卵丘细胞线粒体移植对年老小鼠早期胚胎发育的影响

目的探讨线粒体对早期胚胎发育的影响。方法采用昆明小鼠为动物模型,以其卵丘颗粒细胞、卵母细胞、受精卵为试验材料,提取年老小鼠卵丘细胞线粒体,将其注入年老小鼠卵母细胞和体内冲出的受精卵中。结果与结论通过卵丘细胞线粒体移植,给卵子补充了一定量的线粒体,可以部分弥补卵母细胞因变异引起的功能不足。为第2次减数分裂、受精卵和胚胎发育提供足够的能量,明显改善了胚胎的质量。     

线粒体在卵母细胞成熟和早期胚胎发育中的作用

卵母细胞发育、成熟是一个从量变到质变的复杂过程,需经过细胞质成熟和细胞核成熟才具备受精和进一步发育的能力。作为细胞质中含量最丰富的细胞器和细胞的＂供能中心＂,线粒体在卵子成熟及其后胚胎发育的过程中发挥了极其重要的作用。     

第一极体位置对卵母细胞显微注射受精后受精和胚胎发育的影响

目的　研究第一极体位置对卵母细胞显微注射受精后受精和胚胎发育的影响。方法　回顾分析了 782个经卵母细胞浆内单精子注射 (ICSI)的卵母细胞 ,分别分析第一极体位于 12点和 6点时的卵母细胞存活率、卵母细胞受精率和卵裂胚胎的发育质量。结果　第一极体位于 6点时的卵母细胞存活率、卵母细胞受精率、卵裂胚胎发育质量均略高于 12点位置 ,但差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　显微注射受精时的第一极体位置对卵母细胞的受精和胚胎发育的影响不大。     

胚胎分泌的人白细胞抗原G与体外受精中的高妊娠率相关

目的:研究体外受精(IV F)中胚胎分泌的可溶性人白细胞抗原-G(H LA-G)与妊娠、胚胎发育的关系。方法:回顾性研究。地点:校附属IVF中心。选择行IVF的不孕夫妇作为研究对象。卵子通过卵母细胞单精子显微注射受精,受精卵培养72h后,检测可溶性H LA-G含量,分析HLA-G含量与妊娠结局间的关系。结果:386份样本中有270份能检测到H LA-G。H LA-G分泌量不受胚胎质量或患者年龄的影响。与无H LA-G分泌胚胎相比,分泌型胚胎卵裂率显著增加(分裂球数量6.71±0.09vs5.86±0.22),活产率显著增加(48.4%vs17.1%,χ2=9.09)。结论:①胚胎分泌的可溶…     

流产与保胎

流产是指胎儿体重不到500g 而终止妊娠者。这时胎儿不能存活,妊娠12周前终止妊娠称为早期流产,妊娠12～28周之间终止妊娠称之为晚期流产。妊娠是胎儿在母体内发育成长的过程,卵子受精是妊娠的开始,如精子或卵子一方或双方有缺陷均可引起流产,在配子形成的过程中,染色体发生变异,精子老化,卵子老化,或配子不成熟都可导致受精卵发育异常或胚胎死亡导致流产。通过自然流产排出物的检验,大约有22～60％标本中有染色体异常,精子和卵子结合时,精子、卵子中染色体数目又回复成双倍(2n=46)。如染色体异常可引起流产。染色体数目异常:多倍体——     

未受精人卵母细胞及废弃胚胎线粒体基因的表达

目的检测人卵和胚胎中线粒体基因组的表达,探讨线粒体基因表达水平与卵母细胞发育潜能的关系。方法收集临床常规体外授精(IVF)和单精子卵胞浆内注射(ICSI)不受精的成熟卵母细胞以及不适合移植和冷冻保存的胚胎,单个细胞裂解液制备单个卵母细胞或胚胎总RNA,半定量逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)检测线粒体DNA(mtDNA)编码的5个呼吸链蛋白基因的mRNA含量。结果在所有未受精人卵和胚胎中都检测到了线粒体5种基因的mRNA;未受精人卵ND2、ND5、COⅡ、Cytb、ATP酶6的mRNA含量分别为:(0.38±0.16)、(0.75±0.31)、(0.49±0.22)、(0.74±0.30)(、0.53±0.24),明显低于胚胎中相应5种基因mRNA的含量,其分别为(2.16±0.41)、(3.40±0.53)(、2.40±0.40)(、3.26±0.46)(、2.32±0.42),与胚胎的mRNA含量相比,均P<0.01;三原核胚胎和发育阻滞胚胎的5种基因mRNA水平差异没有显著性意义。结论线粒体基因表达下降可能参与卵母细胞不受精的机制,并与卵母细胞的发育潜能有关。     

黄体生成素在人类卵母细胞和种植前胚胎的表达

[目的]研究人类卵母细胞和种植前胚胎黄体生成素的表达.[方法]应用免疫荧光标记激光共聚焦显微镜方法对不成熟和成熟卵母细胞及种植前胚胎进行黄体生成素表达的观察.[结果]人类卵母细胞和种植前胚胎均存在黄体生成素的表达.不成熟和成熟卵母细胞及2～8细胞期种植前胚胎阶段主要分布在细胞膜;桑葚胚和囊胚阶段分布在细胞膜和细胞浆.多精受精组和正常受精组、新鲜胚胎组和冻融胚胎组黄体生成素的表达没有差异.[结论]人类卵母细胞和种植前胚胎存在黄体生成素的表达.黄体生成素可能以旁或/和自分泌方式影响人类卵母细胞和胚胎发育,并在种植过程胚胎与母体子宫内膜的对话中起直接作用.     

影响猕猴体外受精与胚胎移植成功率的因素分析

将电刺激采集的精液用两种方法优选后进行精子获能处理,然后与超排获得的成熟卵母细胞进行体外受精。受精卵用不同培养体系进行体外发育培养,并对发育到8细胞的11枚胚胎进行冷冻保存,将其中3枚胚胎解冻后移植给一只受体猕猴。结果表明: 上浮法和percoll法都是有效的精子优选法,对受精率的影响差异不显著; 咖啡因和dbcAMP在精子体外获能过程中缺一不可; 理想的受精密度应在2×105精子/ml左右; 在超促排卵后采集的卵母细胞进一步成熟过程中,添加血清和激素会取得更好的结果; 胚胎的发育过程中,血清和氨基酸都是必需的。冷冻保存后的解冻存活率虽然很高,但可能受受体猕猴数量或其他多种因素的影响,移植后并未受孕。     

小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育

[目的]观察小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育.[方法]昆明小鼠超排后获取体内成熟卵母细胞及卵丘细胞.成熟卵子去核后用将卵丘细胞核与精子直接注入,观察其受精和胚胎发育情况.[结果]卵子去核存活率为75.9%(362/477),注核存活率为39.8%(143/359),D1存活率为38.4%(138/359).39.9%(57/143)重构卵子成功排出一个极体并形成两原核,其卵裂率为80.7%(46/57).大部分重构胚发育到2～3细胞停滞,其中2个分裂至4细胞,无囊胚形成.[结论]将小鼠卵丘细胞核、精子同时移植到小鼠的体内成熟卵浆中,可以诱导极体排出,形成2原核 1极体的重构胚胎.重构胚胎大部分发育到2～3细胞即发生停滞,最多到达4细胞期,发育潜能差.     

卵巢高反应临床结局及其卵母细胞超微结构分析

目的 探讨控制性超促排卵周期中卵巢高反应对卵母细胞、胚胎质量及妊娠结局的影响.方法 回顾性分析因输卵管因素和(或)男方因素初次行体外受精-胚胎移植/卵胞浆单精子注射(IVF-ET/ICSI)周期治疗的326例不孕患者的临床资料.根据人绒毛膜促性腺激素(HCG)日血清雌二醇(E2)水平、获卵数不同分为卵巢高反应组(HCG日血清E2＞3 000 pg/ml或获卵数＞15个,n=146)和正常反应组(HCG日血清E2500～3 000 pg/ml或获卵数5～15个,n=180),分析两组间的MII卵率、受精率、卵裂率、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率和流产率.并通过透射电子显微镜下观察两组卵母细胞透明带、卵母细胞卵周隙、卵母细胞细胞器等超微结构的变化.结果 卵巢高反应组获卵数、优质胚胎数和移植周期取消率均显著高于正常反应组(P＜0.05),MII卵率、受精率、优质胚胎率、可利用胚胎率、种植率和临床妊娠率均显著低于正常反应组(P＜0.05).两组间卵裂率、流产率和中重度卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生率差异均无统计学意义(P＞0.05).高反应组的超微结构分析显示,部分卵母细胞胞质中出现大量异常线粒体.结论 卵巢高反应影响卵母细胞质量及胚胎发育潜能,最终降低临床结局.     

显微注射受精时第一极体位置和卵母细胞膜穿破类型对受精和胚胎发育的影响

回顾分析了782个经卵母细胞浆内单精子注射（ICSI）的卵母细胞，第一极体位于12点和6点时，卵母细胞膜穿破方式为显微注射针直接进入胸浆内，卵膜穿破，不形成凹痕（A）及显微注射针进入卵母细胞内，回吸少量胞浆，卵膜在细胞中部穿破，形成轻微的凹痕（B）两种类型时的卵母细胞存活率，卵母细胞受精率和卵裂胚胎的发育质量。结果显示：第一极体位于12点和6点时的卵母细胞存活率，卵母细胞受精率，卵裂胚胎发育质量差异均无显著性，卵母细胞膜穿破方式为A类型时的卵母细胞存活率，卵母细胞受精率，卵裂胚胎发育质量均显著低于B类型组，提示：显微注射受精时的第一极体位置对卵母细胞的受精和卵裂的影响不大，但不同卵母细胞膜穿破类型会影响受精和胚胎发育。     

通过同卵共享模型研究经体外受精和卵母细胞单精子显微注射后男性因素对受孕及胚胎发育的影响

目的:研究来自不同男性的精子对受精及胚胎发育的影响。设计:建立同卵共享模型,即收集同一妇女的多个卵子供给其本人和另一受试者分享,分别接受不同的精子受精。机构:伯明翰妇女医院辅助受孕中心,Edg-baston,英国。患者:行卵子共享的不孕妇女。干预:行体外受精(IVF)。主要观察指标:将两组受试对象经IVF后的受精率和平均第2或第3天的胚胎发育评分(细胞数X分级)进行比较。同时对行卵母细胞单精子显微注射(ICSI)和IVF这两种不同受精方式的受试对象进行相同的比较。将共卵组和受卵组的试验结果进行t检验。结果:供卵组和受卵组的受精率无显…     

人卵母细胞形态学指标预测受精和胚胎发育潜能

目的:探讨卵母细胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)周期中人卵母细胞形态学测量的指标与受精和胚胎发育潜能之间的关系。方法:利用OCTAX Eye-ware software系统在对卵母细胞行ICSI前,逐一采集卵母细胞图像,测量透明带厚度、卵母细胞大小、极体位置的卵间隙大小和极体形态(完整或破碎),将ICSI后的卵母细胞和受精后的胚胎进行单孔培养,记录每个卵母细胞的受精情况、胚胎发育情况。对卵母细胞的形态数据与受精情况、胚胎发育情况进行逐步多元因素Logistic回归分析。结果:共测量卵母细胞436枚,受精率84.9%(370/436),胚胎可用率60.8%(225/370),卵母细胞形态学指标中,透明带厚度、极体位置的卵间隙大小和卵母细胞受精与否有关,受精卵较未受精卵有较厚的透明带[(18.0±2.3)μm vs.(16.9±2.7)μm]和较大的卵间隙[(14.4±3.3)μm vs.(13.2±3.9)μm];而卵母细胞的大小和极体形态均与取卵后72 h的胚胎发育质量有关,发育为可用胚胎的卵母细胞较发育为废用胚胎者有较大的直径[(116.6±3.7)μm vs.(114.7±3.6)μm]和较高的极体完整率(86.2%vs.66.7%)。结论:人卵母细胞形态学测量的指标可预示卵子受精和胚胎发育的潜能。     

人透明带与卵母细胞胚胎质量和发育潜能的关系

受精是精卵相互作用严格有序而又协调发育的复杂过程,而人类卵子受精过程中透明带（zona pellucida ,ZP）起着不可替代的作用.ZP是哺乳类动物卵母细胞外围包裹一层半透明丝状体酸性糖蛋白膜,保护卵子和受精卵免受外界的伤害;在受精过程中,精子必须要穿过ZP这一阻止种间受精的屏障.ZP异常可能导致卵母细胞受精失败,多精受精,胚胎质量、发育潜能下降等一系列问题.ZP在生育中的有着不可或缺的作用,导致近年来越来越多的学者都开始关注ZP,并深入的研究其结构和功能特性.本文就ZP的组成、分子结构、生物学功能及其与卵母细胞及胚胎发育潜能的关系进行综述.     

印迹基因生长因子-受体结合蛋白10在人类卵子及种植前胚胎的表达

目的检测Silver-Russell syndrome(SRS)候选印迹基因-生长因子受体结合蛋白10(Grb10)在人类卵子和种植前胚胎的正常表达,探讨Grb 10与胚胎发育以及辅助生殖的关系.方法应用巢式RT-PCR技术检测印迹基因Grb10在人类卵子及种植前胚胎的表达.结果4细胞、8细胞胚胎、囊胚及卵子中均可测到Grb10基因的表达,2细胞胚胎中未见表达.结论印迹基因Grb10表达于种植前胚胎,与胚胎发育密切相关.     

卵母细胞线粒体移植对年老小鼠植入前胚胎线粒体膜电位的影响

目的探讨卵母细胞线粒体移植（MIT）对年老小鼠植入前胚胎线粒体膜电位(△Ψm)的影响。方法6～8周龄雌性昆明种小鼠经超排卵、卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)及培养液空注后形成的胚胎为A组,12月龄雌性昆明种小鼠经同样处理后形成的胚胎为B组,12月龄雌性昆明种小鼠经超排卵、ICSI及MIT后形成的胚胎为C组。比较植入前各阶段3组胚胎的△Ψm以及各组胚胎植入前各阶段△Ψm的变化趋势。结果在二细胞期和桑椹胚期,A、C两组胚胎△Ψm均高于B组（P＜0.01）,而在四细胞期、八细胞期和囊胚期,A、C两组胚胎△Ψm亦均高于B组（P＜0.05）。3组中,桑椹胚和囊胚△Ψm均高于二细胞期、四细胞期和八细胞期胚胎（P＜0.05）,而前两者间以及后3者间差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论卵母细胞MIT可明显提高年老小鼠植入前胚胎各阶段△Ψm,且不改变其变化趋势。     

早期分裂三细胞对囊胚形成预测的研究

目的通过观察体外成熟卵母细胞显微注射受精后胚胎特定时间段是否经历早期分裂的三细胞阶段来对其囊胚形成潜能进行预测。方法未成熟卵子体外成熟后行卵胞浆内单精子注射（ICSI）,授精后33．9～42．9h内每小时观察1次,记录三细胞胚胎形成数,授精后6d统计囊胚形成率。结果经过三细胞阶段的胚胎囊胚形成率（76．67％）明显高于未出现三细胞阶段（4．17％）,差异有统计学意义（P＜0．05）;并且在39．9h之前出现的三细胞胚胎,其囊胚形成率最高。结论通过观察胚胎分裂早期是否经历三细胞阶段可对囊胚形成率有较好的预测,为建立有效的、无创的早期预测胚胎发育潜能的指标奠定理论基础。     

小鼠生殖泡期卵母细胞体外培养成熟、受精和胚胎发育的研究

为研究性成熟小鼠生殖泡期(GV)卵母细胞的体外成熟,同时比较体外成熟(IVM)和体内成熟组卵子的受精、胚胎发育情况,机械法分离性成熟小鼠卵巢中的GV期卵母细胞及刺激后的成熟卵母细胞,直接培养于[α-MEM+1 mg/ml Fetuin+10％FCS+1.5 IU/ml rHCG±5 ng/mlrEGF]中,16 h后移入f-HTF+10％FCS体外受精4 h,再在M16+10％FCS中培养72 h。记录其成熟、受精和胚胎发育情况,并与体内成熟的卵子比较。结果:GV期卵母细胞在含HCG培养液中成熟率为89.68％,培养液中添加EGF后,卵子成熟率无显著上升,但受精率、卵裂率均有显著提高(P<0.05)。体内成熟卵子的受精率可达62.83％,卵裂率60.18％;IVM组受精率仅48.92％,卵裂率36.69％,明显低于前者(P<0.01)。结论:小鼠GV期卵母细胞可体外培养成熟、受精和胚胎发育。培养液中添加促性腺激素和EGF都促进卵母细胞体外成熟、受精和胚胎发育能力。但IVM组卵母细胞的受精率、卵裂率低于体内成熟组,培养系统仍需改进。     

冷冻载体对小鼠卵母细胞玻璃化冷冻效果影响的研究

目的探讨不同冷冻载体对小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻回收率、复苏率和解冻后胚胎发育潜能的影响。方法以小鼠卵母细胞为实验材料,以玻璃化冷冻方法冻存小鼠卵母细胞,分别以冷冻叶片（A）组、冷冻小钩（B）组、电镜铜环（C）组、自制冷冻叶片（D）组为冷冻载体冷冻小鼠卵母细胞,通过对解冻后卵子回收率、复苏率、卵子受精率及早期胚胎发育率等分析判断冻存效果。结果回收率D组明显低于其他3组,差异有统计学意义（P〈0.01）;D组与其他3组卵母细胞冷冻保存后卵子复苏率、胚胎受精率、继续发育潜能的比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 4种玻璃化冷冻载体都是小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体,自制叶片组的卵子回收率明显低于其他3组,需更进一步熟练叶片制作的技术和实验人员操作技能。     

小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育

【目的】观察小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育。【方法】昆明小鼠超排后获取体内成熟卵母细胞及卵丘细胞。成熟卵子去核后用将卵丘细胞核与精子直接注入，观察其受精和胚胎发育情况。【结果】卵子去核存活率为75．9％(362／477)，注核存活率为39．8％(143／359)，D1存活率为38．4％(138／359)。39．9％(57/143)重构卵子成功排出一个极体并形成两原核，其卵裂率为80．7％(46／57)。大部分重构胚发育到2-3细胞停滞，其中2个分裂至4细胞，无囊胚形成。【结论】将小鼠卵丘细胞核、精子同时移植到小鼠的体内成熟卵浆中，可以诱导极体排出，形成2原核 1极体的重构胚胎。重构胚胎大部分发育到2-3细胞即发生停滞，最多到达4细胞期，发育潜能差。