两首活血化瘀方干预急性心肌缺血心肌细胞凋亡与Bcl—2、Bax表达的实验研究

目的 观察两首活血化瘀方对心肌细胞凋亡与相关蛋白表达干预的作用.方法 采用结扎冠状动脉左前降支的方法 复制急性心肌缺血模型,20条犬随机分成对照组、心肌缺血组、桃红四物汤以及丹参饮组,每组5条.分别采用HE染色、DNA 末端标记法( TUNEL) 以及免疫组化法观察心肌组织病理变化、心肌细胞凋亡与相关蛋白表达的变化.结果 对照组无细胞变性与坏死,仅见极少量凋亡阳性细胞;心肌缺血组有明显心肌组织坏死,心肌细胞凋亡增多,Bcl-2的表达明显减少,Bax的表达明显增多,与对照组比较有统计学意义;桃红四物汤以及丹参饮组心肌细胞坏死及凋亡均显著减轻,Bcl-2的表达明显增多,Bax的表达明显减少,与心肌缺血组比较有统计学意义.结论 桃红四物汤以及丹参饮可影响Bcl-2和Bax的表达,有效地抑制心肌细胞坏死及凋亡,减轻心肌细胞损伤,对缺血心肌有保护作用.     

活血化瘀类方抗急性心肌缺血的实验研究

目的：观察活血化瘀类方对犬急性块血心肌的保护作用。方法：采用结扎冠状动脉左前降支的方法复制急性心肌块血模型，实验结束后检测肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)，观察心肌组织病理学变化。结果：心肌块血组CK、LDH含量及MDA水平均明显升高，SOD水平下调，与对照组比较均有统计学意义(P＜0．05)，形态学观察示心肌细胞坏死增多。血府逐瘀汤组、活络效灵丹组、桃红四物汤组、丹参饮组CK、LDH含量及MDA水平均低于心肌块血组，SOD水平上调，与心肌块血组比较有统计学意义(P＜0．05)，与对照组比较无统计学意义，形态学观察示心肌坏死程度较低。失笑散组CK、LDH含量及MDA水平均明显升高，SOD水平下调，与心肌缺血组比较无统计学意义(P＞0．05)。结论：血府逐瘀汤、活络效灵丹、桃红四物汤、丹参饮可有效降低CK、LDH含量及MDA水平，提高SOD水平，减少心肌细胞坏死，对块血心肌有保护作用，各组间比较无统计学意义(P＞0．05)，而失笑散对急性块血心肌无明显保护作用。     

血府逐瘀汤干预急性心肌缺血心肌细胞凋亡与Bcl-2、Bax表达的实验研究

目的观察血府逐瘀汤对心肌细胞凋亡与相关蛋白表达干预的作用。方法采用结扎冠状动脉左前降支的方法复制急性心肌缺血模型,15条犬随机分成对照组、心肌缺血组以及血府逐瘀汤组,每组5条。分别采用HE染色、DNA末端标记法(TUNEL)以及免疫组化法观察心肌组织病理变化、心肌细胞凋亡与相关蛋白表达的变化。结果对照组无细胞变性与坏死,仅见极少量凋亡阳性细胞;心肌缺血组有明显心肌组织坏死,心肌细胞凋亡增多,Bcl-2的表达明显减少,Bax的表达明显增多,与对照组比较有统计学意义(P<0.05);血府逐瘀汤组心肌细胞坏死及凋亡均显著减轻,Bcl-2的表达明显增多,Bax的表达明显减少,与心肌缺血组比较有统计学意义(P<0.05)。结论血府逐瘀汤可影响Bcl-2和Bax的表达,有效地抑制心肌细胞坏死及凋亡,减轻心肌细胞损伤,对缺血心肌有保护作用。     

硝酸甘油对持续缺血模型犬心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨硝酸甘油对持续缺血心肌细胞凋亡的影响。方法 采用动物犬，随机分为3组。采用冠脉结扎法，建立急性心肌梗死动物模型。以活结结扎左冠状动脉的前降支，造成持续阻断冠脉血流。以缺口末端标记法(TUNEL)标记凋亡细胞。结果 凋亡细胞原位标记与半定量分析表明：硝酸甘油处理组与持续缺血组比较心肌细胞凋亡程度明显降低。结论 持续缺血可导致心肌细胞坏死和凋亡；硝酸甘油预处理能明显减轻心肌细胞坏死和凋亡程度。     

RNA干扰技术下调Toll样受体4对急性心肌缺血坏死的影响

目的 观察利用RNA干扰（RNAi）技术下调Toll样受体4（TLR4）的表达对异丙肾上腺素（ISO）诱导的急性缺血坏死心肌细胞的影响。方法 采用大剂量ISO注射液连续腹腔注射3天，建立小鼠急性心肌缺血坏死模型，分为正常对照组、心肌缺血组（MI组）、心肌缺血加阴性质粒处理组（PCN组）和心肌缺血加siRNA-TLR4处理组（siRNA-TLR4组），通过构建好的靶向TLR4基因的siRNA-TLR4质粒来下调小鼠体内TLR4基因的表达，取心肌组织进行HE染色，观察各组心肌组织缺血坏死情况，Western blot检测各组心肌组织TLR4的表达变化，利用TUNEL法检测各组心肌细胞凋亡率。结果 siRNA-TLR4组心肌细胞TLR4的表达水平与正常对照组、MI组、PCN组相比明显下调，siRNA-TLR4组心肌缺血损伤较MI组和PCN组明显减轻，siRNA-TLR4组心肌细胞凋亡率显著低于MI组和PCN组（9.39%±2.61%比61.44%±2.34%和57.21%±4.40%）。结论 利用RNAi可有效下调小鼠体内TLR4的表达，改善ISO诱导的急性心肌缺血坏死，提示RNAi可为急性心肌缺血坏死治疗提供新的思路。     

预缺血对大鼠心肌缺血再灌注凋亡的影响

为观察大鼠心肌缺血再灌注的致凋亡作用和再灌注早期不同阶段中性粒细胞浸润与凋亡的关系及预缺血对凋亡的影响 ,制备在体大鼠心肌缺血再灌注模型 ,实验分为四组 :缺血 1h再灌注组、缺血 2h再灌注组 ,缺血 3h再灌注组及预缺血组 ,观察分析心功能、梗死面积、中性粒细胞计数、心肌髓过氧化物酶活性及凋亡指数等指标。结果发现 ,缺血再灌注明显引起心脏功能损伤、中性粒细胞浸润和心肌细胞凋亡 ,且随再灌注时间延长而加重 ,预缺血明显减轻其损伤并抑制凋亡。心肌细胞凋亡与中性粒细胞浸润存在显著正相关关系。结果提示 ,预缺血可通过减轻凋亡对心肌发挥保护作用。     

红花黄色素对家兔缺血再灌注心肌超微结构和细胞凋亡及bcl-2、bax蛋白表达的影响

目的 通过在体兔心肌缺血再灌注模型,研究红花黄色素对家兔缺血再灌注心肌超微结构和细胞凋亡及bcl-2、bax蛋白表达的影响.方法 24只新西兰大白兔随机分为3组:缺血再灌注组(IR组),红花黄色素组(SY组),药物组(MI组),每组8只.实验终末,取缺血坏死区心肌在光镜、电镜下观察心肌细胞凋亡状况,并且检测bax和bcl-2蛋白在心肌细胞中的表达水平.结果 与IR组相比,SY组能减轻缺血心肌超微结构的改变,并通过上调bcl-2、下调bax表达抑制细胞凋亡.结论 红花黄色素能产生心肌保护作用,RISK信号转导通路可能参与了这一过程.     

Caspase-3在异丙基肾上腺素致大鼠急性心肌损伤中的作用及bFGF的影响

目的：研究半胱天冬酶-3(caspase-3)在异丙基肾上腺素(isoprenaline，Iso)致大鼠急性心肌损伤中的作用及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对它的影响。方法：将Wistar雄性大白鼠随机分成3组：对照组、损伤组和bFGF保护组，光镜观察心肌组织的病理变化，TUNEL法检测心肌细胞凋亡，免疫组化和原位杂交方法检测caspase-3蛋白及mRNA的表达水平，底物降解法测定该酶的活性。结果：Iso损伤组心肌坏死较重，有显著心肌细胞凋亡，且Caspase-3基因mRNA及蛋白表达水平明显升高，酶活性增加；bFGF保护组心肌坏死明显减轻，凋亡细胞数减少，Caspase-3基因mRNA和蛋白表达水平明显下降，酶活性受到抑制。结论：bFGF可能通过抑制Caspase-3的表达和活性减少心肌细胞凋亡而减轻大鼠心肌损伤。     

丹参多酚预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的心肌保护

目的:探讨丹参多酚预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的机制。方法:成年雄性SD大鼠缺血前1h给予丹参多酚(20mg/kg),结扎冠脉前降支缺血30min后,恢复灌注3h;应用2,3,5-氯化三苯基四氮(TTC)法检测心肌梗死面积;试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和髓过氧化物酶(MPO);心肌细胞的凋亡采用原位脱氧糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测;Western blot检测高迁移率族蛋B1(HMGB1)表达。结果:与对照组相比,丹参多酚预处理显著减小了心肌梗死面积,降低了心肌细胞凋亡和LDH、CK等血清心肌坏死标记物的表达(P0.05)。丹参多酚预处理也显著降低了MPO的表达(P0.05)。同时,丹参多酚预处理抑制了缺血再灌注引起的HMGB1的表达(P0.05)。结论:丹参多酚预处理可以减轻心肌缺血再灌注损伤并抑制心肌细胞凋亡,其抑制缺血再灌注诱导的HMGB1的表达可能与这种保护作用相关。     

Apelin-13对急性缺血诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的研究Apelin在大鼠急性心肌缺血时的变化及外源性给予Apelin-13对大鼠急性心肌缺血损伤的保护机制。方法采用酶联免疫吸附法测定大鼠前降支结扎30、60和120min时心肌组织及血浆Apelin含量;并通过结扎大鼠前降支120min建立急性心肌缺血模型,于缺血前5min经尾静脉分别注射10、100μg/kgApelin-13,观察Apelin-13对心脏功能、心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响。结果心肌缺血30～60min时,大鼠心肌组织Apelin含量逐渐增高,而缺血120min时Apelin含量降至正常水平以下,血浆中Apelin含量在缺血120min内呈逐渐增高趋势。缺血前给予100μg/kgApelin-13能改善心脏功能,减少心肌细胞凋亡,抑制促凋亡基因Bax和Caspase-3的表达,并提高抗凋亡基因Bcl-2的表达。结论在心肌缺血早期心肌组织Apelin含量代偿性增高,长时间缺血时含量下降;外源性Apelin-13在急性心肌缺血中的保护作用与抑制心肌细胞凋亡有关。     

急性心肌缺血早期室性心律失常与缝隙连接蛋白43、细胞内钙离子及心肌凋亡的关系

目的研究急性缺血心肌缝隙连接蛋白43(Cx43)、细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)及凋亡的变化规律,探讨急性缺血性心律失常的发生机制。方法雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组、急性心肌缺血15 min(Is1)及30 min(Is2)组,每组10只。记录各组大鼠室性心律失常的发生情况、心肌Cx43去磷酸化表达、[Ca2+]i及细胞凋亡,建立相关性分析。结果 Is1组室性心律失常较假手术组显著增加;Is2组则更严重。Cx43去磷酸化水平,Is1组较假手术组有所提高,但无统计学差异;Is2组则出现显著增加(P<0.01)。与假手术组比较,[Ca2+]i及凋亡率从缺血15 min开始即显著增加(P<0.01)。Is1组室性心律失常严重程度与Cx43去磷酸化、[Ca2+]i呈显著性正相关;Is2组则与上述两指标及凋亡率均呈显著性正相关。结论心肌[Ca2+]i及凋亡增加可能是急性心肌缺血早期室性心律失常的主要机制;而随后Cx43的变化也参与了其发生。     

缺血后处理对心肌缺血再灌注损伤过程中内质网应激的影响研究

目的 探讨缺血后处理(IPostC)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中细胞凋亡的影响,以及特异性内质网应激(ERS)损伤相关蛋白Grp78(葡萄糖调节蛋白78)和Caspase 12(半胱氨酸蛋白酶12)的蛋白表达水平的变化和意义。方法 Wistar 大鼠24只随机分为假手术组、I/R组(缺血再灌注组)、IPostC组(缺血后处理组)3组,每组8只。分别测定各组心肌缺血和梗死面积、细胞凋亡指数和Caspase12、 Grp78蛋白表达检测。结果 假手术组未见梗死心肌和缺血心肌,IPostC组心肌缺血区面积(46.46±2.13)%和梗死区面积(41.02±2.93)%均明显小于I/R组(53.31±3.87, 52.19±3.44)%,P值均<0.01。假手术组心肌细胞凋亡指数(6.70±2.25)%明显低于I/R组(26.92±1.91)% 、IPostC组(20.54±3.05)%,P值均<0.001。心肌组织Caspase12蛋白表达水平在假手术组(0.11±0.01)明显低于I/R组(0.41±0.06)和IPostC组(0.35±0.06),并且IPostC组低于I/R组,P值均<0.01;心肌组织Grp78蛋白水平在假手术组(0.13±0.03)亦明显低于I/R组(1.04±0.16)和IPostC组(1.17±0.14),并且IPostC组高于I/R组,P值均<0.01。结论 本研究从动物实验证实IPostC能减轻心肌细胞凋亡,而ERS激活参与了大鼠MIRI过程,推测IPostC在大鼠MIRI过程中可能通过调节ERS途径抑制细胞凋亡,改善MIRI。     

犬急性心肌缺血时循环内皮素和一氧化氮的变化及其相关酶的基因表达

目的：探讨急性心肌缺血犬循环内皮素和一氧化氮的浓度变化以及内皮素转换酶（ＥＣＥ）、一氧化氮合酶（ＮＯＳ）基因在缺血心肌的表达和分布情况。方法：结扎麻醉犬冠状动脉左前降支中段，造成实验性急性心肌缺血模型。采用放射免疫法测定血浆内皮素含量，比色法测定血清一氧化氮代谢产物水平，以原位杂交技术检测缺血心肌中ＥＣＥ和ＮＯＳ信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）的表达。结果：随着缺血时间的延长，血中内皮素含量显著升高，而一氧化氮代谢产物水平逐渐下降；缺血３小时后，心肌中ＥＣＥｍＲＮＡ呈高表达，而ＮＯＳｍＲＮＡ呈低表达。结论：心肌缺血时循环内皮素和一氧化氮的浓度变化与ＥＣＥｍＲＮＡ、ＮＯＳｍＲＮＡ表达水平一致，提示内皮素与一氧化氮两者的平衡失调可能参与了心肌缺血性损伤的发生和发展过程。     

间隙连接通道蛋白不均一降解对心肌传导速度影响的研究

目的探讨急性短时间心肌缺血时连接蛋白43（Cx43）的降解对心肌电传导速度的影响。方法16只犬随机分为正常对照组（n=4）和缺血组（n=12），缺血组通过结扎冠状动脉1h造成急性心肌缺血，测定缺血区心肌电传导速度，应用激光共聚焦显微镜技术和荧光免疫组织化学方法对缺血心肌Cx43含量进行定量研究。结果（1）急性心肌缺血时Cx43迅速降解，心肌电传导速度明显下降；（2）缺血区各局部传导速度与该部位Cx43像素密度明显正相关；（3）出现持久传导阻滞的区域其Cx43降解程度均大于50％。结论急性短时间（1小时）缺血时Cx43的降解已经开始对心肌传导速度产生明显的影响作用，而局部心肌Cx43的严重降解将导致该区域出现持久传导阻滞。     

肝细胞生长因子抑制慢性缺血性心脏病心肌纤维化及心肌细胞凋亡的实验研究

目的:研究肝细胞生长因子（HGF）抑制慢性缺血性心脏病心肌纤维化及心肌细胞凋亡的作用。方法: 采用磷酸钙/DNA-TPC方法构建携带HGF基因的重组腺病毒(Ad.HGF)。经18只小型猪的左胸冠状动脉回旋支放置Ameroid环建立慢性心肌缺血猪动物模型,并随机分为3组即盐水组、AdHGF组和缺陷型空病毒Ad5(AdNull)组,每组6只(n=6)。于缺血心肌处,分别注射4×109 pfu 200 μl AdHGF、4×109 pfu 200 μl AdNull及200 μl盐水。4周后做超声心动图检查各组的心脏功能,并行病理学心肌纤维化、心肌凋亡检测。结果: 心脏彩超检测显示,AdHGF组室壁增厚,运动增加,左室舒张末容积（LVEDV）、左室射血分数（LVEF）及短轴缩短率（FS）等明显改善(P<0.05)。AdHGF组心肌组织切片缺血坏死区纤维组织增生明显低于AdNull组(P<0.05)。AdHGF组心肌中Ⅲ型胶原蛋白的量明显低于AdNull组(P<0.05)。AdHGF组心肌细胞的凋亡率(%)明显低于对照组(P<0.05)。结论: HGF具有抑制慢性缺血性心脏病心肌纤维化及心肌细胞凋亡的作用,从而可抑制心室重构和改善心功能。     

中药保护心肌缺血损伤的非循环机制研究进展

中药保护心肌缺血损伤的非循环机制主要包括抑制心肌细胞凋亡、心肌缺血预处理、改善心肌超微结构、心肌酶和免疫功能调节.中药可通过非循环机制增强心肌细胞内源性抗损伤能力,内源性调控保护可能是更有效的心肌保护策略,体现了中西医结合治疗心血管疾病能从整体出发多层面、多靶点发挥作用的优势.     

Myocardial regeneration by activation of multipotent cardiac stem cells in ischemic heart failure

In this study, we tested whether the human heart possesses a cardiac stem cell (CSC) pool that promotes regeneration after infarction. For this purpose, CSC growth and senescence were measured in 20 hearts with acute infarcts, 20 hearts with end-stage postinfarction cardiomyopathy, and 12 control hearts. CSC number increased markedly in acute and, to a lesser extent, in chronic infarcts. CSC growth correlated with the increase in telomerase-competent dividing CSCs from 1.5% in controls to 28% in acute infarcts and 14% in chronic infarcts. The CSC mitotic index increased 29-fold in acute and 14-fold in chronic infarcts. CSCs committed to the myocyte, smooth muscle, and endothelial cell lineages increased approximately 85-fold in acute infarcts and approximately 25-fold in chronic infarcts. However, p16(INK4a)-p53-positive senescent CSCs also increased and were 10%, 18%, and 40% in controls, acute infarcts, and chronic infarcts, respectively. Old CSCs had short telomeres and apoptosis involved 0.3%, 3.8%, and 9.6% of CSCs in controls, acute infarcts, and chronic infarcts, respectively. These variables reduced the number of functionally competent CSCs from approximately 26,000/cm3 of viable myocardium in acute to approximately 7,000/cm3 in chronic infarcts, respectively. In seven acute infarcts, foci of spontaneous myocardial regeneration that did not involve cell fusion were identified. In conclusion, the human heart possesses a CSC compartment, and CSC activation occurs in response to ischemic injury. The loss of functionally competent CSCs in chronic ischemic cardiomyopathy may underlie the progressive functional deterioration and the onset of terminal failure.     

低能量氦氖激光血管内照射对缺血再灌注心肌超微结构的影响

目的:探讨低能量氦氖激光血管内照射(ILIB)对缺血再灌注心肌组织超微结构的影响。方法:通过结扎冠状动脉阻断冠状动脉血流,复制家兔急性心肌缺血-再灌注损伤动物模型。将家兔随机分为4组:假手术组、心肌缺血30min组、缺血30min再灌注30min组、缺血30min再灌注30min+ILIB组。在透射电镜下观察各组心肌超微结构的变化。结果:假手术组心肌纤维呈阶段性收缩、间质水肿、线粒体轻度肿胀、间质可见闭塞的毛细血管;心肌缺血组心肌纤维排列紊乱、肌浆水肿、线粒体水肿、血管扩张、血管结构破坏、血管内可见白细胞镶嵌;缺血再灌注组心肌纤维排列相对整齐、线粒体水肿不明显、肌浆水肿较轻、心肌间质可见轻度毛细血管扩张淤血;缺血再灌注+ILIB组心肌纤维排列整齐、线粒体无肿胀、间质毛细血管内可见红细胞、无毛细血管内白细胞镶嵌现象、毛细血管管腔通畅、血管壁较完整。结论:IL-IB可使缺血再灌注心肌超微结构基本恢复正常,对心肌有保护作用。     

The Pathobiology of Acute Coronary Syndromes: Clinical Implications and Central Role of the Mitochondria

Ongoing investigation has provided new insights into the pathobiology of myocardial ischemic injury. These include an improved understanding of the roles of the major modes of cell injury and death, including oncosis, apoptosis, and unregulated autophagy, as well as the central role of the mitochondria in the progression of myocardial ischemic injury, reperfusion injury, and myocardial conditioning. This understanding is providing insights for developing new pathophysiologic, pharmacologic, and cell-based therapies, alone or in combination with percutaneous coronary interventions, for better preservation of myocardium and reduction of morbidity and mortality rates from ischemic heart disease.Key words: Apoptosis, autophagy, cardioprotection, inflammation mediators, ischemic preconditioning, myocardial, myocardial ischemia/physiopathology, myocardial reperfusion injury/physiopathology, myocardial stunning/physiopathology, myocytes, cardiac/pathology, mitochondria, myocardial reperfusion injury, myocardium/cytology/ultrastructure, myocytes, cardiac/pathology, necrosis/prevention & control, oncosis, regeneration/physiology, reperfusion injury, signal transduction, stem cell transplantationThe dynamic alterations in cells, tissues, and organs involving molecular, biochemical, structural, and functional changes constitute collectively the pathobiology of disease. The first purpose of this review is to relate fundamental knowledge of the pathobiology of acute coronary syndromes (ACS) to clinical manifestations and the clinical course of these conditions. The second purpose is to link this knowledge to opportunities for therapeutic interventions to favorably alter the clinical course and outcomes of ACS.