小鼠单疱病毒角膜炎行羊膜移植MMPs及TIMPs表达的变化

目的:探讨羊膜移植对BalB/c小鼠感染单纯疱疹病毒-1(HSV-1)后基质金属蛋白酶-2,-8,-9及组织金属蛋白酶抑制剂TIMP-1,TIMP-2表达变化及其在单疱病毒角膜炎(HSK)病程中所起的作用。方法:将40只小鼠随机分为实验组和对照组,将5μl(105PFU)HSV-1感染小鼠单侧右眼角膜,建立单疱病毒角膜炎的动物模型。对实验组小鼠右眼角膜行羊膜移植术。分别在HSV-1感染后的第2,7,14 d处死小鼠,用免疫组化方法对小鼠感染HSV-1后MMP-2、MMP-9、MMP-8、TIMP-1、TIMP-2的表达变化进行研究,探讨它们在单疱病毒性角膜炎发展过程中所起的作用。结果:在对照组,角膜中MMP-2、MMP-8、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2在第2天出现表达且表达主要位于浅表基质层及上皮下的炎性细胞中。感染后第14天可见坏死性角膜炎及角膜溃疡形成,同时角膜基质和浸润的炎性细胞中尤其溃疡处,可见MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2表达显著增加。溃疡区域有大量MMP-8阳性染色的中性粒细胞。实验组各时间点MMP-2,-9,-8活性均低于对照组,TIMPS表达高于对照组。结论:行羊膜移植可抑制角膜细胞和浸润的炎性细胞分泌产生MMPs,促进TIMPS表达,可能对上皮性角膜炎与溃疡形成过程起重要的抑制作用。     

MMP-2,9在羊膜移植治疗小鼠单疱病毒性角膜炎中的表达

目的:观察保存人羊膜移植(AMT)对单疱病毒性角膜基质炎(HSK)中基质金属蛋白酶(MMPs)在小鼠角膜中表达的影响,从而探讨羊膜移植对MMP-2,9的调节作用及对HSK治疗的潜在作用。方法:雌性BALB/c小鼠眼角膜接种Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1,SM44毒株)以诱发单纯疱疹性角膜炎。选取右眼感染2 d后出现典型树枝状上皮病变的小鼠40只,随机分为实验组和对照组,实验组小鼠右眼角膜行AMT,对照组仅缝合睑裂不行AMT。术后第0,2,7,14天处死动物取出角膜,应用Western blot方法对结果进行分析,增强化学发光法(ECL)检测小鼠角膜中MMP-2,9的表达。结果:在对照组,角膜中MMP-2,9在第2天表达增加,第7天表达暂时减弱,第14天时达高峰。实验组羊膜移植2 d后角膜炎症反应明显消退且上皮缺损较快愈合,MMP-2,9阳性表达减弱,各时间点MMP-2,9的表达均低于对照组,其差异均有显著性意义(P<0.01)。结论:羊膜移植术可通过抑制角膜细胞及浸润的炎症细胞产生的MMP-2,9,促进快速上皮化并减轻角膜基质炎症反应,抑制角膜新生血管化和溃疡的形成。     

MMP-2、TIMP-2与碱烧伤后角膜新生血管形成的实验研究

目的:探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-2组织型抑制剂(TIMP-2)在碱烧伤大鼠角膜新生血管(CNV)形成中的表达和意义。方法:采用碱烧伤大鼠角膜建立CNV模型,摘除角膜作病理切片,多形核白细胞(PMN)记数;免疫组化法检测MMP-2、TIMP-2的表达。结果:烧伤后1d角膜缘PMN开始增多,到CNV7d组PMN增加最明显,此后逐渐减少;免疫组化显示:MMP-2在CNV中阳性表达逐渐增加,于7d表达最明显,此后随炎性细胞的减少而减弱,21d后几乎无表达;TIMP-2则于早期变化不明显,7d表达开始升高,14d达高峰。结论:烧伤后CNV形成早期,MMP-2活性增高,继而TIMP-2表达增加,使MMP-2活性受抑,基底膜降解受阻,新生血管延伸停滞;CNV形成中,MMP-2的表达增加,并与角膜的炎性反应程度一致,PMN浸润可能是CNV形成的关键因素。     

活化巨噬细胞后真菌性角膜炎中iNOS、MIF、MPO的表达

目的观察巨噬细胞活化后小鼠真菌性角膜炎中的细胞因子一氧化氮合酶（iNOS）、巨噬细胞移动抑制因子（MIF）、髓过氧化物酶（MPO）的表达水平,探讨机体免疫在该病发生发展中的作用。方法应用角膜表层镜法建立Balb/c小鼠茄病镰刀菌性角膜炎模型,分别在小鼠角膜感染真菌前注入乳胶微粒和PBS液,形成实验组和对照组。在感染后第1,3,5,7 d,裂隙灯显微镜观察各组角膜炎特点;H-E染色观察角膜病理变化;Real time-PCR检测角膜中细胞因子MIF、MPO、iNOS的表达。结果（1）临床特征：实验组,早期角膜浸润混浊且进行性加重,第7 d最严重;对照组,早期角膜浸润混浊进行性加重,第5 d后新生血管大量生长。（2）H-E染色：实验组可见早期角膜中央大量炎症细胞浸润,至第7 d最重。对照组可见早期角膜缘、角膜基质及前房中有炎症细胞浸润,第5 d后明显减少,基质纤维细胞逐渐增多。（3）Real time-PCR检测结果表明,MPO、MIF、iNOS细胞因子基因mRNA在接种真菌后第1 d,实验组较对照组低,随后实验组细胞因子浓度持续升高,且均高于对照组,于第7 d达到顶峰。结论活化角膜巨噬细胞后,MPO、MIF、iNOS等细胞因子在真菌性角膜炎中的表达增强,可能在真菌性角膜炎的病理生理中起重要作用。     

羊膜移植对单纯疱疹病毒性角膜基质炎中明胶酶活性表达的影响

目的:探讨羊膜移植对小鼠角膜1型单纯疱疹病毒(HSV-1)感染后发生角膜基质炎(HSK)的角膜中明胶酶(Gelatinases)的活性表达变化的影响,探讨羊膜移植对HSK的治疗作用及其机制。方法:将50只BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,每组各25只,105pfu/L HSV-1病毒(SM44株)感染小鼠角膜,制作HSK小鼠模型。对实验组小鼠右眼角膜行羊膜移植术,对照组角膜不行羊膜移植术。在羊膜移植术后第0,2,7,14,21天处死动物取角膜。应用明胶酶谱(Gelatin Zymography)方法和计算机图像分析系统检测小鼠角膜明胶酶的酶活性表达的变化。结果:角膜感染HSV-1后,明胶酶谱显示:实验组小鼠角膜中酶原形式的pro-MMP-9(92 kU)在AMT后第2,14,21天表达增强。活性形式的MMP-9(82 kU)在AMT后各时间点均有表达,但在第2,14及21天表达增强。pro-MMP-2(72 kU)条带在AMT后各时间点均有表达。而MMP-2活性条带(62 kU)则出现在AMT后第14天和21天。对照组小鼠角膜中明胶酶的表达变化情况跟实验组类似,但是,MMP-2活性各时间点均较实验组为强(P<0.05)。而MMP-9的活性在羊膜移植后第2天(P<0.01),第14及21天(均为P<0.05)均较实验组为强。结论:羊膜移植对HSV-1感染小鼠角膜后引起的坏死性角膜基质炎形成的角膜上皮缺损和角膜基质溃疡有明显的修复作用,这种作用的机制可能是通过抑制明胶酶的活性表达而实现的。     

MMP-2和FAK在单疱病毒性角膜炎中的表达

目的:探讨Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)感染BALB/c小鼠眼角膜及体外培养的人角膜上皮细胞所致的基质金属蛋白酶2(MMP-2)和黏着斑激酶(FAK)表达的变化。方法:以HSV-Ⅰ感染BALB/c小鼠眼角膜制作单疱病毒性角膜炎(HSK)模型,应用免疫组织化学法检测的FAK表达;以HSV-Ⅰ感染体外培养人角膜上皮细胞(HCE),应用聚合酶链反应法、免疫印迹法、免疫组织化学法、免疫荧光法分别于2,20,40h检测HCE中MMP-2和FAK及磷酸化黏着斑激酶(phosphor-FAK)的表达情况。结果:HSK模型的角膜上皮细胞排列紊乱,基质水肿,中性粒细胞增多,FAK阳性细胞数增多,同阴性对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);HCE感染HSV-Ⅰ后2,20,40h,MMP-2和FAK mRNA表达分别同阴性对照组相比显著增强(P<0.01,P<0.05);感染后2hMMP-2、FAK、P-FAK蛋白表达同阴性对照组相比无显著差别(P>0.05);感染后20h、40h,MMP-2、FAK、P-FAK蛋白表达同阴性对照组相比差别显著(P<0.05)。结论:在HSV-Ⅰ感染的早期,磷酸化的FAK在病毒入侵细胞和MMP-2的激活过程中起着重要作用。FAK激活MMP-2的具体通路有待进一步研究。     

诱导型一氧化氮合酶表达与兔角膜碱烧伤新生血管的关系

目的研究诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在兔碱烧伤角膜的表达与角膜新生血管形成的关系。方法将33只家兔分为正常组（3只,6眼）、烧伤组（30只,60眼）,以2mol/LNaOH制备双眼角膜重度碱烧伤模型,用裂隙灯图像分析系统记录角膜新生血管（CoNV）生长情况。碱烧伤组分批（n=5）于伤后第1、4、7、14、21、28天处死家兔,分别取角膜组织行病理学检查和iNOS的免疫组织化学检测。结果iNOS在正常兔角膜上皮层及基质层仅有少量表达,在烧伤组表达明显增强（P〈0.05）,表达范围主要在基质层炎性细胞、角膜上皮细胞及新生血管内皮细胞,表达峰值在术后第7天,随后下降,在第21天时又有所回升。结论碱烧伤后角膜组织中iNOS的表达明显增加,其变化趋势与碱烧伤后角膜新生血管的生长曲线相一致且高峰期提前2～3d,提示iNOS水平与无菌性炎症性新生血管形成有明显的相关性。     

实验性单纯疱疹性角膜炎的组织病理学研究

目的：动态观察1型单纯疱疹病毒（HSV－1）感染角膜后的组织病理改变。方法：BALB／c小鼠眼角膜接种HSV－1（KOS株）以诱发单纯疱疹性角膜炎（HSK）。分别收集正常眼球及感染后第2、7、14天的感染眼球，组织学观察结膜及角膜的病理过程。结果：感染后第2天，中性粒细胞、淋巴细胞及其他单核细胞浸润结膜并在第7－14天间快速向中央角膜扩散。结论：在HSK发展中，中性粒细胞浸润导致进行性的组织破坏。     

MMP-9在大鼠茄病镰刀菌性角膜炎中的表达

目的研究基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）在大鼠茄病镰刀菌性角膜炎中的表达，分析MMP-9与真菌性角膜炎发病的关系，为针对抑制MMPs活性治疗真菌性角膜炎提供理论依据。方法角膜划痕法联合角膜接触镜法制作大鼠茄病镰刀菌性角膜炎动物模型；应用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time polymerase chain reaction，Real-time PCR）和免疫组织化学染色检测MMP-9在mRNA水平和蛋白质水平的表达。结果正常大鼠角膜组织中有MMP-9mRNA的表达，MMP-9分布于角膜上皮层的少数基底细胞；茄病镰刀菌感染角膜后，MMP-9 mRNA表达明显上升，MMP-9主要分布于浸润的炎症细胞。结论MMP-9的表达与真菌性角膜炎角膜病变的严重程度呈正相关，MMP-9在真菌性角膜炎的发病中可能具有重要作用。     

GM6001对宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润 人脐静脉内皮细胞的影响

目的：探讨基质金属蛋白酶(MMP)-9在宫颈鳞癌HCE1多细胞球体中的表达与宫颈癌浸润的关系,研究MMP抑制剂GM6001对HCE1多细胞球体浸润人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的影响。方法：建立宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润HUVECs模型;采用免疫组织化学法检测宫颈鳞癌HCE1单层细胞、多细胞球体MMP-9的表达;光镜下观察GM6001（2.5,12.5 μmol/L）干预宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润模型的形态学改变并检测干预后HCE1浸润模型中MMP-9的表达。结果：成功建立HCE1浸润模型;HCE1多细胞球体中MMP-9的阳性表达率明显高于HCE1单层细胞（P＜0.05）;与对照组比较,GM6001低剂量组和高剂量组HCE1多细胞球体浸润能力抑制率分别为26.09%和92.95%(P＜0.05),其浓度增加抑制能力增强;宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润模型（第4天）GM6001高剂量组HCE1多细胞球体中MMP-9表达较对照组明显下调（χ2=7.033,P＜0.05）。结论：HCE1多细胞球体的浸润能力增强,可能与多细胞球体中MMP-9表达上调有关; GM6001可以下调HCE1多细胞球体中MMP-9的表达,部分阻断HCE1多细胞球体对单层HUVECs的浸润作用。     

实验性单纯疱疹性角膜炎中基质金属蛋白酶mRNA的表达

目的 :探讨Ⅰ型单纯疱疹病毒 (HSV 1)所致的角膜炎中基质金属蛋白酶 (MMPs)mRNA的表达。方法 :雌性BalB/c小鼠眼角膜接种HSV 1(KOS株 )以诱发单纯疱疹性角膜炎 (HSK)。收集正常角膜及感染后第 2 ,7,14d的感染角膜 ,应用RT PCR技术检测基质金属蛋白酶 2 ,基质金属蛋白酶 9(MMP 2 ,MMP 9)的mRNA表达。结果 :除正常角膜MMP 9mRNA为阴性表达其他各组均获得阳性目的片断。感染后第 2dMMP 2mRNA表达较正常组差异没有显著性 (P >0 .0 5 ) ,感染后第 7dMMP 9mRNA表达与第 2d的表达差异没有显著性 (P >0 .0 5 ) ,其他各组差异均有显著性意义 (P <0 .0 1)且大体上呈随感染天数增加表达增高的趋势。结论 :在实验性HSK中存在基质金属蛋白酶mRNA的表达且MMP 2 ,MMP \|9的mRNA高表达参与了角膜溃疡、角膜新生血管的形成等病变的发生。     

眼表面郎格罕细胞对单纯疱疹病毒感染的反应

对豚鼠眼表面 LC 在实验性 HSV-1(F 株)角膜划痕接种后的反应进行了形态学和定量研究。接种后4 d,可见角膜缘及角膜内 LC 的数量明显增加。角膜缘者,至第6d 达到高峰值(390±94/mm~2),为对照组的2.8倍;角膜者至第8 d 达到高峰值(366±34/mm~2),60倍于对照组。接种后第11d,两处 LC 数量开始减少,但直至种毒后第51d,仍高于正常水平。对于局部 LC 密度的改变在机体免疫反应中的意义其及与角膜炎发展的关系进行了讨论。     

细菌性角膜溃疡角膜组织中MMP-2、MMP-9表达的研究

目的:研究细菌性角膜溃疡患者角膜组织中的基质金属蛋白酶-2、-9(MMP-2、-9)的表达与分布,探讨其含量的变化与角膜病变的相关性.方法:收集细菌性角膜溃疡患者的病变角膜和正常角膜,应用免疫组化染色方法检测MMP-2、MMP-9在角膜分布和表达,应用图像分析系统分析.结果:细菌性角膜溃疡角膜组织中,MMP-2的阳性表达主要分布于角膜基质层;MMP-9的阳性表达主要分布于角膜上皮层和基底膜附近.病变角膜组织中两种酶的阳性表达均具有统计学意义.结论:MMP-2、MMP-9对细菌性角膜溃疡的发展可能起重要作用.MMP-2参与角膜基质层的损害,MMP-9参与角膜上皮层和基底膜的损害.     

羊膜移植对急性碱烧伤角膜中MMP-9及TIMP-1表达的影响

目的 :探讨羊膜移植对角膜碱烧伤后基质金属蛋白酶 (MMP 9)及其抑制剂 (TIMP 1)在小鼠角膜中的表达影响及意义。方法 :将 4 0只昆明小鼠随机分为实验组和对照组 ,采用 1mol·L-1氢氧化钠溶液烧伤小鼠角膜 ,建立炎症性角膜碱烧伤动物模型 ;对实验组小鼠右眼角膜行羊膜移植术 ;对照组不行羊膜移植。然后在羊膜移植术后第 2 ,7,14 ,2 1d处死动物。用免疫组织化学染色方法和计算机图像分析系统检测小鼠角膜烧伤后基质金属蛋白酶在角膜中的分布及其平均光度值。结果 :在对照组 ,角膜中MMP 9在第 2d出现表达 ,第 7d达高峰 ,以后逐渐降低。TIMP 1开始表达不明显 ,第 7d出现表达 ,14d达高峰 ,以后逐渐降低。羊膜移植组各时间点MMP 9表达低于对照组 ,而TIMP 1表达高于对照组。结论 :羊膜移植术可通过调节基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达平衡 ,从而抑制和延迟碱烧伤后角膜融解的发生和发展。     

GM6001对真菌性角膜炎角膜组织中基质金属蛋白酶-1表达和活性的影响

目的 检测兔真菌性角膜炎中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的表达,探讨MMP-1在真菌性角膜炎发病机制中的作用及其选择性抑制剂GM6001对其表达的影响.方法 75只新西兰大白兔随机分为3组:对照组、真菌性角膜炎组和GM6001治疗组.分别于接种真菌后12h,24h,4d,7d,14d,21d,28d用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测角膜组织中MMP-1 mRNA的表达.结果 对照组及12h时相兔角膜组织中,未检测到MMP-1 mRNA表达,24h时相检测到MMP-1 mRNA表达,与对照组比较,差异有显著性(P＜0.05).随时间延长,MMP-1 mRNA表达量逐渐升高,并持续至28d.自24h时相起,GM6001治疗组各时相兔角膜组织中MMP-1均有表达,但明显低于角膜炎组,差别有统计学意义(P＜0.05).结论 MMP-1与真菌性角膜炎组织溶解密切相关,GM6001对MMP-1的表达和活性有明显的抑制作用,进而抑制角膜组织的溶解.     

肿瘤坏死因子-α对体外培养的兔角膜上皮细胞基质金属蛋白酶表达活性的影响

目的:观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的兔角膜上皮细胞基质金属蛋白酶-2、-9(MMP-2、MMP-9)表达活性的影响,探讨MMP-2、MMP-9的调节机制及TNF-α和MMP-2、MMP-9在角膜炎症性病变中的作用。方法:组织块法培养兔角膜上皮细胞,经不同浓度(1,10,100μg/L)TNF-α诱导24 h后,收集条件培养基应用明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9的活性,利用计算机图像分析系统进行统计分析。结果:在体外培养的角膜上皮细胞中,TNF-α能增强MMP-2、MMP-9的活性,并具有一定的浓度依赖性,TNF-α可激活MMP-2酶原,使其表现出活化形式。结论:炎性因子TNF-α可以上调角膜上皮细胞分泌的MMP-2、MMP-9的活性,针对这一过程进行干预对防治角膜炎性疾病具有重要意义。     

急性百草枯中毒大鼠肺间质成纤维细胞中MMP-9表达的研究

目的观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠肺间质成纤维细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达变化,探讨其在PQ中毒致肺纤维化中的意义。方法SD大鼠50只,随机分为染毒组和对照组,染毒组用PQ 50 mg/kg灌胃染毒,对照组代以等剂量生理盐水灌胃,灌胃后1、3、7、14和28 d分离和提取肺间质成纤维细胞,应用免疫细胞化学和逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)观察MMP-9蛋白及其mRNA的动态变化。结果PQ灌胃后1 d,肺间质成纤维细胞MMP-9蛋白及其mRNA表达即增高,7 d达到峰值,以后逐渐下降。MMP-9蛋白及其mRNA在PQ灌胃后1、3、7 d与对照组比较升高(P<0.05),MMP-9蛋白在28 d、MMP-9 mRNA在14 d恢复到对照组水平。结论PQ灌胃后,肺间质成纤维细胞MMP-9的表达上调,损伤肺泡基底膜,启动肺纤维的发生。