细胞裂解液对蛋白质定量方法的影响

目的:观察不同细胞裂解液对Bradford法和bicinchoninic acid(BCA)法的影响,以确定适合蛋白质组学研究中细胞全蛋白含量的定量方法。方法:采用Bradford法和BCA法测定牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)样品溶液,样品BSA溶液分别由双蒸水和不同裂解液(荧光差异双向凝胶电泳裂解液、三种传统双向凝胶电泳裂解液)配制;然后,采用这两种方法测定上述裂解液所提取的细胞全蛋白样品;采用Bradford法定量反复冻融、不同比色杯和不同时期标准曲线下的样品。结果:各细胞裂解液对Bradford法均有显著性影响,使所定量的BSA浓度普遍偏高1.2至2倍,但定量值可随着加样浓度的增加而增加(r=0.989~0.996,P<0.05);各裂解液对BCA法也均有显著性的干扰,多数定量结果超出仪器读数范围;对于同批全蛋白溶液样品,BCA法的定量结果与Bradford法相比可有千倍差异;反复冻融后蛋白浓度变化统计学上无显著性差异,但有下降趋势,不同比色杯和不同时期标准曲线对Bradford法无显著影响。结论:Bradford法是蛋白质组学中细胞全蛋白定量的较适方法,但需根据具体实验进行优化。     

几种蛋白质含量测定方法的比较研究

目的 :为培养的肝细胞及神经元蛋白质含量测定选择最佳方案。方法 :采用三种较为常用的蛋白质含量测定方法 :Bradford、Lowry和Bio-radDC法分别对培养的小鼠肝细胞、神经元细胞的全细胞蛋白质提取样品进行测定 ,并对结果进行比较。结果 :蛋白质含量测定及重复性实验对比分析可见 ,用Bradford、Lowry和Bio -radDC法测定肝细胞蛋白质样品 ,结果均较稳定 ;测定神经元蛋白质样品 ,Bradford和Bio -radDC法较稳定 ,Lowry法不稳定。结论 :肝细胞蛋白含量测定宜采用Bradford法 ,神经元蛋白含量测定宜采用改良Bio -radDC法。     

斯氏按蚊黑化包被约氏疟原虫卵囊时血淋巴蛋白的二维电泳分析

目的以斯氏按蚊-约氏疟原虫为模型,用二维电泳技术分析比较约氏疟原虫感染后雌性斯氏按蚊吸饲硝喹蔗糖水和蔗糖水蚊血淋巴蛋白差异.方法用挤压法分别收集吸硝喹糖水3 d、吸感染血和吸蔗糖水雌斯氏按蚊成蚊血淋巴,Bradford法检测血淋巴蛋白浓度,继而对血淋巴进行双向电泳,凝胶考马斯亮蓝染色,ImageMaster VDS-CL对二维电泳凝胶蛋白斑点扫描和用ImageMaster 2D Elite软件进行蛋白质斑点自动分析.结果用药组血淋巴蛋白浓度总是低于吸感染血组和吸糖水组,用药组蚊血淋巴蛋白点有101个,对照组有115个,有51个蛋白点相同.50个仅在用药组中检测到,64个仅在对照组中检测到;蛋白点的分子量和等电点主要位于(40～60)×103和碱性端.结论二维电泳技术可直接反映蛋白质的差异,其蛋白浓度和白点的差异与硝喹诱导疟原虫卵囊黑化有关.     

改良Lowry法和Bradford法测定蚯蚓提取物中蛋白质含量的比较

目的 寻找精确反映蚯蚓提取物中蛋白质含量的测定方法。方法 采用改良Lowry法和考马斯亮蓝染料结合法（Bradford法）测定蚯蚓提取物蛋白质含量；再使用两法测定标准牛血清白蛋白（BsA）水溶液在碱性蛋白酶水解前与后的蛋白质含量。结果 在测定蚯蚓提取物中蛋白质含量时，改良Lowry法的测定结果明显高于Bradford法。未进行酶解的BSA水溶液，两法测定的蛋白质含量相当；使用改良Lowry法，BSA水溶液酶解前与后的蛋白测定值相近；而使用Bradford法时，测定BSA水溶液酶解后蛋白质含量的测定值较酶解前出现大幅下降。结论 测定多肽含量多的生物样品中蛋白质含量时，改良Lowry法更为精确。由于蚯蚓提取物中大量多肽成分的存在，故对测定其蛋白质含量时，改良Lowry法能够更加精确、真实地反映蚯蚓提取物的蛋白质含量。     

茚三酮比色法测乙肝宁水提物中总游离氨基酸含量

目的:建立乙肝宁复方水提物中总游离氨基酸含量测定的方法。方法:以乙肝宁复方水提物中总游离氨基酸含量和蛋白质含量为指标,对总游离氨基酸含量测定最佳除蛋白的乙醇浓度和药液比进行筛选;采用茚三酮比色分光光度法,于568 nm,测定乙肝宁复方中总游离氨基酸的含量。结果:醇浓度为70%,生药浓度为1 g/mL(生药比1∶6)可较好除去蛋白质等大分子物质,减少测定干扰;采用茚三酮比色法,标准曲线方程为:A=0.055 9C-0.225 3(r=0.999 1),平均回收率为98.8%,RSD为2.07%(n=9),线性关系良好。该法测得乙肝宁复方药材中总游离氨基酸的含量为1.47%,乙肝宁浸膏中含量为5.65%。结论:该方法简便、快速准确,可用于测定乙肝宁复方中游离氨基酸的含量测定。     

Determination of total Free-amino acid in Yiganning aqueous extract by Nihydrin colorimetry

目的:建立乙肝宁复方水提物中总游离氨基酸含量测定的方法.方法:以乙肝宁复方水提物中总游离氨基酸含量和蛋白质含量为指标,对总游离氨基酸含量测定最佳除蛋白的乙醇浓度和药液比进行筛选;采用茚三酮比色分光光度法,于568 nm,测定乙肝宁复方中总游离氨基酸的含量.结果:醇浓度为70％,生药浓度为1g/mL(生药比1∶6)可较好除去蛋白质等大分子物质,减少测定干扰;采用茚三酮比色法,标准曲线方程为:A=0.055 9C-0.225 3(r=0.9991),平均回收率为98.8％,RSD为2.07％(n=9),线性关系良好.该法测得乙肝宁复方药材中总游离氨基酸的含量为1.47％,乙肝宁浸膏中含量为5.65％.结论:该方法简便、快速准确,可用于测定乙肝宁复方中游离氨基酸的含量测定.     

反相高效液相色谱法测定大鼠头孢氨苄血药浓度

目的:高效液相色谱法测定大鼠血浆中头孢氨苄浓度。方法:血浆样品用超滤法去除蛋白质直接进样。以μBondapakTMC18柱(4.6mm×250 mm,5μm)为色谱柱,水-甲醇(400∶100,v/v,用1.0mol/L醋酸调pH至4.0)为流动相,流速为0.8m l/m in,柱温25℃;二极管阵列检测波长为254 nm。结果:头孢氨苄浓度在0.63~10.0μg/m l范围内线性关系良好,相关系数>0.999 9;其日内和日间相对标准差(RSD)<10%(n=5),方法回收率为98.1%~100.1%(n=5)。结论:该法快速简便,适用于临床血药浓度研究和间接评价结肠上皮二肽载体(PepT1)的功能。     

消痔灵体外诱导肝癌细胞HepG2凋亡的实验研究

目的观察消痔灵注射液(XZL)体外诱导肝癌细胞HepG2的凋亡情况,并初步探讨其作用机制。方法分别用含0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0g/L XZL的培养液体外培养HepG2细胞,采用MTT法检测HepG2细胞抑制率。用Western blotting检测各组相关凋亡蛋白Bcl-2和nm23-H1表达变化。结果 XZL能明显抑制HepG2细胞生长,且呈时间和浓度依赖性。XZL组与空白对照组、氟尿嘧啶组相比,Bcl-2蛋白表达显著下降;与共同作用组相比,Bcl-2蛋白表达显著增高(F=43.64,q=4.13～15.49,P<0.05)。但nm23-H1蛋白表达各组均无显著差异(P>0.05)。结论 XZL可抑制HepG2细胞增殖,并通过降低Bcl-2蛋白表达诱导HepG2细胞凋亡。     

外阴白斑和鳞癌细胞中p53蛋白的表达

目的　研究 p5 3蛋白对外阴白斑和鳞癌细胞中的表达 .方法　采用 ABC免疫组化法 ,对 10 2例外阴白斑和鳞癌患者进行 p5 3蛋白检测 .结果　各组与鳞癌组相比 ,经 χ2检验 ,有非常显著差别 (P<0 .0 1) .正常组 2 1例 χ2 =2 4.0 2 ,增生组 2 0例χ2 =9.2 3,硬化萎缩组 2 8例χ2 =5 3.2 3,混合组 2 3例 χ2 =138.39,不典型增生组 8例 χ2 =13.5 3.结论　 p5 3蛋白的表达与鳞癌有密切关系 ,为肿瘤的恶性标志 ,说明 p5 3蛋白检测可作为良恶性病变之间的鉴别手段     

原发性肾病综合征湿热证与蛋白关系探讨

目的讨论肾病综合征患者血清中蛋白成分与湿热证的关系。方法对我院肾病综合征伴有湿热证患者的血液过滤液成分分析,与健康对照组进行对比,观察蛋白成分变化结果总血清蛋白质浓度,对照组为(1.25±0.02)μg/μl,湿热证组蛋白质浓度为(1.38±0.03)μg/μl。两组相比(t=-12.277,P=0.001)具有统计学意义(P<0.05)。结论载脂蛋白C-Ⅲ,α2-HS糖蛋白可以作为反映原发性肾病综合征湿热证的特异性蛋白,α1抗胰蛋白酶不能作为湿热证的特异性蛋白检测指标。     

C反应蛋白联合白细胞计数检测对于脑梗死诊断和治疗的临床价值

目的探讨C反应蛋白（hs-CRP）联合白细胞计数（WBC）检测对脑梗死诊断和治疗的临床价值。方法选择2012年9月-2013年9月广东省佛山市中医院80例脑梗死患者（56例存活者、24例死亡者）和40例健康体检者,分别作为观察组和对照组研究对象,对2组C反应蛋白水平和白细胞计数进行观察和比较。结果与对照组相比,观察组CRP水平明显升高[（12.0±2.0）vs（2.0±0.8）],白细胞计数明显增多[（13.0±3.0）vs（7.0±2.0）],差异有统计学意义（P〈0.05）;与存活者相比,死亡者CRP水平明显升高[（18.0±4.0）vs（6.0±1.0）],白细胞计数明显增多[（17.0±3.5）vs（10.0±2.5）],差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 C反应蛋白和白细胞计数有助于脑梗死的诊断,并对患者的预后具有一定的评估作用。     

国产和进口盐酸二甲双胍片溶出对比研究

目的比较国产与进口盐酸二甲双胍片在不同介质中的溶出行为,评价其相似性。方法采用桨法(转速为50 r/min)、温度(37±5)℃溶出、紫外-可见分光光度法在波长233 nm处测定吸光度,测定进口和国产盐酸二甲双胍片在4种不同介质(水、pH 1.2、pH 4.0、pH 6.8缓冲液)中的累积溶出度。结果在pH 1.2介质中,进口片剂在不同时间点的累积溶出度明显高于国产片剂;在pH 4.0介质中,片剂在不同时间点累积溶出度进口比国产高;在水和pH 6.8介质中,国产片剂与进口片剂溶出行为和累积溶出度比较接近。结论本品国产与进口片剂存在差异。     

还脑益聪方组分对β淀粉样前体蛋白转基因痴呆小鼠行为学及胆碱能系统的早期干预作用

目的：观察还脑益聪方复方组分早期干预对阿尔茨海默病（Alzhei mer disease,AD）模型β淀粉样前体蛋白（β-amyloid precursor protein,APP）转基因小鼠行为学及脑胆碱能系统的影响。方法：将60只3月龄APP695V717I转基因小鼠随机分为4组：模型组、大剂量还脑益聪方组[2.80g/（kg.d）]、小剂量还脑益聪方组[1.40g/（kg.d）]及盐酸多奈哌齐阳性对照组[0.65mg/（kg.d）],每组15只。15只遗传背景相同的非转基因C57BL/6J小鼠作为正常对照组。所试药物稀释至相同体积灌胃给药,正常组和模型组给以等体积蒸馏水灌胃,连续灌胃6个月。采用Morris水迷宫实验和避暗实验进行小鼠行为学测试,采用酶联免疫吸附测定法分别检测小鼠大脑皮层和海马组织的乙酰胆碱（acetylcholine,ACh）、乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AChE）含量及胆碱乙酰转移酶（choline acetyltransferase,ChAT）的活性,采用考马斯亮蓝法测定脑组织中蛋白的含量。结果：与正常对照组比较,模型组小鼠学习记忆成绩均显著下降（P〈0.05,P〈0.01）,海马和皮层组织的ACh含量和ChAT活性显著降低,AChE含量显著增加（P〈0.01,P〈0.05）。与模型组比较,盐酸多奈哌齐组、还脑益聪方组小鼠的学习记忆能力均有明显提高（P〈0.05）;盐酸多奈哌齐组、还脑益聪方大剂量组小鼠海马ACh含量明显提高（P〈0.05）,盐酸多奈哌齐组、还脑益聪方组小鼠海马AChE含量显著降低,ChAT活性显著升高（P〈0.01,P〈0.05）;盐酸多奈哌齐组和还脑益聪方两组小鼠皮层ACh含量均明显提高（P〈0.05）,AChE含量有不同程度的降低,还脑益聪方两组小鼠皮层ChAT活性均明显提高（P〈0.05）。结论：还脑益聪方能明显改善APP转基因小鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与调控小鼠海马与皮层胆碱能系统相关酶的含量有关。     

四种介质中国产和进口阿托伐他汀钙片溶出度对比研究

目的:比较国产与进口阿托伐他汀钙片制剂在不同介质中的溶出行为。方法:测定进口和国产阿托伐他汀钙片在4种不同介质(水、pH 1.2、pH 4.0、pH 6.8缓冲液)中的累积溶出度。采用桨法(转速为50转/min)、紫外分光光度法测定(检测波长240 nm)。结果:在pH1.2介质中,进口片剂在不同时间点的累积溶出度高于国产片剂;在水、pH 4.0和pH 6.8介质中,国产片剂与进口片剂溶出行为和累积溶出度基本一致。结论:国产中与进口片剂在pH1.2介质中溶出度存在差异,在其他介质中溶出行为一致。     

人参中可溶性蛋白质含量测定

目的：研究人参中可溶性蛋白质含量测定方法。方法：以牛血清白蛋白为对照品,采用考马斯亮蓝比色法对可溶性蛋白质含量进行测定。结果：对照品浓度在33.4~167.0μg/mL范围内具良好的线性关系（r=0.9990）,供试品溶液在60 min内稳定,平均回收率为99.74%,相对标准偏差为2.36%（n=5）。结论：本含量测定方法快速、准确,可为人参的品种选育、合理栽培和利用提供科学依据。     

荧光增敏法测定咽炎片中丹皮酚的含量

目的 建立测定咽炎片中丹皮酚含量的荧光分析法.方法 基于AlC13试剂对于丹皮酚具有荧光增敏作用,在pH7.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲体系中,于最大发射波长λem=455 nm处（最大激发波长λex=295nm）下检测丹皮酚的含量.结果 丹皮酚的浓度在1.3 ×10-4～7.3 ×10-4μg/ml内与荧光强度增大值△F呈线性关系良好（r=0.999）,回归方程为△F=89.45p（×10-3 μg/ml）-0.2777,检出限为0.8×10-4μg/nl,回收率为95.4％～97.8％,相对标准偏差小于2.53％.结论 该方法准确可靠,可应用于咽炎片中丹皮酚含量的测定.     

前列腺特异性抗原在前列腺癌中的诊断价值

目的:探讨前列腺特异性抗原(tPSA)及其相关指标在前列腺癌(PCa)诊断中的价值。方法:选择45例PCa患者作为观察组,50例前列腺良性增生(BPH)患者(BPH组)和45名健康志愿者(正常对照组)作为对照。血清总PSA(tPSA)和血清游离PSA(fPSA)采用酶放大化学发光仪进行测定,并计算fPSA/tPSA的比值。结果:观察组血清tPSA和fPSA水平均显著高于BPH组(P0.01),BPH组又明显高于正常对照组(P0.01)。当tPSA的值4.0、4.0~10.0及10.0g/L时,BPH患者分别占64.0%、30.0%和4.0%,PCa患者分别占8.9%、22.2%和68.9%,正常对照组分别占97.8%、2.2%和0.0%,3组差异有统计学意义(P0.01)。观察组fPSA/tPSA比值均明显低于正常对照组和BPH组(P0.01),而BPH组亦明显低于正常对照组(P0.01)。在4.0~10.0的灰色区域内,PCa和BPH患者在fPSA/tPSA临界值为0.16时,观察组中80.0%的患者fPSA/tPSA比值0.16,而BHP组中86.7%的患者fPSA/tPSA比值0.16,差异有统计学意义(P=0.002)。结论:tPSA结合fPSA/tPSA可以作为临床上诊断PCa的重要依据。     

心肺复苏后S100B蛋白含量变化及不同中医治疗比较

目的：探讨三种不同中医治法对大鼠心肺复苏后血清和脑组织匀浆S100B蛋白含量的影响。方法：成年雄性SD大鼠40只，随机分为假手术组、复苏组、补阳还五汤组、星蒌承气汤组和镇肝熄风汤组。建立窒息型大鼠心肺复苏模型，于复苏后24小时取样。应用双抗体夹心酶标免疫分析法检测血清和脑组织匀浆的S100B含量并进行不同组别间的比较。结果：与假手术组比较，复苏组和三种药物组大鼠血清和脑组织S100B含量显著升高；与复苏组比较，各药物组大鼠血清S100B显著降低，但各药物组间差异无统计学意义；与复苏组比较，补阳还五汤组脑组织匀浆S100B含量显著降低，星蒌承气汤组和镇肝熄风汤组差异无显著性意义；三个药物组间比较，补阳还五汤组脑组织匀浆S100B含量较星蒌承气汤组和镇肝熄风汤组显著降低，后两组间差异无明显性意义。结论：S100B蛋白可作为心肺复苏后判断脑损伤的标志蛋白。三种不同的中医治法对心肺复苏后脑的保护均有一定作用，但以益气活血通窍熄风法最显著。     

养心益肝片质量标准实验

目的建立养心益肝片的质量标准和含量测定方法。方法采用薄层色谱法对处方中的灵芝、香附、墨旱莲进行定性鉴别，高效液相色谱法对处方中的君药陈皮的有效成分橙皮苷进行含量测定。色谱柱为KromasilC18（4．0mm×200mm，5pm），流动相为V（甲醇）：V（水）：V（醋酸）=35：65：6，检测波长283nm，流速1．0mL／min。结果薄层色谱鉴别特征斑点明显，橙皮苷在0．38-2．53μg范围内呈良好的线性关系，平均回收率为98．43％，相对标准偏差为2．17％。结论建立的方法能较好地控制养心益肝片的质量。