2型糖尿病大鼠模型GLUT4 mRNA表达的研究

目的：研究葡萄糖转运体4（GLUT4）mRNA表达在2型糖尿病胰岛素抵抗中的分子机制。方法：采用高脂高糖饲养，一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制备2型糖尿病大鼠模型。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分析大鼠骨骼肌、心肌和脂肪组织中GLUT4 mRNA的表达量变化与差别。结果：正常对照组和2型糖尿病大鼠模型组GLUT4 mRNA在骨骼肌中有相对较高表达，在心肌中表达次之，在脂肪组织中表达相对偏低。2型糖尿病大鼠模型组骨骼肌中GLUT4 mRNA表达量只有对照组骨骼肌的48％、心肌的44％、脂肪组织的38％。结论：GLUT4 mRNA表达量下降导致骨骼肌、心肌和脂肪组织对葡萄糖摄取利用减少是胰岛素抵抗的重要分子基础，是诱发2型糖尿病原因之一。     

小牛血清去蛋白注射液对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型骨骼肌GLUT4 mRNA表达的影响

目的观察小牛血清去蛋白注射液(DECB)对2型糖尿病胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌中葡萄糖转运因子4(GLUT4)的mRNA表达的影响。方法以高脂高糖饮食加链脲佐菌素制作2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型,观察DECB对大鼠葡萄糖耐量(OGTT),运用RT-PCR方法检测大鼠模型骨骼肌中GLUT-4的mRNA表达。结果 DECB可改善OGTT,增加大鼠模型骨骼肌中GLUT4的mRNA表达。结论 DECB具有较好的降血糖、改善胰岛素抵抗、防治糖尿病并发症的作用。     

ACE抑制剂对糖尿病大鼠心肌组织GluT4基因与蛋白表达的影响

目的　研究ACE抑制剂对糖尿病大鼠心肌组织GluT4基因与蛋白表达的影响。方法　大鼠随机分对照组、糖尿病组及苯那普利治疗组。观察 4wk后应用荧光分光光度法检测各组血浆和心肌组织ACE活性 ,Northern杂交检测心肌组织GluT 4mRNA表达 ,Western杂交检测心肌组织细胞膜GluT4蛋白表达。结果　与对照组相比 ,糖尿病组血浆ACE活性趋于下降 ,心肌组织内ACE活性却明显升高 (P<0 0 5) ,苯那普利对糖尿病大鼠血浆和心肌组织ACE活性均有明显抑制作用 ,分别达 92 1%和 89 0 %。Northern杂交显示糖尿病大鼠心肌组织GluT4mRNA表达明显下调 ,约比对照组下降 40 % ,苯那普利治疗 4wk对此无明显影响。Western杂交显示糖尿病大鼠心肌组织细胞膜GluT4蛋白表达也明显下调 ,但苯那普利治疗 4wk可使下调的GluT4蛋白表达明显增加 (P <0 0 5)。结论　苯那普利不仅对糖尿病大鼠血浆ACE活性有明显抑制作用 ,对心肌组织ACE活性也能明显抑制 ,它对糖尿病大鼠心肌组织下调的GluT4mRNA表达无明显影响 ,但可使糖尿病大鼠心肌组织细胞膜下调的GluT4蛋白表达明显增加     

替米沙坦对2型糖尿病大鼠心肌脂联素受体2葡萄糖转运蛋白4表达的影响

目的探讨替米沙坦对2型糖尿病大鼠心肌组织脂联素受体2(AdipoR2)及葡萄糖转运蛋白4(GluT4)表达的影响。方法30只雄性Wistar大鼠,随机分为3组:健康对照组(A组),糖尿病组(B组)和糖尿病替米沙坦治疗组(C组),每组各10只。采用高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素(STZ)的方法诱导糖尿病模型。用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)的方法测定大鼠心肌AdipoR2mRNA、GluT4mRNA的表达,用免疫组织化学法检测AdipoR2蛋白在心肌组织中的表达,用放射免疫法检测血浆脂联素水平。结果与A组比较,B组糖尿病大鼠心质量/体质量增加,血浆脂联素水平、心肌AdipoR2mRNA和蛋白表达以及GluT4mRNA表达均显著降低。替米沙坦治疗后,C组糖尿病大鼠心质量/体质量降低,血浆脂联素水平、心肌AdipoR2mRNA和蛋白表达以及GluT4mRNA表达均显著升高。结论2型糖尿病大鼠心肌AdipoR2及GluT4表达水平降低。替米沙坦上调2型糖尿病大鼠心肌AdipoR2及GluT4表达,促进心肌葡萄糖氧化,减轻心脏肥大,产生心脏保护作用。     

二甲双胍对糖尿病大鼠肝脏中重要转运蛋白表达的影响

目的：研究二甲双胍对糖尿病大鼠肝脏中重要转运蛋白表达的影响.方法：利用高脂肪饲料与链脲佐菌素（STZ）诱导产生糖尿病模型大鼠.将造模后大鼠分为模型对照组、二甲双胍低剂量组（30 mg·kg^-1·d^-1）、二甲双胍高剂量组（100 mg·kg^-1·d^-1）,口服给药4周,同时设正常对照组.检测并比较不同组别大鼠肝脏组织中P糖蛋白（P-gp）与多药耐药相关蛋白（MRP）2蛋白表达量与相应mRNA表达水平.结果：二甲双胍高、低剂量组的P-gp与MRP2蛋白表达及mRNA水平均明显低于模型对照组（P＜0.05）,且二甲双胍高剂量组明显低于二甲双胍低剂量组（P＜0.05）.结论：二甲双胍可能通过抑制肝脏的P-gP与MRP2蛋白表达及mRNA水平,从而发挥降糖作用,可能是其作用机制之一.     

吡格列酮调节糖尿病鼠肾小球肝素酶的表达

目的：观察胰岛素增敏剂吡格列酮对糖尿病大鼠肾小球肝素酶的表达,探讨其肾脏的保护作用及其机制。方法：将雌性SD大鼠分为3组：正常对照组（NC,n=10）、糖尿病组（DM,n=12）和吡格列酮组（DP,n=12）。链脲菌素腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型。实验第6周,测定血糖（BG）、糖化血红蛋白（GHb）,血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）,24h尿蛋白（24hUP）、尿足细胞（UPC）排泄水平。RT-PCR检测肾小球肝素酶mRNA的表达,肾小球间接免疫荧光分析肝素酶的表达分布。结果：与DM组相比,DP组BG、GHb、BUN、Scr水平显著降低（P〈0．01）;24hUP、UPC排泄量亦明显减少（P〈0．05）;肝素酶mRNA的表达及平均吸光度值显著降低（P〈0．05）。结论：吡格列酮可抑制肝素酶的表达,减轻蛋白尿,对糖尿病肾脏病变有保护作用。     

针康法通过抑制NF-кB信号通路对糖尿病脑卒中大鼠骨骼肌IRS-1mRNA、PI3KmRNA的表达影响

目的探究针康法对糖尿病脑卒中大鼠骨骼肌NF-кB信号通路的抑制作用及其对IRS-1mRNA、PI3KmRNA的表达影响。方法将建模成功及空白大鼠随机分为假手术组、空白组、模型组、针康组、针刺组、康复组,每组各8只。建立糖尿病脑卒中大鼠模型,干预21天后免疫组化法检测大鼠骨骼肌NF-κB-p65蛋白表达,同时用PCR检测骨骼肌中IRS-1mRNA与PI3K mRNA表达量。结果与假手术组及模型组相比,各干预组大鼠骨骼肌NF-κB-p65光密度值均显著降低(P<0.05),干预组IRS-1mRNA与PI3K mRNA表达量均显著增加(P<0.05),与针刺组及康复组相比,针康组光密度明显降低(P<0.05),mRNA表达量增加更为显著(P<0.05)。结论针康法可能通过抑制糖尿病脑卒中大鼠骨骼肌NF-кB信号通路来增加骨骼肌IRS-1mRNA、PI3KmRNA的表达。     

马来酸罗格列酮对大鼠Tanis mRNA表达的影响

目的研究马来酸罗格列酮对大鼠Tanis mRNA表达及血浆白细胞介素-6（ IL-6）水平的影响。方法Wistar大鼠24只，随机分为模型组（A）、给药组（B）和对照组（C），每组8只。A、B两组高糖高脂喂养6周建立胰岛素抵抗模型，C组常规饲喂。模型制作成功后B组喂食马来酸罗格列酮，4 mg.kg^-1.d^-1；A组喂以常规饲料。两周后所有大鼠禁食12 h后称重，测空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS），并按Homa公式计算胰岛素抵抗指数（IR）；应用RT-PCR方法测定大鼠肝组织Tanis mRNA的表达；ELISA法测定IL-6水平。结果与C组相比，A组大鼠血清IL-6水平明显升高（P＜0.05）。Tanis mRNA的表达明显增强（P＜0.05）；B组大鼠血清IL-6水平、Tanis mRNA的表达较A组明显降低（P＜0.05）。多元回归分析显示，IL-6与FINS、IR正相关（r1＝0.633，P＝0.014；r2＝0.638，P＝0.015），Tanis mRNA的表达与IL-6、FINS、IR正相关（r1＝0.606，P＝0.022；r2＝0.651，P＝0.012；r3＝0.584，P＝0.028）。结论Tanis mRNA的高表达可能是胰岛素抵抗和糖尿病的发生机制之一，马来酸罗格列酮可有效改善胰岛素抵抗，降低血浆IL-6水平及Tanis mRNA表达。     

白细胞介素6对2型糖尿病大鼠骨骼肌糖代谢的影响

目的：通过研究白细胞介素6（IL－6）对2型糖尿病（T2DM）大鼠骨骼肌葡萄糖转运体4（GLUT4）和糖原含量的影响,探讨其影响T2DM糖代谢的机制。方法：健康雄性SD大鼠随机分为4组：正常对照组（N组）10只,糖尿病IL-6抗原干预组（A组）10只,糖尿病IL－6抗体干预组（B组）8只,糖尿病对照组（C组）8只。测定血糖、血清胰岛素、血脂等指标;取股四头肌比色法测定肌糖原含量,免疫组化法测定骨骼肌GLUT4蛋白表达。结果：T2DM大鼠骨骼肌糖原含量和GLUT4蛋白表达较正常大鼠明显降低,IL-6抗体干预可以升高T2DM大鼠骨骼肌糖原含量和GLUT4蛋白表达。结论：T2DM大鼠骨骼肌GLUT4蛋白表达减少;IL－6抗体阻滞通过增加GLUT4蛋白表达促进骨骼肌对糖的利用。     

脂联素影响骨骼肌胰岛素抵抗模型中葡萄糖转运蛋白4表达的研究

目的：通过建立骨骼肌L6细胞胰岛素抵抗模型,探讨骨骼肌L6细胞中脂联素（ APN）的分泌,以及脂联素对骨骼肌胰岛素抵抗模型中葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）表达的影响。方法（1）体外培养大鼠L6成肌细胞,诱导分化后,给予不同浓度的棕榈酸（PA）,测定不同时间细胞培养上清液葡萄糖浓度,观察PA对L6细胞摄取葡萄糖的影响,建立胰岛素抵抗模型;（2）根据实验条件的不同分为三组：NC组（正常对照组,即骨骼肌L6细胞组）;IR组（胰岛素抵抗模型组）;IR＋PIO组（胰岛素抵抗模型＋吡格列酮组）。应用Western blot方法分别测定上述三组APN和GLUT4表达水平。结果（1）0．4 mmol· L^-1的棕榈酸在作用12、24、36 h以及0．6～0．8 mmol· L^-1棕榈酸作用8～36 h后,细胞培养上清液中葡萄糖含量,明显高于对照组。胰岛素抵抗模型建立;（2）Western blot结果显示：①与NC组比较,IR组APN和GLUT4表达均减少,差异有统计学意义;②与IR组比较,IR＋PIO组其APN和GLUT4表达均增加,差异有统计学意义。结论（1）大鼠L6成肌细胞培养并诱导分化后,经过一定条件下PA刺激,可以建立胰岛素抵抗模型;（2）大鼠L6细胞可分泌和表达脂联素,骨骼肌源性脂联素上调L6细胞GLUT4的表达;（3）吡格列酮作为PPAR-γ激动剂,可增加大鼠L6细胞脂联素的分泌,进而改善胰岛素敏感性。     

氯氮平对雄性C57BL／6小鼠血糖和骨骼肌过氧化物酶体增殖物激活受体-γ mRNA表达的影响

目的研究不同剂量氯氮平对雄性C57BL／6小鼠血糖及其骨骼肌过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）mRNA表达的影响。方法60只雄性C57BL／6小鼠随机平分成空白对照组、2．0mg·kg^-1氯氮平组和10．0mg·kg^-1氯氮平组;各组小鼠每日腹腔注射空白溶媒或氯氮平注射液1次,连续注射28d。于给药后第29d采血分别测定各组小鼠的空腹血糖（FBG）、葡萄糖耐量及胰岛素水平;随后处死小鼠,提取出小鼠股四头肌,采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）的方法检测PPAR-γ mRNA在骨骼肌中的表达水平变化。结果与空白对照组相比,腹腔注射给药28d后,10．0mg·kg^-1氯氮平组FBG、葡萄糖耐量、胰岛素水平及胰岛素抵抗指数（IRI）明显增加（P〈0．05）,2．0mg·kg^-1氯氮平组各指标稍有变化,但差异无统计学意义;氯氮平各剂量组小鼠骨骼肌PPAR-γ mRNA表达量均有减少,但各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论氯氮平可慢性升高雄性C57BL／6小鼠的FBG、胰岛素水平及使糖耐量受损和诱发胰岛素抵抗;但不降低PPAR-γ mRNA的表达,表明氯氮平升高血糖,导致糖代谢障碍的原因可能与PPAR-γ无关。     

芳香化酶P450与环氧化酶-2在子宫内膜异位症和子宫腺肌病中的表达及意义

目的 研究细胞色素芳香化酶P450(P450arom)和环氧化酶-2(COX-2)在子官内膜异位症(EMs)和子宫腺肌病(AM)在位和异位内膜中的表达及相关性.方法 应用免疫组化Envision法和半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测正常子宫内膜、EMs及AM的在位和异位内膜中P450arom及COX-2的蛋白与mRNA的表达,并进行相关性分析.结果 P450arom和COX-2在正常子宫内膜中无表达或弱表达,二者在EMs和AM在位和异位内膜中的表达均高于正常子宫内膜,差异均有显著性意义(P<0.05).P450arom与COX-2在EMs和AM异位内膜中的表达均高于在位内膜,差异均有显著性意义(P<0.05).P450arom在EMs和AM增殖期和分泌期表达无差异(P>0.05).COX-2在正常子宫内膜、EMs分泌期表达高于增殖期,差异均有、显著性意义(P<0.05).在AM表达不随月经周期变化.P450arom mRNA与COX-2mRNA在EMs中的表达水平呈正相关(r=0.964,P<0.01);在AM中的表达水平亦呈正相关(r=0.813,P<0.01).结论 P450arom和COX-2在EMs和AM中呈过表达,与EMs和AM的发病相关.二者协同作用促进EMs和AM的发生发展.     

缺氧对15-脂氧酶同工酶在肺动脉中表达的影响

目的比较15-脂氧酶的两种同工酶:15-lipoxygenase-1(15-LO-1),15-lipoxygenase-2(15-LO-2)在正常对照组和慢性缺氧组中肺动脉表达的差异,从而探讨两种同工酶在缺氧性肺血管收缩中的作用。方法18只SD大鼠随机分为两组(n=9),正常对照组和缺氧组。通过动物乏氧箱建立大鼠慢性缺氧模型。分别用免疫组化法、原位杂交法、Western blot法比较两种同工酶在两组中表达的差异。结果①15-LO-1在正常对照组肺动脉有蛋白质的表达,而15-LO-2在正常对照组蛋白质水平不表达。②缺氧时15-LO-1蛋白质表达明显强于在正常对照中的表达(P<0.01)。③缺氧时15-LO-2在蛋白质水平表达,但15-LO-1蛋白质水平表达强于15-LO-2。④15-LO-1,15-LO-2在正常对照组和慢性缺氧组均有mRNA水平的表达,而且在缺氧组中的表达高于对照组。结论缺氧同时诱导15-LO-1,15-LO-2在肺动脉中表达增加,从而使二者在缺氧性肺血管收缩中发挥一定作用。     

Ang Ⅱ及缬沙坦对人近端肾小管上皮细胞结缔组织生长因子的影响

目的:研究血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)及Ang Ⅱ1型受体拮抗药缬沙坦(Val)对人肾小管上皮细胞(HK-2)结缔组织生长因子(CTGF)基因表达的影响。方法:将培养的HK-2分别用AngⅡ及Val刺激,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CTGFmRNA的表达。结果:Ang Ⅱ使HK-2细胞CTGF的表达增加分别是空白对照组的(1.2893±0.0233)、(1.4517±0.0353)、(1.6998±0.0969)倍(P<0.01);先用Val刺激后再加入Ang Ⅱ刺激HK-2细胞,其CTGF的表达是空白对照组的(1.2140±0.0832)倍(P>0.05)。结论:Val能够抑制Ang Ⅱ引起的人肾小管上皮细胞CTGFmRNA的表达。     

拟青霉代谢物提取物对慢性应激抑郁模型大鼠皮质激素受体mRNA表达的影响

目的研究拟青霉代谢物提取物(BCPT)对慢性不可预见性应激(CUS)抑郁模型大鼠海马和皮质中盐皮质激素受体(MR)、糖皮质激素受体(GR)mRNA表达的影响。方法采用CUS法建立大鼠抑郁模型,用逆转录-聚合酶链反应方法分别检测CUS模型大鼠海马和皮质中MR、GR mRNA的表达。结果BCPT可上调CUS模型大鼠皮质和海马中MR、GR mRNA的表达,降低MR/GR mRNA值。结论BCPT的抗抑郁作用可能与上述结果有关。     

严重烫伤早期TNFα基因对内毒素刺激表达敏感性增强及TNFα对骨骼肌葡萄糖摄取作用的实验研究

目的 证实严重烫伤大鼠TNFα基因对内毒素(LPS)刺激表达敏感性较强,以及TNFα在创伤胰岛素抵抗中的作用机制。方法 给予同剂量LPS体内注射,观察严重烫伤和正常大鼠血清TNFα及肝脏TNFα-mRNA的变化,并用TNFα单克隆抗体(TNFα-McAb)静脉注射烫伤小鼠,观察骨骼肌基础和胰岛素刺激的葡萄糖摄取量的改变。结果 同剂量的LPS刺激后,正常对照组血清TNFα及肝脏TNFαmRNA升高不显著,而严重烫伤组血清TNFα及肝脏TNFαmRNA明显升高。严重烫伤组基础葡萄糖摄取明显升高,但胰岛素依赖的葡萄糖摄取明显降低,经TNFα-McAb静脉注射治疗后,基础葡萄糖摄取量明显下降,但胰岛素刺激的葡萄糖摄取明显升高。结论 严重烫伤早期TNFα基因对LPS刺激表达敏感性增强,致使TNFα水平明显升高。血清TNFα促进骨骼肌基础葡萄糖摄取和“葡萄糖循环”,抑制胰岛素刺激的葡萄糖摄取。TNFα在创伤胰岛素抵抗中发挥始动作用。     

松果菊苷对过氧化氢损伤的PC12细胞的保护作用及机制研究

目的研究松果菊苷(echinacoside,ECH)对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞损伤的保护作用及机制。方法用终浓度为0.4 mmol.L-1的H2O2损伤PC12细胞,测定细胞存活率和Na+,K+-ATP酶的活性;用激光共聚焦法(LSCM)检测线粒体膜电位(MMP);用RT-PCR法检测Bcl-2和p53 mRNA表达量的变化。结果10 mg.L-1松果菊苷可以提高H2O2损伤的PC12细胞存活率和Na+,K+-ATP酶的活力、升高线粒体膜电位、降低p53 mRNA水平但增高Bcl-2 mRNA水平(P<0.05或P<0.01)。结论松果菊苷可保护H2O2诱导的PC12细胞损伤,升高MMP、下调p53mRNA和上调Bcl-2 mRNA可能是其作用机制。     

青藤碱对类风湿关节炎树突状细胞CD80mRNA、CD86mRNA表达的影响

目的观察中药单体青藤碱对体外培养类风湿关节炎(RA)树突状细胞CD80mRNA、CD86mRNA表达的影响。方法分离10例RA患者外周血单核细胞,分为青藤碱高、中、低剂量组和空白对照组,采用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素-4联合刺激,半定量逆转录聚合酶链反应检测CD80mRNA、CD86mRNA表达的改变。结果与空白对照组比较,经青藤碱高、中、低剂量干预的树突状细胞CD80mRNA、CD86mRNA表达减少(P<0.01或P<0.05),青藤碱3个剂量组之间比较表达存在差异(P<0.05)。结论青藤碱可能通过抑制树突状细胞CD80mRNA、CD86mRNA的表达,阻断对其T细胞的协同刺激而达到治疗RA的作用。     

mRNA疫苗技术概述及新型冠状病毒肺炎mRNA疫苗的研究进展

mRNA疫苗技术的发展受到分子本身不稳定、自身免疫原性高以及体内递送效率低等因素的限制，经过30多年的研究，近年来随着其稳定性、高效传递系统方面的技术日趋成熟，肿瘤和传染病mRNA疫苗研究进展明显。与传统疫苗技术相比，该技术可诱导机体产生体液免疫和细胞免疫，疫苗生产工艺简单、研发周期短、成本低，便于标准化生产，适用于大流行疾病和传染病暴发流行期间的疫苗开发和生产，是一种应用前景广阔的疫苗。在当前新型冠状病毒肺炎全球大流行的背景下，本文从mRNA疫苗的特征、疫苗递送系统入手，结合新型冠状病毒肺炎mRNA疫苗的研究现状进行了分析和阐述，以期为后续的mRNA疫苗研究开发提供参考依据。     

不同治法方药对慢性心理应激大鼠下丘脑CRH mRNA表达的影响

目的　从分子水平研究不同治法方药调控慢性心理应激反应的作用机制。方法　采用慢性束缚心理应激大鼠模型 ,RT PCR法分析应激大鼠下丘脑CRHmRNA的表达及不同治法方药的影响。结果　连续 2wk的慢性束缚心理应激大鼠下丘脑中CRHmRNA表达明显升高 (P <0 0 1) ,调肝和补肾治法方药可以明显地降低下丘脑CRHmRNA表达 (P <0 0 1orP <0 0 5 ) ,而健脾治法方药对此则无调节作用。结论　调肝和补肾治法方药可以通过降低下丘脑CRHmRNA表达 ,有效地调控慢性心理应激反应。