小鼠放射性肺损伤过程中TGF-β1和TNF-α的表达变化

目的 观察放射前后肺组织中两种炎症细胞因子的表达,明确放射性肺损伤的发生发展机制.方法 35只Balb/c健康雄性小鼠,随机分为照射组(全肺单次照射12 Gy)和对照组.各组于照射后15、30和90 d终止实验.肺组织行组织病理学检查及Masson染色、免疫组织化学粢色观察TGF-β1、TNF-α表达情况.结果 照射组照射野脱毛、皮肤可见湿疹,部分有糜烂.30 d时即出现广泛胶原纤维沉积.照射后肺组织TGF-β1、TNF-α表达强度均较对照组增高,且随时间延长表达增多(P＜0.05).结论 TGF-β1和TNF-α参与了放射性肺损伤的发生发展.     

小鼠放射性肺损伤动物模型的建立与鉴定

目的 建立放射性肺损伤小鼠模型和有效的定量评价方法.方法 雌性昆明种小鼠72只,完全随机分为对照组(18只)、照射组(54只).全肺单次照射20 Gy,于照射后1、3 d和1、2、4、8周取照射组及相同鼠龄对照组小鼠肺组织和静脉血,分别用HE、Masson染色,在光镜下观察组织病理改变和胶原纤维沉积情况,用酶联免疫(ELISA)法测定血清转化生长因子-β1(TGF-β1)含量.结果 与对照组比较,照射组小鼠肺组织早期以渗出为主,表现为肺间质及肺毛细血管充血、水肿,照射后期以肺泡间隔及部分肺泡腔内可见纤维素样渗出物为特征.同时,ELISA法显示照射后7 d血清TGF-β1含量[(18.46±1.678)ng/mL]明显增高,与对照组[(9.61±2.027)ng/mL]比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 通过病理形态学和血清学指标证实成功地建立了放射性肺损伤小鼠模型,该模型较好地模拟了放射性肺损伤的发生、发展过程.     

人APE1/Ref-1基因真核表达质粒的构建和鉴定

目的 构建含人APE1/Ref-1基因全长cDNA片段的真核表达质粒pcDNA3.1 APE1,以期进一步研究该基因对细胞DNA损伤的保护作用.方法 采用RT-PCR法定向克隆人APE1/Ref-1基因全长cDNA片段,构建pGM-T Easy/APE1质粒,测序鉴定APE1/Ref-1基因cDNA序列正确后,将目的片断亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1 上,构成pcDNA3.1 APE1表达质粒,并用Western blotting法检测转染人脐静脉内皮细胞APE1/Ref-1蛋白的表达水平.结果 经酶切及测序证实APE1/Ref-1基因真核表达质粒pcDNA3.1 APE1构建成功,Western blotting法检测到转染pcDNA3.1 APE1后,细胞内APE1/Ref-1蛋白表达明显增加.结论 成功构建含人APE1/Ref-1基因全长cDNA片段的真核表达质粒,为探讨APE1/Ref-1对细胞电离辐射损伤的保护作用奠定了基础.     

采用组织芯片技术研究APE/Ref-1在胃癌中的表达及其意义

目的 检测APE/Ref-1在胃癌中的表达及意义.方法 收集60例胃癌和27例癌旁5 cm胃黏膜,用组织芯片(tissue micro-array)和免疫组织化学法检测APE/Ref-1基因的表达,并分析APE/Ref-1与胃癌临床病理指标之间的关系.结果 APE/Ref-1在胃癌和正常胃黏膜组织中呈胞核、胞质或核质共表达.在胃癌组织中,胞核阳性率为91.7%,胞质阳性率为21.7%,核质阳性率为20%;在胃正常黏膜组织中,胞核阳性率为92.6%,胞质阳性率为78%,核质阳性率为63%.胃癌和胃正常黏膜组织相比,胞核阳性率变化不明显(P>0.05),但胞质阳性率和核质阳性率均有显著性差异(P<0.05).结论 APE/Ref-1在胃黏膜组织中普遍表达,以胞核表达为主.APE/Ref-1在胃癌胞质表达水平的降低可能在胃癌的发生、发展中起重要作用.     

大肠癌Ref-1/APE的表达特点及其意义

目的探讨大肠癌氧化还原因子-1(redox factor-1,Ref-1),又称脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease,APE),在大肠癌的表达特点及其与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血管密度的关系.方法应用免疫组化S-P法检测110例大肠癌和40例非癌区大肠组织中Ref-1/APE和VEGF的表达,采用血管内皮特异标记物CD31标记并计数肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD),最后分析Ref-1/APE与VEGF和MVD的关系.结果所有大肠癌和非癌区大肠组织都有Ref-1/APE表达,但是其在细胞内的定位有所不同.40例非癌区大肠组织细胞核都有Ref-1/APE表达,仅5例有胞质表达(5/40,12.5%);而110例大肠癌中有79例(79/110,71.81%)细胞质有Ref-1/APE表达,比例显著高于非癌区大肠组织(P＜0.01).而且细胞质Ref-1/APE阳性表达的大肠癌较无细胞质表达者VEGF阳性率显著增加(P＜0.05),MVD也显著增高(P＜0.05).结论大肠癌Ref-1/APE移位于细胞质的异常表达可能涉及大肠癌的发生,并且可能与VEGF表达和肿瘤血管生成有关.     

大剂量电离辐射对小鼠肺组织的影响

目的 探讨大剂量电离辐射对小鼠肺的影响。方法 60Coγ照射小鼠,HE染色观察小鼠肺组织损伤,免疫组化检测小鼠肺转化生长因子β1（TGFβ1）和细胞间粘附因子1(ICAM1)的表达。结果 大剂量照射后3 d,小鼠肺发生明显异常病变,TGFβ1和ICAM1表达量明显增加。结论 肺内皮细胞损伤和血管内物质外漏可能是急性放射性肺损伤的早期重要事件,早期检测ICAM1有助于预测急性放射性肺损伤的发生程度。     

大鼠半胸照射致肺纤维化模型的病理学观察

目的观察辐射致鼠肺纤维化病变发生过程的病理特征及其规律.方法35只雄性SD大鼠分为实验组21只和对照组14只.实验组用8MV直线加速器给予大鼠右半胸20 Gy单次照射,对照组佯装照射.在照射后1、3、7、14、28、84、164 d共7个时相点,分批活杀大鼠(照射组3只,对照组2只),观察其全肺大体形态改变,取右肺中叶组织进行光镜及电镜病理组织形态观察.结果照射后1、3、7 d可见肺实质细胞的损伤,内皮细胞核损伤出现最早;照射后14、28 d肺泡间隔渐加宽,并有胶原和成纤维细胞的增生;照射后84、164 d出现典型的肺纤维化病灶,肺实变区域有新生的血管内皮细胞和较多的肺泡Ⅱ型上皮细胞,肺泡腔内可见大量吞噬细胞.结论血管内皮细胞可能为辐射损伤最敏感的肺实质细胞.     

益气活血中药对放射性肺损伤大鼠血清及肺组织ET-1表达影响的实验研究

目的探讨血浆及肺组织中ET-1在放射性肺损伤中的改变及益气活血中药对其治疗作用。方法96只Wistar种雌性大鼠随机分为照射加中药组（A组）30只、照射加氨溴索组（B组）30只、单纯照射组（C组）30只、正常对照组（D组）6只。用直线加速器对前三组大鼠右肺进行分次照射（5Gy／次,1次／周,累积剂量为30Gy）,于照射开始后第4、6、8周3个时间点分别处死三组大鼠各6只.采血测定ET-1浓度,肺组织测定ET-1免疫组化。结果照射后肺组织炎症和肺水肿进行性加重;C组照射后5,15,30,60d血清及肺组织ET-1水平进行性升高,A组、B组各时相值表达相似,均明显低于c组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论血浆ET-1水平的变化能反映放射性肺损伤的严重程度,益气活血中药能抑制肺组织ET-1的表达,降低血浆ET-1水平,可能是益气活血中药治疗放射性肺损伤的一个作用机制。     

扶正活血中药治疗放射性肺损伤 的实验研究

目的 观察放射性肺损伤大鼠肺组织转化生长因子-β1（TGF-β1）表达水平及肺组织病理学特征,探讨扶正活血中 药对放射性肺损伤的防治作用及可能机制。方法 将56 只SD 雌性大鼠随机分为模型组、前期干预组、后期短程干预组及后期长程干预组,每组14 只,通过单次大剂量6MV-Ｘ线加速器胸部照射制成放射性肺损伤大鼠模型,分别不用及照射前2 周内、照射后1个月内、照射后3 个月内用扶正活血中药灌胃,于照射后3、6 个月分别随机处死各组大鼠7 只,取大鼠肺组织进行免疫组化检测TGF-β1蛋白表达强度及观察不同时相肺组织病理学特征。结果 各干预组大鼠肺组织TGF-β1蛋白表达强度明显低于模型组,放射性肺损伤病理学改变明显轻于模型组。结论 扶正活血中药具有抑制TGF-β1分泌,有效阻止或延缓肺纤维化的形成,对放射性肺损伤的防治具有一定作用。     

扶正减毒颗粒对放射性肺损伤小鼠肺组织病理学检查和MMP-2、MMP-9水平的影响

目的探讨扶正减毒颗粒治疗放射性肺损伤的作用机理。方法采用单次大剂量胸部照射制成放射性肺损伤小鼠模型,并与空白组比较,观察扶正减毒颗粒对放射性肺损伤小鼠模型肺组织病理学及MMP-2、MMP-9的干预。结果扶正减毒颗粒能降低模型小鼠肺组织MMP-2、MMP-9的表达、明显减轻放射性肺损伤小鼠肺组织病理学改变(P<0.05,P<0.01)。结论扶正减毒颗粒可减轻急性肺损伤的程度,有效阻止或延缓肺纤维化的形成。     

APE/Ref-1基因重组腺病毒的构建表达和鉴定

目的 构建表达氧化还原因子-1（APE／Ref-1）基因的复制缺陷型重组腺病毒，为进一步研究APE／Ref-1在耳蜗螺旋神经节氧化损伤病理过程中的作用机制提供实验基础。方法 应用RT-PCR技术从大鼠脑组织总RNA克隆出APE／Ref-1基因，将APE／Ref-1基因定向克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV上，经与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠埃希菌BJ5183内同源重组后，转染293细胞进行包装，并反复感染293细胞进行扩增。对其进行安全性、滴度以及活性等检测。采用Western blot对APE／Ref-1蛋白表达进行检测和鉴定。结果 克隆出大鼠APE／Ref-1基因，经测序证实结果正确：得到高滴度的重组腺病毒，提取病毒DNA证实含目的基因。结论 成功构建了表达APE／Ref-1的复制缺陷型重组腺病毒。为进一步研究APE／Ref-1在耳蜗螺旋神经节的氧化损伤过程中作用机制奠定了实验基础。     

中国东部地区人群APE1／Ref-1基因启动子-141T／G遗传变异与脑胶质瘤临床研究

目的研究中国东部地区人群APEl／Ref-1基因启动子-141T／G遗传变异与脑胶质瘤相关性。方法采用MassARRAY SequenomSNP时间飞行质谱生物芯片系统检测中国东部766例胶质瘤患者（241例胶质母细胞瘤,284例星型细胞瘤l～3级,241例其他胶质瘤）和824例非肿瘤对照组的APEl／Ref-1-141T／G多态性。并使用非条件logistic回归分析计算比数比（ORs）和95％可信区间（CIs）。结果APEl／Ref-1基因启动子-141T／G多态性与胶质瘤之间无明显联系。组织学分层分析结果提示等位基因G显著降低胶质瘤风险（OR=0．80,95％CI=0．65～0．98,P=0．032）。与携带TT个体相比,携带-141GG基因型的个体患胶质母细胞瘤的风险低（OR=0．54,95％CI 0．34～0．87,P=0．012）。结论APE1／Ref-1启动子特异遗传变异可能调节个体胶质母细胞瘤而非其他类型胶质瘤的发生风险。     

APE1/Ref-1 siRNA抑制多发性骨髓瘤骨髓基质细胞IL-6及IL-8分泌的体外研究

目的 体外通过APE1/Ref-1 siRNA敲低多发性骨髓瘤骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)APE1/Ref-1的表达,观察BMSCs的增殖及分泌细胞因子IL-6、IL-8的变化,初步探讨BMSCs APE1/Ref-1表达的功能特点.方法 通过免疫细胞化学染色法定量榆测35例初治、11例复发/难治多发性骨髓瘤患者及10例正常人BMSCsAPE1/Ref-1的表达特点及其差异,经Adv5-APE1/Ref-1 siRNA感染BMSCs后,流式细胞仪检测BMSCs细胞周期的变化;ELISA法检测BMSCs分泌IL-6、IL-8的水平变化情况.结果 多发性骨髓瘤BMSCs的APE1/Ref-1蛋白阳性表达率显著高于正常BMSCs APE1/Ref-1蛋白阳性表达率(P<0.05),且多发性骨髓瘤BMSCs的APE1/Ref-1呈细胞核及核浆共间表达方式.Adv5-APE1/Ref-1 siRNA感染敲低多发性骨髓瘤及正常BMSCs APE1/Ref-1的表达量呈进行性减少(P<0.01),同时发现APE1/Ref-1 siRNA对多发性骨髓瘤BMSCs抑制作用更明显.Adv5-APE1/Ref-1 siRNA感染BMSCs后对正常人及骨髓瘤患者BMSCs分泌细胞因子IL-6、IL-8的量有显著的抑制作用,特别是感染72 h后,骨髓瘤患者及正常人的BMSCs分泌IL-6[初治患者(246.29±46.51)pg/ml,复发/难治患者(365.09±75.25)pg/ml]、IL-8[初治患者(118.77±18.08)pg/ml,复发/难治患者(188.71±33.76)pg/ml]的量最低,与其他时段比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 多发性骨髓瘤BMscs APE1/Ref-1的表达特点不同于正常BMSCs,可能导致其功能差异;APE1/Ref-1 siRNA敲低了MM BMSCsAPE1/Ref-1的表达,同时明显抑制了其IL-6、IL-8的分泌,减少了对骨髓瘤细胞的促增殖和凋亡作用.     

APE/Ref-1的临床应用研究进展

脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子-1(APE/Ref-1)是一种多功能的蛋白质,在氧化或烷化物所导致的DNA损伤修复,以及在氧化还原反应的调控等多个生物学过程中都发挥着重要作用。本文综合近几年国内外的众多文献,从APE/Ref-1的结构与功能入手,对其与肿瘤和心脑血管疾病、中枢神经系统疾病等之间关系的临床研究进展进行分析,提示APE/Ref-1作为新标记物,在临床的应用有着良好的发展前景。     

1,6-二磷酸果糖对缺血性脑损伤保护机制的研究

目的　探讨 1,6 二磷酸果糖 (FDP)对缺血性脑组织损伤的保护机制。方法　利用大鼠局灶性脑缺血模型 ,采用TTC染色、免疫组织化学染色、Western印迹法和TUNEL染色技术 ,观察FDP对脑梗死面积、缺血区脱嘌呤 /脱嘧啶核酸内切酶 (APE/Ref 1)表达水平以及缺血区细胞凋亡程度的影响。结果　 1,6 二磷酸果糖可显著性减少脑梗死面积 (31 0mm2 ± 2 9mm2 与 4 7 3mm2 ± 6 0mm2 )。可减少缺血半暗带TUNEL阳性细胞数量 ,缺血 2 4h组与FDP干预组分别为 6 9 3± 2 4个 /mm2 与4 2 8± 1 7个 /mm2 。上调缺血半暗带APE/Ref 1蛋白的表达 :缺血 2 4h组与FDP干预组比较APE/Ref 1免疫阳性细胞数分别为 2 6 3± 2 9个 /mm2 与 4 7 0± 3 4个 /mm2 ;Western印迹法光密度扫描值分别为 5 3± 3 2与 13 8± 5 4。结论　FDP可通过上调脱嘌呤 /脱嘧啶核酸内切酶表达水平 ,增强脑组织对缺血损伤的修复能力 ,减少缺血半暗带细胞凋亡发生 ,阻止脑梗死范围进一步扩大 ,因而对缺血性脑损伤具有保护作用     

APE/Ref-1与妇科肿瘤的研究

无嘌呤无嘧啶核酸内切酶(APE)又名氧化还原因子1(Ref-1),是一种多功能蛋白,除了修复AP位点外,还保持很多转录因子的活性还原状态,对维持DNA的稳定和调节细胞因子的表达具有重要作用。目前国内外研究发现APE/Ref-1蛋白在细胞中的表达部位与妇科肿瘤的发生、发展及预后有关,而APE/Ref-1蛋白表达水平的改变与妇科肿瘤放疗的敏感性有关。     

Redox factor-1 may mediate the repair of multiple organ injuries after liver transplantation

AIM: To examine the relationship between multiple-organ injuries and expression of redox factor-1 (Ref-1) in the early period after liver transplantation. METHODS: A total of 150 adult male Wister rats were divided randomly into three groups: liver transplantation, sham surgery, and untreated control. After liver transplantation, animals were sacrificed at different time points. Hepatic and renal functions were analyzed by serology. Histology, apoptotic levels, and Ref-1 expression were examined by immunohistochemistry in the liver, kidneys, intestines, and lungs. RESULTS: Serum levels of alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase peaked 6 h after liver transplantation and decreased appreciably after 12 h in the transplantation group, suggesting that the degree of liver injury in the early period after transplantation peaked at 6 h and then decreased. Pathological analyses showed that hepatic tissues were more severely injured in the transplantation group than in the sham and untreated groups. A considerable number of infiltrating inflammatory cells was observed around the portal vein in the transplantation group. Injuries to the kidneys, intestines, and lungs were milder after liver transplantation. Apoptotic levels increased after liver transplantation in all four organs examined. Ref-1 expression was higher in the transplantation group in the early period after liver transplantation than in the sham surgery and untreated control groups. CONCLUSION: Ref-1 expression induced by ischemia–reperfusion injury may have a critical role in repairing multiple-organ injuries after liver transplantation.