MMP-2,9在羊膜移植治疗小鼠单疱病毒性角膜炎中的表达

目的:观察保存人羊膜移植(AMT)对单疱病毒性角膜基质炎(HSK)中基质金属蛋白酶(MMPs)在小鼠角膜中表达的影响,从而探讨羊膜移植对MMP-2,9的调节作用及对HSK治疗的潜在作用。方法:雌性BALB/c小鼠眼角膜接种Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1,SM44毒株)以诱发单纯疱疹性角膜炎。选取右眼感染2 d后出现典型树枝状上皮病变的小鼠40只,随机分为实验组和对照组,实验组小鼠右眼角膜行AMT,对照组仅缝合睑裂不行AMT。术后第0,2,7,14天处死动物取出角膜,应用Western blot方法对结果进行分析,增强化学发光法(ECL)检测小鼠角膜中MMP-2,9的表达。结果:在对照组,角膜中MMP-2,9在第2天表达增加,第7天表达暂时减弱,第14天时达高峰。实验组羊膜移植2 d后角膜炎症反应明显消退且上皮缺损较快愈合,MMP-2,9阳性表达减弱,各时间点MMP-2,9的表达均低于对照组,其差异均有显著性意义(P<0.01)。结论:羊膜移植术可通过抑制角膜细胞及浸润的炎症细胞产生的MMP-2,9,促进快速上皮化并减轻角膜基质炎症反应,抑制角膜新生血管化和溃疡的形成。     

羊膜移植对单纯疱疹病毒性角膜基质炎中明胶酶活性表达的影响

目的:探讨羊膜移植对小鼠角膜1型单纯疱疹病毒(HSV-1)感染后发生角膜基质炎(HSK)的角膜中明胶酶(Gelatinases)的活性表达变化的影响,探讨羊膜移植对HSK的治疗作用及其机制。方法:将50只BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,每组各25只,105pfu/L HSV-1病毒(SM44株)感染小鼠角膜,制作HSK小鼠模型。对实验组小鼠右眼角膜行羊膜移植术,对照组角膜不行羊膜移植术。在羊膜移植术后第0,2,7,14,21天处死动物取角膜。应用明胶酶谱(Gelatin Zymography)方法和计算机图像分析系统检测小鼠角膜明胶酶的酶活性表达的变化。结果:角膜感染HSV-1后,明胶酶谱显示:实验组小鼠角膜中酶原形式的pro-MMP-9(92 kU)在AMT后第2,14,21天表达增强。活性形式的MMP-9(82 kU)在AMT后各时间点均有表达,但在第2,14及21天表达增强。pro-MMP-2(72 kU)条带在AMT后各时间点均有表达。而MMP-2活性条带(62 kU)则出现在AMT后第14天和21天。对照组小鼠角膜中明胶酶的表达变化情况跟实验组类似,但是,MMP-2活性各时间点均较实验组为强(P<0.05)。而MMP-9的活性在羊膜移植后第2天(P<0.01),第14及21天(均为P<0.05)均较实验组为强。结论:羊膜移植对HSV-1感染小鼠角膜后引起的坏死性角膜基质炎形成的角膜上皮缺损和角膜基质溃疡有明显的修复作用,这种作用的机制可能是通过抑制明胶酶的活性表达而实现的。     

实验性单纯疱疹性角膜炎中基质金属蛋白酶-2的表达研究

目的:探讨I型单纯疱疹病毒（HSV-1）感染对角膜基质金属蛋白酶-2（MMP-2）分布表达的影响。方法:分别收集正常眼球及HSV-1（KOS株）感染后第2,7,14,28d的感染眼球行石蜡包埋,并应用抗MMP-2的多克隆抗体免疫染色角膜切片。结果:感染后第2d,MMP-2的表达比未感染眼增加且表达主要位于浅表基质层及上皮下的炎性细胞中。感染后第7d,MMP-2的表达较第2d减弱。而感染后第14及28d可见角膜基质中及浸润的炎性细胞中尤其是溃疡处可见MMP-2的表达再次显著增加。结论:由角膜细胞及浸润的炎性细胞分泌产生的MMP-2对HSV-1感染所致上皮性角膜炎及角膜溃疡形成可能起重要作用。     

MMP-2和FAK在单疱病毒性角膜炎中的表达

目的:探讨Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)感染BALB/c小鼠眼角膜及体外培养的人角膜上皮细胞所致的基质金属蛋白酶2(MMP-2)和黏着斑激酶(FAK)表达的变化。方法:以HSV-Ⅰ感染BALB/c小鼠眼角膜制作单疱病毒性角膜炎(HSK)模型,应用免疫组织化学法检测的FAK表达;以HSV-Ⅰ感染体外培养人角膜上皮细胞(HCE),应用聚合酶链反应法、免疫印迹法、免疫组织化学法、免疫荧光法分别于2,20,40h检测HCE中MMP-2和FAK及磷酸化黏着斑激酶(phosphor-FAK)的表达情况。结果:HSK模型的角膜上皮细胞排列紊乱,基质水肿,中性粒细胞增多,FAK阳性细胞数增多,同阴性对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);HCE感染HSV-Ⅰ后2,20,40h,MMP-2和FAK mRNA表达分别同阴性对照组相比显著增强(P<0.01,P<0.05);感染后2hMMP-2、FAK、P-FAK蛋白表达同阴性对照组相比无显著差别(P>0.05);感染后20h、40h,MMP-2、FAK、P-FAK蛋白表达同阴性对照组相比差别显著(P<0.05)。结论:在HSV-Ⅰ感染的早期,磷酸化的FAK在病毒入侵细胞和MMP-2的激活过程中起着重要作用。FAK激活MMP-2的具体通路有待进一步研究。     

羊膜移植对急性碱烧伤角膜中MMP-9及TIMP-1表达的影响

目的 :探讨羊膜移植对角膜碱烧伤后基质金属蛋白酶 (MMP 9)及其抑制剂 (TIMP 1)在小鼠角膜中的表达影响及意义。方法 :将 4 0只昆明小鼠随机分为实验组和对照组 ,采用 1mol·L-1氢氧化钠溶液烧伤小鼠角膜 ,建立炎症性角膜碱烧伤动物模型 ;对实验组小鼠右眼角膜行羊膜移植术 ;对照组不行羊膜移植。然后在羊膜移植术后第 2 ,7,14 ,2 1d处死动物。用免疫组织化学染色方法和计算机图像分析系统检测小鼠角膜烧伤后基质金属蛋白酶在角膜中的分布及其平均光度值。结果 :在对照组 ,角膜中MMP 9在第 2d出现表达 ,第 7d达高峰 ,以后逐渐降低。TIMP 1开始表达不明显 ,第 7d出现表达 ,14d达高峰 ,以后逐渐降低。羊膜移植组各时间点MMP 9表达低于对照组 ,而TIMP 1表达高于对照组。结论 :羊膜移植术可通过调节基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达平衡 ,从而抑制和延迟碱烧伤后角膜融解的发生和发展。     

内皮抑素抑制黑色素瘤浸润转移的实验研究

【目的】研究内皮抑素对小鼠B16黑色素瘤中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及组织基质金属蛋白酶抑制剂-2（TMP-2）表达的影响,并阐述相关分子机制。【方法】建立小鼠B16黑色素瘤动物模型,分为内皮抑素实验组和空白对照组,构建组织芯片,应用免疫组化方法检测两组肿瘤组织MMP-9、MMP-2及TIMP-2的表达。【结果】MMP-2、MMP-9和TIMP-2在实验组与对照组间的表达差异均具有统计学意义（t=15．002,t=9．852,t=12．893,P〈0．05）。【结论】内皮抑素影响黑色素瘤组织表达MMP-2和MMP-9,抑制肿瘤生长和局部浸润转移。     

羊膜移植对碱烧伤小鼠角膜基质金属蛋白酶表达的影响及其意义

目的　探讨羊膜移植对急性碱烧伤小鼠角膜基质金属蛋白酶 (MMP 2 ,MMP 9)的表达影响及其意义。方法　将 40只昆明小鼠随机分为实验组和对照组 ,采用 1mol·L- 1 氢氧化钠溶液烧伤小鼠角膜 ,建立炎症性角膜碱烧伤动物模型 ;对实验组小鼠右眼角膜行羊膜移植术 ,对照组不行羊膜移植。然后在羊膜移植术后 2、7、14、2 1d处死动物 ,用免疫组织化学染色方法和计算机图像分析系统检测小鼠角膜烧伤后基质金属蛋白酶在角膜中的分布及其平均吸光度值。结果　在对照组 ,角膜中MMP 2、MMP 9在第 2天出现表达 ,第 7天达高峰 ,以后逐渐降低。实验组各时间点MMP 2及MMP 9表达均低于对照组。结论　羊膜移植术可抑制角膜细胞及浸润的炎症细胞产生基质金属蛋白酶 ,从而抑制和延迟碱烧伤后角膜溶解的发生和发展。     

MMP-3、MMP-9及TIMP-1在急性心肌梗塞中的表达及其意义

目的: 观察急性心肌梗塞（AMI）患者血清中基质金属蛋白酶-3（MMP-3）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）以及基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）水平的变化,探讨冠状动脉粥样硬化斑块破裂的机制。方法:选择67例AMI患者,发病3　h～5　d,选择同期住院非冠心病患者40例作为对照组,应用ELISA法测定血清MMP-3、MMP-9、TIMP-1含量以及血清肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）、肌酸激酶-MB（CK-MB）水平。结果：与对照组比较,AMI组血清中MMP-3、MMP-9和TIMP-1含量明显增高（P<0.05或P<0.01）;AMI组MMP-3/TIMP-1比值和MMP-9/TIMP-1比值均高于对照组（P<0.05）。MMP-3、MMP-9、TIMP-1的含量与cTnI、CK-MB水平无相关性。结论：MMP-3、MMP-9过度表达以及MMP-3/TIMP-1、MMP-9/TIMP-1比例失衡,参与冠状动脉粥样斑块的破裂和心肌梗塞的发生。     

基质金属蛋白酶及其抑制剂在RSV感染诱发哮喘中的作用

目的 本研究通过观察RSV感染致敏小鼠MMP-9和TIMP-1的表达与肺组织病理的变化,探讨RSV感染诱发哮喘发作的发病机制.方法 分3组,分别是安慰剂（生理盐水）对照组、RSV感染小鼠模型组、OVA致敏小鼠模型组,分别作免疫组织化学染色（SP法）和HE,染色观察肺组织病理变化观测MMP-9 mRNA、TIMP-1mRNA的表达.结果 本实验观察到RSV感染小鼠模型组呼吸道组织MMP-9高表达,TIMP-1亦随之有所升高,以MMP-9的表达升高为主,两者比值较安慰剂对照组升高.病理上表现为炎症细胞的浸润为主.而OVA致敏组则表现为TIMP-1过度表达,两者比值较安慰剂对照组降低,病理上出现气道基质增生,纤毛上皮剥落,气道壁纤维化.免疫组化结果显示RSV感染致敏组MMP-9为13312.3±4462.5,TIMP-1为4481.8±2320.3,OVA致敏组MMP-9为4590.8±2320.3,TIMP-1为7477.5-2205.8,两者差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 MMP-9和TIMP-1两者的平衡是气道黏膜生理中的关键因素,当RSV感染导致气道炎症时,MMP-9和TIMP-1两者的平衡被打破,MMP-9高表达,而此后机体对MMP-9和TIMP-1平衡的调节导致TIMP-1随之持续升高最终使气道黏膜高反应性甚至气道黏膜重塑,这可能就是RSV感染诱导哮喘发生发展的重要疾病机制.     

不明原因不孕妇女子宫内膜种植窗期MMP-9和TIMP-1的表达

目的 :探讨不明原因不孕妇女子宫内膜种植窗期基质金属蛋白酶 - 9(MMP- 9)及金属蛋白酶组织抑制物- 1(TIMP- 1)的表达对胚胎着床的影响。方法 :实验组 2 9例 ,正常对照组 14例 ,采用链菌生物素蛋白 -过氧化酶连接法 ,免疫组化测定两组子宫内膜种植窗期 MMP- 9及 TIMP- 1。结果 :在全部子宫内膜标本中 ,MMP- 9均呈阳性表达 ,腺上皮细胞、腔上皮细胞和基质细胞胞浆内均可见棕黄色颗粒沉着 ,上皮细胞染色强度大于基质 ;TIMP- 1表达特点和 MMP- 9相似 ,但 MMP- 9和 TIMP- 1实验组的表达均较对照组弱 (MMP- 9:2 30 .79± 4 3.92 vs 30 7.78±4 4.2 5 ;TIMP- 1:2 33.0 5± 4 8.5 1vs 2 97.86± 35 .5 6 ,P<0 .0 5 )。血雌激素、孕激素和 MMP- 9、TIMP- 1实验组与对照组均无相关性 ,但对照组 MMP- 9、TIMP- 1与孕激素呈现负相关趋势 (r=- 0 .330 ,r=- 0 .4 0 1,但 P>0 .0 5 )。结论 :不明原因不孕妇女子宫内膜种植窗期 MMP- 9及 TIMP- 1的低表达 ,可能是影响胚胎着床导致不孕的重要因素之一。     

蚕蚀性角膜溃疡MMPs/TIMPs表达的研究

目的探讨进行性蚕蚀性角膜溃疡患者角膜中基质金属蛋白酶（MMPs）及其特异性组织抑制剂的表达及意义。方法应用间接免疫荧光技术检测进行性蚕蚀性角膜溃疡与正常角膜中MMP-1、2、3、9，TIMP-1、2的分布，阳性结果应用图像分析系统进行定量分析。结果正常角膜中，仅上皮层有TIMP-1、2的弱阳性表达。在蚕蚀性角膜溃疡，MMP．1、2、3、9，TIMP．1、2均有阳性表达，MMP-2、TIMP．2表达于上皮层，MMP-3表达于基质层，MMP-1、9，TIMP-1在上皮层和基质层均有表达。结论在蚕蚀性角膜溃疡进展期，角膜中溃疡病变与损伤修复反应共存，但是修复速度不及组织破坏速度；其原因可能与角膜中MMP-9过度表达及MMPs／TIMPs系统调节失衡有关。     

基质金属蛋白酶及金属蛋白酶组织抑制剂与脑膜瘤侵袭性的研究近况

原位杂交法及免疫组化法实验研究显示,基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9在脑膜瘤组织中的表达异常,提示其与脑膜瘤侵袭性有关,金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)和TIMP-2可特异性地抑制MMPs的活性,证明MMPs和TIMPs之间的平衡是影响脑膜瘤侵袭性的重要因素。深入研究MMPs和TIMPs在脑膜瘤中的表达及其调节机制,以及如何通过阻断MMPs的活性来抑制脑膜瘤的侵袭性,有望成为治疗脑膜瘤的新途径。     

奥马曲拉对心肌梗死大鼠基质金属蛋白酶表达的影响

目的:探讨奥马曲拉(Omapatrilat,OMA)对大鼠心肌梗死后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织因子抑制剂-1(TIMP-1)的表达以及对心室重构和心功能的影响。方法:结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,术后24 h取实验成功模型大鼠随机分为心肌梗死组(MI组,n=15只)及心肌梗死+OMA治疗组[MI+OMA组,n=15只,OMA 40 mg/(kg.d)饮水给药],另设冠状动脉只穿线未结扎的大鼠为假手术(Sham)组(SH组,n=10只),SH组和MI组大鼠饲普通饮水。治疗后4周测量左室血流动力学,处死动物后测量心室重量指标,行HE染色观察心肌梗死面积,Van Gieson(VG)染色观察胶原容积分数(CVF),Westenblot法测量MMP-2、MMP-9、TIMP-1蛋白表达情况。结果:与SH组比较,手术组大鼠的MMP-2、MMP-9活性显著升高,TIMP-1活性显著降低,心室重构显著,心室功能显著降低;与MI组比较,MI+OMA组可显著降低MMP-2、MMP-9的表达,显著升高TIMP-1的表达,心室功能的改善。结论:OMA可明显抑制大鼠心肌梗死后心室重构,改善心功能,其作用可能与调节MMP-2、MMP-9、TIMP-1的表达有关。     

MMP-2 MMP-9及TIMP-1在人睾丸精原细胞瘤组织中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)在人睾丸精原细胞瘤组织中的表达及其与临床分期、预后的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测33例人睾丸精原细胞瘤和11例正常睾丸组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1的表达,并与肿瘤的临床分期及预后进行比较。结果33例睾丸精原细胞瘤组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1的表达率分别为69.7%、75.8%、57.6%,表达率随肿瘤的临床分期升高而增加。MMPs/TIMPs比值大者死亡率高。结论MMP-2、MMP-9、TIMP-1在人睾丸精原细胞瘤的浸润转移过程中起重要作用,有可能成为估计预后的指标之一。     

PTEN基因对胶质瘤细胞增殖及侵袭性影响的体外研究

目的探讨PTEN基因转染人胶质瘤U251细胞后对其增殖及侵袭性的影响。方法应用脂质体转染技术,将含PTEN基因重组表达质粒转染U251细胞系,Western blot鉴定其蛋白表达;应用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法观察对细胞株生长的影响;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;应用免疫组化检测转染PTEN的U251细胞基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)和金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1、TIMP-2)的表达变化。结果 PTEN质粒成功转染U251细胞并有PTEN蛋白的表达。与对照组、空载体组相比,转染组细胞生长抑制率下降达52.46%;细胞周期改变,细胞从G1期到S期发生阻滞;转染组MMP-2、MMP-9表达显著下降,而TIMP-1、TIMP-2表达显著上升,两者呈负相关(r=-0.506,P<0.05)。结论 PTEN转染人胶质瘤细胞系U251后,可抑制其增殖、促进凋亡;并可能通过抑制MMPs和促进TIMPs来抑制细胞侵袭性。