穗花杉双黄酮调控miR-140-5p介导脂多糖致急性肺损伤的机制研究

目的 探究穗花杉双黄酮对脂多糖（lipopolysaccharides ,LPS）致大鼠急性肺损伤（acute lung injury ,ALI）的保护作用及机制研究。方法 将60只大鼠随机分为4组：对照组、模型组、阳性对照组、实验组。模型组、阳性对照组和实验组大鼠均通过气道滴注3.00 mg/kg LPS 100μl,空白对照组气道滴注等体积的生理盐水,6 h后阳性对照组大鼠腹腔注射地塞米松（2.5 mg/kg）,实验组大鼠腹腔注射穗花杉双黄酮（2.5 mg/kg）,对照组和模型组注射等体积生理盐水。48 h后称重测定大鼠肺组织湿/干比;苏木精-伊红染色( hematoxylin-Eosin staining,HE )观察各组大鼠肺组织病理结构;ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin 6,IL-6）和白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）水平;RT-PCR检测miR-140-5p在肺组织中的表达情况;蛋白印迹法（western Blot,WB）检测肺组织中Toll样受体4（Toll Like Receptor 4,TLR4）、核因子活化B细胞κ轻链增强子（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB）蛋白表达水平。RT-PCR检测肺组织中miR-140-5p的表达情况。利用LPS刺激肺上皮细胞A549,加入穗花杉双黄酮RT-PCR检测miR-140-5P的表达,利用LPS刺激肺上皮细胞A549,加入miR-140-5P抑制剂、mimic-NC干预,RT-PCR检测TLR4、NF-κB的表达。结果 实验组肺组织湿/干比明显低于模型组（P＜0.05）;HE染色结果显示实验组大鼠肺组织结构相比于ALI模型组大鼠炎症细胞明显减少,肺泡间隔明显减轻;ELISA结果显示实验组大鼠肺组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显低于模型组（P＜0.05）;WB结果发现实验组大鼠肺组织中TLR4、NF-κB表达量明显低于模型组;RT-PCR结果显示实验组大鼠肺组织和细胞中miR-140-5P表达均明显高于模型组（P＜0.05）,而miR-140-5P mimic能明显抑制TLR4、NF-κB的表达（P＜0.05）。结论 穗花杉双黄酮能明显缓解LPS诱导的大鼠ALI,降低肺损伤病理进程中血清TNF-α、IL-6和IL-1β的含量,对ALI起保护作用,其作用机制可能是通过促进了miR-140-5P的表达,从而减低ALI炎症过程中关键炎症信号TLR4、NF-κB的表达。     

丙酮酸乙酯对脓毒症急性肺损伤大鼠的 作用及其机制研究

目的 探讨丙酮酸乙酯（EP）对脓毒症急性肺损伤（ALI）大鼠的作用及其可能的作用机制。 方法 选取健康成年雄性SD 大鼠40 只,采用随机数字表法分为对照组、假手术组、ALI 组和EP 组,每组10 只。 ALI 组和EP 组采用盲肠结扎穿孔法复制大鼠脓毒症模型,假手术组仅翻动盲肠,不做结扎穿孔。EP 组术后 腹腔注射EP 溶液（40 mg/kg,间隔6 h）,对照组、假手术组和ALI 组腹腔注射等量乳酸林格液（间隔6 h）。 模型复制24 h 后心脏采血处死大鼠。酶联免疫吸附试验检测肺组织匀浆中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、 Toll 样受体4（TLR4）及核因子κB（NF-κB）的表达;计算肺组织湿干重比;HE 染色后光镜下观察肺组 织病理结构变化。结果 ALI 组、EP 组HMGB1、TLR4 及NF-κB 水平高于假手术组（P <0.05）,且EP 组 低于脓毒症ALI 组（P <0.05）;对照组与假手术组HMGB1、TLR4 及NF-κB 水平比较,差异无统计学意义 （P >0.05）。ALI 组、EP 组肺组织湿干重比高于假手术组（P <0.05）,且EP 组低于ALI 组（P <0.05）;对照 组与假手术组肺组织湿干重比比较,差异无统计学意义（P >0.05）。对照组和假手术组肺组织结构完整,肺泡 间隔无水肿、炎症;ALI 组肺泡结构破坏严重,肺泡间隔增宽,肺间质明显渗出、出血和大量炎症细胞浸润; EP 组肺泡结构较完整,与ALI 组相比,肺间质渗出、出血及炎症细胞浸润症状明显减轻。结论 EP 可能通过 抑制HMGB1/TLR4/NF-κB 信号通路,减轻肺组织炎症反应,改善肺损伤程度从而对脓毒症ALI 发挥保护作用。     

内毒素复合油酸二次打击致大鼠急性肺损伤模型的建立

目的研究腹腔注射内毒素（LPS）和（或）静脉注射油酸（OA）的方法致大鼠急性肺损伤（ALI）模型的不同特点及其可能机制。方法将24只雄性Wistar大鼠随机分为4组,每组6只。对照组（C组）：腹腔注射生理盐水10ml/kg;内毒素组（LPS组）：腹腔注射1%LPS10mg/kg;油酸组（OA组）：静脉注射OA0.15ml/kg;内毒素＋油酸组（LPS＋OA组）：腹腔注射1%LPS10mg/kg,30min后静脉注射OA0.15ml/kg。观察120min内各组大鼠平均动脉压和心率变化率的改变。120min后处死动物采集标本。分别检测肺组织核转录因子κB（NF-κB）P65、血清IL-6、肺组织髓过氧化物酶（MPO）含量、动脉血气指标和肺组织湿-干重比（W/D）,HE染色观察肺组织病理学改变。结果与C组比较,LPS组肺组织NF-κBp65水平、MPO含量及血清IL-6含量显著增加,肺组织W/D比值及血气分析结果无显著性差异,病理组织学改变轻微;OA组肺组织NF-κBp65水平和MPO含量及血清IL-6含量无显著改变,肺组织W/D比值升高,pH值和PaO2降低,PaCO2升高,肺脏出现严重的肺泡上皮细胞损伤和肺泡结构破坏。LPS＋OA组肺组织NF-κBp65水平、MPO含量和W/D比值及血清IL-6含量显著增加,pH值和PaO2降低,PaCO2升高,肺泡破坏严重,大量组织液渗出。结论内毒素复合油酸可以产生协同作用,产生大量致炎细胞因子,并造成大鼠严重的肺脏病理生理改变,临床ALI/ARDS发病过程更为接近,是一种研究ALI发病机制及早期干预的较理想的动物模型。     

五味子乙素对脂多糖诱导的脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织病理损伤、炎症反应和核因子-κB表达的影响

目的 观察五味子乙素对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织病理损伤、炎症反应和核因子 -κB （nuclear factor kappa-B,NF-κB）表达的影响。方法 采用气管滴注40 mg/kg LPS制备大鼠急性肺损伤大鼠模型,手术前1 h腹腔注射80 mg/kg 五味子乙素进行干预治疗,测定大鼠肺湿/干质量比,BCA试剂盒测定大鼠支气管肺泡灌洗液（bronchoalceolar lavage fluid,BALF）总蛋白,牛鲍氏计数板计算 BALF中白细胞数,苏木精-伊红染色观察大鼠肺组织损伤情况,ELISA法检测大鼠肺组织中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）含量,相关试剂盒检测大鼠肺组织中丙二醛（malondialdehyde,MDA）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）含量,蛋白质印迹法检测大鼠肺组织中NF-κB p65、磷酸核因子- κB 抑制蛋白（phosphorylation inhibitor of nuclear factor kappa-B,pIκBα）和Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）的表达水平。结果 与模型组相比,五味子乙素组大鼠肺湿/干质量比、BALF中总蛋白含量及白细胞数均显著减少（P<0.05）,病理损伤显著减轻,TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著减少（P<0.05）,MDA含量显著下降,SOD活性显著升高（P<0.05）,NF-κB p65、pIκBα和TLR4表达水平均显著下调（P<0.05）。结论 五味子乙素能够减轻LPS诱导的脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织的病理损伤,抑制炎症反应和氧化应激反应,抑制NF-κB通路激活。     

白果内酯对脓毒症急性肺损伤大鼠TLR4/NFκB信号通路及Th1/Th2细胞的影响

【摘要】目的 探讨白果内酯（BB）对脓毒症致急性肺损伤（ALI）大鼠Toll样受体-4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路及辅助性T细胞1/2（Th1/Th2）的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、模型组(ALI组)、BB低（2.5 mg/kg）剂量组、BB高（10 mg/kg）剂量组、地塞米松阳性对照组（0.45 mg/kg）,每组各10只,除Sham组外,其余各组采用盲肠结扎穿孔法复制脓毒症ALI模型,术后6 h各药物组经尾静脉注射相应剂量药物,Sham组、ALI组经尾静脉注射生理盐水,均3次/d,共3 d。末次给药1 h后处死大鼠,取肺组织,以苏木精-伊红染色（HE）检测各组大鼠肺组织病理变化;以酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒检测大鼠肺组织氧化物酶(MPO)活性、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;凝胶电泳迁移率转变分析（EMSA）法检测肺组织 NF-κB 活性;以蛋白免疫印迹法检测肺组织中TLR4通路蛋白表达;采用流式细胞仪(FACS）检测肺脏细胞中辅助性T细胞1/2(Th1/Th2)比值。结果 与Sham组相比,ALI组大鼠肺组织可见水肿、炎性细胞浸润等病理损伤,肺组织MPO、IL-6、TNF-α含量、TLR4蛋白表达、NF-κB活性均明显升高（P＜0.05）,Th1/Th2、TNF-α/IL-6均明显降低（P＜0.05）。与ALI组相比,BB低、高剂量组及地塞米松阳性组肺组织水肿、炎性细胞浸润等病理损伤减轻,肺组织MPO、IL-6、TNF-α含量、TLR4蛋白表达、NF-κB活性均明显降低（P＜0.05）,Th1/Th2、TNF-α/IL-6均明显升高（P＜0.05）。与BB低剂量组相比,BB高剂量组及地塞米松阳性组肺组织水肿、炎性细胞浸润等病理损伤减轻,MPO、IL-6、TNF-α含量、TLR4蛋白表达、NF-κB活性均明显降低（P＜0.05）,Th1/Th2、TNF-α/IL-6均明显升高（P＜0.05）。结论 BB可抑制TLR4/NF-κB信号通路活化,调节Th1/Th2平衡,减轻炎性介质释放,改善脓毒症ALI大鼠肺组织损伤。     

胆碱能抗炎通路对内毒素复合油酸致大鼠急性肺损伤的影响

目的研究胆碱能抗炎通路(cholinergic anti-inflammatory pathway,CAP)对内毒素复合油酸2次打击致大鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的影响及其可能的作用机制。方法 24只雄性Wistar大鼠,体质量250±20g。按数字表法将大鼠随机分为4组,每组6只。①对照组(control group,C组):腹腔注射生理盐水10 mL.kg-1;②急性肺损伤(ALI)组:腹腔注射1%内毒素(lipopolysaccharide,LPS)10 mg.kg-1,30 min后静脉注射油酸(oleic acid,OA)0.15 mL.kg-1;③电刺激(stimulation,ST)组:右颈迷走神经干连接刺激电极,以5 V、2 ms、1 Hz强度持续刺激神经10 min,腹腔注射1%LPS 10 mg.kg-1,再持续刺激神经10 min,20min后静脉注射OA 0.15 mL.kg-1;④他克林(tetrahydroaminoacridine,THA)组:静脉注射胆碱酯酶抑制剂THA 1.5 mg.kg-1,10min后行急性肺损伤操作。各组动物均于130 min后从颈总动脉采血1 mL行血气分析,处死动物采集标本,分别检测肺组织Toll-样受体-2(Toll-like receptor-2,TLR2)和TLR4 mRNA、核转录因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)p65、血清白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肺组织髓过氧化物酶(mycloperoxidase,MPO)含量和肺组织湿质量-干质量比(wet weight/dry weight,W/D),HE染色观察左肺组织病理学改变。结果 ALI组与C组比较,pH和动脉氧分压(partial pressure of oxygen,PaO2)均显著下降,二氧化碳分压(partial pressure of carbon dioxide,PaCO2)显著升高;肺泡破坏严重,有大量组织液渗出;肺组织W/D及MPO活性均显著增高;肺组织NF-κB p65蛋白表达明显增强;血清IL-6浓度显著升高;与C组相比,其余3个实验组肺组织TLR2和TLR4mRNA表达均显著增加,组间比较差异无统计学意义;ST组和THA组与ALI组比较,pH和PaO2均显著升高,PaCO2显著下降;肺组织病理改变明显改善;肺组织W/D及MPO活性均显著降低;肺组织NF-κB p65蛋白表达及血清IL-6浓度显著下降。结论电刺激迷走神经或者静脉注射他克林可通过激活CAP,减轻LPS复合油酸2次打击致大鼠ALI时的炎性反应;其可能的机制是抑制NF-κB途径活化,在转录前水平发挥抗炎作用,但是不影响ALI时TLR2和TLR4mRNA的活化。     

呼吸道合胞病毒合并肺炎克雷伯菌感染所致肺炎与TLR4-NF-κB信号通路关系的初步研究

目的 探讨呼吸道合胞病毒( RSV)合并肺炎克雷伯菌( Kp)感染SD大鼠后,初步研究其所致肺炎与TLR4-NF-κB信号转导通路的关系. 方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、RSV组、Kp组及RSV+Kp组,以RSV、Kp滴鼻感染SD大鼠,分别于感染后第0、1、3、5、7天不同时间点,测量其体重、肺指数( LI )的变化;HE染色观察肺的病理学改变;RT-PCR法检测肺组织中TLR4、NF-κB的mRNA表达;Western blot检测NF-κB蛋白的表达;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α( TNF-α)和白细胞介素-1β( IL-1β)含量的变化.结果 与正常对照组相比,RSV组和Kp组均存在弥漫性肺泡间隔增厚和炎症细胞浸润,且随感染时间的延长,肺泡结构破坏逐渐加重, LI、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、NF-κB 蛋白、TNF-α和IL-1β的表达均升高,并与RSV和Kp感染之间存在时间依赖性关系;RSV+Kp组 LI、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、NF-κB蛋白、TNF-α和IL-1β的表达量进一步升高,肺组织炎症明显加剧. 结论 RSV和Kp混合感染具有协同作用,加重肺部炎症;RSV合并Kp感染可能通过 TLR4-NF-κB途径诱导肺部炎症反应,释放细胞因子TNF-α和IL-1β等.     

穗花杉双黄酮对脂多糖致大鼠急性肺损伤的保护作用及机制研究

目的探讨穗花杉双黄酮对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及机制。方法将60只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、阳性对照组和穗花杉双黄酮组(简称穗花杉组),每组15只。模型组、阳性对照组和穗花杉组大鼠均通过气道滴注3.0mg/kg LPS100μL,对照组大鼠气道滴注等体积的生理盐水,6h后阳性对照组大鼠腹腔注射2.5mg/kg地塞米松100μL,穗花杉组大鼠腹腔注射2.5mg/kg穗花杉双黄酮100μL,对照组和模型组注射等体积生理盐水。48h后称重测定大鼠肺组织湿/干重比;苏木精-伊红染色(HE)观察各组大鼠肺组织病理;ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;RT-PCR检测肺组织miR-140-5p表达;蛋白印迹法(WB)检测肺组织Toll样受体4(TLR4)、核因子活化B细胞κ轻链增强子(NF-κB)蛋白表达水平。利用LPS刺激肺上皮细胞A549,加入穗花杉双黄酮RT-PCR检测miR-140-5P的表达,加入miR-140-5P抑制剂、mimic-NC干预,RTPCR检测TLR4、NF-κB表达。结果穗花杉组大鼠肺组织湿/干重比明显低于模型组[(4.77±0.19)比(5.84±0.27),P0.05];HE染色结果显示,穗花杉组大鼠肺组织结构较ALI模型组大鼠炎症细胞明显减少,肺泡间隔明显变薄;ELISA结果显示,穗花杉组大鼠血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显低于模型组[TNF-α:(395.16±41.23)pg/mg比(846.23±29.26)pg/mg;IL-6:(315.26±30.25)pg/mg比(876.54±45.23)pg/mg;IL-1β:(650.16±29.46)pg/mg比(1056.26±54.16)pg/mg,P均0.05];WB结果显示,穗花杉组大鼠肺组织TLR4、NF-κB表达量明显低于模型组;RT-PCR结果显示,穗花杉组大鼠肺组织和人肺上皮细胞miR-140-5P表达分别高于模型组和刺激组[(0.85±0.13)比(0.34±0.08);(0.81±0.15)比(0.27±0.14),P均0.05];miR-140-5P mimic能明显抑制TLR4、NF-κB表达[TLR4:(0.95±0.12)比(2.31±0.08);NF-κB:(0.97±0.13)比(2.45±0.06),P均0.05]。结论穗花杉双黄酮对LPS诱导的大鼠ALI具有保护作用,其机制可能与促进miR-140-5p mimic表达,抑制ALI炎症过程关键蛋白TLR4、NF-κB表达以及其下游炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β水平有关。     

葛根芩连汤对脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠MAPK/NF-κB信号通路的调节及肺组织保护作用*

目的 探讨葛根芩连汤(GQL)对脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠MAPK/NF-κB信号通路的调节及肺组织保护作用。方法 75只大鼠按照随机数字表法分为5组,分别为对照组、模型组、GQL低、中、高剂量组,15只/组。除对照组外,其余大鼠采用腹腔注射脂多糖(LPS)法建立急性肺损伤大鼠模型,GQL低、中、高剂量组按照2.5 mL/kg的剂量灌胃给予大鼠不同剂量的葛根芩连汤,对照组及模型组灌胃给予大鼠等量生理盐水,1次/d,共给药8周。ELISA法测定各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)及白介素-1β(IL-1β)水平、肺泡灌洗液中性粒细胞(PMN)计数、肺湿干重比值、超氧化物歧化酶(SOD)及肺组织丙二醛(MDA)水平,苏木精-伊红染色法进行大鼠肺组织病理学检查,实时定量PCR检测大鼠肺组织NF-κB/P65及P38/MAPK mRNA水平,Western blot检测大鼠肺组织p-NF-κB/P65、NF-κB/P65、P38/MAPK、p-P38/MAPK蛋白水平。结果 与模型组比较,GQL各剂量组大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平、肺泡灌洗液PMN计数、肺组织湿干重比值及MDA水平、肺组织NF-κB/P65及P38/MAPK mRNA水平、p- NF-κB/P65、NF-κB/P65、P38/MAPK、p-P38/MAPK蛋白水平显著降低(均P＜0.05),肺组织SOD活性显著升高(P＜0.05),大鼠肺组织病理学明显改善。结论 葛根芩连汤能够显著降低急性肺损伤大鼠体内炎症因子水平,改善肺组织氧化应激损伤及病理学变化,其机制可能与调节MAPK/NF-κB信号通路有关。     

人心房利钠肽对机械通气肺损伤大鼠肺组织NF-κB p65的表达及影响

目的 探讨人心房利钠肽（hANP）对大鼠机械通气性肺损伤（VILI）时炎症因子和NF-κB p65表达的影响.方法 采用高气道压机械通气模式制备机械通气性肺损伤模型.雄性SD大鼠30只随机分为空白对照组、机械通气肺损伤组（HV组）和人心房利钠肽组（HV＋ hANP组）.HV＋hANP组于机械通气30 min静脉注射hANP（0.1g/kg· min）,机械通气4小时时处死大鼠,免疫蛋白印迹法测定肺组织NF-κB p65的表达,酶联免疫吸附法测定肺组织TNF-a和IL-1β含量,计算肺组织湿/干重比（W/D）.结果 与TV组相比,HV组、HV＋ hANP组肺组织NF-κB p65表达明显增加,肺组织TNF-a和IL-1β含量明显上升（P＜0.05）,肺组织W/D明显升高（P＜0.05）;与HV组相比,HV＋ hANP组肺组织NF-κB p65表达明显抑制,肺组织TNF-a和IL-1β含量明显降低（P＜0.05）,肺组织W/D降低（P＜0.05）.结论 人心房利钠肽通过抑制肺组织NF-κB p65表达,减轻肺部炎症反应,从而减轻大鼠机械通气所致肺损伤.     

抑制炎症反应治疗急性肺损伤的实验研究

目的通过观察急性肺损伤（ALI）大鼠血液和肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒ等炎性细胞因子的变化,探讨抑制炎症反应在治疗急性肺损伤中的作用。方法应用气管内滴入内毒素（LPS）复制大鼠急性肺损伤模型。将48只大鼠随机分成4组：对照组（N组）、LPS组、N-乙酰半胱氨酸（NAC）治疗组（NAC组）、NAC联合地塞米松（Dex）治疗组（NAC＋Dex组）,采用免疫印迹法（Western Blotting）检测NF-κΒ的含量,采用RT-PCR检测肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒmRNA的表达,并采用放免检测血清及支气管肺泡灌洗液（BALF）中的IL-6、TNF-α的含量。结果LPS组大鼠肺病理可见明显的肺损伤表现,NAC组及NAC＋Dex组肺组织病理改变明显减轻;NAC组及NAC＋Dex组肺NF-κB,肺IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒmRNA表达水平及血清和BALF中的IL-6、TNF-α含量明显高于N组（P〈0.01）,而明显低于LPS组（P〈0.05）。结论NAC、Dex等可以抑制炎症反应,减少炎性介质的释放从而减轻肺损伤的程度,达到防治急性肺损伤的目的。     

己酮可可碱对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用

目的 观察己酮可可碱对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠相关肺损伤的保护作用,并探讨其可能的发病机制.方法 36只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组.采用5%牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射的方法,复制大鼠SAP相关肺损伤模型.治疗组在模型制作前30min给予己酮可可碱.12h后分别对胰腺损伤、肺损伤程度进行病理评分,测定肺系数、胰腺湿重、血清淀粉酶,用ELISA法检测血清和支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6、IL-1β含量,用半定量RT-PCR法检测肺组织中NF-κB p65 mRNA的表达.结果与模型组比较,治疗组胰腺及肺损伤程度明显减轻;其血清和支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显下降,肺组织中NF-κB p65 mRNA的表达亦明显减少.结论己酮可可碱对SAP相关急性肺损伤具有保护作用,其机制可能与抑制肺组织中NF-κB p65 mRNA的表达,从而抑制促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β的产生相关.     

大鼠输血相关性急性肺损伤后活化巨噬细胞表面TLR4及CD40的表达情况

目的:研究大鼠输血相关性急性肺损伤后活化巨噬细胞表面TLR4及CD40的表达情况。方法:选择SD大鼠作为实验动物,依次输注脂多糖和血浆,建立输血相关性急性肺损伤(TRALI)动物模型,取肺组织测定湿干比以及TLR4、NF-κB、CD40、TNF-α、IL-1β、MIP-2、GRP78的mRNA表达量,取血清检测TNF-α、IL-1β、MIP-2的含量,取外周血巨噬细胞检测TLR4、NF-κB、CD40的mRNA表达量。结果:TRALI组大鼠肺组织湿干比显著高于Sham组;TRALI组大鼠巨噬细胞中TLR4、NF-kB、CD40的mRNA表达量均显著高于Sham组;TRALI组大鼠肺组织中TLR4、NF-kB、CD40、TNF-α、IL-1β、MIP-2、GRP78的mRNA表达量均显著高于Sham组;TRALI组大鼠血清中、TNF-α、IL-1β、MIP-2的含量显著高于Sham组;TRALI组大鼠肺脏组织中SOD、GSH的含量低于Sham组,MDA、8-OhdG含量高于Sham组。结论:大鼠输血相关性急性肺损伤后活化巨噬细胞表面TLR4及CD40的表达量显著升高,进而会通过炎症反应、氧化应激反应、内质网应激等环节来造成肺损伤。     

HMGB1基因敲除通过抑制TLR4/NF-κB通路减轻脓毒症小鼠急性肺损伤

目的 研究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)基因敲除减轻脓毒症小鼠急性肺损伤及抑制Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路的作用。方法 野生型(WT)小鼠分为WT-Sham组和WT-模型组,HMGB1基因敲除(KO)小鼠分为KO-Sham组和KO-模型组。WT-模型组和KO-模型组采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症ALI模型,WT-Sham组和KO-Sham组进行假手术操作。造模后24 h,检测动脉血氧分压(PaO₂),计算氧合指数(OI),检测肺组织病理改变,计算肺损伤评分,检测血清及肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、活性氧簇(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的浓度,肺组织中HMGB1、TLR4、核NF-κB的表达。结果 WT-模型组的PaO₂、OI、血清及肺组织SOD的浓度低于WT-Sham组,肺损伤评分、血清及肺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、MDA的浓度、肺组织中HMGB1、TLR4、核NF-κB的表达水平高于WT-Sham组(P<0...     

基于TLR4/MyD88/NF-κB通路异甘草素对大鼠颅脑外伤后炎症反应及Th1/Th2失衡的影响

【摘要】 目的 探讨异甘草素（ISL)通过介导Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB (NF-κB)通路对大鼠颅脑外伤 （TBI)炎症反应及Th1/Th2细胞失衡的影响。方法将SPF级大鼠随机分为模型组、ISL低剂量组（20 mg·kg-1）、ISL高剂量组（40 mg·kg-1）、阳性药物组（甘油果糖氯化钠,40 mg·kg-1）,每组10只,另设对照组。HE染色观察大鼠脑组织病理学变化;比较血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-4（IL-4）、γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,脑组织TLR4、My D88、NF-κB p65 mRNA及TLR4、My D88、NF-κB p65、磷酸化核转录因子-κB p65（p-NF-κB p65）蛋白表达。结果与对照组比较,模型组血清IL-1β、IL-4、TNF-α水平,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平升高,血清IFN-γ水平降低（均P＜0.05）;与模型组比较,ISL低剂量组、ISL高剂量组、阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）;与ISL低剂量组比较,ISL高剂量组、阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）;与ISL高剂量组比较,阳性药物组血清IFN-γ水平升高,IL-1β、IL-4、TNF-α水平降低,脑组织TLR4、My D88 mRNA及TLR4、My D88、p-NF-κB p65蛋白水平降低（均P＜0.05）。HE结果显示,ISL低剂量组、ISL高剂量组、阳性药物组脑组织病变较模型组出现不同程度改善,ISL高剂量组和阳性药物组改善尤为明显。结论ISL能有效改善大鼠TBI炎性反应、调节Th1/Th2细胞平衡,可能基于调控TLR4/MyD88/NF-κB通路相关mRNA和蛋白表达发挥作用。     

体质指数与大鼠急性肺损伤模型的肺损伤程度相关性研究

目的：急性肺损伤（Acute lung injury,ALI）发病机制复杂,死亡率高。本研究从大鼠体质指数（Body mass index,BMI）及血脂水平角度出发探讨脂质代谢是否在ALI发病机制中起着调控作用及其可能途径。方法：36只雄性SD（Sprague-dawley,SD）大鼠随机平均分为对照组（C组）、模型组（OA组）、高脂肥胖组（C-H组）、高脂肥胖模型组（O-H组）,造模后预定时间点处死大鼠并取肺组织作湿重/干重比值（W/D）、肺组织病理学观察、肺组织核因子-κB（Nuclear factor -kappa B,NF-κB）表达水平,及测定炎症因子白细胞介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）、肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor α,TNF-α）等。结果：O-H组在肺损伤病理学评分以及IL-1β、TNF-α 3项指标均较OA组程度升高（P＜0.05）,前者肺组织NF-κBmRNA表达水平较后者明显上调,C-H组较C组相比也存在上述指标的显著差异。结论：在相同单位剂量油酸的诱导下,从mRNA及炎症因子水平提示了BMI水平与肺损伤程度呈正相关,是影响肺损伤程度的独立因子,为临床防治提供一定的参考价值。     

熊果酸对脓毒症模型大鼠肺损伤的保护作用及对HMGB1/TLR4/NF-κB通路的影响

目的:观察熊果酸对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用及对HMGB1/TLR4/NF-κB通路的影响。方法:Wistar大鼠75只随机分为假手术组,模型对照组,熊果酸低剂量组(20 mg·kg~(-1))、中剂量组(40 mg·kg~(-1))、高剂量组(80 mg·kg~(-1)),每组15只。采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠脓毒症模型,术后立即及8 h后尾静脉注射给药。造模后24 h处死大鼠,苏木精-伊红染色法评估肺组织病理学变化;ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平;硫代巴比妥酸比色法检测肺组织匀浆丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;Western blot法检测肺组织中高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)、Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠肺组织中MDA、HMGB1、TLR4、NF-κB表达显著增加,SOD活性下降,血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,熊果酸各剂量组大鼠肺组织病理明显改善,MDA、HMGB1、TLR4、NF-κB表达显著降低,SOD活性升高,血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著下降(P<0.01或P<0.01)。结论:熊果酸可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路减轻炎症反应,从而发挥对脓毒症肺损伤的保护作用。     

熊果酸对脓毒症模型大鼠肺损伤的保护作用及对HMGB1/TLR4/NF-κB通路的影响

目的:观察熊果酸对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用及对HMGB1/TLR4/NF-κB通路的影响。方法:Wistar大鼠75只随机分为假手术组,模型对照组,熊果酸低剂量组(20 mg·kg~(-1))、中剂量组(40 mg·kg~(-1))、高剂量组(80 mg·kg~(-1)),每组15只。采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠脓毒症模型,术后立即及8 h后尾静脉注射给药。造模后24 h处死大鼠,苏木精-伊红染色法评估肺组织病理学变化;ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平;硫代巴比妥酸比色法检测肺组织匀浆丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;Western blot法检测肺组织中高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)、Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠肺组织中MDA、HMGB1、TLR4、NF-κB表达显著增加,SOD活性下降,血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高(P0.01);与模型组比较,熊果酸各剂量组大鼠肺组织病理明显改善,MDA、HMGB1、TLR4、NF-κB表达显著降低,SOD活性升高,血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著下降(P0.01或P0.01)。结论:熊果酸可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路减轻炎症反应,从而发挥对脓毒症肺损伤的保护作用。     

乌司他丁减轻老年大鼠髋部骨折后肺损伤程度的实验研究

目的 探讨乌司他丁减轻髋部骨折后肺损伤的作用及相关机制。方法 将24只10月龄SD大鼠随机分为对照组、实验组及干预组,每组8只,后2组制成左侧髋部骨折,其中干预组在造模前给予尾静脉注射乌司他丁50 000 U/kg。造模24 h后处死各组大鼠,检测各组实验动物血清中线粒体DNA（mtDNA）水平,肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平,肺组织中toll样受体-9（TLR9）、转录因子NF-κB表达水平,肺组织干湿质量比（W/D）、病理评分情况。结果 实验组大鼠血清中mtDNA水平,肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6水平,肺组织中TLR9、NF-κB表达水平,肺组织W/D、病理评分情况均高于对照组（ P<0.05）;干预组大鼠血清中mtDNA水平,肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6水平,肺组织中TLR9、NF-κB表达水平,肺组织W/D、病理评分情况均较实验组下降（ P<0.05）,但均未恢复至对照组水平（ P<0.05)。结论 乌司他丁可能通过减少髋部骨折释放的mtDNA,进而降低肺组织中TLR9、NF-κB表达及下游的炎症因子水平,最终达到保护肺功能的作用。     

过氧化物酶体增殖物激活受体-γ激动剂对急性胰腺炎大鼠肺损伤的保护机制研究

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ激动剂对胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用及调节机制。方法 72只大鼠随机分为假手术组、模型组和罗格列酮组,各组再分为术后6 h、12 h、24 h组。模型组采用两次腹腔注射L-精氨酸制备SAP模型,罗格列酮组术后30 min静脉注射10%罗格列酮6 mg/kg,假手术组腹腔注射等体积生理盐水。观察大鼠肺病理改变,测定肺TLR4、NF-κB、肺髓过氧化物酶活性、肺干/湿重比、血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量。使用重复测量方差分析,SNK-q检验比较差异。结果 ROSI组大鼠肺组织病理损害较SAP组减轻;与SAP组比较,肺内NF-κB、TLR4蛋白下降(P0.05),髓过氧化物酶活性及肺干/湿重比降低(P0.05);ROSI组外周血IL-1β、IL-6、TNF-α含量与SAP组比较明显下降(P0.05)。结论 PPAR-γ激动剂能减轻急性胰腺炎大鼠肺组织的损伤,抑制NF-κB、TLR4表达,降低促炎细胞因子水平,推测PPAR-γ激动剂对NF-κB/TLR4通路的调节可能是胰腺炎的保护机制之一。