阿托伐他汀对AngⅡ诱导内皮细胞VCAM-1和ICAM-1 mRNA表达的影响

目的:观察阿托伐他汀对于血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的培养人脐静脉内皮细胞表达血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)mRNA的影响,探讨阿托伐他汀的非降脂作用和潜在的治疗作用.方法:培养人脐静脉内皮细胞,取生长良好的第2、3代细胞进行实验.将细胞分为三组:对照组、AngⅡ组、阿托伐他汀干预组.对照组加培养液,AngⅡ组以不同浓度的AngⅡ与细胞共孵育24 h,干预组首先用不同浓度的阿托伐他汀(0.05μmol/L,0.1 μmol/L,1.0 μmol/L,10 μmol/L)分别作用1 h,而后加1 μmol/L Ang Ⅱ与细胞共育24 h.半定量RT-PCR测定粘附分子ICAM-1和VCAM-1mRNA的表达.结果:Ang Ⅱ能上调ICAM-1和VCAM-1的表达,阿托伐他汀在一定程度上可抑制上述作用.结论:阿托伐他汀可抑制粘附分子ICAM-1和VCAM-1 mRNA表达,可能具有增加粥样斑块稳定性和延缓动脉粥样硬化进程的作用.     

阿托伐他汀抑制血管平滑肌细胞Cyr61的表达

目的 探讨阿托伐他汀对增殖的血管平滑肌细胞Cyr61的作用.方法 贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,将培养的平滑肌细胞分为正常对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组和阿托伐他汀组.AngⅡ组将1μmol/L AngⅡ加入平滑肌细胞培养基,共培养180 min;阿托伐他汀组在AngⅡ刺激细胞前1h加入10 μmol/L阿托伐他汀到培养基中.采用RT-PCR及Western blot检测各组中各时点Cyr61 mRNA和蛋白表达.结果 AngⅡ组与正常对照组相比上调增殖的平滑肌细胞Cyr61mRNA和蛋白表达,阿托伐他汀组与AngⅡ组相比抑制AngⅡ刺激的Cyr61蛋白表达,尤其在30 min时点更加明显(P＜0.01).结论 阿托伐他汀抑制增殖的平滑肌细胞Cyr61的表达,为阿托伐他汀降脂外的抗动脉硬化作用增加新的理论依据.     

氟伐他汀及氯沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导人足细胞VEGF表达的影响

目的:观察氟伐他汀及氯沙坦对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)刺激人足细胞血管内皮细胞生长因子(vascu-lar endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:采用不同浓度的(10-9～10-5 mol/L)AngⅡ刺激人足细胞24 h以确定最适干预浓度;选择最适干预浓度(10-7 mol/L)的AngⅡ刺激0、6、12、24 h以确定最适干预时间;AngⅡ(10-7 mol/L)和不同浓度的(10-7～10-5 mol/L)氟伐他汀共同干预足细胞24 h以确定氟伐他汀最适干预浓度;AngⅡ(10-7 mol/L)和不同浓度的(10-6～10-4mol/L)氯沙坦共同干预足细胞24 h以确定氯沙坦最适干预浓度;氟伐他汀和氯沙坦(均为10-6 mol/L)共同干预足细胞24 h。Western blot检测人足细胞VEGF的表达。结果:①10-7 mol/L AngⅡ刺激人足细胞24 h后表达VEGF增加最明显;②氟伐他汀干预组与AngⅡ刺激组比较,VEGF表达明显下降,浓度10-5 mol/L下降最明显。氯沙坦干预组与AngⅡ刺激组比较,VEGF表达明显下降...     

阿托伐他汀抑制心房肌细胞CTGF及Cx43的表达

目的探讨阿托伐他汀(atorvastatin)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心房肌细胞结缔组织生长因子(con-nective tissue growth factor,CTGF)及缝隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)表达的影响。方法 18只雌雄对半1周龄左右Wistar大鼠,用于体外心房肌细胞的分离培养与鉴定。设置6组(n=18):正常对照组、AngⅡ(终浓度1μmol/L)组、AngⅡ+二甲基亚砜(DMSO)组、AngⅡ+atorvastatin(0.1、1.0、10μmol/L)组,作用72 h后RT-PCR分别检测CTGF、TGF-β1及Cx43的mRNA表达。结果与正常对照组相比,AngⅡ组CTGF、TGF-β1和Cx43 mRNA表达呈显著增加(P<0.05),阿托伐他汀逆转上述变化,10μmol/L组作用最强(P<0.05),而作为溶剂的DMSO无明显作用(P>0.05)。结论阿托伐他汀可能通过抑制AngⅡ诱导的心房肌细胞CTGF mRNA的高表达来减轻心房纤维化,同时可能通过下调Cx43 mRNA的表达来逆转缝隙连接蛋白的重构,最终减低房颤发生率。     

钙调蛋白激酶Ⅱ信号转导途径在血管紧张素Ⅱ致心肌肥大反应中的调控作用

目的 研究钙调蛋白激酶Ⅱ(CAMKⅡ)途径在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导乳鼠心肌细胞肥大反应中的作用.方法 原代培养乳鼠心肌细胞,分为对照组(不加任何干预因素),肥厚组(Ang Ⅱ刺激心肌细胞肥大),缬沙坦组(缬沙坦直接作用于心肌细胞)和预处理组(缬沙坦进行干预30 min后,加入AngⅡ刺激心肌细胞).测定心肌细胞3H-亮氨酸掺入作为心肌细胞肥大的指标;用RT-PCR和Western blot法检测心肌细胞CAMK Ⅱδ的mRNA和蛋白质表达的水平.结果 ①AngⅡ在10-9～10-6 mol/L范围内剂量依赖性地增加乳鼠心肌细胞的3H-亮氨酸掺入.选择10-7 mol/L AngⅡ作用心肌细胞48 h为成功的心肌细胞肥厚模型.② AngⅡ(10-7 mol/L)处理心肌细胞48 h,可使3H-亮氨酸掺入明显增加,该作用可被缬沙坦明显抑制.③与对照组相比,肥厚组心肌的CAMKⅡδ mRNA水平显著增加;而缬沙坦预处理组较之肥厚组则显著下降.④与对照组相比,肥厚组心肌的CAMK Ⅱδ的蛋白质表达显著增加;而缬沙坦预处理组的CAMKⅡδ蛋白质表达水平较之肥厚组则显著下降.结论 ①CAMKⅡ信号转导通路激活是AngⅡ介导的心肌肥大反应重要环节之一.②缬沙坦抑制Ang Ⅱ介导心肌肥大反应的机制可能部分是通过抑制CAMKⅡδ的表达而实现的.     

橙皮素对血管紧张素Ⅱ诱导H9C2心肌细胞肥大的影响

目的 探讨橙皮素对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导H9C2心肌细胞肥大的影响.方法 使用不同浓度橙皮素（0.125、0.25、0.5、1μmol/L）和AngⅡ（1μmol/L）共同孵育H9C2心肌细胞12h,心肌细胞骨架骨骼α肌动蛋白（α-actinin）荧光染色评估H9C2细胞面积改变以及real-time PCR方法检测心肌肥厚标志物BNP、β-MHC的mRNA表达变化,以观察不同浓度橙皮素对AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大的影响,选择0.25 μmol/L橙皮素和AngⅡ（1μmol/L）共同孵育H9C2心肌细胞6、12、24h,观察橙皮素对AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大抑制作用的时间相关性.结果 橙皮素干预可以缓解AngⅡ诱导H9C2心肌细胞的细胞面积增大;橙皮素抑制了AngⅡ诱导的H9C2心肌细胞BNP、β-MHC的mRNA表达水平升高.结论 橙皮素能够抑制AngⅡ诱导H9C2心肌细胞肥大,其有可能成为治疗心肌重构新的潜在药物.     

阿托伐他汀经ERK信号转导通路抑制CD40L诱导的内皮细胞E-选择素的表达

目的 探讨阿托伐他汀对CD40L诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达E-选择素的影响及其信号转导通路的关系.方法 原代培养HUVEC,给予CD40L刺激和不同浓度阿托伐他汀干预.应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术分别检测阿托伐他汀对CD40L诱导的HUVEC的E-选择素mRNA和细胞表面E-选择素表达情况.同时通过蛋白印迹法检测细胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白磷酸化的表达.结果 0.1、1、10μmol/L阿托伐他汀可浓度依赖性下调CD40L诱导的HUVEC E-选择素mRNA及蛋白的表达.1 μmol/L阿托伐他汀可使E-选择素蛋白下调48.68%,10μmol/L阿托伐他汀可使E-选择素蛋白下调70.25%.同时不同浓度阿托伐他汀均能抑制CIM0L诱导的ERK1/2磷酸化水平,其表达分别下凋至CD40L刺激组的81%±6%、73%±5%和41%±5%.结论 阿托伐他汀能通过ERK1/2信号转导通路抑制CD4OL诱导的内皮细胞E-选择素表达.     

氟伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导的系膜细胞AT1受体和Ⅳ型胶原表达的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的正常大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AT1R)蛋白和Ⅳ型胶原(ColⅣ)蛋白的表达情况及氟伐他汀对AT1R和ColⅣ表达的影响,探讨其肾脏保护作用的可能机制。方法:将HBZY-1细胞分为3组:①阴性对照组;②不同浓度(0.1,1.0,10μmol/L)AngⅡ刺激组;③1.0μmol/L AngⅡ加不同浓度(0.1,1.0,10μmol/L)氟伐他汀干预组,蛋白质印迹法检测各组AT1R蛋白的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA法)检测各组ColⅣ蛋白的表达。结果:AngⅡ刺激后,HBZY-1细胞AT1R及ColⅣ的表达随AngⅡ浓度增加而增强;氟伐他汀能够剂量依赖性地抑制AT1R和ColⅣ的表达。结论:氟伐他汀能够抑制AngⅡ诱导的HBZY-1细胞AT1R和ColⅣ的表达,同时AT1R和ColⅣ的表达存在正相关,推断氟伐他汀可能通过下调AT1R影响ColⅣ的表达,进而改善高血压肾脏硬化。     

阿托伐他汀抑制血管紧张素Ⅱ诱导心房肌细胞肥大及对缝隙连接蛋白40的影响

目的观察阿托伐他汀对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心房肌细胞肥大及缝隙连接蛋白40（Cx40）表达的影响。方法20只1周龄左右Wistar大鼠,用于体外心房肌细胞的分离培养与鉴定。设置正常对照组、AngⅡ（1μmol/L）组、AngⅡ＋二甲亚砜组和AngⅡ＋阿托伐他汀0.1、1.0、10μmol/L共6组。72h后利用氚标亮氨酸掺入法检测心房肌细胞蛋白合成速率,逆转录聚合酶链反应分别检测脑钠肽的前体（Nppb）、转化生长因子（TGF）-β1Cx40 mRNA的表达。结果与正常对照组相比,AngⅡ组氚标亮氨酸掺入量和Nppb mRNA表达呈显著性增加（P〈0.05）,同时TGF-β1mRNA高表达而Cx40mRNA低表达,阿托伐他汀逆转上述变化,10μmol/L组作用最强（P〈0.05）,而作为溶剂的二甲亚砜无明显作用。结论阿托伐他汀可能通过抑制Nppb mRNA的高表达来逆转AngⅡ诱导的心房肌细胞肥大,抑制TGF-β1RNA的高表达减轻心房纤维化,同时可能通过增强Cx40 mRNA的表达来逆转缝隙连接蛋白的重构,最终减低房颤发生率。     

氟伐他汀对脂多糖和血管紧张素Ⅱ致大鼠主动脉内皮细胞TF和TFPI表达的影响

目的 研究氟伐他汀(fluvastatin)对脂多糖(LPS)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的离体大鼠主动脉内皮细胞(RAEC)表达组织因子(TF)和组织因子途径抑制物(TFPI)的影响.方法 体外培养RAEC,分别给予LPS和AngⅡⅡ刺激,采用ELISA法检测氟伐他汀对RAEC TF和TFPI表达的影响.结果 氟伐他汀0.01、O.1、1和10μmol/L组能剂量依赖性抑制LPS和AngⅡ引起的TF表达增强;氟伐他汀0.01、0.1、1和10μmnol/L.组TFPI表达增强,呈剂量依赖性.结论 氟伐他汀能抑制引起血栓形成的TF表达,增加TFPI表达.     

Effect of Atorvastatin on Expression of Peroxisome Proliferator-activated Receptor Beta/delta in AngiotensinⅡ-induced Hypertrophic Myocardial CellsIn Vitro

Objective To explore the effect of atorvastatin on cardiac hypertrophy and to determine the potential mechanism involved. Methods Anin vitro cardiomyocyte hypertrophy from neonatal rats was induced with angiotensinⅡ (AngⅡ) stimulation. Before AngⅡ stimulation, the cultured rat cardiac myocytes were pretreated with atorvastatin at different concentrations (0.1, 1, and 10μmol/L). The following parameters were evaluated: the myocyte surface area,3H-leucine incorporation into myocytes, mRNA expressions of atrial natriuretic peptide, brain natriuretic peptide, matrix metalloproteinase 9, matrix metalloproteinase 2, and interleukin-1β, mRNA and protein expressions of theδ/β peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) subtypes. Results It was shown that atorvastatin could ameliorate AngⅡ-induced neonatal cardiomyocyte hypertrophy in the area of cardiomyocytes,3H-leucine incorporation, and the expression of atrial natriuretic peptide and brain natriuretic peptide markedly. Meanwhile, atorvastatin also inhibited the augmented mRNA level of several cytokines in hypertrophic myocytes. Furthermore, the down-regulated expression of PPAR-δ/β at both the mRNA and protein levels in hypertrophic myocytes could be significantly reversed by atorvastatin treatment. Conclusions Atorvastatin could improve AngⅡ-induced cardiac hypertrophy and inhibit the expression of cytokines. Such effect might be partly achieved through activation of the PPAR-δ/β pathway.     

吡哆胺和替米沙坦对血管紧张素II诱导的大鼠心肌细胞氧化应激的影响

 目的 探讨吡哆胺和替米沙坦对血管紧张素II诱导的大鼠心肌细胞氧化应激的影响。方法 大鼠心肌细胞培养并随机分为正常对照组【C组】,血管紧张素Ⅱ组【10-6mol/L,AngⅡ组】,吡哆胺组【吡哆胺（10 mmol/L）+ AngⅡ（ 10-6mol/L）,P组】,替米沙坦组【替米沙坦（10-6mol/L）+ AngⅡ （10-6mol/L）,T组】,联合治疗组【替米沙坦（10-6mol/L)＋吡哆胺（10 mmol/L）+ AngⅡ（ 10-6mol/L）,TP组】。 流式细胞仪检测细胞上清液中的活性氧簇（ROS）浓度,硫代巴比妥酸法（TBA）测定丙二醛（MDA）浓度,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物岐化酶（SOD）活力,荧光实时定量PCR方法检测心肌细胞所表达的晚期糖基化终产物受体（RAGE）mRNA表达量。 结果 与AngⅡ组比较,T组、P组及TP组MDA、ROS浓度均显著降低、SOD活力显著升高（P<0.05）;与T组比较,P组、TP组的ROS浓度明显降低、SOD活力明显升高（P<0.05）;与AngⅡ组比较,T组、P组和TP组RAGE mRNA表达量明显降低（P<0.01）;与T组、P组比较,TP组的RAGE mRNA表达进一步降低（P<0.05）。结论 吡哆胺和替米沙坦协同下调大鼠心肌细胞RAGE mRNA的表达,二者均可改善氧化应激,但吡哆胺较替米沙坦强。     

血管紧张素ⅡⅠ型受体反义寡核苷酸体外逆转心肌细胞肥大

目的:用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)Ⅰ型受体(AT1R)反义寡核苷酸(AS ODN)逆转心肌细胞肥大。方法:将培养的乳鼠心肌细胞分为正常组、AngⅡ组、AT1R AS ODN组,观察AngⅡ及AT1R AS ODN对心肌细胞 c jun基因表达、总蛋白合成、体积、搏动频率的影响。结果:AngⅡ可引起心肌细胞 c jun基因表达增多、搏动频率增快、体积增大、总蛋白合成增加。AT1R AS ODN能逆转 AngⅡ的上述作用。结论:AT1R AS ODN能有效逆转 AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。     

吡哆胺和替米沙坦对人肾小管上皮细胞活性氧生成的影响

 目的  通过体外培养人肾小管上皮细胞株（HK-2）细胞,探讨吡哆胺和替米沙坦对肾小管上皮细胞活性氧生成影响。方法  HK-2细胞培养并按干预方式不同分为HK-2正常对照组,血管紧张素Ⅱ组（10^-6 mol/L,AngⅡ组）,替米沙坦组［替米沙坦（10 ^-6 mol/L）+ AngⅡ（10^-6 mol/L）,T组］,吡哆胺1组［吡哆胺（1 mmol/L）+ AngⅡ（10^-6 mol/L）,P1 组）,吡哆胺2 组［吡哆胺（10 mmol/L）+ AngⅡ（10^-6 mol/L）,P2］,替米沙坦+吡哆胺联合组［替米沙坦（10^-6 mol/L）垣吡哆胺（10 mmol/L）+ AngⅡ（10^-6 mol/L）,TP 组］。流式细胞仪检测细胞上清液中的活性氧（ROS）浓度,荧光实时定量PCR方法检测HK-2 细胞所表达的转化生长因子β1（TGF-β1 ）和晚期糖基化终产物受体（RAGE ）mRNATGF-β1 表达量。结果  检测细胞上清液中的ROS 浓度,与AngⅡ组比较,P1 组和P2 组均显著降低ROS 浓度（P < 0.01）,TP 组的ROS 生成也明显减少（ P< 0.01）,但T组与AngⅡ组间比较差异无统计学意义（ P>0.05）;与AngⅡ组比较,T组、P2 组和TP 组的HK-2 细胞的, mRNA表达量明显降低（ P< 0.05）;与T 组和P2 比较,TP组HK-2 细胞的mRNA表达进一步降低（ P< 0.01）。结论  替米沙坦和吡哆胺可协同下调HK-2 细胞转化生长因子TGF-β1 和RAGE 的表达;在改善氧化应激功能上,吡哆胺作用强于替米沙坦。     

丝裂素活化蛋白激酶在AngⅡ上调培养的血管平滑肌细胞转化生长因子-β受体表达中的作用

目的:探讨丝裂素活化蛋白激酶在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)转化生长因子-β受体(TGF-βR1)上调中的作用。方法:培养大鼠主动脉VSMC,以10-7mol/L AngⅡ刺激作为AngⅡ组,AngⅡ刺激前分别应用10-5mol/L氯沙坦(Losartan)、PD98059预处理,以正常的VSMC为对照组,细胞免疫化学法测定培养12h时VSMC TGF-βR1的含量。结果:与对照组相比,AngⅡ刺激培养12h的VSMC TGF-βR1表达上调(P<0.01);AngⅡ受体AT1型拮抗剂Losartan使TGF-βR1表达显著降低(P<0.01),丝裂素活化蛋白激酶抑制剂PD98059能显著降低TGF-βR1表达(P<0.05)。结论:AngⅡ通过AT1上调TGF-βR1的表达,丝裂原活化蛋白激酶参与AngⅡ的胞内信号转导。     

Ghrelin对血管紧张素Ⅱ诱导的脐静脉内皮细胞 氧化应激和内皮功能损伤的影响

目的：探讨促生长激素释放肽（ghrelin）对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ, Ang Ⅱ）诱导的离体培养的脐静脉内皮细胞（human umbilicus vein endothelial cell-12,HUVEC-12）损伤的保护作用。方法：(1)在培养的人脐静脉内皮细胞中加入10-9~10-6mol/L AngⅡ共培养24 h,或用10-9~10-6mol/L ghrelin预处理2 h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24 h。用MTT法测量内皮细胞活力和用AnnexinV-FITC凋亡试剂盒在流式细胞仪下测量内皮细胞凋亡率。(2)HUVEC用10-9,10-8,10-7,10-6mol/L AngⅡ分别培养3,6,12或24 h,10-9,10-8,10-7或10-6 mol/L ghrelin预处理2 h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24 h。生长激素促分泌剂受体1a(growth hormone secretagogue receptor 1a,GHSR1a)受体阻断剂 ［D-Lys3］GHRP-6加入 10-6 mol/L ghrelin预处理2 h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24 h组,DCF荧光探针法测细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）。(3)HUVEC分别与 10-9,10-8,10-7或10-6mol/L AngⅡ和 ghrelin共培养24 h,与10-6mol/L AngⅡ孵育3,6,12或24 h,或10-9,10-8,10-7或10-6mol/L ghrelin预处理30 min,1 h或2 h后与10-6mol/LAngⅡ培养24 h,加入丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路（mitogen-activated protein kinase /extracullar signal regulated kinase 1/2,MAPK/ERK1/2）信号通路抑制剂PD98058、磷脂酰肌醇3-激酶/丝-苏氨酸激酶（phosphoinositide-3-kinase/serine threonine kinase,PI3K/Akt ）阻断剂 wortmannin和［D-Lys3］GHRP-6 共培养24 h,与用AngⅡ和ghrelin孵育的HUVEC 比较上清液中NO产量,HUVEC用ghrelin,PD98059, wortmannin, ［D-Lys3］GHRP-6预处理2 h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24 h,或用ghrelin加上PD98059,wortmannin及［D-Lys3］GHRP-6预处理2 h后与10-6mol/L AngⅡ共培养24 h。内皮细胞上清中的一氧化氮（nitric oxide, NO）用Griess法测量。(4)HUVEC用空白对照或AngⅡ在有或没有用ghrelin或ghrelin和wortmannin 一起预处理的情况下孵育,用免疫印迹法（Western blot ）测量内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS）的蛋白表达及丝苏氨酸激酶（serine threonine kinase,Akt）磷酸化蛋白表达。结果：AngⅡ引起内皮细胞损伤,增加HUVEC细胞凋亡率,减少培养的HUVEC细胞上清中NO含量,而ghrelin保护HUVEC免受AngⅡ损伤;Ghrelin减少与AngⅡ共同孵育的HUVEC ROS的产生。这种作用被［D-Lys3］GHRP-6消除。PD98059能阻止AngⅡ导致的HUVEC分泌NO减少,Wortmannin和［D-Lys3］GHRP-6消除Ghrelin保护HUVEC释放NO的作用;AngⅡ减少eNOS 的表达,但ghrelin能增加eNOS表达,Wortmannin消除Ghrelin的这种作用;Ghrelin 能刺激p-Akt的表达并在10~20 min达到高峰。结论：Ghrelin在AngⅡ导致的HUVEC损伤中起保护作用,其机制与通过GHSR1a受体减少氧化应激、增加eNOS蛋白表达和激活PI3K/Akt信号通路有关。