三种方法对大鼠视网膜固定效果的比较研究

目的研究三种不同方法对大鼠视网膜石蜡切片的固定效果。方法根据离体眼球的不同固定方法,将9只SD大鼠随机分为A组(改良固定液固定,n=3)、B组(4%多聚甲醛固定,n=3)和C组(4%多聚甲醛心脏灌注法固定,n=3)。24 h后制作标本进行苏木精-伊红染色,分析比较固定效果。结果 A组固定的眼杯不变形,B组固定的有少许变形,C组固定的基本不变形。显微镜观察显示A组眼球视网膜各层组织结构完整,B组和C组视网膜均有断层、分离和脱片等现象。结论改良固定液固定眼球的方法优于单纯4%多聚甲醛和4%多聚甲醛心脏灌注固定的方法,适用于视网膜石蜡切片的后期研究。     

小鼠眼球标本石蜡切片制作方法的改进

目的探讨小鼠眼球标本石蜡切片的制作方法。方法处死C57BL/6小鼠,取眼球固定于质量分数为4%中性多聚甲醛中,通过严格控制脱水与浸蜡程序并制成石蜡切片,经HE染色后在显微镜下观察。结果眼球外形均无明显变形和收缩;显微镜下视网膜组织结构完整清晰,各层细胞排列紧密,无明显裂隙。结论该方法适合小鼠眼球标本切片,尤其是视网膜切片的一种有效制作方法。     

经颈总动脉灌注固定大鼠海马组织30例体会分析

目的观察经颈总动脉灌注固定对大鼠海马组织灌注效果的影响。方法 30只SD大鼠经颈总动脉插入灌注针,灌注生理盐水后再灌注4%多聚甲醛,断头取脑,4%多聚甲醛中浸泡固定24 h后制作石蜡切片,HE染色及免疫组化染色后观察海马组织形态。结果经颈总动脉灌注固定大鼠海马组织,具有灌注时间短、灌注液体量少、灌注效率高等优点;固定后的海马组织切片染色效果良好,切片染色清晰,染色满意;海马组织中的神经元排列紧密有序,形态规则正常。结论经颈总动脉灌注固定海马组织是一种可以应用于基础研究的组织灌注固定方法。     

不同固定液对大鼠肝脏组织石蜡切片质量的影响

目的 探讨不同固定液对大鼠肝脏组织石蜡切片HE染色效果.方法 应用SD大鼠肝脏组织分别在动物空腹和空腹条件下,选择三种常规的固定液：体积分数10％甲醛固定液、Bouin＇s固定液和改良Davidson＇s固定液,对肝脏组织进行固定、石蜡包埋、切片和HE染色,观察动物空腹与未空腹条件下组织固定对切片质量的影响,以及不同固定液对肝脏组织切片质量的影响.结果 在未空腹的条件下,肝脏组织结构显示不清晰,呈水样变性的形态改变;Bouin＇s固定液和改良Davidson＇s固定液固定的组织结构更清晰,但是切片色泽不如体积分数10％甲醛固定液的鲜亮.结论 大鼠是否处于空腹状态对肝脏组织结构影响很大,三种固定方法对大鼠肝脏组织切片质量影响差异不大.     

不同固定方法对新生大鼠脑组织切片的影响

目的：观察应用与不应用多聚甲醛心脏灌注这两种不同固定方法对新生大鼠脑组织切片的影响。方法：20只新生大鼠随机化分为灌注组与非灌注组，每组各10只。灌注组经麻醉后经左心室插入灌流针，先灌注冰冻无菌生理盐水再灌注4％多聚甲醛，灌注同时切开小部分肝脏，断头取脑，多聚甲醛浸泡固定24小时，再经70％、80％、95％、100％乙醇及二甲苯浸泡，石蜡包埋。非灌注组新生大鼠经麻醉后直接断头取脑，其它固定方法同灌注组。进行石蜡切片HE染色观察鼠脑组织结构。结果：灌注组脑组织切片组织结构清晰，无共染现象，组织切片完整均匀，皮层及海马区组织、细胞形态正常，未见扩张的毛细血管。非灌注组大脑皮层及海马区组织水肿，细胞周围间隙增宽，胞体肿胀，有些细胞境界模糊不清，核着色不良，部分视野可见扩张的毛细血管，血管内有血细胞样物。结论：应用多聚甲醛心脏灌注对新生大鼠脑组织的固定效果较好，是应用动物脑组织切片进行形态学研究实验的必不可少的步骤。     

大鼠视网膜、视神经冰冻切片适宜厚度探索

目的 针对大鼠眼球冰冻切片难度高,各研究对眼球冰冻切片厚度差异较大的问题,探索大鼠视网膜、视神经冰冻切片适宜的厚度.方法 将24只SD大鼠随机分为3组,使用传统的石蜡切片行HE染色做对照,分别对不同厚度的冰冻切片做HE染色和FITC-lectin荧光染色进行观察（5μm、6μm、8μm、10μm、12μm、15 μm,n=8）.结果 视网膜冰冻切片HE染色显示6μm和8μm的大鼠视网膜各层细胞可看到完整细胞,密疏适宜,胞核清楚,核膜光滑完整,神经纤维层厚度均匀;6μm视神经冰冻切片HE染色显示视神经纤维排列密集、规则,染色均匀;免疫组化染色结果显示5μm、6μm和8μm的大鼠视网膜冰冻切片FITC-lectin荧光染色后层次清晰,lectin阳性细胞呈绿色分枝状,在神经节细胞及内网状层清晰可见,亦可在外网状层看到少量绿色lectin阳性细胞,10 μm及15 μm的大鼠视网膜由于各层细胞重叠严重,无法看到绿色lectin阳性细胞.6μm的视神经冰冻切片FITC-lectin荧光染色显示清晰可见的活化小胶质细胞,胞体变肥大,突起缩短,呈阿米巴样变化.结论 6 μm的视神经冰冻切片以及6～8 μm的视网膜冰冻切片,可以得到重复性切片,也可以达到理想的免疫组化染色效果。     

三种固定液对大、小鼠肠道组织石蜡切片质量的影响

目的对比三种固定液对大、小鼠肠道组织石蜡切片质量的影响,优选大、小鼠肠道组织切片固定液。方法选择三种常用的固定液:10%中性福尔马林固定液,Bouin’s固定液,改良Davidson’s固定液,对SD大鼠和KM小鼠小肠组织进行固定,常规制作石蜡切片、HE染色,对比观察其染色效果。结果三种固定液对大、小鼠肠道组织石蜡切片质量存在影响,单纯福尔马林固定的切片存在肠粘膜上皮脱落、坏死的假象;Bouin’s固定液和改良Davidson’s固定液则可避免这一假象的出现,而且切片结构更精细、清晰,但是,HE染色的色彩不如单纯福尔马林固定液的鲜艳。结论 Bouin’s固定液和改良Davidson’s固定液固定的大、小鼠肠道组织的石蜡切片质量优于10%中性福尔马林固定液。     

三种固定液对眼球组织固定效果的比较研究

目的从甲醛-戊二醛混合液、Davidoson液和10％福尔马林三种固定液中优选一种,用于对眼球组织的固定。方法取SD大鼠和新西兰兔的双侧眼球,分别用三种固定液固定,然后做成5μm厚的切片并HE染色,观察各自的组织结构及染色效果。结果用甲醛一戊二醛混合液固定的眼球组织,大鼠眼球切片厚度5μm,而新西兰兔切片时厚度8μm,才能切出完整的切片;Davidoson液和10％福尔马林固定的眼球,切片厚度5μm即可。HE染色后,10％福尔马林固定的眼球组织结构不完整,而Davidoson液固定后的眼球,结构清晰、组织完整。结论Davidoson液对大鼠和新西兰兔的眼球固定效果均佳,甲醛-戊二醛混合液对大鼠眼球固定效果也较佳。     

大鼠眼部晶状体标本石蜡切片的改良制作方法

目的:探讨应用改良固定液和加压脱水法制作大鼠晶状体石蜡切片的效果。方法:将大鼠晶状体投入到由甲醛、冰醋酸和丙酮组成的改良固定液中固定后制成石蜡切片,经HE染色后在显微镜下观察。结果:晶状体组织结构完整清楚。结论:此改良固定液和加压脱水法优于其它方法,是适合大鼠眼部晶状体标本石蜡切片的一种有效方法。     

大鼠眼内组织水通道蛋白1的表达

目的：观察水通道蛋白1（AQP1）在正常大鼠眼内组织的表达部位.方法：雄性Wistar大鼠断头放血取出眼球,4%多聚甲醛固定,石蜡包埋.做矢状面5μm连续切片,每个标本切3张,分别用于AQP1免疫组化染色、阴性对照和HE染色,用已知有AQP1表达的大鼠肾脏肾小管切片为阳性对照.结果：光镜下观察AQP1免疫组化染色切片,细胞中出现棕色粗大颗粒为阳性,反之为阴性.大鼠眼内组织AQP1阳性表达部位有：（1）角膜内皮细胞;（2）虹膜上皮细胞;（3）晶状体上皮细胞;（4）睫状体非色素上皮（NPE）细胞;（5）视网膜神经节细胞层、内核层;（6）视神经胶质细胞.结论：AQP1在眼内与水代谢有关的多个部位呈阳性表达.     

三种固定液对神经纤维冰冻切片固定效果之比较

目的:观察比较10%甲醛、丙酮和Bouin三种固定液对神经纤维的固定效果,为临床做出更好的神经纤维的快速冰冻切片提供实验基础.方法:取健康大鼠双侧坐骨神经,冰冻切片后分别用三种固定液固定,然后做HE染色,观察各自的组织结构及染色情况.结果:10%甲醛固定的神经纤维组织结构较清楚但是组织发生收缩;丙酮固定的神经纤维染色效果较好,组织没有发生收缩;Bouin固定液固定的神经纤维结构和染色都比较好但是组织收缩最明显.结论:三种固定液都可用于固定神经纤维,但丙酮效果最好.     

三种不同固定液对小鼠组织过碘酸雪夫染色效果比较

目的 比较小鼠肝脏、肾脏、小肠三种组织在质量分数4％多聚甲醛液、Carnoy's液、Bouin,s液三种固定液不同固定时间下的制片质量和过碘酸雪夫染色(PAS)效果,筛选出一种最为适用的固定方法.方法 取成年雄性C57BL/6小鼠肝脏、肾脏、小肠,分别固定于三种固定液,固定时间分别是质量分数4％多聚甲醛液:24h、48 h、72 h;Camoy's液:4h、8h、12 h;Bouin's液:12 h、24 h、48 h,充分固定后,常规制作石蜡切片,然后进行PAS染色,对比观察染色效果.结果 三种固定液对不同组织、不同固定时间下PAS染色结果存在差异.肝脏、肾脏、小肠经Camoy's液处理12h后PAS效果最佳,质量分数4％多聚甲醛液固定24 h基本满足观察检测效果,而经Bouin's液固定组织染色效果相对较差.结论 PAS反应对固定液和固定时间具有选择性,Camoy's液是组织进行PAS染色的理想固定液,但从固定效果、重复性、安全性、成本等多因素综合考虑,在PAS反应中,质量分数4％多聚甲醛液可以替代Camoy's液.     

不同固定方法对冰冻切片间接免疫荧光结果的影响

目的：寻找一种冰冻切片间接免疫荧光染色以及HE染色过程中最佳的组织固定方法。方法：取健康成年小鼠双侧睾丸冰冻切片,分别采用3种方法进行固定：①丙酮4℃固定15分钟,-20℃保存24h;②95％酒精4℃固定15分钟,-20℃保存24h;③切片-20℃保存24h后,再用4℃丙酮固定15分钟。然后做间接免疫荧光和HE染色,观察组织结构及染色情况。结果：4℃丙酮固定的组织切片HE染色以及间接免疫荧光效果良好。-20℃保存24h后,4℃丙酮固定15分钟的冰冻切片HE染色和间接免疫荧光结果最差。结论：酒精和丙酮都可以固定组织,但是4℃丙酮固定效果最好。     

冰冻切片免疫荧光中组织固定方法研究

目的通过对3种不同固定液对肝组织冰冻切片免疫荧光过程中固定情况的比较,探寻保存抗原最佳固定效果的方法。方法取Wistar大鼠肝脏,OCT包埋后置于冰冻机切片,片厚8～10μm。分别用10%甲醛、丙酮和1%多聚甲醛3种固定液固定后,进行免疫荧光染色,经Image-pro图像分析软件及单因素方差分析统计,比较其染色效果。结果丙酮固定的肝组织的免疫荧光组织结构清晰,核浆对比度好,其Heppar肝细胞抗原的阳性面积为(73.2±1.2)%,与10%甲醛(46.2±1.5)%及1%多聚甲醛(62.2±1.1)%固定的肝组织比较差异有统计学意义。结论在保存肝组织中抗原活性方面,相对于10%甲醛和1%多聚甲醛液,以丙酮固定液固定效果最好。     

组织检材的PCR性别鉴定研究

作者用引物Ｙ３、Ｙ４通过ＰＣＲ技术对微量陈旧的组织检材进行了扩增，扩增的靶序列位于Ｙ染色体ＤＮＡ特异３．４Ｋｂ重复序列中，产物为４４６ｐｂ。检材是新鲜组织、甲醛固定组织、石蜡包埋组织和ＨＥ染色切片组织。检材的保存时间从凡小时到五年。结果表明：新鲜组织，１０％中性缓冲甲醛固定一年以下的组织和石蜡包埋３年以下的组织均可做为ＰＣＲ性别鉴定的良好检材。     

Warthin-Starry银染色与Grams染色在诊断组织中幽门螺杆菌感染的作用比较

目的比较WarthinStarry(WS)银染色与Grams染色在组织学诊断幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,HP)感染中的作用。方法HE染色法判断所选组织的病理分型并进行分组;用WS银染色法结合Grams染色法判断所选组织HP的感染状况,比较两种不同染色方法的染色结果。结果WS银染色结果阳性率为85.5%,Grams染色结果阳性率为87.74%,两者比较差别无统计学意义(P>0.05)。结论WS银染色与Grams染色在组织学诊断HP感染中的作用无显著性差别,Grams染色可用于胃组织石蜡切片中HP感染的检查。