CD40L对单纯疱疹病毒2型DNA疫苗的免疫增强作用研究

目的 研究重组质粒pcDNA3-Kan/CD40L辅佐HSV-2 DNA疫苗增强小鼠体液免疫和细胞免疫的作用效果,探讨其作为HSV-2 DNA疫苗佐剂的潜力。 方法 (1)构建鼠CD40L基因的重组真核表达质粒pcDNA3-Kan/CD40L。(2)体外细胞实验:检测重组质粒pCD40L刺激小鼠外周血淋巴细胞增殖情况和脾细胞分泌IFN-γ的能力。(3)体内动物实验:48只雌性BALB/c小鼠随机分为4个免疫组pK组、pgD组、pcCD40L+pgD组和pK+pgD组。小鼠后腿肌内注射,共免疫2次,间隔3周。末次免疫3周后,每组随机取4只小鼠进行致死剂量攻毒实验验证疫苗的保护作用。 ELISA检测小鼠血清抗HSV-2 IgG抗体水平和趋化因子RANTES;流式细胞术检测全血中CD4⁺和CD8⁺T细胞百分率以及分泌IFN-γ和IL-4的T细胞的百分率;MTS法检测小鼠脾脏T细胞的增殖能力。 结果 (1)体外实验结果:重组质粒pcDNA3-Kan/CD40L对小鼠外周血淋巴细胞的增殖能力和刺激脾细胞分泌IFN-γ的能力均显著大于空质粒pcDNA3-Kan(P<0.05)。(2)体内实验结果:小鼠血清抗HSV-2 IgG水平、趋化因子RANTES、脾淋巴细胞刺激指数和外周血CD4⁺T细胞数和分泌IFN-γ的Th1细胞数均高于其他免疫组(P<0.05)。pcDNA3-Kan/CD40L+pgD组预防小鼠感染HSV-2效果好于其他免疫组。 结论 (1)重组质粒pcDNA3-Kan/CD40L能够诱导外周血淋巴细胞增殖并刺激脾细胞分泌IFN-γ具有作为疫苗佐剂的潜力。(2)pcDNA3-Kan/CD40L可以辅助HSV-2 DNA疫苗诱导BALB/c小鼠产生特异性抗HSV-2的体液免疫和细胞免疫,具备作为HSV-2 DNA疫苗免疫佐剂的能力。     

载铜绿假单胞菌DNA疫苗温敏水凝胶系统的构建及体内评价

构建载铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA） DNA疫苗的PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶系统,评价该系统的体内免疫效力。通过简单物理混合法制备PA DNA疫苗的PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶,测量其胶凝温度;评价其体外毒性、体外累计释放率;通过凝胶体积变化评价水凝胶的体内降解;将小鼠分为对照组（PBS）、水凝胶组（Hydrogel）、in vivo-jetPEI/质粒DNA组（in vivo-jetPEI/pDNA）、水凝胶+in vivo-jetPEI/质粒DNA组（Gel+in vivo-jetPEI/pDNA）,免疫3次,每次间隔10 d,末次免疫2周后处死小鼠,检测血清特异性IgG抗体、脾淋巴细胞增殖情况及细胞上清液中IFN-γ水平。结果显示,PLGA-PEG-PLGA水凝胶具有温敏性,相变温度为（32 ± 0.5） ℃;体外对DC 2.4细胞无明显毒性;体外释放7 d时约释放80%的质粒DNA;PLGA-PEG-PLGA在体内具有可降解性,大约15 d几乎完全降解;体内免疫实验表明in vivo-jetPEI/pDNA及Gel+in vivo-jetPEI/pDNA组小鼠脾淋巴细胞明显增殖、特异性IgG抗体及IFN-γ水平升高,且水凝胶可增强DNA疫苗诱导的免疫反应水平。结果表明,载PA DNA疫苗的温敏水凝胶系统是研发PA疫苗有前景的一种新策略。     

沙眼衣原体多表位疫苗的构建及其抗感染保护作用

目的构建沙眼衣原体(Ct)多形态膜蛋白D(PmpD)与衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)多表位疫苗,并通过动物实验评价其抗感染保护作用。 方法利用生物信息学分析PmpD和CPAF的二级结构、抗原性、T细胞表位和B细胞表位;构建基于PmpD和CPAF多表位的重组蛋白RPC、原核表达、纯化RPC蛋白。免疫雌性BABL/c小鼠,ELISA检测小鼠血清IgG、IgG2a/IgG1及脾细胞上清细胞因子水平,CCK-8检测脾细胞增殖;Cm攻毒后,检测生殖道Cm载量以评估多表位融合疫苗RPC的抗感染保护作用。 结果成功构建多表位融合蛋白RPC。与PBS组相比,RPC组IgG抗体水平、IgG2a/IgG1比值、脾细胞刺激指数、γ干扰素、白细胞介素-2水平均明显升高(P＜0.05);攻毒后RPC组可加快清除小鼠生殖道衣原体。 结论基于PmpD与CPAF的多表位融合蛋白RPC免疫小鼠,能诱导细胞免疫和体液免疫应答,有效降低衣原体载量,具有一定的抗感染保护作用。     

纳米SiO2及磁性γ-Fe2O3@SiO2对Hg2+的吸附及去除

首先用微乳法合成了纳米SiO₂和纳米γ-Fe₂O₃,然后利用传统的St ber方法合成出核壳结构的γ-Fe₂O₃@SiO₂,并利用X射线衍射仪（XRD）、透射电子显微镜（TEM）、振动样品磁强计（VSM）对其进行了表征。采用双硫腙光度法在551 nm处,测定了Hg²⁺在纳米SiO₂、纳米γ-Fe₂O₃和γ-Fe₂O₃@SiO₂表面的吸附等温线,发现三者的吸附等温线类型依次为Ⅱ、Ⅲ和Ⅰ型,等温线类型与纳米材料的分散性、表面硅羟基、离子空位以及磁性有关。利用双吸附等温线法、准一级和准二级动力学模型对吸附数据进行拟合得出：纳米SiO₂和γ-Fe₂O₃@SiO₂对Hg²⁺的吸附符合Langmuir等温式,而纳米γ-Fe₂O₃对Hg²⁺的吸附符合Freundlich等温式。三者对Hg²⁺的去除率均与pH有关,均属于准二级动力学模型。     

重组HSP65-6P277乳酸乳球菌疫苗对链脲佐菌素诱导的1型糖尿病小鼠的降糖作用

探讨表达HSP65-6P277蛋白的乳酸乳球菌活载体疫苗对链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病小鼠的降糖作用及可能的作用机制。采用多次小剂量腹腔注射STZ建立1型糖尿病模型。将诱导型表达菌株Lactococcus lactis NZ9000 pCYT∶HSP65-6P277和组成型表达菌株L.lactis NZ9000 pHJ∶HSP65-6P277及无关蛋白对照菌株L.lactis NZ9000 pCYT∶Nuc灌胃1型糖尿病小鼠(2×10⁹CFU,200 μL),每天灌胃1次,连续7 d,之后每周灌胃1次,持续16周。每月从小鼠眼眶静脉丛取血1次,血糖检测仪检测STZ造模小鼠血糖水平并称体重。4个月后将小鼠处死,取小鼠脾脏做脾细胞增殖实验,采用ELISA试剂盒分别检测脾细胞上清液中的IL-10和IFN-γ细胞因子水平以及血清IgG抗体水平。结果显示,与对照组相比,pCYT∶HSP65-6P277组和pHJ∶HSP65-6P277组可以一定程度上降低STZ造模小鼠血糖水平(P<0.05),并能维持其正常体重稳定,降低脾细胞针对HSP65和P277的增殖(P<0.05),脾细胞上清液中IFN-γ细胞因子水平明显降低(P<0.05),血清IgG抗体水平无明显差异(P >0.05)。     

重组梅毒螺旋体黏附素在小鼠模型中的免疫原性及免疫保护性研究

目的观察重组梅毒螺旋体(Tp)黏附素Tp0751(rTp0751)、Tp0136氨基端(rTp0136N)、Tp0435(rTp0435)诱生C57BL/6小鼠适应性免疫应答水平及免疫后抑制Tp在小鼠体内播散情况,为筛选梅毒疫苗候选分子提供依据。方法表达和纯化重组蛋白rTp0751、rTp0136N和rTp0435。将C57BL/6小鼠随机分为PBS对照组、rTp0751组、rTp0136N组、rTp0435组,分别以PBS、rTp0751、rTp0136N及rTp0435免疫各组小鼠3次；ELISA检测各组小鼠免疫血清特异性IgG抗体水平；流式细胞术(FCM)检测末次免疫后2周小鼠脾细胞胞内白细胞介素-4(IL-4)与干扰素-γ(IFN-γ)含量；实时荧光定量PCR(qPCR)检测Tp攻击6周后小鼠心、脾、脑组织中Tp的DNA载量。结果各免疫组小鼠血清特异性IgG抗体随免疫时间增加而逐渐升高并于首次免疫第6周达到峰值。FCM检测结果显示各免疫组淋巴细胞胞内CD4＋IFN-γ＋与CD8＋ IFN-γ＋含量均高于PBS对照组(P＜0.01),CD4＋T细胞产生IL-4水平均极低。qPCR检测结果显示,在脾脏、心脏和脑组织中,rTp0751与rTp0136N组Tp-DNA载量均低于PBS对照组(P＜0.05),rTp0435组与PBS对照组之间无明显差异。结论rTp0751、rTp0136N、rTp0435均具有良好的免疫原性,Tp0751、Tp0136N有望为梅毒候选疫苗分子。     

Chi-CpG NP的制备及其对rNMB0315蛋白的免疫效果

目的制备黏膜免疫佐剂Chi-CpG NP,并检测其对重组B群脑膜炎奈瑟菌0315蛋白(rNMB0315)的免疫效果。 方法用壳聚糖纳米颗粒(Chi NP)包裹免疫刺激分子(CpG-ODN)合成Chi-CpG NP,随后检测其理化性质和安全性。将不同黏膜免疫佐剂与rNMB0315充分混合、吸附,滴鼻免疫雌性BALB/c小鼠,检测PBS组、rNMB0315组、rNMB0315+CpG组、rNMB0315+Chi NP组、rNMB0315+Chi-CpG NP组小鼠免疫42天后的体液免疫(IgG、IgG1、IgG2a、sIgA)、细胞免疫水平[白细胞介素(IL)-4、γ干扰素(IFN-γ)、IL-17A]、免疫保护效果以及血清体外杀菌活性。 结果成功制备的Chi-CpG NP呈球形,大小均一,有较好的吸附性能和良好的安全性。小鼠免疫42天后,体液免疫和细胞免疫水平rNMB0315+Chi-NP组、rNMB0315+Chi-CpG NP组高于rNMB0315组(P＜0.05)；rNMB0315+Chi-CpG NP组高于rNMB0315+CpG组和rNMB0315+Chi-NP组(P＜0.05)。致死剂量B群脑膜炎奈瑟菌攻击各组小鼠后,rNMB0315+Chi-CpG NP组小鼠存活率最高；血清体外杀菌抗体滴度为1∶4。 结论成功制备了Chi-CpG NP。Chi-CpG NP能增强rNMB0315蛋白的免疫效果,提高小鼠的存活率。     

磁共振定量成像测量肝脏R2值一致性研究

目的 探讨IDEAL-IQ序列与T*_2map序列定量测量肝脏R*₂值的一致性。方法 选取2022年1~8月临床需要进行3.0T腹部磁共振检查的29例患者的磁共振资料进行研究。所有被检查者在常规腹部检查序列的基础上加扫最短TE时间为0.9ms和1.2ms的两组T*_2map序列,常规腹部检查序列中包括IDEAL-IQ序列,在3组序列的R*₂图像上测量肝脏的R*₂值。3组序列得到的R*₂值的两两比较采用配对t检验,R*₂值的一致性采用Pearson相关分析。结果 IDEAL-IQ序列、TE时间为0.9ms和1.2ms的T*_2map序列得到的R*₂值分别为52.65±19.47Hz、62.89±23.76Hz和68.14±24.05Hz,两两比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。3组图像得到的R*₂值两两之间呈正相关。结论 IDEAL-IQ序列和T*_2map序列均可用于肝脏R*₂的定量诊断;在存在脂肪肝的患者中推荐使用IDEAL-IQ序列进行肝脏R*₂值的测量。     

还原型谷胱甘肽联合个体化抗结核化疗方案治疗耐多药肺结核的疗效观察

目的探讨还原型谷胱甘肽联合个体化抗结核化疗方案治疗耐多药肺结核(MDR-PTB)的疗效。 方法选取80例MDR-PTB患者,随机均分为化疗组(抗结核化疗)和联合组(抗结核化疗+还原型谷胱甘肽)。比较两组疗效、肝功能指标、CD4＋/CD8＋、CD4＋CD25＋、CD4＋PD-1＋、CD8＋CD28－、CD8＋PD-1＋比值、血清C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)和γ干扰素(IFN-γ)等。 结果治疗后,两组治疗总有效率比较差异无显著性(P＞0.05)。治疗后,联合组血清白蛋白水平高于化疗组,总胆红素、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、高密度脂蛋白胆固醇水平均低于化疗组(P＜0.05)。与治疗前比较,两组治疗后CD4＋/CD8＋比值、IFN-γ升高,CD4＋CD25＋、CD4＋PD-1＋、CD8＋CD28－、CD8＋PD-1＋比值、CRP、IL-6降低；且治疗后联合组较化疗组变化更显著(P＜0.05)。 结论还原型谷胱甘肽联合个体化抗结核化疗方案治疗耐多药肺结核有效,且可解除患者免疫耐受,抑制炎症反应,规避化疗后肝损伤,可在临床上应用和推广。     

铁死亡参与无机砷致人肝星状细胞活化的研究

目的 研究亚砷酸钠(NaAsO₂)对人肝星状细胞(LX-2)铁死亡的影响。方法 体外培养LX-2细胞,采用成组设计将不同浓度NaAsO₂(5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L)染毒LX-2细胞24h,构建体外NaAsO₂致LX-2活化模型,同时设立对照组;透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察NaAsO₂处理LX-2细胞线粒体结构变化情况;荧光显微镜和荧光酶标仪检测细胞Fe²⁺水平;比色法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;蛋白免疫印迹法检测溶质载体家族7号成员11(solute carrier family number 7member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶 4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平。结果 TEM结果显示,NaAsO₂组细胞线粒体膜完整性破损,线粒体嵴减少和消失;此外,与对照组比较,NaAsO₂处理组Fe²⁺水平均升高(P ＜ 0.05);不同剂量NaAsO₂组MDA含量差异均有统计学意义(F=7.18,P均＜0.05)。其中,与对照组比较,5、15μmol/L NaAsO₂组LX-2细胞MDA含量均高于对照组(P ＜0.05);在翻译水平上,纤维化指标α-SMA蛋白表达水平随着NaAsO₂剂量的升高而表达上调(P<0.05),铁死亡指标SLC7A11和GPX4 蛋白表达水平随着 NaAsO₂剂量的升高而减少(P<0.05)。结论 铁死亡参与NaAsO₂致LX-2细胞活化过程。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

扩张兔皮肤超微结构的变化

目的：动态观察扩张兔皮肤超微结构的变化。方法：选用2--3kg新西兰大白兔64只，分为2大组，快速扩张组和常规扩张组，每组32只，每大组再分为4组，为扩张完成后即时、1周、12周、24周组。每组8只，其中4只为实验组，另4只植入扩张器不扩张作为对照组。透射电子显微镜观察各组皮肤超微结构的变化。结果：表皮扩张后经历--由扩张刺激引起的创伤至完全修复的过程。扩张后即时真皮中成纤维细胞大量增生，功能由静止转向活跃，胶原纤维碎裂成片，弹力纤维部分断裂，炎症细胞浸润；扩张后1周常规扩张组基底膜连续性基本恢复。显示成纤维细胞合成功能活跃。扩张后12周、24周，成纤维细胞趋于稳定、形态狭长，部分胶原排列紊乱，部分有似癜痕样改变。结论：扩张刺激可致兔皮肤创伤。扩张后真皮不可完全修复。     

芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用

目的观察芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用。方法30只Long-Evans大鼠用动脉结扎法造成视网膜缺血模型,其中治疗组20只腹腔注射芹黄素,对照组10只注射溶媒二甲基亚酚。用视觉电生理仪检查视网膜功能恢复情况。结果芹黄素治疗组视网膜功能恢复明显好于对照组(P<0.05)。结论芹黄素能促进大鼠缺血视网膜的功能恢复。      

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

人体寄生虫学多媒体教学效果的初步评估

通过分析多媒体辅助教学方法与传统教学方法在人体寄生虫学教学中的应用,指出多媒体辅助教学对于提高教学质量效果显著,受到了绝大部分同学的赞同和欢迎.     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

头孢他啶用于胸外科感染的疗效分析

目的 观察和评价头孢他啶（泰得欣）应用于普通胸外手术的临床疗效和安全性。方法 采用对比试验，观察2005年8-10月96例普胸手术预防和治疗的疗效和不良反应。结果 泰得欣在预防和治疗术后感染中总有效率95．9％，不良反应发生率为5．2％。结论 泰得欣临床效果满意，使用安全，值得在普胸手术中选用。     

87株幽门螺旋杆菌VacA等位基因的分析

目的以研究方法LiPA（Line Probe Assay）分析VacA等位基因的表达,了解幽门螺旋杆菌致病机理的理解。方法从三个不同城市87位进行胃镜检查患者的胃粘膜中培养出幽门螺旋杆菌,提取DNA,用LiPA方法分析VacA等位基因。结果（1）87位患者以sic（88．5％）和m2a（63．2％）分布为主,未发现s1b和s2;（2）混合菌株感染率为41．4％,远远高于西方国家,其中上海的混合感染率最高（62．5％）,与北京（41．0％）和南宁（20．8％）相比具有显著性差异,P〈0．01;（3）北京、海、南京三个不同城市s1、m等位基因亚型分布率存在差异;（4）溃疡病和非溃疡病患者m1和m2的分布率没有显著性差异。结论我国幽门螺旋杆菌多重菌株感染率较高,不同的m基因型与消化性溃疡的发生无显著性相关。