益气养阴祛瘀方对NOD小鼠TLR-IFNα通路调控作用的研究

目的:探讨益气养阴祛瘀方对干燥综合征样非肥胖糖尿病(NOD)小鼠PBMC中TLR-IFNα通道表达的影响。方法:将30只NOD自发性干燥综合征(SS)样小鼠随机分为模型组、羟氯喹组、益气养阴祛瘀方组(中药组),每组10只。ICR小鼠10只为正常组。正常组和模型组给予生理盐水,羟氯喹组给予羟氯喹溶液75 mg/kg,中药组予益气养阴祛瘀方药液27.4 g/kg,观察小鼠的饮水量指标的变化,实时定量PCR技术检测TLR5和IFN-α mRNA表达水平。结果:与模型组相比,羟氯喹组和益气养阴祛瘀方组的饮水量有明显改善(P0.05);模型组IFN-α mRNA相对表达量较正常组显著升高(P0.05);与模型组比较,羟氯喹组、中药组IFN-α mRNA相对表达量明显降低(P0.05);中药组IFN-α mRNA相对表达量低于羟氯喹组(P0.05),模型组TLR5 mRNA相对表达量较正常组显著升高(P0.05),羟氯喹组和中药组TLR5 mRNA相对表达量均低于模型组(P0.05),但比正常组高(P0.05)。结论:益气养阴祛瘀方对干燥综合征的治疗有效,推测与其调节NOD小鼠TLR-IFNα通路的表达有关。     

活血解毒方对干燥综合征小鼠的干预机制

目的:探讨活血解毒方对干燥综合征小鼠血清白细胞介素-6(interleukin,IL-6)、IL-21及颌下腺病理的影响及机制。方法:以NOD/Ltj小鼠及C57bl/6j小鼠为实验对象,分为正常组、模型组、白芍总苷组、活血解毒方组。正常组、模型组分别给予蒸馏水灌胃,另外两组分别给予白芍总苷混悬液、活血解毒方汤剂灌胃,干预8周。比较各组小鼠唾液流率、颌下腺指数、颌下腺病理染色及评分,并收集血清检测干预后各组小鼠血清IL-6、IL-21水平。结果:正常组唾液流率均高于其他各组(P0.05);在第8周时,活血解毒方组唾液流率高于模型组及白芍总苷组(P0.05)。正常组颌下腺指数均高于其余各组(P0.05)。干燥综合征小鼠各组颌下腺病理评分均高于正常组(P0.01);与模型组比较,活血解毒方组评分较低(P0.05)。模型组IL-6水平高于正常组,而白芍总苷组及活血解毒方组血清IL-6水平低于模型组(P0.05);模型组及白芍总苷组血清IL-21水平高于正常组(P0.01);活血解毒方组血清IL-21水平低于模型组及白芍总苷组(P0.05)。结论:活血解毒方可改善干燥综合征模型小鼠唾液流率,减轻小鼠颌下腺炎症,降低血清IL-6、IL-21水平。     

益气养阴祛瘀中药对干燥综合征自发性模型非肥胖糖尿病小鼠的治疗作用及机制

[目的]探讨益气养阴祛瘀中药对非肥胖糖尿病(NOD)自发性干燥综合征(SS)样小鼠的疗效及作用机制。[方法]将45只8周龄NOD自发性SS样小鼠随机分为对照组、中药组和西药组灌胃治疗12周,分别检测各组治疗前、后小鼠不同时间点(9、15和20wk)的唾液分泌量,检测各组小鼠血清的IgG、IgA、C3,比较各组小鼠颌下腺、胸腺和脾脏指数情况,并观察各组颌下腺组织病理学改变;同时采用RT-PCR法检测各组颌下腺组织BAFF和NF-κB mRNA表达水平。[结果]中药组对NOD小鼠的唾液分泌量、颌下腺指数和颌下腺炎性浸润较对照组均有不同程度地改善(P0.05或P0.01);其疗效也更优于单用羟氯喹的西药组(P0.05)。中药组能明显下调NOD小鼠颌下腺BAFF mRNA的表达水平,能使NOD实验小鼠在治疗后外周血IgG和C3水平改善(P0.05或P0.01)。[结论]益气养阴祛瘀中药对NOD小鼠SS具有有效的治疗作用,将为治疗SS提供一种新的治疗方法,而其作用机制与下调BAFF分子表达密切相关。     

解毒通络生津法对干燥综合征自发性模型小鼠唾腺泪腺的影响

目的:探讨解毒通络生津法对干燥综合征自发性模型小鼠唾腺泪腺的影响。方法:将9周龄SPF级雌性非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠随机分为解毒通络生津治疗组、养阴生津对照组和空白组。分别予灌胃解毒通络生津方、养阴生津方、生理盐水干预,共5周。观察小鼠饮水量等一般情况;实验结束检测血清免疫球蛋白G(IgG)、血清免疫球蛋白A(IgA)、补体3(C3)浓度,HE染色法观察小鼠唾腺泪腺病理。结果:与空白组比较,治疗组和对照组NOD小鼠饮水量的增加得到明显控制;对照组小鼠血清IgG、IgA、C3浓度升高,而治疗组仅有C3浓度上升,IgG、IgA无显著变化;各组小鼠唾腺泪腺组织病理学积分均无显著差异。结论:解毒通络生津法与传统养阴生津法均能改善NOD小鼠口干症状,升高C3,但均未能对该模型鼠唾腺泪腺病理学改变造成显著影响;而解毒通络生津法对NOD小鼠的IgG、IgA无显著影响。     

间充质干细胞对干燥综合征模型小鼠治疗效应的研究

目的 探讨MSCs对晚期干燥综合征(Sjgren''s syndrome, SS)模型小鼠的治疗效果及血清中细胞因子浓度的影响。方法16只雌性NOD/Ltj小鼠随机分为疾病对照组和MSCs治疗组,8只雌性C57BL/6小鼠作为健康对照组。监测各组小鼠饮水量和血糖;MSCs治疗组小鼠26周龄时进行连续2周的尾静脉MSCs注射;测算小鼠唾液流率;计算小鼠的下颌下腺淋巴细胞灶积分;ELISA检测小鼠血清中IL-2、IL-6、HGF、IFN-γ、IL-10、PGE2、TGF-β1、TNF-α的水平。结果从第16周龄开始,NOD小鼠饮水量及血糖水平显著增加;治疗后,MSCs治疗组唾液流率下降幅度明显小于同时期的疾病对照组;MSCs治疗组下颌下腺淋巴细胞灶积分明显小于疾病对照组;3组间多种与SS发病或MSCs免疫抑制功能相关的细胞因子差异有统计学意义。结论 MSCs对晚期干燥综合征模型小鼠有一定的治疗效果,其可能通过改变血清中多种细胞因子浓度达到治疗效应。     

AQP5重组腺病毒载体构建及其临床作用

目的 构建AQP5的重组腺病毒载体,并验证其在干燥综合征中的治疗作用.方法 采用RT-PCR方法扩增AQP5基因,经酶切插入穿梭质粒pAdTrack-CMV,形成重组质粒pAdTrack-CMV-AQP5.经Pmel酶切线性化后与pAdeasy-1同源重组,重组质粒pAdeasy-AQP5经Pacl酶切,经脂质体转染入HEK293细胞中包装获得病毒.经过体外检测确认病毒表达后,于NOD小鼠颌下腺周注射病毒,观察其对唾液分泌量的影响.结果 经PCR和测序证实重组pAdeasy-AQP5质粒构建成功.并可见其在293细胞中表达;初步实验研究发现,其能缓解NOD小鼠的唾液腺分泌功能异常.结论 成功构建了AQP5的重组腺病毒载体,初步证实了pAdeasy-AQP5在干燥综合征中的治疗作用.     

益气养阴祛瘀中药对干燥综合征样小鼠TLR/IFN/BAFF通路的作用研究

[目的]研究益气养阴祛瘀中药对干燥综合征模型样NOD小鼠外周血单个核细胞TLR9、IFN-α、BAFFmRNA表达水平的调节作用,探讨益气养阴祛瘀中药对SS的TLR-IFN-BAFF通路信号表达的影响及其作用机制。[方法]实验动物选择NOD小鼠20只及ICR正常小鼠10只,雌性,8周龄,SPF级,于无特殊病菌的恒温条件下喂养。NOD小鼠随机分为2组：模型组、给药组。ICR正常小鼠10只,作为正常对照组。于小鼠9周龄时开始每日定时灌胃一次,持续12周。于实验第12周末时所有小鼠股动脉取血后处死,分离外周血单个核细胞,采用RT-PCR法检测TLR9、IFN-α、BAFF的mRNA表达水平。小鼠股动脉取血后处死,摘取小鼠颌下腺,用光镜下观察小鼠颌下腺病理改变。[结果] 对照组、模型组、中药组TLR9 mRNA表达水平分别为0.15±0.03,0.92±0.05,0.29±0.06;对照组、模型组、中药组IFN-α mRNA表达水平分别为0.12±0.03,1.48±0.04,0.20±0.03;对照组、模型组、中药组BAFF mRNA表达水平分别为0.23±0.06,1.28±0.04,0.38±0.06;模型组和正常对照组相比TLR9、IFN-α、BAFFmRNA均明显升高（P<0.01 或P<0.05),给药组和模型组比较TLR9、IFN-α、BAFFmRNA均明显下降（P<0.05)。[结论]NOD小鼠存在血清TLR9、IFN-α、BAFF mRNA水平过度表达。益气养阴祛瘀中药对NOD小鼠TLR/IFN/BAFF通路的过度表达具有抑制作用。     

干燥综合征毒邪致病研究进展

近年来毒邪致病理论在干燥综合征的认识和治疗中得到越来越多的应用和研究.对干燥综合征毒邪致病学说的中医观点和现代学研究进行总结,探讨了中医毒邪致病理论与现代医学干燥综合征发病机制的联系,以期为干燥综合征的治疗与研究提供新思路、新方法.     

应用α-胞衬蛋白鼻黏膜免疫治疗干燥综合征的实验研究

目的 探讨α-胞衬蛋白鼻黏膜给药对干燥综合征自发鼠模型NOD小鼠SS病变的抑制作用及其机制.方法 以NOD小鼠作为干燥综合征自发鼠模型,8只1组,自4周龄开始分别鼻吸入法给予α-胞衬蛋白1 μg和1O μg,隔天给药1次,对照组分别给予磷酸盐缓冲液(PBS)10 μl及谷胱甘肽转移酶(GST)10 μg,观察小鼠饮水量的改变.测定血清中的抗α-胞衬蛋白及M3受体蛋白多肽(M3RP)抗体,抗干燥综合征抗原(SS)A抗体、SSB抗体、类风湿因子(RF)及抗核抗体(ANA)等自身抗体.酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定白细胞介素(IL)-10和干扰素-γ,流式细胞仪检测脾细胞FoxP3+ T细胞的表达,应用HE染色和免疫组化方法 分别检测小鼠颌下腺、腮腺的病理学改变及α-胞衬蛋白的表达.结果 (1)鼻吸入α-胞衬蛋白可以抑制NOD小鼠自身抗体的产生.α-胞衬蛋白鼻黏膜免疫组的α-胞衬蛋白抗体和M3RP抗体滴度较对照组减低.差异有统计学意义(P＜0.05).至小鼠17周龄,对照组分别有5只鼠出现ANA阳性,而1 μg组和10 μg组分别有2只和3只鼠ANA阳性.(2)鼻吸入α-胞衬蛋白可使NOD小鼠血清IFN-γ水平降低.α-胞衬蛋白1 μg组、10 μg组、PBS组及GST组小鼠血清干扰素-γ水平,分别为(42±16)、(37±15)、(87±18)及(72±11)pg/ml,α-胞衬蛋白给药组明显低于对照组(P＜0.05),而IL-10在各组间差异无统计学意义.(3)鼻吸入α-胞衬蛋白可上调NOD小鼠Foxp3+ T细胞的数量:1 μg、10 μg、PBS及GST组小鼠脾细胞的表达Foxp3+的CD4+ CD25+ T细胞占CD4+CD25+ T细胞的比例分别为(4.0±1.7)%、(4.3±1.0)%、(2.2±0.6)%、(2.3±0.7)%,α-胞衬蛋白治疗组较对照组明显提高(均P＜0.05).(4)鼻吸入α-胞衬蛋白可以抑制NOD小鼠腺体淋巴细胞浸润和α-胞衬蛋白的表达.α-胞衬蛋白给药组淋巴细胞浸润较对照组少,且应用α-胞衬蛋白多抗免疫组化的方法检测,α-胞衬蛋白给药组的α-胞衬蛋白表达明显减少.(5)鼻吸入α-胞衬蛋白可以降低NOD小鼠的饮水量.α-胞衬蛋白1 μg、10 μg、PBS及GST组的小鼠于16周龄时饮水量分别为(39.2±2.1)、(40.4±2.5)、(49.3±3.1)及(51.6±2.8)ml,与对照组相比,α-胞衬蛋白免疫诱导后可减少患鼠的饮水量(P＜0.05).结论α-胞衬蛋白是SS的致病性抗原,利用该蛋白鼻黏膜免疫可以上调调节性T细胞的数量,抑制SS动物自身抗体的产生及腺体中淋巴细胞浸润.     

白芍总苷抑制NLRP3活化治疗干燥综合征小鼠的实验研究

目的：探讨白芍总苷（total glucosides of paeony，TGP）治疗干燥综合征的效果及与抑制核苷酸结合寡聚化结构域 （nucleotide binding oligomerization domain，NOD）样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NOD-like receptor pyrin domain containing 3， NLRP3）炎症体活化的关系，旨在阐明TGP治疗干燥综合征的新机制。方法：选取雌性非肥胖性糖尿病小鼠为干燥综合征模型。400 mg/kg TGP灌胃1个月后，测量小鼠唾液流量，观察颌下腺组织淋巴细胞浸润情况，检测脾脏细胞NLRP3炎症体活化状态。体外刺激脾脏细胞NLRP3炎症体活化，并用100 μg/mL TGP处理，RT-qPCR和Western blot法检测脾脏细胞NLRP3炎症体活化状态。结果：与对照组相比，TGP灌胃组小鼠唾液流量显著增加（P＜0.05），颌下腺组织淋巴细胞浸润显著减少，脾脏细胞的NLRP3炎症体表达水平显著下降（P＜0.05）；体外实验也表明，TGP抑制脾脏细胞的炎症体活化（P＜0.05）。结论：TGP改善干燥综合征小鼠症状，其机制与抑制NLRP3炎症体活化相关，揭示了TGP治疗干燥综合征的新机制，为进一步推广应用 TGP治疗干燥综合征提供了新的证据。     

基于“思伤脾”理论探讨心理应激在干燥综合征发生发展中的作用

干燥综合征是一种慢性自身免疫性疾病，可累及多系统造成全身损害，目前发病机制尚不完全明确。近年研究发现，心理应激作为一种刺激因素，在干燥综合征的发病中起着重要作用，但尚不能完全明确心理应激所致干燥综合征的发病机制和干预靶点。而在中医理论中，同样认为情志因素作为影响干燥综合征的重要因素，其与心理应激有着本然的一致性。“思伤脾”是中医情志致病的重要内容之一，文章结合现代医学研究成果，从中医“思伤脾”理论对干燥综合征的病理机制作中西医比对，试图发掘内在联系，探索协同诊治体系，融通中西疗法互参，以期为干燥综合征的诊治提供更多的理论依据与支持。     

干燥综合征患者唇腺活检病理表现及其意义

目的探讨干燥综合征患者的唇腺活检病理表现及其在诊断中的意义。方法对我院93例确诊干燥综合征患者的唇腺活检病理标本进行分析。结果发现主要病理改变为腺小叶及导管周围灶性淋巴细胞浸润（一个灶：≥50个淋巴细胞/4mm2）,腺泡破坏、萎缩,导管扩张,纤维结缔组织增生,脂肪浸润。以≥1个灶/4mm2为阳性标准,唇腺活检的阳性率为59.1%。30岁以下和31～40岁组患者的诊断阳性率较高,分别为83.3%和71.4%。结论唇腺活检是诊断干燥综合征的必要检查,尤其对年轻患者有更高的敏感度,对该疾病的诊断有举足轻重的意义。     

唐氏综合征神经系统发育障碍疾病模型的构建及发病机制的研究进展

唐氏综合征是人类常见的染色体数目异常疾病,临床上,先天性智力障碍是唐氏综合征的主要表型之一,为此,探讨唐氏综合征神经系统发育障碍的机制尤为重要。建立动物和细胞疾病模型是研究疾病的关键,本研究报道了较为成熟的唐氏综合征疾病小鼠模型及细胞模型,同时综合了国内外近年研究结果,对唐氏综合征神经系统发育障碍的发病机制,包括氧化应激、线粒体功能障碍和21号染色体基因剂量异常的相关内容进行综述,以期为唐氏综合征患儿早期预防和治疗神经系统异常提供参考。     

唐氏综合征神经系统发育障碍疾病模型的构建及发病机制的研究进展

唐氏综合征是人类常见的染色体数目异常疾病,临床上,先天性智力障碍是唐氏综合征的主要表型之一,为此,探讨唐氏综合征神经系统发育障碍的机制尤为重要。建立动物和细胞疾病模型是研究疾病的关键,本研究报道了较为成熟的唐氏综合征疾病小鼠模型及细胞模型,同时综合了国内外近年研究结果,对唐氏综合征神经系统发育障碍的发病机制,包括氧化应激、线粒体功能障碍和21号染色体基因剂量异常的相关内容进行综述,以期为唐氏综合征患儿早期预防和治疗神经系统异常提供参考。     

中医药治疗干燥综合征的实验研究进展

近几年来,我国广泛开展了有关中医药防治干燥综合征的实验研究,并取得了很大的进展,显示了中医药治疗干燥综合征具有很大的优势,通过对改善血液流变性及微循环,增加涎腺分泌和进行免疫调节,清除自由基等方面的疗效观察,旨在为进一步明确中医药治疗干燥综合征的作用机理提供理论依据。     

小鼠Ⅲ度烧伤模型的复制及皮肤病理形态改变的动态观察

目的 利用近交系小鼠建立方法简便、效果稳定的Ⅲ度烧伤模型,对其皮肤病理改变进行动态观察,为烧伤实验治疗研究提供资料.方法 小鼠实验前备毛,乙醚麻醉固定小鼠四肢,苏醒后于备毛部覆盖自制控制烧伤面积硬纸片,滴加95%酒精,点燃计时;烧伤早期和远期取皮肤进行病理检查,用Ki67抗体免疫组化观察细胞增殖.结果 按本方法建立小鼠Ⅲ度烧伤模型,面积准确,深度一致,操作简便易行.小鼠烧伤皮肤病理改变与人类基本一致,但有其特点:小鼠Ⅲ度烧伤包括表皮至脂膜肌,烧伤后炎性渗出较晚,约需2 d;创面周围毛发生长活跃,倾向创面,Ki67抗体阳性细胞集中于毛囊底部.结论 为利用小鼠烧伤模型进行实验治疗的研究提供了有实用价值的资料.     

人子宫内膜异位症NOD-SCID鼠模型的建立

目的　探讨采用人在位子宫内膜及异位子宫内膜建立子宫内膜异位症动物模型的可行性。方法　获取人分泌晚期在位子宫内膜及人异位子宫内膜种植于NOD -SCID鼠腹部皮下 ,随机分成 4组 ,分别在 2、4、6、8周取出其皮下移植物行病理检查。结果　 3 2只小鼠均存活 ,有 15只小鼠皮下在位内膜移植物经HE染色可见明显的子宫内膜腺体和间质 ,成功率为 93 .75 %。而异位内膜移植物仅见到纤维结缔组织。结论　用人在位内膜建立NOD -SCID小鼠子宫内膜异位症模型成功率高 ,模型性状显著且稳定。     

原发性干燥综合征合并原发性胆汁性肝硬化12 例临床分析

原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)是一种病因未明的慢性进行性胆汁淤积性肝脏疾病。其病理改变主要以肝内细小胆管的慢性非化脓性破坏、汇管区炎症、慢性胆汁淤积、肝纤维化为特征,最终发展为肝硬化和肝衰竭[1]。研究发现,PBC与干燥综合征(Sj觟gren’s Syndrome,SS)具有较为密切的相关性,国内外已有多家报道,而原发性干燥综合     

NOD/SCID小鼠模型在实验血液学研究中的应用

NOD/SCID(非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷)小鼠是在SCID(重症联合免疫缺陷)小鼠的基础上与非肥胖性糖尿病小鼠(NOD/Lt)品系回交的免疫缺陷鼠.NODISCID小鼠既有先天免疫缺陷,又有T和B淋巴细胞缺乏,各种肿瘤细胞可以植入,且较少发生排斥反应及移植物抗宿主病(GVHD).所以NOD/SCID小鼠逐渐成为血液学实验研究的有用工具.本文从NOD/SCID小鼠的生物学特性、建立人类白血病模型、干细胞移植、药物研究及NOD/SCID小鼠应用中存在的不足和改良等方面综合述评.     

水通道蛋白5在干燥综合征发病机制中的作用研究进展

干燥综合征(Sjgren''s syndrome, SS)是以口干、眼干为主要临床表现的一种病因不明的自身免疫性疾病。水通道蛋白5(aquaporin5, AQP5)是一种能特异性跨膜转运水的蛋白,能显著增加细胞膜水通透性,参与水的分泌、吸收及细胞内外水的平衡。近年来有研究表明AQP5在干燥综合征患者唾液腺细胞中异常的亚细胞分布可能参与了疾病的发生。而恢复干燥综合征患者腺体内AQP5的正常亚细胞分布、上调AQP5成为治疗SS的可能手段。