多指标综合加权评分法优化清胃散提取工艺研究

  目的   采用多指标综合加权评分法结合正交试验优化经典名方清胃散的提取工艺。   方法   以煎煮水量、煎煮时间及煎煮次数为考察因素,高效液相(HPLC)特征图谱相似度、出膏率及主要成分异阿魏酸、阿魏酸、毛蕊花糖苷、盐酸小檗碱和丹皮酚的含量为指标,采用层次分析法(AHP)结合指标相关性权重法(CRITIC)确定各指标的权重,结合正交试验计算综合评分,优化清胃散的煎煮工艺。   结果   确定清胃散的煎煮工艺为:取处方量饮片粗粉共24 g至锅中,加12倍水量,浸泡30 min,大火煮沸后小火煎煮60 min,煎煮两次,浓缩至200 mL,过滤即得。优化煎煮方法后的清胃散出膏率大于39.99%,HPLC特征图谱相似度>0.964,主要成分阿魏酸、异阿魏酸、毛蕊花糖苷、盐酸小檗碱和丹皮酚的平均含量分别为0.061%、0.535%、0.060%、0.261%、0.054%。   结论   特征图谱能较好表现清胃散全方及主要指标成分的信息,经考察后优化的煎煮工艺能更好地反映清胃散的综合煎煮质量,便于医疗机构煎煮操作,为清胃散标准汤剂的物质基础研究提供依据,并为其后续中药配方颗粒剂的开发研究提供实验参考。      

半夏及其炮制品7种主要核苷类成分差异性分析

目的:核苷类成分是半夏的主要药效物质,通过比较半夏及其炮制品中主要核苷类成分含量的差异,为科学评价及有效控制半夏及其炮制品质量提供参考。方法:采用HPLC结合多变量统计分析,对半夏及其炮制品的主要核苷类成分进行含量测定,并筛选出炮制前后的差异性成分。结果:测定结果表明,生半夏中各核苷类化合物含量显著高于炮制品;法半夏中鸟苷、腺苷平均含量显著高于姜半夏(P<0.05),与清半夏各成分平均含量差异不显著;姜半夏和清半夏未见明显区分。主成分分析(PCA)结果显示生半夏及其炮制品可被明显区分;正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)筛选得到生半夏与法半夏的差异性成分为尿苷、胸苷;生半夏与姜半夏的差异性成分为尿苷、鸟苷、腺苷、胸苷;生半夏与清半夏的差异性成分为尿嘧啶、尿苷、鸟苷、腺苷、胸苷;法半夏与姜半夏、法半夏与清半夏的差异性成分均为尿嘧啶、鸟苷、腺苷;姜半夏与清半夏未见明显区分。以上结果表明核苷类成分含量可体现半夏及其炮制品之间的差异。结论:该实验建立的含量测定方法科学、准确、稳定且易于操作,为半夏及其炮制品的质量控制提供了参考依据。     

基于靶标循环放大策略的双色荧光传感体系探索何首乌“九蒸九晒”炮制过程中不同蒸制次数对肾细胞的减毒作用

目的 通过采用所建立的双色荧光传感体系nanoflare测定肾细胞分泌的miR-21和miR-200c表达,观察经“九蒸九晒”炮制后的制首乌对肾细胞的毒性作用。方法 生首乌和不同炮制次数制首乌的水提物与肾细胞孵育后,利用双色荧光传感体系nanoflare对给药前后细胞培养基中的miR-21和miR-200c进行定量检测。结果 通过比较不同炮制次数的何首乌水提物的毒性,发现伴随着炮制次数的增加,双色荧光传感体系的荧光恢复强度在不断减弱,制首乌水提物处理后的细胞培养基中miR-21和miR-200c的表达在不断减少,说明在炮制过程中毒性逐渐减弱,炮制至第9次时毒性明显减弱,对肾细胞未产生明显毒性,表明制首乌水提物对肾细胞的毒性随炮制次数增加在不断降低。结论 生首乌毒性很强,而经炮制后的制首乌毒性逐渐减弱,在炮制次数超过9次后基本无毒,表明通过“九蒸九晒”在细胞水平可以达到减毒的作用,为制首乌炮制工艺与质量标准的完善提供参考。     

HPLC法测定威麦宁胶囊中原花青素B2和表儿茶素的含量

目的:建立威麦宁胶囊中原花青素B2、表儿茶素的HPLC测定方法。方法:采用高效液相色谱法测定原花青素B2、表儿茶素的含量,其标准曲线、精密度、重复性、加样回收率均符合要求。色谱柱:Zorbax SB-C18柱,流动相为乙腈-0.04%磷酸水溶液,梯度洗脱,检测波长为280nm,柱温30℃,流速1.0 mL.min-1,进样量10μL。结果:原花青素B2、表儿茶素的标准曲线分别为A原花青素B2=7047.3C-1066(r=0.9998),A表儿茶素=7321.9C-601.43(r=0.9999),加样回收率分别为93.56%(RSD 4.36%)、99.34%(RSD 4.14%),3个批次威麦宁胶囊中原花青素B2、表儿茶素的平均含量分别为1.44mg/粒、0.96mg/粒。结论:威麦宁胶囊3个批次中2种主要成分的含量相近。该方法简便、准确、重复性好,可为威麦宁胶囊提供质量控制方法。     

曲安奈德离子导入在兔眼房水中的药代动力学研究初探

目的研究曲安奈德(TA)离子导入在兔眼房水中的药代动力学特点,为临床用药提供实验依据。方法以成年新西兰兔为实验动物,TA离子导入兔眼,不同时间点抽取兔眼房水,采用高效液相色谱(HPLC)法测定样本中的药物浓度,用DAS1.0拟合计算药代动力学参数。结果线性范围为0.025～2.000μg/ml,药代动力学参数:t1/2为(2.6±0.4)h,AUC(0~24h)为(1.37±0.16)mg.L-1.h-1,AUC(0-∞)为(1.37±0.21)mg.L-1.h,Cmax为(0.66±0.15)mg/L,Tmax为(0.50±0.17)h。结论建立的房水中TAHPLC测定方法简便、准确、稳定、可靠,适用于TA的药代动力学研究,TA经离子导入吸收快,在房水中药物浓度较高,离子导入比眼球内注射安全性高,为临床改变给药途径提供药代动力学参数。     

雷公藤活性成分对大鼠体内P450酶活性的影响

目的用Cocktail探针药物法,研究雷公藤片对大鼠肝CYP450的影响。方法分别以奥美拉唑和咪达唑仑作为CYP2C19和CYP3A4的探针药,将大鼠随机分为低剂量和高剂量两组,每日早晚灌胃雷公藤片,采用液质联用法测定连续使用雷公藤片前后大鼠血浆中相应的探针药物的浓度及其药代动力学参数。结果连续灌胃10 d后,与用药前比较,奥美拉唑、咪达唑仑的血药浓度及其药代动力学参数有明显改变;低剂量组和高剂量组中咪达唑仑的AUC明显增加,CL/F明显降低,T12增大,Vd/F和Tmax变化不明显,高剂量组中Cmax有所增大;低剂量组中奥美拉唑的T21和Vd/F有所增大,高剂量组中AUC增加(P<0.05)。结论连续灌胃雷公藤片10 d后,雷公藤片对大鼠体内CYP3A4酶具有抑制作用;对CYP2C19酶具有一定的抑制作用。     

基于HPLC指纹图谱结合多元统计分析不同炮制方式对九制女贞子化学成分的影响

目的：探究并比较女贞子在九蒸九晒和九蒸九烘不同干燥工艺过程中的外观性状、浸出物和化学成分的变化。方法：按照《中国药典》方法对女贞子生品及炮制品进行醇溶性浸出物测定,采用高效液相色谱法（HPLC）对其化学成分进行分析比较,并运用聚类分析法（HCA）进行模式识别研究。结果：女贞子在两种干燥方式的炮制过程中醇溶性浸出物均呈现先降低后增加的趋势;建立了生品、炮制品的指纹图谱,共标定26个共有峰,指认8个成分,新增加a、b、c 3个成分;HCA分析可将九蒸九晒和九蒸九烘炮制品归为一类。结论：本研究建立的指纹图谱法能清晰地掌握女贞子九制过程中化学成分的动态变化,结合浸出物和HCA结果分析,表明九蒸九晒和九蒸九烘炮制工艺无显著差异,可考虑用九蒸九烘的现代工艺代替传统的九蒸九晒工艺。     

异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷与牛血清蛋白的结合及分子对接研究

目的： 研究异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷与牛血清蛋白的相互作用。 方法： 采用平衡透析法,高效液相色谱测定异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷与牛血清蛋白的结合率。采用同源建模和分子对接技术分析药物相互作用模式。 结果： 异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷与牛血清蛋白的最佳平衡透析时间为16 h,异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷低、中、高（2,4,8 mg·L^-1）3个质量浓度的牛血清蛋白结合率分别为（43.23±2.23）%,（45.16±3.12）%,（44.71±3.25）%。牛血清白蛋白同源建模和分子对接结果显示：异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷能够与牛血清白蛋白氨基酸残基形成6个氢键。 结论： 异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷与牛血清发生中等强度的结合。     

雷公藤红素对胶原诱导性关节炎小鼠的免疫作用研究

目的研究雷公藤红素对牛Ⅱ型胶原诱导的关节炎小鼠抗炎作用及其对T细胞的作用机制。方法选用DBA/1J小鼠,以牛Ⅱ型胶原诱导建立小鼠关节炎CIA模型。成模后,以雷公藤红素2mg/kg给药治疗并设置对照组,记录小鼠关节评分;二次免疫70d后摘眼球取血处死小鼠,ELISA检测小鼠血浆中IL-17、IL-6、TGF-β水平,HE染色法观察小鼠关节病理变化,流式细胞术检测小鼠脾脏细胞中Th17和Treg比例。结果雷公藤红素组小鼠关节评分显著低于模型组(P0.01);HE染色结果显示,雷公藤红素有效改善关节滑膜炎性浸润情况(P0.05);ELISA检测小鼠血浆结果显示雷公藤红素使Th17相关细胞因子IL-6水平显著降低(P0.01);流式检测结果显示,雷公藤红素可显著降低小鼠脾脏中Th17细胞亚群比例(P0.01)并增加Treg细胞亚群比例(P0.05)。结论雷公藤红素可以有效缓解CIA小鼠关节炎症症状,抑制关节滑膜炎性细胞浸润、血管翳生成和软骨破坏。雷公藤红素治疗CIA小鼠炎症反应可能是通过减少CIA小鼠体内IL-6等促炎症因子的分泌并伴随着抑炎因子参与的免疫平衡调节过程而实现。     

高效液相质谱联用法分析大鼠血浆中异鼠李素-3．0-新橙皮糖苷的浓度及其药代动力学研究

目的：建立LC-MS／MS方法测定异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的浓度并研究其在大鼠体内的药代动力学。方法：8只大鼠分别尾静脉注射异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷5mg·kg^-1。建立并确证高灵敏度的液质联用法分析大鼠血浆中异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的浓度,采用芦丁作为内标。采用甲醇蛋白沉淀法提取血浆中的异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷和芦丁。然后用10mmol·L^-1的乙酸铵／甲醇（20：80,v／v）的流动相在C18色谱柱（150mm×2．1mm,I．D.,5μm）上进行洗脱并采用多反应检测的方式进行质谱分析。结果：异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的在大鼠血浆中的线性范围为0．01-10μg·mL^-1。其定量下限为0.01μg·mL^-1。结论：该方法可以用于测定大鼠血浆中异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的浓度。