GSTθ高表达对肝癌7721细胞的生长及侵袭性的影响

目的探讨增加GSTθ表达水平对人类肝癌7721细胞生长及侵袭能力的影响。方法通过脂质体Lipo-fectAMINE将pcDNA3-GSTθ真核质粒载体转染获得高GSTθ表达水平的7721稳定转染细胞;采用RT-PCR检测GSTθmRNA的表达水平;采用细胞记数法测定细胞的生长;采用Boyden小室方法观察细胞侵袭能力的改变。结果 GSTθ高水平表达对7721细胞的生长无明显影响,但使7721细胞的侵袭能力下降。结论本实验证实了在7721细胞中,GSTθ高水平表达可以降低细胞的侵袭能力。     

谷胱甘肽S转移酶π高水平表达抑制人类宫颈癌HeLa细胞的生长、转移和浸润

目的研究胎盘型谷胱甘肽S转移酶π（GSTπ）在宫颈癌细胞中的高表达对其生物学特性的影响。方法通过脂质体介导转染,在人类宫颈癌HeLa细胞建立GSTπ基因高表达稳定转染株;采用细胞计数和MTT法测定细胞的生长;采用划痕法和Boyden小室法检查细胞的转移、浸润能力;采用RT-PCR和Western blot技术检测宫颈癌细胞中相关mRNA和蛋白的表达水平。结果成功构建了GSTπ高表达和空质粒转染的HeLa细胞株;GSTπ基因高表达明显地抑制HeLa细胞的生长、转移和浸润。结论GSTπ可以明显抑制HeLa细胞的生长、转移和浸润,为GSTπ作为一种新的抑癌基因提供了临床前实验数据和依据。     

GSTθ转染对HCT116细胞系的影响

目的观察转染了GSTθ后HCT116细胞系的生长、细胞周期的变化,以及HCT116细胞系生长对血清浓度的依赖性。方法通过脂质体Lipofectamine将质粒载体pcDNA3及pcDNA3-GSTθ分别转染HCT116细胞获得稳定转染株,通过RT-PCR检测GSTθ的表达,细胞计数绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期变化,MTT法检测细胞生长对血清浓度的依赖。结果GSTθ转染后抑制了HCT116细胞的生长,并且是通过G2/M和S期阻滞而导致的,GSTθ还增加了HCT116细胞对血清的依赖性。结论GSTθ可降低HCT116细胞的恶性程度,使其对血清及营养物质的需求增加。     

核仁素表达下调对宫颈癌细胞Hela生物学行为的影响

目的 探讨核仁素表达下调对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡、侵袭等生物学行为的影响。方法 实验分4组：3个靶向人核仁素基因的实验组(siN1组、siN2组、siN3组)及1个阴性对照组(NC组)。体外化学合成各组siRNA并转染HeLa细胞;利用荧光实时定量RT-PCR法和Western blotting法分别从mRNA和蛋白水平检测核仁素基因的干扰效率,并筛选出干扰效率最高的片段;利用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测核仁素下调对HeLa细胞增殖活性的影响;利用流式细胞学Annexin V-FITC检测转染后HeLa细胞凋亡率的改变;Transwell实验检测转染后细胞侵袭能力的改变。结果 与NC组相比,各实验组核仁素mRNA表达水平均下降(P<0.05);蛋白表达水平也相应下调(P<0.05)。成功筛选出最佳干扰片段siN2,用于后续实验。siN2组HeLa细胞生长速率明显受到抑制(P<0.05);流式细胞学Annexin V-FITC检测siN2组HeLa细胞凋亡率明显高于NC组(P<0.05);Transwell实验显示siN2组HeLa细胞侵袭能力减弱(P<0.05)。结论 核仁素表达下调明显抑制宫颈癌Hela细胞增殖与侵袭能力,促进细胞凋亡,为宫颈癌的基因治疗提供了理论依据。     

番茄红素对宫颈癌HeLa细胞侵袭转移及基质金属蛋白酶-2基因表达的影响

目的研究不同浓度番茄红素对人宫颈癌HeLa细胞体外增值及侵袭作用的影响,并初步探讨其作用机制。方法不同浓度的番茄红素作用于人宫颈癌HeLa细胞,应用MTT法来检测番茄红素对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响;体外侵袭实验（transwell小室）检测番茄红素对HeLa细胞侵袭转移能力的影响;逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测番茄红素对HeLa细胞基质金属蛋白酶-2（MMP-2）基因mRNA表达的影响。结果随着番茄红素浓度的增加,穿过膜的细胞数较空白对照组明显减少,番茄红素能明显降低MMP-2基因mRNA的表达。结论番茄红素对HeLa细胞的生长具有抑制作用,可有效抑制宫颈癌侵袭和转移,其作用机制可能与降低宫颈癌细胞运动能力、抑制MMP-2的表达水平有关。     

RNAi沉默Furin基因对人宫颈癌HeLa细胞增殖和转移的影响

目的研究Furin基因沉默对宫颈癌HeLa细胞株生长转移的影响。方法脂质体法将质粒Furin siRNA转染人宫颈癌HeLa细胞。MTT法检测细胞的增殖情况,Boyden细胞迁移和侵袭实验观察HeLa细胞的迁移和侵袭能力。Western blot检测Furin及产物MT1-MMP蛋白量的变化,ELISA法检测细胞上清中MMP2的浓度。结果细胞增殖实验中Furin siRNA处理后48h的HeLa细胞与空质粒转染组相比体外生长抑制38.6%,差异有统计学意义(P<0.01);细胞迁移和侵袭实验中,Furin siRNA处理后,HeLa细胞穿过滤膜和基质胶的细胞数量均明显少于空质粒转染(P<0.05);它可显著降低MT1-MMP蛋白表达及MMP2的分泌。结论 Furin siRNA可有效抑制人宫颈癌HeLa细胞的生长及肿瘤细胞转移,机制可能与降低Furin产物MT1-MMP的表达及MMP2合成有关。     

p38δ对宫颈癌HeLa细胞顺铂敏感性的影响

【摘要】 目的 探讨p38δ对HeLa细胞顺铂敏感性的影响。方法 采用细胞转染方法在HeLa细胞中过表达p38δ蛋白;采用Annexin V FITC/PI双染色检测细胞凋亡水平;采用蛋白质印迹法检测蛋白表达水平;采用免疫沉淀法纯化p38δ蛋白,并采用蛋白质印迹法检测其磷酸化水平。结果 与转染对照质粒HeLa细胞相比,转染p38δ表达质粒HeLa细胞在正常培养条件下和顺铂处理条件下的细胞凋亡水平都显著上升（P均＜001）。在顺铂处理条件下,与转染对照质粒HeLa细胞相比,转染p38δ表达质粒HeLa细胞Bcl 2蛋白表达水平下降,Bax和p53蛋白表达水平上升（P均＜001）。顺铂处理HeLa细胞中p38δ磷酸化水平显著上升（P＜001）。与转染野生型p38δ（WT）HeLa细胞相比,转染激酶失活突变体p38δ（K54R）HeLa细胞在正常培养条件下和顺铂处理条件下的细胞凋亡水平都显著下降（P均＜001）。结论 p38δ促进HeLa细胞凋亡并增强其对顺铂的敏感性,且p38δ对HeLa细胞凋亡的调控依赖于其蛋白激酶活性。     

Snail对宫颈癌细胞侵袭转移的影响

目的研究Snail与宫颈癌侵袭转移间的关系,并探讨其分子机制。方法构建正义全长Snail真核表达载体并转染宫颈癌细胞系HeLa、SiHa。采用Western blot方法分析相关基因表达,细胞伤痕愈合实验,Trans well模型穿膜细胞计数检测细胞侵袭转移能力。结果①在转染pEGFPC1/Snail的宫颈癌细胞株HeLa、SiHa中E-cadherin表达明显下调,Snail和Vimentin则表达上调（P〈0.05）。②宫颈癌细胞系HeLa、SiHa转染正义全长Snail真核表达载体,12h细胞伤痕愈合能力显著提高（P〈0.05）;转染pEGFPC1/Snail后,HeLa、SiHa细胞12h穿膜细胞数明显增多（P〈0.05）。Snail过表达可显著促进宫颈癌细胞株HeLa、SiHa的侵袭转移潜能。结论转录因子Snail促进宫颈癌上皮细胞间质化转变（EMT）,并提高其侵袭转移能力。     

TALENs介导的Nanog基因表达下调对宫颈癌HeLa 细胞恶性行为的影响

目的 研究Nanog表达下调对宫颈癌HeLa 细胞恶性行为的影响。方法 通过基因编辑工具转录激活样效应器核酸酶（TALENs）介导Nanog 下调表达,基因测序分析Nanog的突变情况;挑取单个细胞培养以筛选出Nanog明显下调表达的单克隆HeLa细胞;RT-PCR 检测mRNA 表达水平;Western blot 检测蛋白表达水平;HeLa细胞的集落形成能力、侵袭性及耐药性分别通过集落形成实验、 Transwell 侵袭实验及药物敏感性实验检测。 结果 TALENs成功介导Nanog 基因突变并导致其下调表达,Nanog突变的单克隆HeLa细胞Nanog mRNA和蛋白表达水平较野生型HeLa细胞均下调表达（P<0.05）。Nanog突变单克隆HeLa细胞相对于野生型HeLa细胞表现出明显减弱的侵袭、集落形成及化疗药物抵抗能力（P<0.05）。 结论 Nanog突变减弱HeLa 细胞的恶性行为,下调或沉默Nanog表达有望成为一种新型的治疗宫颈癌策略。     

MTA1通过β-catenin、MMP-9调节HeLa细胞粘附、侵袭、转移

目的观察转染转移相关基因1(metastasis-associated 1,MTA1)基因对人宫颈癌细胞HeLa迁移、侵袭、粘附能力以及β-catenin、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法 Western blot法检测HeLa、SiHa细胞中MTA1表达;以脂质体LipofectamineTM2000介导的方法将含MTA1全长基因的质粒pEGFP-C1-MTA1转染HeLa细胞,Western blot法检测目的基因表达;划痕、侵袭、粘附试验分别检测HeLa细胞迁移、侵袭、粘附能力变化;Western blot法检测β-catenin、MMP-9表达变化。结果与SiHa细胞相比,MTA1在HeLa细胞中表达较低(P<0.05);MTA1质粒转染的HeLa细胞中,MTA1表达、划痕愈合、Matrigel侵袭、Matrigel粘附能力均明显高于未转染及转染空载体对照组(均P<0.05);β-catenin、MMP-9表达在转染后均上调(均P<0.05)。结论 MTA1基因过表达可促进HeLa细胞转移、侵袭和粘附,上调β-catenin、MMP-9表达,MTA1基因可能成为肿瘤治疗靶点。     

姜黄素通过降低一氧化氮合酶水平抑制宫颈癌HeLa细胞的侵袭和转移

目的探讨姜黄素抗宫颈癌HeLa细胞侵袭转移的作用及其可能机制。方法分别以0、10、25、50、100、150和200 μmol/L浓
度的姜黄素干预宫颈癌HeLa细胞。24 h后,采用MTT法观察其对HeLa细胞增殖的抑制作用,TUNEL法染色观察其对HeLa
细胞凋亡的诱导作用。应用Transwell小室检测姜黄素对HeLa细胞侵袭转移能力的抑制作用,Western-blot检测其对金属基质
蛋白酶-9（MMP-9）以及E-钙粘素（E-cad）表达水平的影响。通过RT-PCR及Western-blot 检测姜黄素对诱生型一氧化氮合酶
（iNOS）表达水平的影响;采用Griess法观察姜黄素对HeLa细胞生成一氧化氮（NO）能力的影响。结果姜黄素可通过诱导凋亡
抑制HeLa细胞的增殖,且呈现浓度依赖性;姜黄素可显著降低HeLa细胞的侵袭能力并能够降低MMP-9的表达水平,同时升高
E-cad的表达水平;姜黄素可显著降低HeLa细胞内iNOS的表达水平,并降低NO的合成。结论姜黄素可能通过降低iNOS的表
达水平抑制HeLa细胞的侵袭、转移能力。
     

组织因子对人类大肠癌培养细胞侵袭能力的影响

目的：分析组织因子表达对人类大肠癌细胞(HT—29细胞)体外侵袭能力的影响。方法：利用构建有正义／反义组织因子cDNA(TF cDNA)的真核表达载体pcDNA3．1／Zeo，以脂质体法转染HT—29细胞，经验证转染成功的HT—29细胞采用Western印迹分析检测组织因子的蛋白表达水平并进行基质胶(Matrigel)侵袭实验观察细胞体外侵袭能力的变化。结果：转染了正义TFcDNA的HT—29细胞的组织因子表达水平及侵袭能力较未转染的HT—29细胞升高；转染了反义TFcDNA的HT—29细胞的组织因子表达水平及侵袭能力较未转染的HT—29细胞相比降低。结论：组织因子可以增加人类大肠癌细胞的体外侵袭能力。     

Rab26诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡并抑制其迁移

目的 研究调控Rab26蛋白表达对宫颈癌HeLa细胞凋亡及迁移的影响.方法 常规培养HeLa细胞,分别将含有Rab26 cDNA全长的真核表达载体(过表达组)、含有Rab26 siRNA序列的真核表达载体(siRNA组)瞬时转染HeLa细胞,同时设立正常细胞组及空载体转染组作为对照.转染48 h后,分别用RT-PCR和Westem blot检测各组细胞中Rab26的mRNA及蛋白表达水平;采用流式细胞仪(FCM)检测各组细胞的凋亡率;同时采用划痕实验检测各组细胞迁移速度.结果 与正常细胞组及空载体转染组相比,过表达组HeLa细胞中Rab26 mRNA及蛋白表达水平显著上调(P＜0.05),而siRNA组细胞中Rab26 mRNA及蛋白表达水平显著下调(P＜0.05),过表达组HeLa细胞凋亡率增高并抑制细胞迁移速度(P＜0.01),siRNA组则促进细胞迁移(P＜0.05).结论 Rab26与HeLa细胞的凋亡及细胞迁移有关,故调控Rab26的表达有望成为治疗宫颈癌的新靶点.     

siRNA-ΔNp63干扰质粒在体外对HeLa细胞迁移和侵袭能力的影响

目的研究siRNA-ΔNp63干扰质粒在体外对宫颈癌HeLa细胞迁移、侵袭能力的影响。方法在体外利用siRNA-ΔNp63干扰质粒转染HeLa细胞,将实验分为空白对照组、空载体组、阴性质粒组和干扰质粒组;采用Real-time PCR、Western blot检测各实验组细胞中ΔNp63的mRNA、蛋白的表达;通过Transwell侵袭实验、同质黏附实验和异质黏附实验来检测各组细胞的侵袭能力和细胞迁移能力。结果成功将siRNA-ΔNp63干扰质粒转入HeLa细胞;与空白对照组比较,阴性质粒组及空载体组中ΔNp63的mRNA、蛋白的表达水平无明显变化（P〉0.05）,siRNA-ΔNp63质粒组中ΔNp63的mRNA、蛋白的表达水平表现为降低（P〈0.05）;空载体组和阴性质粒组平均细胞穿膜数、同质黏附性和异质黏附性无明显变化（P〉0.05）;而干扰质粒组中平均细胞穿膜数明显降低（P〈0.05）,同质黏附性增加（P〈0.05）,异质黏附性明显下降（P〈0.05）。结论 siRNA-ΔNp63能明显降低HeLa细胞的迁移和侵袭能力。     

hTERT siRNA表达载体的构建及对转染的HeLa细胞生长抑制作用

目的:通过RNA干涉技术抑制肿瘤细胞端粒酶表达,探讨干涉后对肿瘤细胞生长的抑制作用. 方法:根据人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA编码序列,设计RNA干涉靶点,构建siRNA(small interferencing RNA)表达载体,并转染HeLa细胞,通过RT-PCR法观察重组质粒转染肿瘤细胞后端粒酶mRNA、蛋白含量及细胞生长情况. 结果:构建的siRNA表达载体可以使HeLa细胞端粒酶逆转录酶mRNA及其蛋白含量降低,转染质粒的细胞生长增殖速度减慢. 结论:成功构建了针对人端粒酶逆转录酶的siRNA表达载体,通过转染HeLa细胞,可有效抑制细胞中端粒酶的表达,并引起细胞生长抑制.     

linc00152通过调控DNMT3A和DNMT3B促进人宫颈癌细胞生长与侵袭

探讨linc00152在宫颈癌中的生物学功能及其调控机制。运用qRT-PCR检测人宫颈癌细胞与正常宫颈上皮细胞中linc00152的表达;转染sh-linc00152、si-DNMT3A和si-DNMT3B于HeLa细胞以敲低细胞中linc00152、DNMT3A和DNMT3B的表达水平,采用qRT-PCR与Western blot法检测转染效率;采用Western blot法检测sh-linc00152对甲基化转移酶(DNMT)3A和3B蛋白表达水平的影响;采用MTT、Transwell侵袭实验检测sh-linc00152、si-DNMT3A以及si-DNMT3B对人宫颈癌HeLa细胞增殖与侵袭的影响。结果显示,linc00152在宫颈癌细胞中的表达水平明显高于正常宫颈上皮细胞(P<0.01);在HeLa细胞中,sh-linc00152组DNMT3A和DNMT3B蛋白表达水平明显低于sh-control组;sh-linc00152组、si-DNMT3A以及si-DNMT3B组HeLa细胞的存活率及穿过基质胶的HeLa细胞数量均明显低于各自对照组。linc00152可能通过调控DNMT3A和DNMT3B信号通路促进人宫颈癌细胞生长与侵袭。     

溶酶体组织蛋白酶L对人宫颈癌细胞HeLa迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨溶酶体组织蛋白酶L(Cathepsin L)是否通过上皮-间充质转化(EMT)影响宫颈癌细胞的侵袭及迁移能力.方法 利用荧光定量PCR来检测人宫颈癌细胞HeLa、CaSki以及HeLa229中Cathepsin L的表达水平;设计并合成靶向Cathepsin L的特异性shRNA,通过脂质体转染法转染Cathepsin L表达最高的宫颈癌细胞HeLa以构建稳定低表达Cathepsin L细胞株,通过Western blot和定量PCR来验证shRNA的干扰效率,拟将Cathepsin L-shRNA和空白对照载体转染HeLa细胞,并将构建好的稳定细胞株命名为HeLa/shRNA,空白组和对照组分别为HeLa和HeLa/Con.通过Transwell法检测干扰后细胞的迁移及侵袭能力,Western blot法检测EMT相关指标E-cadherin和N-cadherin以及其上游信号分子Snail、WNT-5a的变化.结果 Cathepsin L-shRNA转染后,能够有效抑制HeLa细胞中Cathepsin L的表达;Transwell法检测结果显示,Cathepsin L干扰组细胞侵袭及迁移能力显著低于阴性对照组(P ＜0.001).Western blot法检测结果发现,Cathepsin L干扰组细胞的E-cadherin表达增加,N-cadherin的表达降低;此外,Cathepsin L干扰组细胞的Snail、WNT-5a表达较对照组显著下降.结论 运用RNA干扰技术能够有效沉默HeLa细胞的Cathepsin L基因,并诱导其迁移侵袭能力的下降,其可能的机制是通过调节EMT的上游信号分子Snail、WNT-5a的表达来调控EMT,从而影响宫颈癌细胞的迁移及侵袭.提示Cathepsin L在宫颈癌的发生发展中起重要作用,抑制Cathepsin L的表达可能成为一种治疗宫颈癌的新方法.     

Twist shRNA对人宫颈癌细胞体外黏附、铺展及迁移能力的影响

目的通过RNA干扰抑制Twist基因在人宫颈癌HeLa细胞中的表达,观察Twist基因沉默对HeLa细胞体外黏附、铺展及迁移能力的影响。方法根据shRNA设计原则,构建两种靶向Twist基因的短发夹RNA（shRNA）干扰质粒,稳定转染HeLa细胞。通过荧光定量PCR及Western印迹法检测HeLa细胞中Twist基因mRNA和蛋白的表达水平,利用黏附实验、铺展实验和划痕实验检测其对细胞黏附力和迁移力的影响。结果成功构建的Twist shRNA真核表达载体稳定转染HeLa细胞后可显著降低Twist基因的表达。与对照组相比,Twist基因沉默组细胞的黏附、铺展及迁移能力明显下降（P〈0.05）。结论成功构建的Twist shRNA真核表达载体,能有效抑制HeLa细胞黏附、铺展及迁移能力。     

p38δ在宫颈癌细胞中的表达及其对缺氧HeLa细胞凋亡的影响

目的探讨p38δ在宫颈癌组织细胞和HeLa细胞系中蛋白表达水平及p38δ对缺氧诱导HeLa细胞凋亡的影响。方法采用蛋白印迹法检测组织及细胞蛋白表达水平。采用慢病毒转染及细胞耐药性筛选构建稳定表达p38δ HeLa细胞株。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染色法检测细胞凋亡水平。结果宫颈癌细胞系HeLa 细胞中p38δ蛋白表达水平低于非癌性细胞系人胚肾293 细胞及小鼠胚胎纤维细胞，差异有统计学意义（P <0.05）；宫颈癌组织细胞中p38δ蛋白表达水平低于正常宫颈组织细胞，差异有统计学意义（P <0.05）；p38δ 过表达提高缺氧条件下HeLa细胞凋亡水平，差异有统计学意义（P <0.05）；p38δ 过表达促进缺氧条件下HeLa 细胞中凋亡相关因子Bcl-2 蛋白表达水平下调及Bax、p53 蛋白表达水平上调，差异有统计学意义（P <0.05）。结论在宫颈癌组织细胞和宫颈癌HeLa 细胞中，p38δ的蛋白表达水平降低。HeLa细胞中高表达p38δ 促进缺氧细胞凋亡。     

针对VEGF的shRNA对宫颈癌细胞株细胞生物学行为的影响

目的用VEGF-shRNA真核表达载体干预体外培养的宫颈癌细胞（Hela）的一系列生物学行为,探讨这些干预的作用机制。方法设计合成VEGFshRNA,体外脂质体介导转染宫颈癌Hela细胞株,RT-QPCR转染前后VEGF的表达变化。MTT法检测转染前后细胞的生长速度,体外侵袭实验及体外迁移实验比较细胞侵袭、迁移能力变化。结果 VEGFshRNA明显下调VEGF基因的表达。VEGF表达下调后,Hela细胞生长出现明显的抑制,体外侵袭能力、迁移能力显著降低。结论 VEGFshRNA明显地抑制了Hela细胞的生长、体外侵袭和迁移运动。