水生实验动物剑尾鱼的DNA指纹图谱构建

目的 剑尾鱼是由原良种委员会审定并由农业部公布的水生实验动物,在遗传学研究、水环境污染监测、细菌性疾病研究方面显示出较好的应用前景.为了对剑尾鱼选育系进行种质资源监测、区分选育系与非选育以及鉴定近交系纯度,本研究采用微卫星DNA进行水生实验动物剑尾鱼的指纹图谱构建.方法 根据相关报道设计合成了50对微卫星引物,对几个剑尾鱼品系的种质资源进行检测,筛选品系间差异性引物;确立剑尾鱼核心引物,用EXCEL散点图绘制DNA指纹图谱模式图;并将数字化指纹数据输入珠江水产研究所鱼类种质鉴定软件V1.0,形成剑尾鱼标准化指纹图谱鉴定数据库.结果 共获得剑尾鱼品系间特异标记5个可用于剑尾鱼近交系鉴定,确立46个微卫星标记为核心引物,构建剑尾鱼选育系RR-B系、RW-H系和非选育的野生品种的DNA指纹图谱.结论 本研究筛选出的微卫星标记与构建的指纹图谱,可用于剑尾鱼3个品种间的品种鉴定、纯度检测及遗传监测.     

近交系剑尾鱼的STR遗传检测技术

目的 建立近交系实验用鱼DNA检测方法,用于遗传质量控制.方法 以RR-B、RW-H、BY-F三个近交系剑尾鱼的基因组DNA为主要研究对象,并以非选育剑尾鱼作对照,采用STR (short tandem repeat) 引物扩增方法检测不同品系在DNA上的异同.设计10对STR引物,优化PCR电泳条件,使用相同的实验条件进行重复,以得到可靠的扩增条带,筛选出特异性引物.结果 有4对引物可扩增出稳定条带,1对引物(AY204223)的PCR扩增条带在非选育群中表现多态性,在RR-B与BY-F系表型一致,与RW-H表型不同.这些STR位点能够区分剑尾鱼三个近交系品系.结论 STR检测技术可望用于近交系剑尾鱼的遗传质量监测.     

封闭群斑马鱼的STR遗传检测技术

目的建立近交系实验用鱼DNA检测方法,用于遗传质量控制。方法以RR-B、RW-H、BY-F三个近交系剑尾鱼的基因组DNA为主要研究对象,并以非选育剑尾鱼作对照,采用STR（short tandem repeat）引物扩增方法检测不同品系在DNA上的异同。设计10对STR引物,优化PCR电泳条件,使用相同的实验条件进行重复,以得到可靠的扩增条带,筛选出特异性引物。结果有4对引物可扩增出稳定条带,1对引物（AY204223）的PCR扩增条带在非选育群中表现多态性,在RR-B与BY-F系表型一致,与RW-H表型不同。这些STR位点能够区分剑尾鱼三个近交系品系。结论STR检测技术可望用于近交系剑尾鱼的遗传质量监测。     

封闭群斑马鱼的遗传生化标记研究

目的通过研究对RR-B、RW-H、BY-F三个近交系和非选育剑尾鱼的研究比较,建立近交系剑尾鱼的遗传生化标记检测技术。方法依照国标GB／T14927.1-2008的遗传操作规程优化实验条件,对三个近交品系及非选育群剑尾鱼的不同组织的6个遗传生化位点进行研究,以得到其遗传生化图谱。结果在6个生化位点中,同一品系剑尾鱼同工酶存在组织特异性,多数同工酶在肝中活性较强。同一生化位点在不同品系间存在差异。RR-B系在葡萄糖磷酸异构酶（Gpi）、6-磷酸葡萄糖脱氢酶（Gpd）位点表现出特异性条带,RW-H系在过氧化氢酶（Ce）位点表现出特异性条带。同一生化位点在各品系内表现较为一致,而在非选育剑尾鱼中在上述三个生化位点表现出多态性。在酯酶（ES）、碱性磷酸酶（AKP）、乳酸脱氢酶（LDH）位点,各品系谱带不易区分其差异。结论建立了剑尾鱼近交系生化标记检测技术,可望用于近交系剑尾鱼的遗传质量监测。     

近交系剑尾鱼的遗传生化标记研究

目的 通过研究对RR-B、RW-H、BY-F三个近交系和非选育剑尾鱼的研究比较,建立近交系剑尾鱼的遗传生化标记检测技术.方法 依照国标GB/T 14927.1-2008的遗传操作规程优化实验条件,对三个近交品系及非选育群剑尾鱼的不同组织的6个遗传生化位点进行研究,以得到其遗传生化图谱.结果 在6个生化位点中,同一品系剑尾鱼同工酶存在组织特异性,多数同工酶在肝中活性较强.同一生化位点在不同品系间存在差异.RR-B系在葡萄糖磷酸异构酶(Gpi)、6-磷酸葡萄糖脱氢酶(Gpd)位点表现出特异性条带,RW-H系在过氧化氢酶(Ce)位点表现出特异性条带.同一生化位点在各品系内表现较为一致,而在非选育剑尾鱼中在上述三个生化位点表现出多态性.在酯酶(ES)、碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)位点,各品系谱带不易区分其差异.结论 建立了剑尾鱼近交系生化标记检测技术,可望用于近交系剑尾鱼的遗传质量监测.     

剑尾鱼线粒体细胞色素b基因的序列分析

目的　克隆和测定剑尾鱼 (Xiphophorushelleri)线粒体细胞色素b基因 (cytb)的全序列。方法　提取剑尾鱼肝脏的总DNA。设计合成特异引物进行PCR扩增。扩增产物经琼脂糖电泳检测、纯化后克隆到pGEM Teasyvectorsystem中的T载体上 ,筛选转化子 ,提取质粒 ,酶切鉴定。挑取重组质粒pGEM T xhcytb 11进行序列测定。结果　获得了剑尾鱼线粒体cytb基因的全序列 ,共 114 0bp。结论　用BLAST与GenBank中的线粒体DNA序列进行比较 ,显示剑尾鱼与其他鱼类的cytb基因具有较高的同源性 ;根据剑尾鱼与其他 13种鱼的cytb基因序列同源性所建立的进化树 ,与传统的分类地位基本吻合     

克隆波尔山羊的微卫星DNA鉴定

目的:利用微卫星DNA技术进行体细胞克隆后获得个体的鉴定.方法:提取正常山羊、供核波尔山羊、本地受体山羊及克隆个体的基因组DNA,通过设计微卫星DNA多态PCR引物扩增微卫星DNA序列并对之进行微卫星DNA鉴定.结论:通过微卫星DNA序列的扩增,证明克隆个体为供核波尔山羊的克隆.     

小型猪微卫星标记多重PCR体系的建立与应用

目的 建立实验用小型猪微卫星标记的多重PCR体系和进行实验猪群的遗传监测. 方法利用3种不同荧光标记的微卫星引物结合ABI3700 遗传分析仪测序的方法,通过筛选和优化反应条件,建立可用于实验用小型猪遗传质量控制的稳定的多重PCR反应体系.在此基础上进一步检测实验用小型猪近交群体的遗传变异以验证建立体系的效率.结果 筛选出了2组理想的组合:组合1包括SW742、S0228和S0218座位,复性温度58℃和56℃;组合2包括S0155、SW902和S0227三个座位,复性温度为60℃和58℃.组合内不同座位标记不同的荧光染料.还以此检测了实验用小型猪群体中的遗传变异.结论 初步建立了中国三种实验用小型猪微卫星标记检测的多重PCR体系, 为快速、大通量、准确的小型猪遗传监测提供了初步的技术基础.     

乳腺癌T细胞受体α链全长编码序列多重PCR扩增方法的建立

目的:建立乳腺癌克隆性T细胞TCRα链全长编码序列(CDS)的多重PCR扩增方法。方法:根据Gen Bank现有TCR序列设计扩增TCRα链32个亚家族上游引物35条,下游引物2条。对Mg2+、d NTPs和引物浓度比例以及退火温度进行优化,确定最佳反应体系进行TCRα链多重PCR扩增,构建重组质粒并酶切鉴定。结果:扩增出乳腺癌转移淋巴结中的TCRα链全长编码序列并构建重组质粒,5例患者共获得23个阳性克隆。结论:建立的TCRα链多重PCR扩增方法具有特异、快速、简便的特点,可为研究乳腺癌克隆性T细胞提供帮助。     

淋巴瘤克隆性TCRγ基因重排的多重引物分析

目的 探讨TCRγ多重引物检测淋巴瘤克隆性基因重排的功效及意义。方法 引物分为两组扩增淋巴瘤DNA，PCR产物用于琼脂糖电泳和单链构象多态性分析（SSCP）检测。结果 两组多重引物PER的阳性率高于通用引物阳性率；B细胞淋巴瘤组织中存在一定比例克隆性TCRγ基因生重排；部分淋巴瘤中存在两种，ICRγ基因重排。结论 多重引物和降落式PCR适于淋巴瘤TCRγ基因重排研究，可提高检出率、判断淋巴瘤组织中不同TCRγ基因重排情况；SSCP可排除假阳性。     

RR-B系剑尾鱼LDH和GDH同工酶的分析

目的　分析RR B系剑尾鱼第 2 0代个体的LDH和GDH两种同工酶 ,检验其遗传均一性。方法　应用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳 ,分析剑尾鱼眼球、脑、肝脏、肌肉、心脏等部位的乳酸脱氢酶 (LDH)和葡萄糖脱氢酶(GDH) ,并以同工酶谱最具代表性的组织对不同个体的RR B系和非选育剑尾鱼进行分析和比较。结果　RR B系剑尾鱼不同个体的乳酸脱氢酶酶谱和葡萄糖脱氢酶酶谱是一致的 ,非选育剑尾鱼的乳酸脱氢酶酶谱和葡萄糖脱氢酶酶谱存在多态性。结论　RR B系剑尾鱼有较好的遗传均一性。     

剑尾鱼近交系遗传纯度的RAPD分析

目的　分析近交系剑尾鱼 (Xiphophorushelleri)的遗传纯度 ,以指导剑尾鱼实验动物化的培育工作。方法　应用经过筛选的 2 9条随机引物对剑尾鱼的第 19代近交系 12尾剑尾鱼个体基因组DNA进行RAPD扩增 ,计算近交系个体间的相似系数及遗传距离。结果　筛选的 2 9条引物共扩增出 30 6条带 ,扩增片段的大小在 0 2 - 3kb之间。其中多态性带 2 9条 ,多态性带频率在 0～ 5 0 0 0 %之间 ,平均为 9 48%。近交系剑尾鱼不同个体拥有相同条带的比率较高。计算得到近交系的平均相似系数 (S)为 0 9839(0 973～ 0 997) ,平均等位基因频率 ( q)为 0 8731,最低平均杂合率 ( H)为 0 12 6 9。 结论　剑尾鱼第 19代近交系有较高的遗传纯合度。     

几种实验用鱼的研究现状

综述了斑马鱼、青鳉、鮈鲫、河鲀、红鲫以及剑尾鱼等6种小型鱼在血液学、遗传学、环境科学、发育生物学以及分子生物学等方面的研究现状,并对具有实验用鱼开发前景的野生白缘yang的生物学特征进行了评估.     

cDNA微阵列分析人apoE4转基因鼠肾脏基因表达谱的变化

目的研究人apoE4转基因鼠肾脏的基因表达谱变化.方法分别提取人apoE4转基因鼠和正常C57BL/6J小鼠的肾脏总RNA,经逆转录合成cDNA探针后分别与鼠cDNA表达点阵杂交,再用ESTblot软件进行分析,并用Northern印迹证明基因表达的改变.结果人apoE4转基因鼠肾脏中有38个基因的mRNA表达升高,22个基因的mRNA表达降低.其中血浆谷胱甘肽过氧化物酶前体、视黄酸γ受体和白介素5受体等基因的表达明显增加.B-raf原癌基因、促红细胞生成素受体、整联蛋白α4的基因表达显著降低.Northern杂交证明转基因鼠肾脏的c-Jun基因表达升高.结论人apoE4转基因鼠肾脏的c-Jun、血浆谷胱甘肽过氧化物酶前体、白介素5受体等基因的表达增加;促红细胞生成素受体、整联蛋白α4等基因的表达减少.     

通用引物PCR-SSCP技术分析16Sr RNA基因特征快速鉴定细菌

目的探讨通用引物聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术在细菌检测中的应用.方法选取9种常见的细菌,采用通用引物对细菌的16SrRNA基因进行PCR扩增,产物进行单链构象多态性分析,并以标准菌株为对照.结果一对引物扩增产物SSCP图谱各细菌之间难以区别;两对引物扩增产物SSCP图谱条带数目、相对迁移率及条带之间的间距存在明显,可相互区别;3种细菌的标准菌株和临床菌株的SSCP图谱完全一致.结论采用针对16SrRNA的通用引物PCR-SSCP技术以标准菌株为对照可方便快捷地检测细菌.     

Establishment of a multiplex PCR system to diagnose tuberculosis and other bacterial infections

BactirialinfectiousdiseasesareverycommoninchildrenofChina.Manysevereinfectionssuchaspu-rulentmeningitis,tuberculousmeningitisandsepsisstillthreatenchildren'shealthandeventheirlives.Bacterialcultureisaclassicmethedtodetectthepathogensofinfectiousdiseases,butithastotakeseveraldaysforgeneralbacteriaandeven4to8weeksfortuberclebacillus(Tb).ltcouldbringsomeperplexitiesfordoctorstodeterminetheeffectivetherapy.So,arapid,specificandsensitivemethodisrequiredfordiagnoslngbacterialinfections,speciallydif…     

Clinical Identification of Common Species of Dermatophytes by PCR and PCR-RFLP

Summary: To find a fast and efficient way of identifying seven common dermatophytes in clinical practice, we used the techniques of polymerase chain reaction (PCR) and PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP) targeting Topoisomerase Ⅱ gene. The DNA of 7 dermatophytes, along with Candida albicans, Aspergillus terreus and Aspergillus flavus were amplified by consensus primer dPsD1. They were then subjected to a second PCR with primers dPsD2 and species-specific primers PsT and PsME separately. 6 of the products generated by dPsD2 were digested with restriction enzyme Hinc Ⅱ. DNA fragments of 3390 bp and 2380 bp was amplified by using consensus primer dPsD1 and dPsD2 from the genomic DNA of each dermatophyte species separately. By combining the results of the two species-specific primer sets (PsT and PsME), all species of dermatophyte yielded unique sizes-set of PCR products expect for T. mentagrophytes and T. tonsurans.From the restriction profiles of Hine Ⅱ , 6 of the 7 dermatophytoses were diagnosed to species levelincluding T. mentagrophytes and T. tonsurans. By combining the results of the PCR and PCR-RFLP, the 7 common dermatophytes can be identified to species level. It is conclude that the multiplex PCR and PCR-RFLP identification targeting the DNA topoisomerase Ⅱ gene is rapid and efficient.     

有关SARS病原冠状病毒合并感染组织胞浆菌的探讨

目的研究汞（Hg）对剑尾鱼（Xiphophorus helleri Heckel）鳃和肝组织总抗氧化能力（T-AOC）的影响以及硒（Se）对Hg致机体损伤的拮抗作用,探讨剑尾鱼器官组织内T-AOC变化作为环境风险评价（ERA）的有效生物学标记的可行性.方法使用浸浴法以0、0.21、0.42 mg/L三个Hg浓度,（0.21＋0.0664）和（0.42＋0.0664）mg/L二个Hg加Se浓度,以及0.0664 mg/L一个Se浓度为剑尾鱼染毒,定量测定了染毒5 d内鳃和肝组织中总抗氧化能力的变化.结果在整个实验期间Hg暴露组剑尾鱼组织的T-AOC值都有不同程度的下降,与对照组相比高Hg组在染毒第5天时鳃和肝脏组织总抗氧化能力分别降低了39%和30%（P＜0.01）,相反,单独硒处理不论鳃和肝脏组的T-AOC则自第1天起持续显著升高（P＜0.05）.低Hg加Se组鳃组织T-AOC在实验期间基本上维持在接近对照组的水平,但肝组至第5天时,T-AOC下降明显（P＜0.05）.而高Hg加Se组无论鳃或肝组虽然在第1天时T-AOC仍保持一定的活力,但随染毒时间的延长,T-AOC有显著降低（P＜0.05或P＜0.01）.结论硒在一定程度上拮抗汞对机体T-AOC的降低.剑尾鱼鳃和肝组织的总抗氧化能力可作为环境风险评价（ERA）的有效生物学标记.