同源导入近交系绿色荧光裸小鼠Foxn1nu.B6-CAG-EGFP/SU的建立

目的建立一个能稳定表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorecence protein,EGFP)的裸小鼠近交新品系,供包括人脑胶质瘤在内的所有人类肿瘤移植实验用。方法将雌性C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)转基因小鼠和雄性Foxn1nu裸小鼠,按同源导入方法进行杂交和回交,用荧光手电筒和匹配的眼镜、多功能活体成像仪、荧光显微镜对是否表达EGFP进行鉴别,传至F10后进行遗传学检测。结果所建品系命名为Foxn1nu.B6-CAGEGFP/SU(Soochow University),14个遗传生化位点中13个表型与BALB/c(Foxn1nu)吻合,唯Pep3(肽酶-3)的电泳为b型,而标准的BALB/c近交系为a型;外周血淋巴细胞占全部有核细胞15%,T淋巴细胞仅占0.3%,与亲本的Foxn1nu一致。结论成功地建立了一个既与亲本C57BL/6-Tg N(CAG-EGFP)-样稳定表达EGFP,又与Foxn1nu裸小鼠(BALB/c背景)一样具有T细胞缺乏的荧光裸小鼠新品系-Foxn1nu.B6-CAG-EGFP|SU,Pep3为b型是有别于Foxn1nu裸小鼠的生化遗传标记位点。     

同源导入近交系绿色荧光裸小鼠

目的 建立一个能稳定表达EGFP的裸小鼠近交新品系,供包括人脑胶质瘤在内的所有人类肿瘤移植实验用。方法 将♀C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)转基因小鼠和♂Foxn1nu裸小鼠,按同源导入方法进行杂交和回交,用荧光手电筒和匹配的眼镜、多功能活体成像仪、荧光显微镜对是否表达EGFP进行鉴别,传至F10后进行遗传学检测。结果 所建品系命名为 Foxn1nu.B6-CAG-EGFP/SU (Soochow University),14个遗传生化位点中13个表型与BALB/c（Foxn1nu）吻合,唯Pep3（肽酶-3）的电泳为b型,而标准的BALB/c近交系为a型;外周血淋巴细胞占全部有核细胞15%,T淋巴细胞仅占0.3%,与亲本的Foxn1nu一致。结论 成功地建立了一个既与亲本C57BL/6-TgN(CAG-EGFP)－样稳定表达EGFP,又与Foxn1nu裸小鼠（BALB/c背景）一样具有T细胞缺乏的荧光裸小鼠新品系- Foxn1nu.B6-CAG-EGFP｜SU ,Pep3为b型是有别于Foxn1nu裸小鼠的生化遗传标记位点。     

裸基因对小鼠胸腺发育的影响

分别对7、14、21、28、35、60、90日龄的BALB/c-nu/nu、BALB/c-nu/+和BALB/c-+/+三种基因型小鼠的胸腺进行检查。结果发现BALB/c裸小鼠(nu/nu)缺乏胸腺,杂合子小鼠(nu/+)的胸腺重量和胸腺皮质厚度均明显低于纯合子正常小鼠(+/+)。提示突变小鼠胸腺的表现型受裸基因及基因型的控制。     

非近交系615/PBI-beige/nude小鼠免疫学功能的初步研究

非近交系615/PBI-beige/nude小鼠(以下简称615-bg/nu)是一种T和NK细胞功能联合缺陷型动物,其主要遗传背景来源于国内培育的近交系小鼠615/GI。它是以615/PBI-nu和615.B6—bg为亲本动物,采用杂交-内交和回交-内交等5个不同交配步骤培育而成。初步研究表明,该615-bg/nu小鼠脾细胞对ConA诱导的增殖反应,与非beige裸鼠相近,而其自然杀伤(NK)细胞活性(9.2±2.4％)明显低于615-nu裸小鼠(39±4.8％)和BALB/C-un裸小鼠(32±4.6％)(P<0.01)。此外,我们发现在beige和非beige小鼠,其脾细胞的NK活性都有随其nu基因数目增加而升高的趋势,这表明杂合状态下的nu基因亦可使小鼠的NK活性增高。这种低NK活性的T细胞缺陷动物模型——615-bg/nu的育成,为肿瘤免疫学和实验肿瘤学的研究工作提供了一种极有价值的新实验材料。     

不同部位皮下裸小鼠移植瘤特点比较

裸小鼠先天性无胸腺 ,主要的缺陷为 :11号染色体上有一个隐性突变基因 ,毛发生长发育异常 ,表现为全身形似无毛 ,呈裸体外表 ,无胸腺 ,仅有胸腺残迹或异常的胸腺上皮 ,这种上皮不能使T细胞正常分化 ,缺乏成熟T细胞的辅助、抑制及杀伤功能 ,因而细胞免疫力低下 ,不能执行正常T细胞功能。为了比较不同皮下部位裸小鼠移植瘤特点 ,笔者选用了 2 6只SPF级BalB/CA nu品系 3～ 4周龄的裸鼠做实验 ,现报告如下。1　材料和方法1.1　材料裸小鼠 2 6只 ,均为雄性 (中国医学科学院动物繁育场提供 ) ,体重 18～ 2 0 g ,人肺腺癌细胞系 (购于上海细胞…     

BALB/c系裸小鼠雌性纯合子繁殖试验

裸小鼠是一种先天性免疫缺陷型动物。一般认为,雌性纯合子(nu/nu)裸小鼠缺乏生育能力或母性差,故采用nu/+((?))×nu/nu((?))方式来繁殖生产。作者在BALB/c裸小鼠的饲养繁殖过程中,曾发现雌性纯合子有受孕现象,继而进一步作繁殖试验,旨在探讨雌性纯合子裸小鼠的可育性,并期望寻找新的繁殖方式,加速裸小鼠的繁殖生产速度。材料与方法 1.试验动物以BALB/c系裸小鼠4对为试验组,BALB/c系nu/+((?))×nu/nu((?))3对为对照组,均由中科院上海实验动物中心购入(购入时为4周龄),按雌雄单配式繁殖。     

荷人脑瘤裸小鼠模型NHG-1的活体骨髓细胞SCE观察

本文报告采用Perdo 方法测定荷人脑胶质瘤裸小鼠模型(NHG-1)和NC 系正常裸小鼠活体骨髓细胞的姐妹染色单体互换(SCE)。结果提示:NHG-1的SCE 值(2.47±0.146)显著高于正常鼠(1.77±0.135)。说明SCE 值增高是NHG-1的一个重要染色体特征.     

裸小鼠内源性C型病毒的显现及其侵染异种移植瘤的电镜观察

裸小鼠因胸腺先天发育不良、T细胞免疫功能缺损而成为移植人体肿瘤的理想动物模型。近年发现,裸小鼠内源性C型病毒有侵染异种移植瘤的情况,其结果有可能改变移植瘤的生物学特性,使肿瘤生化、免疫研究复杂化。对于此类病毒的活化机制及其生物危害业已引起肿瘤工作者的重视。自1981年以来,本文作者在开展裸小鼠繁殖研究和建立异种移植瘤模型的过程中,对裸小鼠内源性C型病毒的显现特点及其侵染异种移植瘤的现象进行了比较系统的电镜观察,现将结果报告如下: 材料和方法实验所用的二个品系裸小鼠分别引自日本国和美国BALB/CA/JCL(nu/nu,un/+)及Swiss-DF(nu/     

裸小鼠人脑胶质瘤模型NHG-1的染色体分析

本文报告了我室的SHG-44细胞接种于裸小鼠以后所建立的NHG-1模型染色体G显带、C显带分析结果,和SHG-44细胞G显带核型分析,初步认为SHG-44细胞和NHG-1第1、22代再培养细胞中均存在着2条相似2号染色体的异常染色体。染色体众数或核型亦基本一致,从而提示NHG-1移植瘤起源于人脑恶性胶质瘤而不是裸小鼠自发瘤。     

裸鼠自发淋巴瘤生物特性和病理形态观察

本文介绍纯合子Swiss裸鼠自发恶性淋巴瘤的移植特性和病理形态观察。取肿瘤组织悬液接种无T淋巴细胞的纯合子(nu/nn)小鼠皮下,每点注射0.2ml,肿瘤发生率100%;接种有T淋巴细胞的小鼠均不生长。该肿瘤共传5代,其特性均与原自发瘤一样。光镜检查为B细胞型恶性淋巴瘤;电镜检查符合B细胞恶性淋巴瘤。     

人肝癌细胞系9724在不同免疫缺陷小鼠中的增殖特点

目的 探讨人类肝癌细胞9724在不同免疫缺陷小鼠的生长及模型特点。方法 体外培养人类肝癌细胞9724；按种到不同免疫力小鼠（B缺陷的CBA／N，T缺陷的BALB／c裸鼠，T，B缺陷的C.B-17 SICD小鼠及免疫重建的SCID小鼠。免疫正常的BALB／c作为对照组）皮下、肝内、腹腔，观察其生长特性。结果 BALB／c小鼠和用BALB／c外周淋巴细胞免疫重建的SCID（BALB／c-PBL-SCID)不成瘤；CBA/N小鼠随接种数量和途径不同而有不同的表现；BALB／c裸鼠，SCID小鼠和CBA／N小鼠外周淋巴细胞重建的SCID（CBA／N－PBL－SCID）100％成瘤。结论 SCID小鼠是建立肝癌模型的最佳小鼠，也是进行肿瘤免疫研究最佳模型动物；T细胞在异种瘤移植排斥中起主要作用。     

小鼠SRS白血病病毒感染的细胞株的建立及其生物学特性

用小鼠SRS腹水瘤的无细胞提取液感染体外培养的小鼠NIH/3T3细胞,建立可传递的、感染SRS白血病病毒(SRSV)的细胞株。感染的NIH/3T3细胞,电镜下可见A型和C型病毒颗粒,X-C检测和逆转录酶活性测定均为阳性。感染SRSV的细胞形态变圆,并出现集落性生长,给3只BALB/c(nu nu)裸鼠皮下接种,在15d内都产生纤维肉瘤。Southern blot分子杂交法证明,感染的NIH/3T3细胞内有游离的前病毒DNA存在,将其无细胞提取液注入SW-1近交系新生乳鼠,在191d内有52.38％诱发了淋巴细胞白血病和胸腺淋巴瘤。     

DIABETOGENIC T CELLS INDUCE AUTOIMMUNE DIABETES IN BALB/c MICE

Objective To investigate the role of T cell and its subsets in the induction of insulifis and type 1 diabetes mellitus （T1DM） in BALB/c mice. Methods Autoimmune diabetes mellitus was developed by intraperitoneal injection of 40 mg/kg streptozotocin （STZ） daily for 5 consecutive days in BALB/c mice as sources of donor cells. Spleen cells from diabetic mice were then cultured for 7 days in the stimulation of interleukin-2 （IL-2） to harvest diabetogenic T cells, which were subse-quently transferred into normal BALB/c mice recipients. MTT, ELISA, and HE staining were used to analyze the lym- phocyte proliferation, cytokine （ IL-2, interferon-γ, IL-4, and IL-10） levels, and pathological changes in pancreatic is- lets. Results As few as 3×10^6 diabetogenic T cells successfully induced diabetes mellitus in recipients pretreated with STZ twice, whereas transfer of equal amount of normal splenocytes, T cell-depleted diabetogenic splenocytes, or diabe-togenic CD4^＋ T cells alone in recipients receiving STZ twice pretreatment was proved not to induce diabetes mellitus either. A markedly increased lymphocyte proliferation, high levels of interferon-γ/and IL-2 in the supernatants of diabeto-genic T cells were observed. In addition, a markedly enhanced lymphocyte proliferation, a high level of interferon-γ/secretion in serum, and numerous lymphocytes infiltration in pancreatic islets were detected in the diabetic mice induced by diabetogenic T cells transfer. Conclusions A novel T1DM murine model is established in STZ-pretreated BALB/c mice by adoptive transfer of diabetogenic T cells. CD4^＋ T cells with interferon-γ/may promote the onset of diabetes mellitus.     

过表达IL-12的恶性黑色素瘤细胞在肿瘤免疫微环境重建过程中抑制T细胞表面PD-1的表达

目的 探讨过表达IL-12的恶性黑色素瘤细胞B16对肿瘤免疫微环境重建过程中T细胞表面PD-1表达水平的影响。方法 利用慢病毒感染小鼠黑色素瘤细胞B16以构建稳定过表达IL-12的B16细胞株;利用qRT-PCR、ELISA检测IL-12的表达情况;通过平板细胞克隆形成实验验证转染病毒对B16细胞增殖能力的影响;利用ELISA检测B16/IL-12细胞在体内表达IL-12的能力;将健康的C57BL/6小鼠随机分为2组,分别接种B16细胞及B16/IL-12细胞,14 d后用流式细胞术检测肿瘤引流区淋巴结中高表达PD-1的T细胞比例;利用650cGy剂量的放射线照射C57BL/6小鼠以构建免疫重建模型,并将造模后的小鼠随机分为2组,分别接种B16细胞及B16/IL-12细胞,将未接受放疗处理的小鼠作为对照组接种B16细胞,记录各组小鼠肿瘤生长情况,接种细胞14 d后用流式细胞术分别检测肿瘤引流区淋巴结以及肿瘤组织中PD-1+T细胞比例。结果 B16/IL-12细胞相比于B16细胞显著增加IL-12的表达（P<0.001）;转染IL-12过表达慢病毒并未对B16细胞增殖能力造成显著影响（P>0.05）;接种B16/IL-12细胞的何瘤小鼠在其肿瘤组织中含有更高水平的IL-12（P<0.01）;常规荷瘤小鼠模型中,B16/IL-12组小鼠较B16组小鼠具有更低比例的CD4+PD-1+T细胞（P<0.01）,而CD8+T细胞群中,PD-1表达水平差异不显著（P>0.05）;免疫重建小鼠模型中,接种B16细胞的小鼠肿瘤引流区淋巴结和肿瘤组织中的CD4+PD-1+T细胞（P<0.05）及CD8+ PD-1+T细胞比例（P<0.01）均高于正常B16组小鼠,接种B16/IL-12细胞的免疫重建小鼠肿瘤引流区淋巴结及肿瘤组织中的CD4+PD-1+T细胞比例（P<0.01）和CD8+ PD-1+T细胞比例（P<0.001）相比于接种B16细胞的免疫重建小鼠均有显著降低;在小鼠肿瘤生长过程中,接种B16/IL-12细胞的免疫重建小鼠的肿瘤生长受到明显抑制（P<0.001）。结论 肿瘤区域过表达IL-12后可减少免疫重建过程中肿瘤区域T细胞表面PD-1 的表达,达到良好的肿瘤控制效果。     

IL-2激活的胃癌引流区淋巴结淋巴细胞的LAK样活性

LAK细胞的抗肿瘤抗转移作用已在动物实验和临床研究中得到证实。目前,临床上多采用患者自身的外周血淋巴细胞作为LAK前体细胞的来源。为了诱导出足够数量的具有LAK活性的细胞,需要反复分离外周血。这会使机体发生贫血,血小板减少和感染等副作用。在肿瘤的手术治疗中,常将肿瘤引流区淋巴结和原发肿块一起切除。清除的淋巴结中含有大量的淋巴细胞,若能使这些细胞获得LAK样活性并用于自体回输,不但可以增加LAK细胞的来源、防止由于反复分离外周血所     

自身免疫调节因子缺失对小鼠脾脏T/B淋巴细胞功能的影响

目的：探讨自身免疫调节因子（Aire）基因的缺失对小鼠脾脏T／B淋巴细胞功能的影响。方法：利用淋巴细胞转化实验和酶联免疫吸附实验分别检测T／B淋巴细胞在受到特异性及非特异性刺激后的增殖情况以及细胞因子和免疫球蛋白分泌状况。结果：与对照鼠相比，Aire^≠鼠的脾脏T／B淋巴细胞增殖功能并未受到显著影响；T／B淋巴细胞分泌IL-2和Ig的能力无统计学意义。结论：Aire基因不影响外周免疫器官T／B淋巴细胞的基本功能。     

小鼠免疫力对接种人类肝癌细胞系9724生长的影响

目的 探讨不同免疫力小鼠的免疫细胞对人类肝癌细胞系9724生长的影响及异种特异性细胞毒杀伤能力。方法 将培养后的人类肝癌细胞系接种到不同免疫力小鼠（免疫正常的BALB／c,B缺陷的CBA／N,T缺陷的BALB/c nude及T,B缺陷的C.B－17 SICD小鼠）右后臀皮下,观察其生长;取实验和相应的正常鼠脾细胞进行细胞毒杀伤试验。结果 BALB/c和CAB／N小鼠不成瘤;BALB/c nude和C.B－17 SCID小鼠100％成瘤;SCID免疫重建组用BALB/c外周淋巴细胞重建SCID（BALB/c－PBL－SCID）的不成瘤,用CAB／N外周淋巴细胞重建的SCID（CBA／N－PBL－SCID）成瘤,接种过瘤的BALB/c和CBA／N小鼠脾细胞对癌细胞有较强的细胞毒杀作用,对照组和nude,SCID小鼠无杀伤作用;SCID免疫重建有较小的杀伤作用。结论 T细胞在异种瘤移植排斥中起主要的免疫杀伤作用,这种排斥是异种特异笥的;肿瘤免疫需要综合性免疫作用。