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人分泌型肿瘤坏死因子相关激活诱导因子基因的克隆及测序 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 克隆人分泌型肿瘤坏殛因子相关激活诱导因子(sTRANCE)的编码区cDNA片段。方法 从人淋巴结组织提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增人sTRANCE基因编码区序列,将其克隆至pMD18-T载体中,并行序列测定。结果 克隆获得的744bp片段与文献报道的人sTRANCE基因编码区cDNA序列一致。结论 本研究为进一步研究sTRANCE的生物学性能和用于肿瘤生物治疗的可能性打下了基础。 相似文献
3.
人GDNF基因的克隆 总被引:2,自引:0,他引:2
克隆可表达人胶质细胞源性神经营养因子的基因。方法;从脑胶质细胞瘤患术后的脑瘤组织中提取总RNA,以RT-PCR方法扩增出了一般约558bp的cDNA片段,将这一片段克隆于pUC18载体中,进行全序列分析。结果:证实该研究所克隆的cDNA是编码正确的GDNF基因。 相似文献
4.
尿激酶受体反义RNA表达质粒的构建 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 构建能在哺乳动物细胞中表达尿激酶受体(uPAR)反义RNA的表达质粒pURAS。方法 采用RT-PCR方法扩增并克隆尿激酶受体(uPAR)cDNA5’端-46 ̄454bp一段为500bp的顺序,利用DNA重组技术将该片段反向插入表达载体pcDNA3的CMV启动子下游。结果 限制性内切酶分析和DNA顺序分析证实RT-PCR获得uPAR cDNA片段与文献报道相吻合;重组质粒pURAS转染肺癌细 相似文献
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目的:克隆人淋巴毒素cDNA并测序。方法:采用RT-PCR技术,从PHA/PMA活化的人T细胞系Jurkat细胞总RNA中扩增人淋巴毒素cDNA,并定向克隆于pUC18、pUC19质粒载体,Sanger双脱氧链终止法测序。结果:RT-PCR扩增出一个541bp的DNA片段,限制性内切酶图谱分析和测序结果显示,该541bp片段为编码人淋巴毒素成熟肽的cDNA,与公布的人淋巴毒素cDNA序列完全一致。结论:本实验成功地克隆了人淋巴毒素cDNA,为在大肠杆菌表达人淋巴毒素并进一步研究其功能,以及淋巴毒素的开发与临床应用奠定了基础。 相似文献
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大鼠β—防御素rBD—2的分子克隆及其在皮肤组织的诱导表达 总被引:3,自引:0,他引:3
从大鼠皮肤提取总RNA,以P15′→3′TTCAGTCATGAGGATCCATTAC和P25′→3′GGTTCTTGGTCTTTTTATCTAC引物,采用RT-PCR技术扩增得到一cDNA片段,经核苷酸序列测定,并根据其推导的氨基酸序列与人β-防御素-2和大鼠β-防御素-1进行同源性比较,结果显示,该cDNA片段编码的氨基酸序列具高度同源性(其成熟肽与hBD-2的同一性为50%,相似性为32%),均含6个典型的半胱氨酸,这表明所克隆的cDNA为大鼠β-防御素-2亚类,因此命名为rBD-2。大鼠β-防御素-2基因在大肠杆菌感染性损伤皮肤组织中的表达明显增强,与人hBD-2的表达相似,能够被诱导表达。以上结果提示,β-防御素-2可能是皮肤组织对感染性损伤的防御反应所产生的重要免疫介质。 相似文献
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目的:克隆人淋巴毒素cDNA并测序。方法:采用RT-PCR技术,从PHA/PMA活化的T细胞系Jurkat细胞总RNA中扩增入淋巴毒素cDNA并定向克隆于pUC18,pUC19质粒载体Sanger双脱氧链终止法测序,结果:RT-PCR扩增出一个541bp的DNA片段,限制性内切酶图谱分析和测序结果显示。该541bp片段为编码人淋巴毒素成熟肽的cDNA,与公布的人淋巴毒素cDNA序列完全一致,结论; 相似文献
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采用5'加端PCR从K562cDNA文库中扩增出含锌指结构域的cDNA基因片段,重组至pGEM7ZDNA载体中。通过PCR及Southern印迹杂交初步从K562cDNA文库中筛选出9个含锌指基因片段的重组克隆。经DNA序列分析和基因库检索,发现有2个克隆的序列与巳知基因差异显著,有可能为新的锌指蛋白基因片段。 相似文献
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构建能在哺乳动物细胞中表达尿激酶受体(uPAR)反义RNA的表达质粒pURAS。方法采用RT-PCR方法扩增并克隆尿激酶受体(uPAR)cDNA5’端-46~454bp一段长500bp的顺序,利用DNA重组技术将该片段反向插入表达载体pcDNA3的CMV启动子下游。结果限制性内切酶分析和DNA顺序分析证实RT-PCR获得的uPARcDNA片段与文献报道相吻合;重组质粒pURAS转染肺癌细胞株95D,NorthernBlot证实转染细胞克隆有uPAR反义RNA的表达。结论重组质粒pURAS能在肺癌细胞株95D中表达尿激酶受体反义RNA,尿激酶受体(uPAR)反义RNA表达质粒的构建获得成功。 相似文献
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采用热酚法从登革2型病毒43株(D2-43)感染的C6/36细胞中提取了病毒RNA,以病毒RNA为模板,进行D2-43株NS3基因cDNA片段的反转录-PCR扩增,片段长度为1176bp。将扩增的cDNA片段克隆到T载体pBluescript-ksⅡ中。通过双脱氧法测定了cDNA片段序列,与国际标准株NGC株序列一致。 相似文献
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目的 为在大肠杆菌表达幽门螺杆菌CagA蛋白,建立ELISA法检测CagA抗体,克隆幽门螺杆菌cagA基因片段。方法 根据cagA基因序列,设计引物PCR扩增cagA基因片段,用T-A克隆的方法将PCR产物克隆入质粒载体pGEM-T,并转化大肠杆菌JMI109。结果 经蓝白斑筛选,PCR及限制性内切酶酶切分析,获得cagA基因片段的克隆,序列测定结果与文献报道一致。结论 PCR产物可采用T-A法克 相似文献
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本文报道了利用PCR技术检测了34例丙型肝炎病毒E2/NS1基因的cDNA并与5’非编码区基因的cDNA检测技术进行了比较,应用pUC18质粒对此扩增片段进行了克隆与序列分析,结果表明克隆片段HCV-S1为我国主要流行的HCV基围亚型-II型,其与HCV-II型的核苷酸与氨基酸的同源性均在90%以上,序列分析表明该片段富含脯氨酸和胱氨酸,可能具有复杂的空间构型,且与4个糖基化位点一样保持稳定,另外,在HCV-S1片段的3’端有一36个核苷酸的区域,其变化可能具有型特异性 相似文献
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HCV E2/NS1基因的PCR检测克隆与序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
本文报道了利用PCR技术检测了34例丙型肝炎病毒E2/NS1基因的cDNA并与5非编码区基因的cDNA检测技术进行了比较,应用pUC18质粒对此扩增片段进行了克隆与序列分析,结果表明克隆片段HCV-S1为我国主要流行的HCV基因亚型-II型,其与HCV-II型的核苷酸与氨基酸的同源性均在90%以上,序列分析表明该片段富含脯氨酸和胱氨酸,可能具有复杂的空间构型,且与4个糖基化位点一样保持稳定,另外, 相似文献
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克隆人肝脏再生增强因子(hALR)cDRNA,构建重组表达载体并对其诱导表达,纯化。方法:提取胎儿肝组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增出hALRcDNA,克隆于载体pGEM-T,酶切鉴定后亚克隆至表达载体pGEX-4T-3,测序证实序列正确并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白GST-hALR,表达物通过谷胱甘肽Sepharose4B亲和层析纯化后进行Thrombin酶切, 相似文献
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目的 克隆人软骨来源形态发生蛋白-1(CDMP-1)成熟肽编码区的基因片段。方法 用异流氰酸胍一步法从人软骨组织和酶消化法原代培养的软骨细胞中分别抽提总RNA,利用RT-PCR方法扩增出人CDMP-1成熟区的基因片段(约1.0kbp),将所得基因片段插入pBluescript)质粒载体,重组质粒DNA,通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果 从罗骨组织直接取到总RNA,其质量与从等重量软骨 相似文献
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人CD80基因的cDNA克隆及其在肿瘤细胞中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
采用巢式PCR的方法从Raji细胞中扩增出人CD80 cDNA,并将这一cDNA克隆入载体pUC19中,经PCR扩增和限制性酶切分析,进行初步鉴定后,再将入CD80cDNA克隆到pcDNA表达载体上,构建成pCD-CD80重组质粒。应用脂质本介导的基因转移技术将这一表达载体导入小鼠黑色素瘤B16细胞后,用SABC法进行瞬时表达的检测。结果表明,转染后48h就具有明显人CD80基因的表达产物。 相似文献
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使用一种随机引物“P2(CGGCCGGTA)对正常Wistar雄性大鼠DNA基因组进行RAPD-PCR分析,扩增产物呈现出多态性DNA图谱,其中DNA片段分子大小依次为:1439、1334、1122、708、575、537、479、316bp。RAPD-PCR技术简便、快速。 相似文献
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目的:克隆可表达人胶质细胞源性神经营养因子的基因。方法:从脑胶质细胞瘤患者术后的脑瘤组织中提取总RNA,以RTPCR方法扩增出了一段约558bp的cDNA片段,将这一片段克隆于pUC18载体中,进行全序列分析。结果:证实该研究所克隆的cDNA是编码正确的人GDNF基因。与发表于GeneBank上的序列相比,发现该研究克隆的基因有一段78bp的核苷酸序列缺失,但不影响密码子的阅读框。结论:克隆到了编码正确的人GDNF的cDNA全序列,对帕金森病基因治疗的基础研究及临床应用具有重要意义。 相似文献
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大鼠肝再生增强因子编码区的cDNA克隆和原核表达 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:克隆大鼠肝再生增强因子(ALR)编码区cDNA并进行原核表达。方法:提取新生大鼠肝脏总RNA为模板,以寡聚dT为引物逆转录合成第一链cDNA,再以我们设计的PCR引物进行PCR扩增获取大鼠肝再生增强因子编码区双链cDNA;以基因重组技术构建大鼠ALR的原核表达质粒,然后将重组表达质粒转化至大肠杆菌内以IPTG诱导表达。结果:成功克隆出大鼠肝再生增强因子编码区cDNA,其序列与以前报道的完全一致;构建的大鼠ALR原核表达重组质粒在大肠杆菌内高效表达rALR融合蛋白,其表达量占菌体蛋白30%。结论:大鼠肝再生增强因子编码区cDNA的克隆及其在大肠杆菌的高效表达为ALR的深入研究奠定了基础。 相似文献