认知功能的改善作用及对Nrf2、Keap1相关信号通路的影响。方法:70只雄性SD大鼠随机分成正常组、假手术组、模型组、脑复康组(0.15 g/kg)、温肾醒脑方给药组(高剂量组5 g/kg、中剂量组2.5 g/kg、低剂量组1.25 g/kg),每组10只动物。采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD模型。给予温肾醒脑方灌胃治疗后,Morris水迷宫测试治疗后VD大鼠认知功能的改善情况。检测脑组织中SOD、MDA、GSH-Px、NOS,HE染色观察脑海马组织的病理变化情况,RT-PCR大鼠脑组织NQO1、HO-1的mRNA水平和Western Blot检测Keap1、Nrf2、NQO1、HO-1蛋白水平的表达情况以及EMSA检测Nrf2与ARE结合力。结果:与正常组比较,VD模型组大鼠逃避潜伏期明显较长,游泳总距离明显缩短,穿越站台总数明显减少(P0.01);大脑组织中MDA含量显著增加,SOD、GSH-Px和NOS的含量明显减少(P0.01);大脑组织结构明显受损伤,细胞形态改变,细胞核固缩,核仁不清晰;同时大脑组织中细胞核Nrf2蛋白表达降低、细胞质中Keap1蛋白表达增加,NQO1、HO-1 mRNA和蛋白表达降低(P0.01)。与VD模型组比较,脑复康和温肾醒脑方组大鼠的认知行为得到很大的提高,脑组织MDA、SOD、GSH-Px、NOS含量和脑组织病理结构得到很好的改善,Nrf2、Keap1、NQO1、HO-1在mRNA水平或蛋白水平上有一定程度改变,特别是温肾醒脑方组大鼠的改善非常显著。结论:温肾醒脑方可以改善VD大鼠的认知行为,其机制可能与Nrf2-Keap1-NQO1/HO-1抗氧化应激信号通路相关。     

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨豨莶草对尿酸钠诱导的滑膜细胞作用机制

目的:探讨Nrf2/HO-1信号通路介导豨莶草对尿酸钠诱导的滑膜细胞氧化应激作用的影响。方法:取SD大鼠滑膜组织剪碎进行自然沉降贴壁培养滑膜细胞,采用不同种浓度的豨莶草含药血清处理尿酸钠诱导的滑膜细胞,采用酶联免疫法测定各组滑膜细胞中ROS、SOD和MDA的含量;采用RTPCR法测定滑膜细胞中Nrf2、HO-1表达。结果:ELISA测定结果发现与对照组比较,模型组滑膜细胞中ROS和MDA含量明显增加,SOD含量明显降低;与模型组比较豨莶草高、中、低组都能够明显降低滑膜细胞中ROS和MDA含量,增加SOD含量;RT-PCR结果显示模型组滑膜组织中Nrf2、HO-1 m RNA表达明显增加,不同浓度豨莶草组能够明显提高滑膜细胞Nrf2、HO-1 m RNA表达。结论:豨莶草可能通过Nrf2/HO-1调节滑膜细胞促进Nrf2合成和核转位,从而促进下游抗氧化基因HO-1的表达有关,进而抑制氧化应激反应。     

加味涤痰汤对慢性间歇低氧模型大鼠心肌组织损伤及Keap1-Nrf2信号通路的影响

目的探讨加味涤痰汤对慢性间歇性低氧诱导大鼠心肌损伤的影响及可能作用机制。方法30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、加味涤痰汤组,每组10只。模型组和加味涤痰汤组放入低氧舱内建立慢性间歇性低氧大鼠模型。加味涤痰汤组每天放进低氧舱前30 min按14.8 g/(kg·d)灌胃给药,正常组和模型组则按相同体积予生理盐水灌胃,共干预12周。检测血清心肌酶指标[包括肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)]、氧化应激指标[包括丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)]和组织铁含量;检测心肌组织中kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、核红系转录因子2(Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(Gpx4)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(Acsl4)蛋白和mRNA的表达;HE染色观察心肌细胞的形态。结果与正常组比较,模型组大鼠血清CK、CK-MB、LDH、MDA上升,GSH表达和组织铁含量降低,心肌组织Keap1、Acsl4蛋白和mRNA表达增加,Nrf2、Gpx4蛋白和mRNA表达减少(P<0.05);HE染色结果显示模型组大鼠心肌组织内血管充血,淋巴细胞浸润,心肌细胞轻微水肿。与模型组比较,加味涤痰汤组大鼠血清CK、CK-MB、LDH、MDA下降,GSH表达和组织铁含量升高,心肌组织Keap1、Acsl4蛋白和mRNA表达降低,Nrf2、Gpx4蛋白和mRNA表达升高(P<0.05);HE染色显示心肌细胞病理形态有所改善。结论加味涤痰汤能有效改善慢性间歇性低氧过程中氧化应激对大鼠心脏造成的损伤,其机制可能是通过影响Keap1-Nrf2通路介导的铁死亡而发挥作用。     

艾灸对卵巢储备功能减退大鼠Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的:观察艾灸对卵巢储备功能减退(DOR)大鼠核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路的影响,探讨艾灸对卵巢储备功能的保护效应机制。方法:将40只SD大鼠随机分为空白组、模型组、艾灸组、激素组,每组10只。模型组、艾灸组、激素组均采用雷公藤多苷片混悬液灌胃制备DOR大鼠模型,空白组灌胃等体积的0.9%氯化钠溶液,每日1次,连续灌胃14 d。激素组在造模即日起采用激素序贯疗法连续干预14 d;艾灸组在造模即日起每日给予双侧"肾俞"或"关元""中脘"艾灸治疗,两组穴隔日交替,每次10 min,连续14 d。每日采用阴道脱落细胞涂片观察大鼠的动情周期,统计各组大鼠动情周期紊乱率。干预结束后,采用HE染色观察各组大鼠卵巢组织学形态;ELISA法检测各组大鼠血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、抗苗勒管激素(AMH)和超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;免疫组化法检测各组大鼠卵巢组织Nrf2和HO-1蛋白水平;实时PCR(TaqMan探针法)检测各组大鼠卵巢组织Nrf2和HO-1 mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠动情周期紊乱率升高(P<0.01);与模型组比较,艾灸组和激素组大鼠动情周期紊乱率降低(P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠血清FSH、LH、MDA含量增多(P<0.01),血清E2、AMH、SOD含量减少(P<0.01);与模型组比较,艾灸组和激素组大鼠血清FSH、LH、MDA含量减少(P<0.01,P<0.05),血清E2、AMH、SOD含量增多(P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠卵巢组织Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达减少(P<0.01);与模型组比较,艾灸组和激素组大鼠卵巢组织Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达增多(P<0.01)。结论:艾灸可以降低DOR大鼠的动情周期紊乱率,改善血清性激素水平和抗氧化应激能力,其机制可能与调控Nrf2/HO-1信号通路有关。     

天麻粉预防痴呆小鼠模型发病及其对抗氧化作用的影响

目的:研究长期灌胃天麻粉是否可以改善APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习记忆能力以及延缓AD进程,这些作用是否与调控Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)-核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)抗氧化应激通路有关,进一步探讨天麻粉的神经保护作用机制以及对AD预防和治疗的作用。方法:APP/PS1双转基因小鼠模型,将实验小鼠分为5组,正常组,正常给药组,模型组,天麻粉预防组,天麻粉治疗组。正常给药组,天麻粉预防组在小鼠8周龄时每日灌胃同等剂量的天麻粉(1.5 g·kg^-1);正常组、模型组同时期给予等量的生理盐水,直至24周龄时行Morris水迷宫检测小鼠学习和记忆能力,天麻粉治疗组待小鼠22周龄时,连续2周每天灌胃同等剂量天麻粉(1.5 g·kg^-1),灌胃至24周龄时行Morris水迷宫检测小鼠穿越平台次数、逃避潜伏期及平台停留时间;提取小鼠海马组织RNA,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Nrf2,HO-1,Keap1的mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马组织中Nrf2,HO-1,Keap1蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,水迷宫检测结果显示,模型组小鼠的学习记忆能力显著降低(P<0.01);与模型组比较,天麻粉预防组、天麻粉治疗组小鼠学习记忆能力显著提高(P<0.01);与正常组比较,模型组小鼠海马组织中Nrf2,HO-1的mRNA及蛋白水平均有不同程度的降低(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,天麻粉预防组小鼠海马组织中Nrf2,HO-1的mRNA及蛋白水平均有不同程度的增高(P<0.05,P<0.01),天麻粉治疗组Nrf2,HO-1 mRNA水平显著增高(P<0.01),Nrf2,HO-1蛋白表达水平变化差异无统计学意义,各组间Keap1的mRNA及蛋白水平变化无统计学差异。结论:Morris水迷宫及其他结果显示天麻粉能够改善APP/PS1小鼠的学习和记忆能力,且其可能通过调控Keap1-Nrf2/HO-1通路,增强下游抗氧化基因的表达发挥抗氧化功能,进而改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力。     

小续命汤改善心肺复苏后大鼠神经功能及脑保护作用

[目的]研究小续命汤对心肺复苏后大鼠的脑保护作用及机制研究。[方法]将63只SPF级SD雄鼠按照随机数字表分为对照组(8只)和建模组(55只)。建模大鼠使用经皮心外膜电刺激法建立大鼠心脏骤停模型,将建模成功大鼠进行心肺复苏,当大鼠恢复自主循环表示大鼠心肺复苏建模成功。将建模成功的大鼠随机分为5组,小续命汤高、中、低剂量组、二甲基亚砜(DMSO)组和模型组。大鼠心肺复苏后10 min,小续命汤高、中、低剂量组灌胃300、150、75 mg/kg小续命汤。DMSO组灌胃100 mg/kg的DMSO,模型组和对照组均灌胃等体积生理盐水,每日1次,治疗7 d。治疗前后对大鼠神经功能进行评分;通过苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠脑海马组织病变;用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定各组大鼠脑海马组织氧化应激指标脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)浓度;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测大鼠脑海马组织胞浆蛋白伴侣分子(Keap1)、核因子E2相关因子(Nrf2)和血红素氧合酶1(HO-1)mRNA表达水平;通过蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠脑海马组织中Keap1、Nrf2和HO-1蛋白表达水平。[结果]大鼠治疗后神经功能评分,模型组高于对照组(P<0.05),DMSO组和小续命汤高、中、低剂量组均低于模型组(P<0.05);对照组脑海马区组织神经元无明显病变,模型组可见神经元排列稀疏且凌乱,神经元出现明显水肿,细胞核肿胀,胞浆空泡样变,DMSO组、小续命汤高、中、低剂量组病变均出现好转;大鼠脑海马组织MDA含量模型组高于对照组(P<0.05),DMSO组和小续命汤高、中、低剂量组均低于模型组(P<0.05);SOD含量模型组低于对照组(P<0.05),DMSO组和小续命汤高、中、低剂量组均高于模型组(P<0.05);Keap1 mRNA和蛋白相对表达量模型组均低于对照组(P<0.05),DMSO组和小续命汤高、中、低剂量组均低于模型组(P<0.05);Nrf2和HO-1 mRNA和蛋白相对表达量模型组高于对照组(P<0.05),DMSO组、小续命汤高、中、低剂量组均高于模型组(P<0.05)。[结论]小续命汤可改善心肺复苏大鼠神经功能,减轻脑海马组织损伤,抑制氧化应激,推测其机制可能与激活Keap1-Nrf2/HO-1信号通路,下调Keap1 mRNA和蛋白表达,上调Nrf2和HO-1 mRNA和蛋白表达水平有关。     

小柴胡颗粒激活Nrf2通路抗TAA致大鼠急性肝损伤的机制探讨

目的:观察小柴胡颗粒对硫代乙酰胺(TAA)致大鼠急性肝损伤(ALI)的治疗作用,探讨核转录因子(NF)-E2相关因子2(Nrf2)抗氧化损伤通路在其中的作用。方法:SD大鼠随机分为空白组,模型组,小柴胡颗粒低、中、高剂量组(1,2,4 g·kg-1),大鼠给予250 mg·kg-1TAA腹腔注射2 d制备肝损伤模型,从第3天各组分别给予等量双蒸水和不同剂量小柴胡颗粒,灌胃2周。末次给药后24 h取材,肝组织行苏木素-伊红(HE)染色;比色法测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA)水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Nrf2通路相关mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2通路相关蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组ALT,AST,MDA水平显著增高,T-SOD活性明显降低(P 0. 05,P 0. 01),病理学呈现大片炎性浸润表现,肝脏组织Nrf2,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1),醌氧化还原酶1(NQO1),血红素加氧酶-1(HO-1),谷氨酸半胱氨酸合成酶催化亚基(GCLC),谷氨酸半胱氨酸合成酶调节亚基(GCLM) mRNA及蛋白表达水平均明显下降(P 0. 05,P 0. 01);与模型组比较,小柴胡颗粒各剂量组ALT,AST,MDA水平均明显降低,T-SOD活性明显升高(P 0. 05,P 0. 01),病理结果示大鼠肝脏病变范围与严重程度均有不同程度改善,肝脏组织Nrf2,Keap1,NQO1,HO-1,GCLC,GCLM的mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:小柴胡颗粒可能通过上调Nrf2信号通路上下游分子的表达,对TAA致急性肝损伤大鼠起到治疗作用。     

三白草木脂素对创伤性脑损伤大鼠神经保护作用及Nrf2-ARE信号通路的影响

目的:探讨三白草木脂素对创伤性脑损伤(TBI)模型大鼠的神经保护作用及脑组织核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化反应原件(ARE)信号通路参与的机制。方法:将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、木脂素组3组,每组20只。除假手术组外,其余大鼠构建TBI模型。采用改良的神经功能缺损评分(mNSS)评价神经功能,脑组织干湿重称量法评价脑水肿,TUNEL染色评价神经元的凋亡,酶活性检测试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)的水平,并比较各组大鼠脑组织中Nrf2蛋白、亚铁血红素加氧酶1(HO-1)和奎宁氧化还原酶1(NQO1)mRNA的表达水平。结果:与假手术组比较,模型组2 h和24 h m NSS、脑组织含水量、神经细胞凋亡率、氧化应激产物MDA的水平、细胞核Nrf2蛋白相对表达水平显著升高,氧化酶SOD、GSH-Px的活性、细胞质Nrf2蛋白相对表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,木脂素组24 h m NSS、脑组织含水量、神经细胞凋亡率、氧化应激产物MDA的水平、细胞质Nrf2蛋白相对表达明显降低,SOD、GSH-Px的活性、细胞核Nrf2蛋白相对表达、HO-1和NQO1 mRNA的表达水平明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:三白草木脂素通过减弱氧化应激来保护脑组织免受TBI的影响,同时Nrf2-ARE信号通路激活可能是三白草木脂素发挥其神经保护作用的机制之一。     

栝楼桂枝颗粒激活Nrf2信号通路减轻脑缺血再灌注损伤大鼠氧化应激损伤作用

目的:探讨栝楼桂枝颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠氧化应激的保护作用及分子机制。方法:建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,栝楼桂枝颗粒灌胃给药后,核磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)检测大鼠脑梗死面积,化学荧光法测定脑组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,硫代巴比妥酸法(TBA)测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,水溶性四唑蓝法(WST)测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,紫外法测定过氧化氢酶(catalase,CAT)和比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力;蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR法(Realtime PCR)分别检测脑组织中核转录因子-E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2),细胞质中血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1),醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1]及Kelch样ECH联合蛋白1(Kelch-like ECHassociated protein1,Keap1)的蛋白表达和mRNA相对含量。结果:栝楼桂枝颗粒能够明显减小大鼠脑梗死面积,减少ROS和MDA的产生(P0.01),增加SOD,CAT和GSH-Px活力(P0.01)。此外,栝楼桂枝颗粒能够上调脑组织中Nrf2,HO-1,NQO1及Keap1的表达。结论:栝楼桂枝颗粒可能通过上调Nrf2信号通路,从而抑制脑缺血再灌注损伤引起的氧化应激反应。     

三才连梅颗粒通过Nrf2/HO-1信号通路对糖尿病小鼠生精功能的影响

目的:探讨三才连梅颗粒通过核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路影响糖尿病小鼠生精功能的作用机制。方法:将2型糖尿病小鼠分为正常对照组、糖尿病模型组、三才连梅组、二甲双胍组。给药4周后,取小鼠附睾检测精子参数;透射电镜及HE染色观察睾丸病理改变,TUNEL染色检测睾丸生精细胞凋亡情况;qPCR及Western blot检测睾丸组织Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达水平;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、P62的表达水平;ELISA检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的表达水平。结果:与糖尿病模型组比较,三才连梅组能显著提高大鼠精子密度、活力及存活率,上调糖尿病小鼠睾丸组织Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达水平,增加SOD生成,减少MDA的生成,下调自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、P62、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达(均P<0.05)。与糖尿病模型组比较,三才连梅组可显著抑制生精细胞过度自噬,减轻生精细胞凋亡。结论:三才连梅颗粒能有效提高...     

静宁颗粒对H2O2诱导的原代皮层神经元氧化应激的保护作用研究

目的:探讨静宁颗粒对小鼠原代皮层神经元氧化损伤的保护作用。方法:实验分为正常组、模型组和各用药组。采用过氧化氢(H₂O₂)刺激造成原代皮层神经元氧化损伤模型,各用药组采用0.2、0.4、0.8 mg/ml的静宁颗粒进行干预。采用MTT法检测活性抑制率,采用试剂盒检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)活力; Western blot检测kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、红系衍生的核转录相关因子2(Nrf2)、促凋亡蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase 3)等蛋白的表达。结果:静宁颗粒干预后较模型组相比ROS、MDA降低,GSH、SOD升高; 与模型组比较,Keap1、p53、Bax及Caspase 3蛋白表达下调,Nrf2、NQO1、HO-1及Bcl-2蛋白表达升高。结论:静宁颗粒可通过Keap1/Nrf2氧化应激通路和Caspase依赖的线粒体通路对H₂O₂所致小鼠原代皮层神经元氧化应激损伤发挥保护作用。     

帕病2号方对帕金森病模型大鼠中脑黑质Nrf2，HO-1表达的影响

目的：观察帕病2号方对6-羟基多巴胺（6-OHDA）所致帕金森病（PD）大鼠中脑黑质组织内核因子E2相关性因子2（Nrf2）以及下游靶基因血红加氧酶1（HO-1）的表达。方法：采用6-OHDA左侧纹状体两点注射法建立PD大鼠模型,经阿卟吗啡（APO）诱导表现为恒定右侧旋转且旋转圈数大于210 r·30 min^-1视为成功PD大鼠模型。24只造模成功大鼠随机分为模型组,帕病2号方低、中、高剂量组（8.0,16.0,32.0 g·kg^-1）,同时设立正常组,假手术组。正常组,假手术组,模型组给予等容积蒸馏水,连续灌胃给药4周。Western blot 法检测中脑黑质Nrf2细胞核蛋白及HO-1蛋白表达。RT-PCR法检测中脑黑质Nrf2,HO-1mRNA表达。结果：与假手术组比较,模型组Nrf2细胞核蛋白,HO-1蛋白表达上调（P<0.01）,Nrf2,HO-1mRNA水平上调（P<0.01）;与模型组比较,帕病2号方低、中、高剂量组大鼠中脑黑质组织Nrf2细胞核蛋白,HO-1蛋白表达明显上调（P<0.01）,Nrf2,HO-1mRNA水平上调（P<0.01）,帕病2号方高剂量组与中、低剂量组比较有明显差异（P<0.01）。结论：6-OHDA造模后可以激活Nrf2/HO-1信号通路;帕病2号方治疗后进一步提高Nrf2细胞核蛋白和Nrf2mRNA表达,进而上调下游靶基因HO-1蛋白及HO-1mRNA的表达,且帕病2号方高剂量组作用更为明显。