黄芩素通过BMP-2/Smad通路促进MC3T3-E1成骨作用的实验研究

目的 探讨黄芩素（BAI）对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞（MC3T3-E1）成骨分化的作用及其分子机制。方法 将MC3T3-E1分为对照组（正常培养）和BAI组（以Baicalein处理）,在成骨分化条件培养下采用CCK-8检测BAI对MC3T3-E1细胞增殖的影响;分别以碱性磷酸酶染色（ALP）、茜素红染色（ARS）检测MC3T3-E1细胞成骨分化水平与矿化能力,实时荧光定量PCR检测成骨标志基因ALP、COL1A1、RUNX2、OSX的mRNA表达水平,通过免疫印迹法（Western-blot）检测MC3T3-E1细胞中BMP-2、Smad1、p-Smad1蛋白表达水平,通过免疫荧光技术（IF）检测RUNX2、COL1A1表达水平。结果 与对照组比较,BAI干预1 d后发现,BAI组COL1A1（P<0.001）、RUNX2（P <0.05）、OSX（P <0.05） mRNA表达水平在成骨分化中表达上升;干预3 d后发现,与对照组比较,BAI组ALP（P <0.05）、RUNX2（P <0.001）mRNA表达上升;干预7 d后发现,与对照组比较,BAI组COL1A1（P <0.05）mRNA表达水平较对照组上升,BMP-2、p-Smad1/Smad1蛋白表达水平上升（P <0.05）。免疫荧光中成骨标志蛋白RUNX2、COL1A1表达增多（P <0.05）。结论 BAI可通过激活BMP-2/Smad通路促进MC3T3-E1成骨分化。     

积雪草苷通过TGF-β/Smads通路对BMSCs成骨分化的影响

目的 探讨积雪草苷对骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）成骨分化的诱导作用以及潜在机制。方法 使用6个浓度的积雪草苷（0、5、10、20、30、40 μmoL/L）作用BMSCs,利用CCK-8与检测细胞增殖率与细胞凋亡率,筛选出积雪草苷对BMSCs最大无毒浓度。将BMSCs分成3组,空白对照组、积雪草苷组与抑制组,空白对照组正常培养,积雪草苷组使用积雪草苷对BMSCs进行诱导成骨分化,抑制组在此基础上加用SB-431542（50 moL/L）处理。诱导12 d后,茜素红染色观察细胞中矿化结节的数量,RT-qPCR检测细胞中碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）和骨钙素（OCN）基因表达水平,Western blot检测细胞中转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad2、p-Smad2、Smad3和p-Smad3蛋白表达水平。结果 20 μmoL/L的积雪草苷对BMSCs无明显抑制效果。与空白对照组相比,积雪草苷促进BMSCs钙化结节形成增多,ALP、OPN和OCN基因表达水平升高,TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3蛋白表达水平升高（均P＜0.05）;积雪草苷在TGF-β/Smads通路被抑制的情况下仍然能发挥诱导BMSCs成骨分化作用。结论 积雪草苷具有诱导骨髓间充质干细胞成骨分化的潜力,可能涉及的机制为激活细胞中TGF-β/Smads通路,上调OPN、ALP与OCN基因表达量,帮助骨髓间充质干细胞完成成骨分化。     

HDAC2转染对骨髓干细胞成骨细胞分化的影响

[目的]探讨组蛋白去乙酰化酶2 (histone deacetylase 2, HDAC2)转染对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)向成骨细胞分化的影响。[方法] HDAC2-siRNA重组序列、阴性随机对照序列分别转入大鼠BMSCs,命名为HDAC2-si组和空载组,未做干预细胞为空白组,检测转染后各组HDAC2 mRNA表达量;诱导BMSCs成骨分化后,检测ALP活性及BGP分泌量、茜素红染色,Western blot法检测HDAC2、SHH、IHH、Ptch1、Glis1蛋白表达量。[结果]转染后HDAC2-si组HDAC2 mRNA相对表达量低于空白组和空载组(P0.05)。茜素红染色显示,诱导前3组均无红色矿化结节,诱导后空白组和空载组出现红色矿化结节,HDAC2-si组矿化结节更多。与空白组和空载组比较,HDAC2-si组成骨诱导后HDAC2蛋白相对表达量较低,ALP活性、BGP分泌量及SHH、Ptch1、Glis1蛋白相对表达量均较高(P0.05),IHH蛋白相对表达量组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。[结论]下调HDAC2表达可促进BMSCs向成骨细胞分化,机制可能是通过激活Hedgehog信号通路相关分子发挥促向成骨分化的作用。     

间充质干细胞外泌体通过TGF-β信号通路抑制成骨分化

目的 探究间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）来源外泌体对MSC成骨分化的影响及其可能的机制。方法 超速离心获得未被地塞米松干预和用地塞米松（10 μmol/L）干预的MSC外泌体：Exo-1和Exo-2。将MSC分为3组：对照组、Exo-1组和Exo-2组,成骨诱导分化培养7 d。生化检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性。流式检测细胞凋亡率。qRT-PCR检测炎症因子及TGF-β信号通路相关基因表达。Western blot检测TGF-β信号通路相关蛋白表达。结果 用地塞米松干预的MSC来源外泌体能够降低MSC细胞中ALP活性,细胞凋亡率升高,下调NF-κB mRNA表达、Smad3和RUNX2 mRNA和蛋白表达（P＜0.05）,上调IL-1β和TNF-α mRNA表达、TGF-β mRNA和蛋白表达（P＜0.05）。结论 用地塞米松（10 μmol/L）干预的MSC来源外泌体能通过TGF-β信号通路抑制MSC成骨分化,促进细胞凋亡和炎症反应。     

壮筋养血汤介导MAPK/P38-ERK通路调控成骨成脂分化的作用机制

目的 探讨壮筋养血汤（Zhuangjin Yangxue Decoction,ZJYXD）通过LncRNA ANRIL介导的MAPK/ P38-ERK 通路调控成骨成脂分化的作用机制。方法 提取骨髓间充质干细胞（BMSCs）,并采用ANRIL慢病毒转染BMSCs;制备ZJYXD含药血清用于培养转染后的BMSCs。通过CCK-8检测BMSCs增殖活力;运用碱性磷酸酶、茜素红及油红O染色检测各组细胞成骨成脂分化情况;通过qRT-PCR、Western Blot法检测成骨、成脂、MAPK/ P38-ERK信号通路相关基因及蛋白的表达。选取24只SPF级C57BL/6雄性小鼠用于制作股骨横断骨折模型,造模后给予不同转染的BMSCs治疗并给予ZJYXD。通过X-ray与Micro-CT检测对照组、对照组+ZJYXD组、ANRIL过表达组、ANRIL过表达+ZJYXD组小鼠骨愈合情况。结果 与0 %含药血清相比,6 % ZJYXD含药血清对BMSCs细胞增殖能力最强（P<0.01）。ZJYXD干预后成骨染色加深,成骨相关基因OPN、RUNX2 mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.01）;成脂染色减弱,相关基因PPARγ、C/EBPα mRNA及蛋白表达显著降低（P<0.01）。同时ZJYXD促进了P-ERK、P38蛋白表达（P<0.01）。X-ray及Micro-CT显示ZJYXD促进了小鼠骨折后愈合。当ANRIL过表达后,ZJYXD调节成骨成脂细胞分化作用消失,无法有效的促进骨折愈合。结论 壮筋养血汤具有促进成骨分化、抑制成脂分化的作用,而这种作用通过LncRNA ANRIL调控MAPK/ P38-ERK信号通路实现。     

GLP-1对GK糖尿病大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化能力的影响

目的 观察胰高血糖素样肽-l( Glucagon-like peptide-I,GLP-l)对Goto-Kakizaki鼠骨髓间充质干细胞（Bone marrow stromal cell,BMSCs)成骨分化能力的影响,并讨探其可能作用机制。方法 贴壁法取8周龄GK鼠BMSCs,逆转录PCR法验证BMSCs表达GLP-1受体,MTT法筛选GLP-1对GK鼠BMSCs的最佳刺激浓度,选取该浓度干预GK鼠BMSCs,观察其成骨分化相关指标：第7 d、14 d测定碱性磷酸酶活性,第14d应用实时定量PCR检测ALP、RUNX2、OCN、Smad1、β-catenin、OPG和 RANKL的表达。结果 1. GK鼠BMSCs中存在GLP-1受体;2. 20 nmol/L的GLP-1对细胞刺激作用最佳;3.成骨诱导后ALP 活性升高。成骨诱导7 d,诱导组和GLP-1干预组的ALP活性相对于对照组均明显升高(P <0. 05);成骨诱导14 d,诱导组和 GLP-1干预组的ALP活性进一步升高（与自身7d时相比,P <0.05),且均高于对照组(P <0. 05); GLP-1干预组ALP活性在第 7d时稍高于诱导组(P >0. 05),第14d时明显高于诱导组(P <0. 05) ;4.与正常成骨诱导组相比,GLP-1干预组ALP和RUNX 2表达量均明显增加(P <0.5),OCN的表达量增加,但无统计学意义。GLP-1干预组表达Smad1减少（P > 0. 05),β-catenin 明显增多（P <0.05)。GLP-1干预组表达 OPG增加（P >0.05),RANKL 减少（P <0. 05),OPG/RANKL 升高（P <0.05)。结论 1. GK鼠BMSCs上存在GLP-1受体;2. GLP-1可促进GK鼠BMSCs向成骨细胞分化,并调节Wnt通路部分基因的表达及OPG/RANK/RANKL轴的动态平衡。     

骨细胞Wnt/β-Catenin通过Notch信号促进BMSCs成骨分化

目的探讨骨细胞Wnt信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用及其分子机制。方法采用条件性基因敲出Cre/loxp技术制备特异性激活骨细胞Wnt/β-Catenin信号通路的小鼠;体外分离其和野生对照组小鼠的骨细胞,并分别与野生型小鼠骨髓间充质干细胞共培养;碱性磷酸酶(ALP)染色及活性定量、茜素红(Alizarin red)染色检测共培养早期成骨分化和晚期钙盐沉积;Real-Time PCR检测骨细胞Notch信号配体Jag1、Jag2、Dll1、Dll4及共培养后成骨分化特异标志物Runx2、ALP、Osteocalcin的mRNA表达水平。随后于共培养中加入Notch信号通路化学抑制剂DAPT(对照组加DMSO),再次行碱性磷酸酶(ALP)染色及活性定量和Real-Time PCR检测成骨分化特异标志物表达水平。结果 Wnt/β-Catenin激活的骨细胞其自身Jag1、Jag2、Dll4 mRNA表达较对照组骨细胞明显升高(P0.05),与BMSCs共培养后成骨转录因子Runx2,成骨分化特异标志物ALP、Osteocalcin mRNA的表达较野生型明显升高(P0.05),钙盐沉积增加。加入DAPT后,骨细胞Wnt激活组成骨转录因子Runx2、ALP、Osteocalcin mRNA的表达明显下降(P0.05)。结论骨细胞调控骨的代谢,激活其Wnt/β-Catenin信号通路将通过上调Notch信号而促进BMSCs的成骨分化。     

环指蛋白11调控Akt信号通路促进BMSCs成骨分化的机制研究北大核心CSCD

目的研究BMSCs成骨分化过程中环指蛋白11(ring finger protein 11,RNF11)对Akt信号通路的调节作用,为进一步阐明BMSCs成骨分化机制和用于临床治疗提供思路。方法从健康人体新鲜骨髓中分离培养BMSCs并传代,取第4代细胞经流式细胞术,成骨、成软骨和成脂诱导培养鉴定后用于实验。BMSCs成骨诱导分化培养0~14 d,通过茜素红染色和ALP染色检测其成骨分化程度,并用Western blot法检测RNF11蛋白表达。取第4代BMSCs,分为空白对照组(A组)、空载慢病毒(Lv-NC)组(B组)和敲低RNF11(Lv-ShRNF11)组(C组),成骨诱导分化培养0~14 d,采用Western blot检测RNF11蛋白表达,茜素红染色和ALP染色检测其成骨分化程度,14 d实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测BMSCs成骨标志物Runx2、骨钙素(osteocalcin,OCN)及骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的mRNA相对表达量;采用Western blot检测Akt、Smad1/5/8及β-catenin信号通路蛋白相对表达量,以磷酸化前后比值表示。为研究RNF11对Akt信号通路的影响机制,取第4代BMSCs分为Lv-NC转染组(A1组)、Lv-ShRNF11转染组(B1组)和添加Akt信号通路激活剂SC79的Lv-ShRNF11转染组(C1组),14 d时采用Western blot检测RNF11和Akt信号通路蛋白相对表达量,茜素红染色、ALP染色及qRT-PCR检测成骨相关指标。结果流式细胞术及成骨、成软骨和成脂诱导培养鉴定显示分离培养细胞为BMSCs。RNF11蛋白相对表达量随成骨分化时间延长而逐渐增加(P<0.05);下调RNF11后,茜素红和ALP染色示C组相较于A、B组BMSCs成骨分化程度降低,qRT-PCR检测示Runx2、OCN、OPN mRNA相对表达量减少(P<0.05)。随成骨分化时间延长,RNF11与Akt信号通路蛋白相对表达量均上升(P<0.05)。下调RNF11后,C组相较于A、B组,其Akt信号通路蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),而对Smad1/5/8以及β-catenin信号通路蛋白相对表达量无明显影响(P>0.05)。B1、C1组相较于A1组,其RNF11蛋白相对表达量减少(P<0.05),B1组相较于A1、C1组,其Akt信号通路蛋白相对表达量降低(P<0.05);茜素红与ALP染色示C1组BMSCs成骨分化程度稍低于A1组(P>0.05),而明显高于B1组(P<0.05);qRT-PCR检测示C1组Runx2、OCN、OPN mRNA相对表达量稍低于A1组(P>0.05),而明显高于B1组(P<0.05)。结论RNF11通过正向调控Akt信号通路激活水平促进BMSCs向成骨细胞分化。RNF11可作为提高BMSCs修复骨缺损疗效以及治疗骨代谢病的潜在靶点。     

木通皂苷D促进糖皮质激素环境下小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化

目的观察木通皂苷D(ASD)对糖皮质激素(GC)环境下小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响及其机制。方法体外培养小鼠BMSCs,实验分为三组,分别用成骨诱导培养基(OBI)、OBI+地塞米松(DEXA,0.1μmol/L)、OBI+DEXA(0.1μmol/L)+ASD(10μmol/L)干预。ALP试剂盒检测ALP活性,茜素红染色检测矿化情况,qRT-PCR检测成骨因子Runx2、骨钙素(OCN)及Smad1、Smad5 mRNA表达,Western blot检测Smad1/5磷酸化水平及Smad1/5/8总蛋白表达。结果OBI+DEXA组ALP活性明显较OBI组低(P<0.001),OBI+DEXA+ASD组ALP活性明显较OBI+DEXA升高(P<0.01)。OBI+DEXA干预组成骨相关因子Runx2、OCN、Smad1和Smad5 mRNA表达较OBI组均明显下调(P<0.01),OBI+DEXA+ASD组Runx2、OCN、Smad1和Smad5 mRNA表达较OBI+DEXA干预组明显上调(P<0.01和P<0.05)。三组Smad1/5/8总蛋白表达差异无统计学意义,OBI+DEXA干预组pSmad1/5较OBI干预组表达降低,OBI+DEXA+ASD干预组pSmad1/5表达较OBI+DEXA干预组增加。结论ASD可促进GC环境下小鼠BMSCs成骨分化,其机制可能与激活BMP/Smad信号通路有关。     

基于Hippo信号通路探讨鹿茸提取液对BMSCs成骨分化的影响

目的 观察鹿茸提取液对SD大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）向成骨分化及Hippo信号通路的影响。方法 将3、4代BMSCs随机分为正常组、诱导组以及鹿茸组。酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法分别检测6、12 d以及18 d碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的活性及水平;茜素红染色法检测3组BMSCs钙结节生长增殖情况;qRT-PCR法和蛋白质印迹法（Western blot）检测RUNX2及Hippo信号通路 MST1和YAP的转录表达与蛋白表达水平。结果 ELISA实验结果表明,鹿茸提取液可以提高ALP的活性,12 d鹿茸组ALP的活性达到最高,18 d鹿茸组ALP的活性显著上调（P＜0.01）;茜素红实验结果显示,鹿茸组观察到大量且密集的钙结节形成,提示鹿茸提取液可有效促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞转化;qRT-PCR的实验结果表明,与正常组相比,鹿茸组YAP和RUNX2 mRNA显著上调（P＜0.01）;Western blot法检测结果显示,鹿茸提取液可显著上调YAP蛋白表达水平（P＜0.01）,并且明显上调RUNX2蛋白表达水平（P＜0.05）。结论 鹿茸提取液能够影响RUNX2以及Hippo信号通路中 MST1和YAP相关蛋白进而推进骨髓间充质干细胞向成骨细胞的转化。     

富血小板血浆与地塞米松对人骨髓基质干细胞成骨分化作用的对比研究

目的 通过系统评价富血小板血浆(PRP)与地塞米松(DEX)对人骨髓基质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响,为PRP临床骨组织修复应用提供更为可靠的实验依据.方法 将体外培养的BMSCs分为单纯血清培养组(FCS组)、PRP诱导组和DEX组,通过相差显微镜观察碱性磷酸酶(ALP)染色、钙盐沉积染色,RT-PCR法检测碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)、Ⅰ型胶原(Coll-Ⅰ)、骨连接蛋白(ON)、中心结合因子(Cbfα1)mRNA表达系统评价PRP的成骨分化能力. 结果 PRP抑制了BMSCs向三角形、多角形细胞转变,DEX则诱导BMSCs向三角形、多角形细胞转变;PRP抑制了ALP分泌,钙盐沉积;DEX增加了ALP分泌,促进钙化结节形成.与FCS组相比,DEX促进了ALP、OCmRNA表达,PRP抑制了ALP、OC mRNA表达;PRP、DEX对Coll-Ⅰ、ON、Cbfα1 mRNA表达均无影响.结论 在本实验条件下,PRP对人BMSCs体外成骨分化的直接作用是抑制效应;在体外PRP并不能代替DEX作为人BMSCs成骨分化的诱导因子.     

miR-187-5p 对骨髓间充质干细胞成骨分化能力的调控作用

目的利用小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的成骨分化模型,探讨miR-187-5p在成骨分化中的表达趋势及调控作用。方法通过切除雌性小鼠双侧卵巢构建小鼠骨质疏松模型;应用qRT-PCR技术检测组织和细胞中miR-187-5p的表达;应用基因转染技术观察过表达或敲减miR-187-5p对BMSCs向成骨分化的影响;应用茜素红和碱性磷酸酶染色检测BMSCs中矿化结节的数量和矿化区域的染色面积。结果 qRT-PCR结果显示miR-187-5p在骨质疏松模型小鼠的骨组织及BMSCs中均表达下降。过表达miR-187-5p可提高ALP、Collagen-1、Runx2、BMP4、OCN和OPN等成骨分化相关基因mRNA的表达,促进BMSCs向成骨分化;而敲减miR-187-5p降低ALP等成骨分化相关基因mRNA的表达,抑制BMSCs向成骨分化。在体实验同样证实,过表达miR-187-5p可以显著促进骨质疏松小鼠BMSCs向成骨分化,改善小鼠的骨质疏松表型。结论过表达miR-187-5p促进BMSCs向成骨分化,敲减miR-187-5p抑制BMSCs向成骨分化。     

Mechanical loading increased BMP‐2 expression which promoted osteogenic differentiation of tendon‐derived stem cells

This study aimed to investigate the effect of repetitive tensile loading on the expression of BMP‐2 and the effect of BMP‐2 on the osteogenic differentiation of tendon‐derived stem cells (TDSCs) in vitro. Repetitive stretching was applied to TDSCs isolated from rat patellar tendon at 0%, 4%, and 8%, 0.5 Hz. The expression of BMP‐2 was detected by Western blotting and qPCR. To study the osteogenic effects of BMP‐2 on TDSCs, BMP‐2 was added to the TDSC monolayer for the detection of ALP activity and calcium nodule formation in a separate experiment. TDSCs adhered, proliferated, and aligned along the direction of externally applied tensile force while they were randomly oriented in the control group. Western blotting showed increased expression of BMP‐2 in 4% and 8% stretching groups but not in the control group. Up‐regulation of BMP‐2 mRNA was also observed in the 4% stretching group. BMP‐2 increased the osteogenic differentiation of TDSCs as indicated by higher ALP cytochemical staining, ALP activity, and calcium nodule formation. Repetitive tensile loading increased the expression of BMP‐2 and addition of BMP‐2 enhanced osteogenic differentiation of TDSCs. Activation of BMP‐2 expression in TDSCs during tendon overuse might provide a possible explanation of ectopic calcification in calcifying tendinopathy. © 2010 Orthopaedic Research Society. Published by Wiley Periodicals, Inc. J Orthop Res 29:390–396, 2011     

The effect of recombinant human bone morphogenetic protein-2 on the osteogenic potential of rat mesenchymal stem cells after several passages

Background Since the osteogenic potential of bone marrow derived mesenchymal stem cells (BMSCs) becomes reduced with passage, establishment of culture condition that permit the rapid expansion of BMSCs while retaining their potential for differentiation is needed for clinical application. Bone morphogenetic proteins stimulate osteogenic differentiation in mesenchymal progenitor cells as well as increase stem cell numbers. Thus, we analyzed the effect of recombinant human bone morphogenetic protein-2 (rhBMP-2) on the osteogenic potential of rat BMSCs over several passages.

Material and methods Osteogenic differentiation in vitro was evaluated in terms of the alkaline phosphatase (ALP) activity and the osteocalcin (OC) concentration in the supernatants, and the expression of ALP and OC mRNA in the cultured cells. For in-vivo osteogenesis, BMSCs cultured with and without rhBMP-2 through all passages were implanted into athymic mice.

Results  The levels of osteogenic markers were significantly higher in the cells of the BMP(+) group than in the cells of the BMP(-) group, although they decreased with passage irrespective of whether or not rhBMP-2 was added. Similar to the in-vitro experiments, there was a greater degree of bone and cartilage tissue formation in the BMP(+) group over all passages.

Interpretation  From our results, osteogenic potential can be maintained even in BMSCs that have been passaged several times in the presence of rhBMP-2. These cells are capable of inducing and participating in bone formation and can be used for clinical applications.     

从少火生气理论探讨肾气丸促巨噬细胞M2型极化影响成骨的作用

目的 基于少火生气理论探讨肾气丸原组方（SQW）和肾气丸去除桂枝、附子（SQQ）诱导巨噬细胞M2型极化对小鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）成骨分化作用的效果差异。方法 采用CCK8法分别检测SQW、SQQ对RAW264.7细胞存活率的影响，以确定药物干预的安全作用浓度。将RAW264.7细胞分为CON组、IL-4组、IL-4+SQW组、IL-4+SQQ组。将不同药物组诱导巨噬细胞M2型极化后分泌的细胞上清液作为条件培养基培养BMSC，评估BMSC成骨分化的能力。用碱性磷酸酶染色法（ALP）及茜素红染色法（ARS）检测各组BMSC成骨分化能力；使用免疫荧光技术（IF）检测BMSC成骨标志蛋白骨形态发生蛋白4（BMP4）、骨保护素（OPG）的分布和表达；使用蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测M2型巨噬细胞极化相关的精氨酸酶1（ARG1）、白细胞介素10（IL-10）的表达以及BMSC成骨相关的BMP4、RUNT相关转录因子2（RUNX2）的表达。结果 与IL-4+SQQ组相比，IL-4+SQW组更加显著促进M2型巨噬细胞极化相关因子ARG1、IL-10上调（P＜0.01），且其条件培养基培养的BMSC的ALP及ARS染色增强，成骨蛋白BMP4、OPG、RUNX2表达升高（P＜0.05）。结论 肾气丸原组方与肾气丸去除桂枝、附子两味药相比，具备更强的促进巨噬细胞M2型极化与增强BMSC成骨分化能力，为少火生气理论提供了实验依据。     

钽涂层对骨髓间充质干细胞的黏附增殖及成骨分化的影响

目的探讨钽涂层金属在体外促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)黏附、增殖及成骨分化方面的作用。方法在体外取6只6周龄SD大鼠BMSCs进行原代培养至第3代,使用化学气相沉积系统自行制备钽涂层金属。然后进行流式细胞术鉴定、BMSCs三向诱导、荧光染色、细胞增殖检测及实时荧光定量聚合酶链反应技术(Q-PCR)试验。观察比较BMSCs在钛合金圆片(Ti6Al4V组)和钽金属圆片(Ta组)表面黏附的BMSCs数量、增殖速率、成骨细胞特异性转录因子(OSX)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨粘连蛋白(OSN)和骨桥蛋白(OPN)的表达情况。结果流式细胞术结果显示CD44(94.55%)、CD90(95.01%)、CD34(0.06%)。诱导成骨分化14 d后碱性磷酸酶(ALP)染色阳性;诱导成骨分化21 d后出现茜素红钙化结节;成脂诱导21 d后油红O染色呈阳性;成软骨诱导21 d后阿利新蓝染色评估有软骨形成能力。激光共聚焦显微镜结果显示BMSCs在Ti6Al4V组和Ta组金属圆片表面贴附生长,细胞间互相接触、聚集成片,Ta组金属圆片上黏附的BMSCs数量明显多于Ti6Al4V组,并且具有更好的延展性能。细胞增殖检测结果发现,分别共培养1、3、5、7 d后Ta组BMSCs的增殖速率明显快于Ti6Al4V组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Q-PCR结果发现,与Ti6Al4V组相比,体外培养7 d后Ta组金属圆片更能促进OSN和OPN的表达,差异有统计学意义(P<0.05);体外共培养21 d后,Ta组金属圆片更能促进OSX、RUNX2、OSN和OPN的表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论相比于传统的骨科植入物钛合金而言,钽涂层金属能够更好地促进BMSCs的黏附,增殖和成骨分化。