测定人血浆中齐多夫定的液相色谱-串联质谱法及生物等效性的应用

目的:建立快速、灵敏的液相色谱-串联质谱法(LC／MS／MS)测定人血浆中齐多夫定,并用于制剂生物等效性研究。方法:血浆样品经液-液萃取后,以甲醇-水(70:30,用1％氨水调节pH至6．0)为流动相, Zorbax Extend C18柱分离,采用电喷雾离子源四极杆串联质谱,以选择反应监测(SRM)方式进行正离子检测。用于定量分析的离子反应分别为m／z 268→m/z 127(齐多夫定)和m／z 225→m／z 127(内标,司他夫定)。结果:齐多夫定测定方法的线性范围为1．0-2 500μg·L-1;日内、日间精密度(RSD)均小于8．0％,准确度 (RE)在±2．0％以内。应用此法研究比较了18名健康受试者单剂量口服齐多夫定参比制剂和受试制剂 200 mg后的主要药动学参数。以AUC0-8计算受试制剂相对生物利用度。结论:该法选择性强、灵敏度高,适用于齐多夫定制剂的生物等效性评价及临床药动学研究。     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中雷洛昔芬及其在制剂生物等效性研究中的应用

目的:建立专属、灵敏的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)法测定人血浆中的雷洛昔芬,并将方法应用于雷洛昔芬两种制剂的人体生物等效性研究。方法:血浆样品中加入200μLβ-葡萄糖苷酸酶于37℃水浴孵化10 h后采用液-液萃取法预处理。Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)进行分离,流动相为甲醇-醋酸铵(5 mmol.L-1)-甲酸(65∶35∶0.1),流速为0.6 mL.min-1。大气压化学电离源,多反应监测方式(MRM)进行正离子检测,定量分析离子对为m/z 474→m/z 112(雷洛昔芬)和m/z 478→m/z116(内标d4-雷洛昔芬)。临床试验采用随机双交叉设计,24例健康男性受试者空腹单次口服60 mg雷洛昔芬受试制剂或参比制剂,LC-MS/MS法测定血浆雷洛昔芬浓度,计算有关药代动力学参数并进行生物等效性评价。结果:雷洛昔芬定量方法线性范围为0.20～250 ng.mL-1,定量下限为0.20 ng.mL-1,日内、日间精密度(RSD)均小于11.2%,准确度(RE)在-4.0%～1.3%之间。两种制剂的AUC0～120无显著性差异,Cma...     

LC-MS/MS法测定人血浆中替加色罗的浓度及其

目的:建立灵敏、快速的LC-MS/MS法测定人血浆中替加色罗,并用于制剂生物等效性研究。方法:血浆样品经有机溶剂提取后,以乙腈-5 mmol.L-1乙酸铵-甲酸(70∶30∶0.01)为流动相,采用Zorbax XDB-C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离,通过电喷雾离子化四极杆串联质谱,以多反应监测(MRM)方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z302→173(替加色罗)和m/z256→167(内标苯海拉明)。结果:替加色罗测定方法的线性范围为0.010~10 ng.mL-1,定量下限为0.010 ng.mL-1,日内、日间精密度(RSD)均<7.3%,准确度(RE)在±1.4%之内。应用此法研究比较了22例健康受试者单剂量口服替加色罗参比制剂和受试制剂6 mg后的主要药动学参数,受试制剂和参比制剂Tmax分别为(0.86±0.22)和(1.01±0.24)h,Cmax分别为(2.21±0.69)和(2.05±0.64)ng.mL-1,t1/2α分别为(1.18±0.44)和(1.24±0.56)h,t1/2β分别为(10.10±3.07)和(8.81±2.35)h,AUC0~36 h分别为(6.35±2.48)和(6.47±1.99)ng.h.mL-1,AUC0~∞分别为(6.69±2.59)和(6.70±2.03)ng.h.mL-1。马来酸替加色罗分散片的相对生物利用度平均为(98.2±22.1)%。结论:该法灵敏、快速、准确,适用于替加色罗制剂的人体生物等效性评价。     

HPLC-MS/MS测定人体血浆和尿液中罗通定的浓度

目的 建立一种简便、灵敏的测定人体血浆和尿液中罗通定浓度的高效液相色谱串联质谱( HPLC-MS/MS)方法.方法 血浆、尿液样品分别采用乙腈沉淀处理后,进样分析.采用Agilent-ECLIPSE-C18柱(2.1mm×150 mm,5μm),以乙腈-0.2％甲酸溶液=85∶15为流动相,采用正离子,多反应监测方式测定样品浓度.检测离子为m/z356.3→192.3(罗通定)和m/z 285.0→193.0(地西泮,内标).结果 罗通定血浆及尿样均在2.5～1000 ng· mL-1与峰面积线性关系良好(r=0.999 4);最低定量浓度均为2.5 ng·mL-1.日内与日间RSD均＜10％,血浆样品回收率在91.4％～109.2％,尿样回收率在88.63％～115.8％.结论 本方法简便快速、灵敏准确,适用于罗通定在人体内的药物动力学研究.     

LC-MS/MS方法测定Beagle犬血浆中比卡鲁胺的浓度

目的 建立灵敏的液相色谱-串联质谱法测定狗血浆中比卡鲁胺的浓度.方法 血浆样品采用乙腈蛋白沉淀方法,以0.2％甲酸-乙腈(35∶65,v/v)为流动相;采用Zorbax SB C18柱(150 mm×4.6mm,5 μm)分离,通过电喷雾电离源,以选择多反应监测(MRM)方式进行负离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z428.9→254.7(比卡鲁胺)和m/z 269→169.6(内标,甲苯磺丁脲).结果 建立的体内比卡鲁胺测定方法线性范围为5～2 000 ng·mL-1,定量下限可达1 ng·mL-1.日内、日间精密度(RSD)均＜10％.结论 该方法预处理操作简洁、灵敏、专属性强,可方便用于比卡鲁胺药物的体内药动学研究.     

HPLC—MS／MS测定人体血浆和尿液中帕洛诺司琼的浓度

目的建立一种简便、灵敏的测定人体血浆和尿液中帕洛诺司琼浓度的高效液相色谱一串联质谱（HPLC-MS／MS）方法。方法血浆、尿液样品分别采用甲醇沉淀处理后,选样分析。采用Agilent-ZORBAX-C18色谱柱（2．1mm×50mm,5fμm）．以乙腈-0．1％甲酸溶液为流动相,采用正离子,多反应监测方式测定样品浓度。用于定量分析的检测离子质荷电（m／z）297．2→m/z110．1（帕洛诺司琼）和DI／Z285．0→M／z193．0（内标）。结果帕洛诺司琼血浆样品在0．02～10ng·mL^-1与峰面积线性关系良好（r=0．9975）;定量下限（LLOQ）为0．02ng·L^-1;日内与日间RSD均〈10％;回收率在89．6％～114．0％。尿样在2．5～100ng·mL^-1与峰面积线性关系良好,7—0．9974;定量下限（LLOQ）为2．5ng·mL^-1;日内与日间RSD均〈10％;回收率在96．4％～113．4％。结论本方法简便快速、灵敏准确,适用于帕洛诺司琼在人体体内的药物动力学研究。     

LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中甘草酸和甘草次酸

目的：建立一种同时测定大鼠血浆中甘草酸和其代谢产物甘草次酸的高效液相色谱一串联质谱的（LC-MS／MS）分析方法。方法：采用汉邦VP—ODS（150min×2．1nun,5μm）色谱柱,流动相为甲醇和1％的甲酸水,梯度洗脱：21％水相（0-3．5min）,2％水相（3．5-8．2min）。简单的乙腈沉淀蛋白法处理血浆样品。以格列喹酮为内标,采用ESI源负离子模式、多反应检测进行测定。检测离子对分别为m／z821．4→350．9（甘草酸）、m／z526→401．1（格列喹酮）和m／z469．2→425．2（甘草次酸）。结果：甘草酸和甘草次酸的检测浓度分别在50－2000ng·mL-1、10-500ng·mL-1范围内线性关系良好。相关系数为0.9989和0．9981。日内及日间精密度RSD均小于15％。结论：方法专属性强．准确度好．适用于同时监测甘草酸和甘草次酸的浓度及进行药动学研究。     

液相色谱-串联质谱法测定健康人体血浆中米格列醇浓度及其药代动力学研究

目的建立测定血浆中米格列醇片(降血糖药)的液相色谱-串联质谱法,考察米格列醇在中国健康志愿者体内的药代动力学。方法血浆样品经液-液提取后,进行色谱分离,在三重四极杆串联质谱仪上,以多反应离子监测(MRM)方式进行定量分析,用于监测的离子为m/z 208．3→m／z 146．1 (米格列醇)和m/z 268．5→m/z 250．4(内标,伏格列波糖)。结果米格列醇的最低定量浓度为5．0 μg·L-1,线性范围为5～2 000 μg·L-1,精密度与准确度符合生物样品分析要求。结论该法操作简便、快速、灵敏度高,适于临床药代动力学研究。     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中的伪麻黄碱浓度

建立了测定人血浆中伪麻黄碱浓度的液相色谱 串联质谱法。血浆样品经液 液萃取处理后 ,以甲醇 水 甲酸 (体积比 6 0∶40∶2 )为流动相 ,采用ZorbaxC18柱分离 ,通过电喷雾四极杆串联质谱 ,正离子方式检测 ;采用SRM转化m/z 16 6→ 147(伪麻黄碱 )和m/z 2 75→ 12 5 (内标罗哌卡因 )进行定量分析。线性范围为 5 0～ 2 5 0 0ng/mL ,定量限为 5 0ng/mL。应用本法测试了 2 0名健康受试者口服 6 0mg盐酸伪麻黄碱后不同时刻的血浆药物浓度     

LC-MS/MS法测定氨氯地平血药浓度及其片剂的生物等效性研究

目的:建立测定人血浆中氨氯地平血药浓度的方法,并评价2种苯磺酸氨氯地平片的生物等效性。方法:人血浆样本经液-液萃取后,选用ZorbaxSB-C18NarrowBore色谱柱,以甲醇-10mmol/L乙酸铵(90:10,V/V)为流动相,流速为0.3ml/min,选用API3200型三重四极杆串联质谱仪的多重反应监测(MRM)扫描方式进行监测,电喷雾电离(ESI)离子化源,正离子方式,选择监测离子反应分别为m/z409.2→m/z238.2(氨氯地平)和m/z256.2→m/z167.3(苯海拉明,内标)。24名健康受试者随机于2个周期交叉口服相同剂量的苯磺酸氨氯地平片受试制剂(国产)或参比制剂(进口),考察其生物等效性。结果:氨氯地平和苯海拉明的保留时间分别约为2.79、2.43min;氨氯地平的血药浓度在0.10～10.0ng/ml范围内线性关系良好(r=0.9997),定量下限为0.10ng/ml,日内、日间RSD均<15%,相对偏差(RE)均在±15%范围以内,平均提取回收率为(84.7±5.5)%,平均基质效应因子为(76.5±8.4)%。以AUC0-120h计,受试制剂相对于参比制剂的生物利用度为(105.8±20.9)%。结论:该方法快速、灵敏、专属性强、重现性好,适用于人血浆中氨氯地平的测定,可用于苯磺酸氨氯地平片的人体生物等效性研究;2种制剂生物等效。     

LC/MS/MS与GC/MS法分析鉴定小鼠尿中沙美特罗的代谢产物

目的:鉴定沙美特罗在小鼠尿中的主要代谢产物.方法:ig给药后,收集小鼠尿液,经固相提取,葡萄糖醛酸酶水解,进行LC/MS/MS分析和硅烷化后进行GC/MS分析同时分离鉴定沙美特罗代谢产物.结果和结论:在给药后尿样中发现沙美特罗原型和4种代谢产物M1～M4,其结构推测为19-羟基沙美特罗(M1)、2-羰基沙美特罗(M2)、19-羰基沙美特罗(M3)和19-羟基-8-甲氧基沙美特罗(M4).     

高效液相色谱-质谱联用测定人血浆中辛伐他汀浓度

目的建立测定人血浆中辛伐他汀浓度的方法。方法血浆样品中加入内标,用乙醚提取,浓缩后采用高效液相色谱-质谱联用进行测定。结果血浆样品中辛伐他汀线性范围为0.1～20ng·mL-1(r=0.9999);萃取回收率为94.3%。结论本方法灵敏度高、专属性强、重现性好、准确,可用于辛伐他汀片人体药动学及生物等效性研究。     

HPLC/MS/MS联用技术测定全血中的瑞芬太尼

目的:建立全血中瑞芬太尼的HPLC／MS／MS测定方法,并测定围麻醉期患者体内瑞芬太尼的血药浓度。方法:全血样品中加入枸橼酸芬太尼作内标,用1-氯丁烷进行提取。以乙腈与三氯甲烷(V乙腈:V三氧甲烷= 1:1)混合液加乙酸铵(2 mmol·L-1)为流动相,色谱柱为Intersil ODS-3(50 mm×2．1 mm,3μm),流速0．3 mL·min-1。三级四极杆质谱采用正离子模式,离子采集方式为多反应监测模式(MRM),离子源温度200℃,离子源电离电压为5 000 V,雾化气流速8 L·min-1。采集离子(母离子／子离子)为瑞芬太尼377／228,芬太尼337／188。结果:瑞芬太尼在0．5～50．0 ng·mL-1浓度范围内呈良好的线性(r=0．9994)。日内、日间精密度均在15％以内,提取回收率大于67．3％,方法回收率在95．0％～97．6％。结论:本方法灵敏、准确,适合瑞芬太尼的体内分析。     

LC/MS/MS的多反应监测方法定量测定灯盏乙素

目的：建立一种可靠的灯盏乙素定量分析方法。方法：用三级四极串联质谱(MS/MS)作为HPLC的检测器,其中MS/MS使用了多反应监测(MRM)扫描方式。选择母→子离子对m/z -461→m/z -285作为MRM监测的离子对;HPLC流动相为100％甲醇,流速0.9 mL.min^-1,色谱柱Beckman ODS-1。以测定短葶飞蓬提取物的灯盏乙素含量为例,对此方法进行了应用。结果：灯盏乙素在短葶飞蓬提取物中含量为6.98%。方法线性范围20～160 ng.mL^-1 (γ=0.999);加入灯盏乙素标准品20,60和160 ng的加样回收率分别为：96.5%,97.4%和97.3%。检测限为1 ng,每个样品的分析时间为4 min。结论：此法灵敏、快速、准确,可应用于灯盏乙素的各种药剂、药代的研究。     

System suitability in bioanalytical LC/MS/MS

System suitability is widely recognized as a critical component of bioanalysis. This paper discusses a generic system suitability test that monitors instrument performance throughout a run when used for liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC/MS/MS) in bioanalysis. This system suitability process is designed to ensure that the LC/MS/MS system is performing in a manner that leads to the production of accurate and reproducible data that can be submitted with confidence to regulatory agencies. This process contains tests for signal stability, carryover, and instrument response. This approach is integrated throughout an analytical run and has been used in the analysis of over 25,000 batches of clinical samples. Two case studies are presented in which quality control samples and standards meet all acceptance criteria (based on Standard Operating Procedures and the Food and Drug Administration's recommendations for bioanalytical method validation) but failed the proposed system suitability test, and thus were rejected. In these case studies, the concentrations of a significant number of clinical samples (over 35%) were affected, resulting in changes of more than 15% when the samples were reanalyzed. These data indicate that the poor performance of an LC/MS/MS system could adversely affect the calculated concentrations of unknown samples even though the results for quality control samples appear to be acceptable.     

液相色谱-质谱联用法测定人血浆双氢青蒿素浓度

目的:建立液相色谱-质谱联用法测定健康人血浆中双氢青蒿素浓度的方法。方法:以青蒿素为内标,血浆样品采用液-液萃取法处理。用电喷雾离子化和正离子多离子反应监测方式检测双氢青蒿素。结果:该方法双氢青蒿素线性范围为1.01~2020 ng.ml-1;定量下限为1.001±0.072 ng.ml-1;方法回收率在93.0%~98.2%;批内、批间变异系数均<10%。结论:该方法准确、灵敏、特异、简便,适用于健康人血浆双氢青蒿素浓度的测定。     

氯吡格雷在人血浆浓度的液质联用测定法

目的建立测定人血浆中氯吡格雷(抗心肌及抗脑梗死药)血药浓度的HPLC/MS/MS法。方法血浆样品用叔丁基甲醚提取,内标为噻氯匹定;色谱柱用X-Terra MS C_(18)(2.1 mm×50 mm,5μm),柱温30℃,流动相:乙腈-水(含10 mmol·L~(-1)醋酸铵,调pH为4.0)为70:30,流量为0.3 mL·min~(-1);质谱用ESI离子源,定量分析的离子反应分别为m/z 322→z 212 (氯吡格雷),m/z 264→m/z 154(内标噻氯匹定)。结果氯吡格雷的线性范围为10×10~4～1.2×10~4pg·mL~(-1)(γ=0.9993),日内、日间RSD均小于10%,提取回收率约为80%。结论该方法快速、准确、灵敏度高,可用于氯吡格雷血药浓度测定。     

UPLC(超高效液相色谱)/MS/MS联用技术测定全血中的西罗莫司

目的 建立全血中西罗莫司的UPLC（超高效液相色谱）／MS／MS测定方法,方法 全血样品中加入他克莫司（FK506）作内标，用叔丁基甲醚进行提取。以乙腈与含千分之五甲酸的水溶液为流动相（40：50），色谱柱为AcquityUPLCTMBEHC。（50mm×2．1mm，1．7μm），流速0．5ml／min。三重四极杆质谱采用正离子模式，离子采集方式为多反应监测模式（MRM），离子源温度105℃，离子源电离电压为3300V，雾化气流速500L／h。采集离子（母离子／子离子）西罗莫司为931．2／864．1，FK506为822．0／577．0。结果 西罗莫司在1～240腿／L浓度范围内呈良好的线性（n=0．9995）。日内、日间精密度均在15％以内，提取回收率大于75．0％，方法回收率为95．0％～98．5％，最低检测限为0．2μg／L。结论 本方法灵敏、准确，适合临床西罗莫司的全血分析。     

LC/MS/MS法测定辛伐他汀血浆浓度及其在健康人体内的药物动力学研究

目的:建立人体血浆中辛伐他汀的LC/MS/MS测定方法,并研究辛伐他汀片在男性健康志愿者体内的药物动力学行为,评价其生物利用度和生物等效性。方法:采用两制剂双周期自身对照试验设计。18名男性健康志愿者随机交叉服用单剂量辛伐他汀试验片剂和参比片剂20mg,采用液相色谱-串联质谱(LC/MS/MS)分析方法测定血浆辛伐他汀的浓度。采用DAS2.0程序计算药物动力学参数和相对生物利用度,并进行等效性评价。结果:测定单剂量口服20mg辛伐他汀参比片剂和试验片剂的AUC_((0→24))分别为(14.90±5.86)和(14.37±4.94)ng·h·ml~(-1),AUC_((0→∞))分别为(15.62±6.29)和(14.78±5.02 )ng·h·ml~(-1);C_(max)分别为(4.54±2.11)和(4.00±1.34)ng·ml~(-1);T_(max)分别为(1.75±0.79)和(1.39±0.65)h。以AUC_((0→24))与AUC_((0→∞))计算相对生物利用度分别为(108.0±52.7)%和(106.4±52.5)%。结论:该法准确灵敏,测得的数据可靠,统计分析表明两种制剂生物等效。     

液相色谱-质谱联用法测定人参皂苷Re在健康人血浆的浓度

目的建立液相色谱-质谱联用法测定人参皂苷Re在健康人血浆中浓 度的方法。方法血浆样品用固相萃取法处理。用电喷雾离子化和正离子多 离子反应监测方式检测人参皂苷Re。结果该方法人参皂苷Re线性范围为 1．05～1 050 ng·mL-1;定量下限为1．05 ng·mL-1;方法回收率在99．3％～ 104．3％;日内、日间变异系数(RSD)均<15％。结论该法准确、灵敏、特异, 适用于健康人血浆人参皂苷Re浓度测定。