Tyrphostins AG1478对内分泌耐药乳腺癌细胞的作用

目的：研究表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂对内分泌治疗耐药的激素依赖性乳腺癌细胞的作用,探讨EGFR抑制剂的应用前景.方法：选择雌激素受体（ER）阳性的乳腺癌细胞MCF-7,建立三苯氧胺（TAM）耐药的乳腺癌细胞（T-MCF-7）.研究EGFR抑制剂Tyrphostins AG1478对T-MCF-7细胞的作用,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法进行细胞生长抑制试验,流式细胞仪（FCM）检测细胞周期的影响,Western blot方法分析EGFR及其信号通路的改变.结果：MCF-7细胞在持续给予TAM（10-7mol/L）处理6个月后获得耐药细胞T-MCF-7.与MCF-7细胞相比,T-MCF-7对AG1478的敏感性增高.AG1478可使T-MCF-7细胞周期阻滞,增殖指数下降,凋亡率增加;对T-MCF-7细胞的EGFR和细胞外信号调节激酶（ERK1/2）蛋白水平无影响,但使其磷酸化-ERK1/2水平下降,降低了EGFR下游信号通路的活性水平.结论：激素依赖性乳腺癌细胞给予TAM长期处理后,更依赖于EGFR信号转导通路的作用.EGFR抑制剂可抑制EGFR信号通路的活性,提高乳腺癌内分泌治疗的效果.     

染料木黄酮对人乳腺癌细胞雌激素样作用机制研究

目的 探讨染料木黄酮(genistein,GEN)对人乳腺癌细胞增殖影响及作用机制.方法 MTT法测定GEN对雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7和非雌激素依赖性乳腺癌细胞MDA-MB231增殖作用,应用雌激素受体拮抗剂IC1182780观察GEN的雌激素样作用途径,采用流式细胞术分析乳腺癌细胞周期情况.结果 GEN可促进MCF-7细胞的增殖,使G1期向S期转变,增殖作用可被雌激素受体拮抗剂所拮抗;对非雌激素依赖性MDA-MB231细胞增殖无影响.结论 GEN通过雌激素受体(ER)介导而发挥雌激素样活性作用.     

MCF-7人乳腺癌细胞阿霉素敏感株和耐药株中雌激素受体表达的变化及意义

目的:研究MCF-7人乳腺癌细胞阿霉素敏感株(MCF-7细胞)和耐药株(MCF-7/ADR细胞)中雌激素受体(estrogenreceptor,ER)表达的变化与其对细胞生物学特性的影响。方法:应用Westernblot法检测MCF-7细胞和MCF-7/ADR细胞中雌激素受体表达,MTT法检测细胞增殖及细胞对雌激素(es-trogen,E2)和droloxifene(Dro)的敏感性,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果:Westernblot证实在MCF-7细胞中ER为阳性,而在MCF-7/ADR细胞中ER为阴性。经MTT分析,与MCF-7相比,MCF-7/ADR细胞生长速度减慢,细胞多分布于G0/G1期。E2在1×10-12mol/L的浓度时开始促进MCF-7细胞的生长,到达1×10-9mol/L时促生长作用进入平台期;而任何浓度的E2对MCF-7/ADR细胞均无促生长作用。Dro的浓度达到10μmol/L的时候,开始出现对MCF-7细胞生长的抑制,抑制程度随浓度的增加而逐渐增强;Dro浓度小于20μmol/L时,对MCF-7/ADR细胞生长无明显作用,当浓度达到20μmol/L时对MCF-7/ADR细胞的生长出现明显抑制,且高于对MCF-7细胞的抑制。结论:MCF-7/ADR细胞雌激素受体表达缺失,生长速度减慢,同时细胞失去对雌激素的依赖性,并对一定浓度的内分泌治疗药物不敏感。     

乳腺癌雌激素受体阳性细胞对雌激素受体阴性细胞增殖的影响

目的探讨雌激素受体(ER)表达不同的乳腺癌细胞间相互作用。方法 PCR法检测MDA-MB-231及MCF-7细胞中ER的基因表达。CCK-8法检测17β-雌二醇对MCF-7和MDA-MB-231细胞生长增殖的影响。将MDA-MB-231(雌激素受体阴性细胞)用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)法标记荧光信号,将其分别与MCF-7细胞(雌激素受体阳性细胞)和未标记荧光的MDA-MB-231细胞(雌激素受体阴性细胞)用Transwell侵袭小室分层共培养,加入或不加入雌二醇,检测MDA-MB-231细胞的增殖差异。结果 MCF-7细胞表达雌激素受体α(ESR1,ERα)和雌激素受体β(ESR2,ERβ),而MDA-MB-231细胞均不表达。17β-雌二醇浓度为10-11 mol/L时促MCF-7增殖作用最大,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),对MDA-MB-231细胞则无明显作用(P>0.05)。在加入雌二醇培养的MCF-7细胞与MDA-MB-231细胞小室分层共培养组,经流式细胞仪检测发现MDA-MB-231平均荧光强度较对照组显著降低。结论雌激素受体阳性细胞在雌激素作用下,可促进雌激素受体阴性细胞的增殖。     

通络散结丸药物血清对乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用

目的:通过观察通络散结丸药物血清对乳腺癌MCF-7细胞的芳香化酶和雌激素受体基因的表达、细胞增殖周期及细胞凋亡的影响,探讨通络散结丸治疗乳腺肿块性疾病的可能机制。方法:制备通络散结丸含药动物血清,以体外培养的MCF-7细胞为研究对象,以qRT-PCR法检测乳腺癌细胞芳香化酶CYP19及雌激素受体ER mRNA表达水平;流式细胞术(FCM)测定细胞增殖周期和凋亡水平;MTS实验测定细胞生长曲线。结果:与空白对照组比较,含药血清组作用细胞24 h后能明显抑制乳腺癌细胞株MCF-7的CYP19 mRNA、ER mRNA表达水平,表达水平分别降低0.346和0.128倍;药物血清作用48 h后S期和G2/M期细胞所占比例降低,尤以S期最为显著,相应的G0/G1期细胞增加,药物血清抑制了细胞增殖的正常进行;凋亡实验示细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均增加,药物血清组总体凋亡率高于对照组;药物血清作用细胞48 h以后细胞生长曲线幅度开始明显低于对照组,在96 h时抑制效果最明显。结论:通络散结丸药物血清影响乳腺癌MCF-7细胞的雌激素合成及其作用发挥,同时抑制细胞生长。     

番茄红素对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的影响

目的 观察番茄红素对体外培养的雌激素受体阳性(ER )乳腺癌细胞MCF-7和雌激素受体阴性(ER-)乳腺癌细胞MDA-MB-231的存活率、细胞周期及凋亡的影响.方法 采用MTT法和H3-TdR 掺入法观察番茄红素对两种细胞增殖的影响;流式细胞仪观察同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化.结果 番茄红素抑制MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖和DNA合成,具有剂量效应关系,随着时间延长,抑制作用增强,最大抑制率分别为52.6%、61.9%.流式细胞仪结果显示,番茄红素作用24 h后,MCF-7、MDA-MB-231细胞周期各相发生变化,G0/G1期细胞增多,而S期和G2/M期细胞减少,同时可诱发MDA-MB-231细胞凋亡.结论 番茄红素通过阻滞MCF-7细胞于G1期而抑制该细胞的增殖,而对MDA-MB-231细胞增殖的抑制除可通过阻滞细胞周期进程外,还与诱导凋亡有关.     

丹参酮ⅡA磺酸钠对乳腺癌细胞株的作用及其机制研究

目的:研究丹参酮ⅡA磺酸钠对雌激素受体(ER)、表皮生长因子受体-2(HER-2)表达不同的人乳腺癌细胞株(MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231)的作用,并探讨其作用机制。方法:以0.025~0.8μg/ml不同浓度丹参酮ⅡA磺酸钠处理MCF-7、SKBR-3、MDA-MB-231细胞,MTT法测定不同浓度丹参酮ⅡA磺酸钠对三种乳腺癌细胞株细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期。结果:丹参酮ⅡA磺酸钠处理后,MCF-7细胞增殖活性降低,凋亡指数升高,细胞周期分布改变,G0/G1期细胞数增加,S期和G2/M期细胞数减少;SKBR-3和MDA-MB-231细胞增殖活性、细胞凋亡及细胞周期无明显改变。结论:丹参酮ⅡA磺酸钠对ER阳性乳腺癌细胞具有生长抑制作用,其作用机制可能与凋亡诱导、细胞周期阻滞有关;丹参酮ⅡA磺酸钠对ER阴性、HER-2阳性和ER阴性、HER-2阴性乳腺癌细胞无明显生长抑制作用。     

性激素与促性腺激素对卵巢癌SKOV3细胞体外生长调控及其机制的研究

目的性激素和促性腺激素对卵巢癌的影响一直存在争议,文中研究性激素和促性腺激素对卵巢癌细胞株的体外生长的调控,并探讨可能机制,为进一步的临床研究提供理论依据。方法将不同浓度雌激素、孕激素、人绒毛促性腺生长激素(human chorionic gonadotropin,hCG)作用于卵巢癌细胞株SKOV3,利用四甲基偶氮唑兰(MTT)比色法检测细胞在24、48、72h的增殖情况,流式细胞仪检测用药后细胞凋亡率及细胞周期的改变,实时荧光定量PCR检测用药前后各组细胞表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、Bcl-2、Bax mRNA的表达量。结果孕激素和浓度为10-4mol/L的雌激素抑制细胞的生长,诱导细胞凋亡,作用细胞72h其EGFR、Bcl-2 mRNA表达量显著下调;10-4mol/L的雌激素作用72 h后细胞周期分布以S期为主,孕激素作用72 h后大量细胞阻滞在G0/G1期;hCG和浓度小于10-6mol/L的雌激素促进细胞增殖,作用细胞72 h其EGFR、Bcl-2 mRNA表达量均上调显著,细胞周期分布G2/M期增多。结论孕激素和高浓度的雌激素能抑制卵巢癌细胞的增殖,其机制可能是通过将细胞分别阻滞于G0/G1、S期,下调EGFR和Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的。HCG和低浓度的雌激素能刺激卵巢癌细胞的增殖,其机制可能是通过上调EGFR和Bcl-2的表达而抑制细胞凋亡来实现的。     

白桦脂醇的选择性雌激素受体调节作用实验研究

目的 对白桦脂醇的选择性雌激素受体调节作用进行研究,探讨其植物雌激素活性。方法 将40只性未成熟雌性小鼠采用随机数字表法分为空白组,雌激素组,白桦脂醇低、高剂量组4组,每组10只,分别给予生理盐水及17β-雌二醇(17β-E2)、白桦脂醇混悬液灌胃7 d。灌胃结束后,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠血清雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平;剖取子宫称重,计算子宫增重率和子宫指数;通过Western bolt法检测小鼠子宫组织中雌激素受体(ER)α、ERβ和雌激素膜受体G蛋白偶联受体30(GPR30)蛋白的表达;通过细胞增殖实验观察白桦脂醇对人乳腺癌细胞(MCF-7)的促增殖作用;通过细胞增殖拮抗实验观察ER阻断剂ICI182 780、ERα阻断剂MPP、ERβ阻断剂THC、雌激素膜受体GPR30阻断剂G15等4种阻断剂对白桦脂醇促MCF-7细胞增殖作用的影响。结果 白桦脂醇能明显升高性未成熟雌性小鼠的子宫增重率、子宫指数,血清E2、FSH水平,以及子宫组织中ERα、GPR30蛋白的表达水平(P0.05或P0.01),促进MCF-7细胞增殖(P0.01),且其促MCF-7细胞增殖作用能被ICI182 780、MPP、G15所拮抗(P0.01)。结论 白桦脂醇具有雌激素样活性,此活性由ERα和GPR30介导。     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞端粒酶的影响

目的 研究三羟异黄酮(Genistein,Gen)对人乳腺癌细胞系体外增殖的影响及其与端粒酶的关系.方法 体外培养雌激素受体阳性(ER )和阴性 (ER-)乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231,MTT法检测细胞增殖的影响;RT-PCR法观察端粒酶逆转录酶TERT基因mRNA的表达;免疫细胞化学染色观察NF-κB p65的核移位.结果 雌二醇(Estradiol,E2)单独作用时,促进MCF-7细胞增殖、TERT mRNA表达和NF-κB p65的核移位,但对MDA-MB-231细胞无明显影响.低剂量的Gen对MCF-7细胞的单独作用与E2类似,与E2联合作用时,MCF-7细胞无明显变化;高剂量的Gen单独或联合E2作用于 MCF-7细胞以及MDA-MB-231细胞,均表现为抑制细胞增殖、TERT mRNA表达和NF-κB p65的核移位.结论 Gen对两种乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231增殖的不同影响与雌激素受体表达状态及E2存在与否有关,并可能是通过调节TERT的mRNA表达、NF-κB p65的核移位来调控细胞端粒酶活性的.     

染料木素促乳癌细胞增生和IGF-1R mRNA表达机制

目的 研究染料木素促人乳癌(MCF-7)细胞增生及IGF-1R mRNA 表达机制.方法 MCF-7细胞常规培养后,用ICI182,780或JB-1与染料木素共同培养,以阻断雌激素受体(ER)或IGF-1R.MTT法观察细胞生长情况,RT-PCR技术观察IGF-1R基因表达情况.结果 染料木素对MCF-7细胞具有增生效应,与对照组相比差异有统计学意义(F=14.627,q=3.76,P＜0.05),此效应可以被ER拮抗剂ICI182,780或IGF-1R拮抗剂JB-1完全阻断(q=3.89、4.25,P＜0.05);染料木素可增加IGF-1R基因表达(F=21.695,q=4.94,P＜0.01),此效应也能够被ICI182,780或JB-1完全阻断(q=5.03、5.89,P＜0.01).结论 染料木素可以促进MCF-7细胞的增生和IGF-1R mRNA的表达,此作用可以被ER 拮抗剂ICI182,780或IGF-1R拮抗剂JB-1完全阻断.     

Inhibition of cell proliferation by siRNA targeting hPRLR in breast cancer MCF-7 cell line

Objective： To study the inhibition of proliferation of breast cancer by small interfering RNA（siRNA） targeting human prolactin （hPRLR） and the underlying mechanisms. Methods：The siRNA targeting hPRLR was chemically synthesized and transfected into MCF-7 cells, the expression of hPRLR was analyzed by real-time quantitive PCR, cell growth inhibition was measured with MTT assay, cell cycle of the transfected cells was examined by flow cytometry, meanwhile, expression of cyclin D1 was tested by semi-quantitative RT-PCR, Results：24 h after transfection with 100 nmol/L siRNA-PRLR, the expression of hPRLR mRNA was suppressed by 65%, cells in G1 phase increased, but cells in S phase decreased. Down regulated hPRLR expression exhibited significant inhibition in cell proliferation. And the expression of cyclin D 1 was down regulated. Conclusion：The results indicate that siRNA-hPRLR is a useful tool for silencing hPRLR expression and inhibiting cell proliferation in breast cancer MCF-7 cell line, and it may be a possible new approach for breast cancer gene therapy.     

E1A抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖及其分子机制

Objective To explore the molecular mechanism of proliferation inhibition of human breast cancer cell MCF-7 regulated by E1A gene.Methods E1A gene was transfected into MCF-7 cells by liposome reagents. RT-PCR and Western blot were used to detect E1A mRNA and protein expression and HER-2 mRNA in MCF-7. The proliferation and colony formation of MCF-7 were measured by 3-(4,5-dinmethylthiahiazo-z-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay and soft agar formation assay. The apoptosis of MCF-7 cells regulated by E1A expression was examined by flow cytometry.Results E1A was not endogenously expressed in MCF-7. E1A expression in MCF-7 could significantly decrease HER-2 mRNA and protein expression. Flow cytometry indicated that the apoptosis of MCF-7 could be induced by E1A. Meanwhile, E1A gene could significantly inhibit MCF-7 proliferation and colony formation in soft agar.Conclusion E1A gene can decrease HER-2 expression and induce the apoptosis of human breast cancer cell MCF-7, and inhibit the proliferation and colony formation of MCF-7.     

PIN1反义核酸转染抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖

目的 研究利用Pin1反义核酸阻断乳腺癌MCF-7细胞中Pin1的表达,并观察其对增殖的影响.方法 构建Pin1反义核酸真核表达质粒pPIN1as,用脂质体转染法将重组质粒转染MCF-7细胞,G418筛选稳定表达重组质粒的克隆,RT-PCR检测Pin1基因表达水平,Western blot检测Pin1蛋白的表达,MTT检测细胞增殖状况稳定表达Pin1反义核酸的MCF-7细胞内Pin1基因表达在Mrna水平和蛋白水平都显著降低;MTT实验显示MCF-7PINAS细胞的增殖速度较MCF-7细胞明显减慢（P＜0.05）.结论 阻断Pin1可以显著抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖活性.这为乳腺癌的基因研究及治疗提供了新思路.     

miR-373抑制剂对乳腺癌细胞生长的影响

目的探索miR-373抑制剂对乳腺癌细胞系MCF-7生长的影响。方法设计并合成miR-373抑制剂,通过脂质体转染至MCF-7细胞,采用荧光定量聚合酶链式反应检测转染后细胞内miR-373的表达水平,同时检测Caspase-3与Caspase-8的表达情况,并应用MTT实验检测miR-373抑制剂对MCF-7细胞生长的影响。结果 miR-373抑制剂能有效抑制MCF-7细胞中miR-373的表达。转染后,MCF-7细胞中Caspase-3与Caspase-8的mRNA水平均升高（P〈0.05）。miR-373抑制剂对MCF-7细胞的生长有明显的抑制作用,抑制率随浓度升高而增加（P〈0.05）。结论 miR-373抑制物可有效抑制MCF-7细胞增殖,有望成为治疗乳腺癌的新靶点。     

核糖核酸酶抑制因子与人乳腺癌细胞恶性增殖的相关性研究

目的:探讨核糖核酸酶抑制因子(ribonuclesae inhibitor,RI)的表达与人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、SKBR-3恶性增殖之间的关系。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测RI基因表达水平,细胞免疫化学技术检测RI蛋白表达情况。结果:人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖速度、S期所占比例均小于人乳腺癌细胞MDA-MB-231、SKBR-3(P<0.05~P<0.01),且MCF-7细胞中RI基因表达水平、蛋白表达水平明显高于MDA-MB-231、SKBR-3细胞(P<0.01)。结论:RI与人乳腺癌细胞恶性增殖生长有一定的相关性。     

靶向survivin反义寡核苷酸对MCF-7乳腺癌细胞系Survivin mRNA及紫杉醇药物敏感性的影响

目的探讨靶向survivin基因的反义寡核苷酸（ASODN）对MCF-7细胞的增殖、凋亡及药物敏感性等生物学行为的影响。 方法采用脂质体介导survivin-ASODN转染MCF-7乳腺癌细胞系，RT-PCR检测survivin mRNA的表达，MTT法检测细胞增殖能力及对药物的敏感性，流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。 结果survivin-ASODN可有效下调survivin表达水平，抑制细胞的生长，并呈时间剂量依赖关系；流式细胞术示，24h反义转染组细胞周期被阻滞于G2/M期，细胞凋亡率增加到15.23%。 紫杉醇作用早期（6h），survivin mRNA 表达增高，利于肿瘤细胞逃避紫杉醇诱导的细胞凋亡，增加肿瘤耐药的机会；反义转染组中细胞早期survivin mRNA表达上调受到抑制，对药物的敏感性增加。 结论survivin基因ASODN转染细胞后，下调survivin的表达，细胞凋亡增加，提高了对药物的敏感性。     

1,25-二羟基维生素D3对乳腺癌MCF-7细胞CYP1B1表达的作用和COX-2/PGE2通路机制

目的 分析COX-2、p-ERα、CYP1B1在人乳腺癌组织和ERα阳性表达人乳腺癌细胞系MCF-7中的表达规律,探讨1,25-二羟基维生素D3 [1,25(OH)2D3 ]在人乳腺癌细胞MCF-7中通过COX-2/PGE2通路对CYP1B1表达和细胞增殖、细胞周期转化的影响及作用机制。方法 用免疫组织化学法检测42例人乳腺癌组织中COX-2、p-ERα、CYP1B1的表达,并分析其相关性;MTT法检测1,25(OH)2D3对MCF-7细胞增殖的影响,并确定后续实验药物浓度;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR检测MCF-7细胞COX-2 mRNA水平;ELISA法检测细胞培养上清液中PGE2水平;蛋白质印迹法检测MCF-7细胞COX-2、p-ERK、p-ERα、CYP1B1蛋白水平;免疫细胞荧光检测COX-2、p-ERα、CYP1B1蛋白在MCF-7中的原位表达。结果 在人乳腺癌组织中COX-2、p-ERα、CYP1B1蛋白呈阳性表达,两两之间均呈正相关性(P<0.05)。1,25(OH)2D3对MCF-7细胞增殖具有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。应用100 nmol/L 1,25(OH)2D3 72 h后,MCF-7细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05);细胞COX-2 mRNA表达减少(P<0.05);细胞培养上清中PGE2水平降低(P<0.01);COX-2、p-ERK、p-ERα及CYP1B1蛋白表达均减少(P<0.05)。结论 在乳腺癌中,COX-2/PGE2通路对CYP1B1的表达具有正向调控作用。1,25(OH)2D3可通过抑制COX-2/PGE2通路减少CYP1B1的表达,对乳腺癌细胞MCF-7的增殖产生抑制作用。     

姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制作用及机制研究

目的:探讨姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制、诱导凋亡作用及其分子作用机制。方法:MTT法检测姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;流式细胞术PI单染法检测细胞周期;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的mRNA表达水平。结果:姜黄素对MCF-7细胞生长有明显抑制作用,并呈剂量、时间依赖性;FCM结果显示姜黄素能使MCF-7细胞阻滞在G1/S期;Annexin V/PI双染法验证姜黄素可以诱导细胞凋亡;RT-PCR结果显示Bax mRNA水平明显上调,而Bcl-2的mRNA表达水平降低。结论:姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖具有显著的抑制作用并可诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其上调Bax基因表达水平的同时,下调Bcl-2基因表达水平,从而诱导细胞凋亡有关。