淫羊藿苷对尾悬吊模拟失重诱导大鼠骨丢失的防护作用

目的 研究淫羊藿苷对尾悬吊模拟失重大鼠骨丢失的影响。方法 大鼠随机分为空白组、模型组、阿仑膦酸钠组(2.0 mg/kg)、淫羊藿苷组(30 mg/kg),每组10只。大鼠灌胃给药6周,每周称重1次,从第3周开始,除空白组外,其他各组均给予尾悬吊处理。6周后,ELISA法检测大鼠相关骨代谢标志物水平;双能X线骨密度仪检测大鼠骨密度;三点弯曲力学实验分析大鼠股骨生物力学性能;Micro-CT扫描仪观察大鼠股骨形态结构特性并对骨小梁进行三维重建,测定相关空间结构参数;Schr9dinger Maestro 12.8软件将阿仑膦酸钠、淫羊藿苷分别与BMP-2、OPG、RANK、RANKL蛋白进行分子对接;Western blot法检测股骨组织BMP-2、OPG、RANK、RANKL蛋白表达。结果 与模型组比较,淫羊藿苷组骨吸收相关标志物水平降低(P<0.05,P<0.01),骨形成相关标志物水平、骨密度、股骨骨应力、弹性模量及最大载荷、股骨组织BMP-2和OPG蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);淫羊藿苷较阿仑膦酸钠与骨代谢蛋白对接更好,更易发生作用。结论 淫羊...     

淫羊藿苷对Ⅱ型胶原诱导型关节炎大鼠骨破坏及血清RANKL/OPG的干预作用

目的 观察淫羊藿苷对Ⅱ型胶原诱导型关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）大鼠血清破骨细胞分化因子（receptor activator of NFκB-ligand,RANKL）和护骨素（osteoprotegerin,OPG）的影响及对骨破坏的保护作用。方法 除正常组（8只）外,其余大鼠用牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂注射诱导建立CIA大鼠模型。选取关节炎指数（arthritis index,AI）≥6分的CIA大鼠24只,根据其AI评分分为模型组、甲氨喋呤组和淫羊藿苷组,每组8只。正常组和模型组给予生理盐水灌胃,甲氨喋呤组给予甲氨喋呤每周 5 mg/kg灌胃,淫羊藿苷组给予淫羊藿苷20 mg/（kg?d）灌胃,均连续给药4周。每周记录大鼠AI评分。给药结束后,HE染色观察踝关节组织形态学变化;X射线检查足趾骨质破坏与骨质疏松情况;ELISA法测定血清RANKL、OPG水平。结果 给药4周后,与模型组比较,淫羊藿苷组AI评分、Larsen评分、血清RANKL水平及RANKL/OPG比值明显降低,OPG水平明显升高,差异均有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;甲氨喋呤组上述指标均降低,差异无统计学意义（P>0.05）。HE染色示淫羊藿苷组关节滑膜增生、炎症细胞浸润与软骨面破坏程度明显减轻。结论 淫羊藿苷能缓解或减轻CIA大鼠骨破坏程度,其作用机制可能与降低CIA大鼠血清RANKL水平,提高OPG浓度进而降低RANKL/OPG比例有关。     

淫羊藿总黄酮对成骨细胞中OPG和RANKL mRNA基因表达影响的实验研究

目的:探讨淫羊藿总黄酮对大鼠成骨细胞中骨保护素(OPG)和核因子κB受体激活因子配体(RANKL) mRNA基因表达的影响.方法:体外培养成骨细胞,分别加入含0.1、1、10、100 ng/ml淫羊藿总黄酮(HEF)的培养液,48 h及96 h后分别提取细胞总mRNA,用RT-PCR方法分析OPG/RANKL的mRNA的表达,进行半定量分析.结果:培养48 h后,与对照组比较,HEF增强了OPG mRNA的表达,有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01),VOPG/VRANKL比值增大;96 h后,HEF明显增强了OPG mRNA的表达,各浓度组与对照组相比,均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01),各浓度组VOPG/VRANKL比值增大,有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01).结论:淫羊藿总黄酮可能通过增加成骨细胞OPG的表达来抑制破骨细胞的分化和成熟,从而抑制骨吸收,达到治疗骨质疏松症的目的.     

衰老大鼠肾上腺皮质VDR、CYP24A1、CYP27B1基因mRNA表达变化以及淫羊藿苷的干预作用

目的:探讨淫羊藿苷对D-半乳糖致衰老大鼠肾上腺皮质VDR、CYP24A1、CYP27B1基因mRNA表达的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为6组:对照组,衰老模型组,淫羊藿苷低、中、高剂量组,维生素D组。ELISA法观察大鼠血清25(OH)D_3,1,25(OH)_2D_3水平,Real-Time QPCR法观察大鼠肾上腺皮质VDR、CYP24A1、CYP27B1基因mRNA表达。结果:ELISA结果显示模型组的血清25(OH)D_3与1,25(OH)_2D_3水平均相对对照组降低(P0.05),维生素D组与部分淫羊藿苷不同剂量组的血清25(OH)D_3与1,25(OH)_2D_3水平相对衰老模型组上升(P0.05)。Real-Time QPCR结果显示相比对照组,模型组大鼠肾上腺皮质CYP27B1与VDR表达下降(P0.05),CYP24A1表达上升(P0.05);相比模型组,维生素D组与淫羊藿苷不同剂量组的大鼠肾上腺皮质CYP27B1与VDR基因相对模型组表达上升(P0.05),CYP24A1则相对下降(P0.05)。结论:淫羊藿苷可以通过影响相关基因表达上调衰老大鼠肾上腺皮质的维生素D活化水平。     

淫羊藿总黄酮对大鼠成骨细胞代谢调控的机制研究

目的：探讨淫羊藿总黄酮对大鼠成骨细胞代谢调控的影响。方法:取新生SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞。应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法(PNPP)和RT-PCR方法观察淫羊藿总黄酮对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和OPG mRNA,RANKL mRNA表达的影响。结果:淫羊藿总黄酮能刺激成骨细胞增殖,提高碱性磷酸酶活性,增强OPG mRNA的表达（P<0.05或P<0.01）。结论:淫羊藿总黄酮能促进成骨细胞的增殖、分化,增加OPG mRNA的表达,对RANKL的表达无明显影响。     

淫羊藿苷对哮喘大鼠醌氧化还原酶1及谷胱甘肽还原酶表达及氧化应激的影响

目的探讨淫羊藿苷对哮喘大鼠醌氧化还原酶1(NQO1)及谷胱甘肽还原酶(GR)表达及氧化应激的影响。方法选取40只健康雌性Wistar大鼠,随机将其分为正常组、模型组、布地奈德组及淫羊藿苷组,每组10只。除正常组外,其余组大鼠采用卵蛋白溶液造成慢性大鼠哮喘模型。实验期间正常组及模型组每天灌胃生理盐水,淫羊藿苷组每天灌胃淫羊藿苷120 mL/kg,布地奈德组致敏2周后在卵蛋白溶液雾化吸入后给予布地奈德吸入。于末次激发后24 h内处死各组(正常组同期处死)大鼠并取出右肺组织,以ELISA方法检测各组氧化因子活性氧(ROS)表达水平,采用RT-PCR法检测各组GR mRNA表达水平,采用Westernblot方法检测各组NQO1蛋白表达水平。结果模型组大鼠肺组织中ROS表达水平明显高于正常组(P<0.05),GR mRNA及NQO1蛋白表达水平均明显低于正常组(P均<0.05)。淫羊藿苷组及布地奈德组大鼠肺组织中ROS表达水平均明显低于模型组(P均<0.05),GR mRNA及NQO1蛋白表达水平均明显高于模型组(P均<0.05),淫羊藿苷组与布地奈德组各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论淫羊藿苷可上调哮喘大鼠GR mRNA及NQO1蛋白的表达,减轻哮喘大鼠氧化应激反应。     

肾阳虚大鼠血清对OB-OC共育体系中β-catenin/OPG/RANKL表达的影响及淫羊藿苷的调控作用

目的:观察肾阳虚大鼠血清对共育体系中骨保护素(OPG),胞质蛋白(β-catenin)及核转录因子-κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达的影响及淫羊藿苷对其的调控,进一步探究其诱导骨质疏松发生的可能机制。方法:取16只雄性SD大鼠,随机分为空白组和模型组,每组8只,模型组以10 mL·kg-1腺嘌呤灌胃建立肾阳虚模型,造模成功后收集血清。体外分离培养成骨细胞(OB)和破骨细胞(OC),采用茜素红、碱性磷酸酶(ALP)及姬姆萨染色观察并鉴定OB,OC用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定,transwell小室建立OB-OC共育体系,设置淫羊藿苷组(100μmol·L-1),空白组,淫羊藿苷(100μmol·L-1)+血清组(10%肾阳虚血清),血清组(10%肾阳虚血清)及Dickkopf1(DKK-1)药物组(100μg·L-1),干预共育体系2 d后,对OC进行计数,微板酶标法检测培养液中TRAP及ALP的含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组OPG,β-catenin及RANKL蛋白的表达。结果:与空白组比较,血清组ALP活性,β-catenin及OPG蛋白表达均明显降低(P0. 05),而OC数量,TRAP活性及RANKL蛋白的表达明显升高(P0. 05);与血清组比较,淫羊藿苷组ALP活性显著降低(P0. 01),与淫羊藿苷组比较,淫羊藿苷+血清组ALP活性及OPG蛋白表达明显降低(P0. 05),TRAP活性及RANKL表达明显升高(P0. 05)。结论:肾阳虚大鼠血清能诱导骨质疏松的发病,其作用机制可能是通过降低ALP活性,下调OPG及β-catenin蛋白的表达,同时提高TRAP活性,上调RANKL蛋白的表达来实现的。     

基于RhoA/ROCK通路探讨淫羊藿苷对肾病综合征大鼠的保护机制

目的:研究淫羊藿苷对肾病综合征(NS)大鼠肾素同源蛋白A(RhoA)/Rho相关激酶(ROCK)通路的影响和保护机制。方法:实验对象为54只清洁级雄性SD大鼠,随机均分为正常组,模型组,RhoA抑制剂组(Rhosin,40 mg·kg^-1·d^-1)和淫羊藿苷低、中、高剂量组(30,60,120 mg·kg^-1·d^-1)。模型组大鼠尾静脉注射6.5 mg·kg^-1盐酸阿霉素给,诱导大鼠NS发生。造模后腹膜给药,正常组和模型组给予生理盐水2.5 mL·d^-1,抑制剂组和各剂量组分别给对应剂量的Rhosin和淫羊藿苷进行干预。试剂盒检测各组大鼠尿总蛋白(Alb),尿肌酐(Cre)水平,计算尿总蛋白/肌酐值(A/C);透射电镜(TEM)鉴定肾脏超微病理;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA水平和蛋白表达。结果:TEM结果显示,正常组基底膜完整,足突规整;模型组基底膜损坏严重,足突出现消失、融合严重;淫羊藿苷低剂量组基底膜损伤减轻,足突的数量和密度改善、融合明显;淫羊藿苷中剂量组和抑制剂组,基底膜增厚情况减轻,足突轻度融合;淫羊藿苷高剂量组基底膜结构较完整,足细胞较长、排列较紧密。与正常组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白量、尿液中Cre,A/C,肾组织RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA和蛋白水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,抑制剂组和淫羊藿苷低、中、高剂量组24 h尿蛋白量,A/C和肾组织中RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA和蛋白水平,抑制剂组和淫羊藿苷高剂量组尿液中Cre明显降低(P<0.05)。与抑制剂组比较,淫羊藿苷高剂量组24 h尿蛋白量、尿液中Cre和肾组织RhoA蛋白水平明显降低(P<0.05);淫羊藿苷低剂量组24 h尿蛋白量、尿液中Cre,A/C和肾组织RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA和蛋白水平,淫羊藿苷中剂量组肾组织RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA水平明显升高(P<0.05)。与淫羊藿苷低剂量组比较,淫羊藿苷中、高剂量组尿液中Alb,A/C和肾组织RhoA,ROCK1,ROCK2 mRNA和蛋白水平,淫羊藿苷高剂量组尿液中Cre明显降低(P<0.05)。与淫羊藿苷中剂量组比较,淫羊藿苷高剂量组24 h尿蛋白量、尿液中Cre和肾组织RhoA,ROCK1 mRNA和蛋白水平,肾组织ROCK2 mRNA明显降低(P<0.05)。结论:在NS大鼠治疗过程中,淫羊藿苷可能通过影响RhoA/ROCK通路,实现肾小球内皮和足细胞保护作用。     

淫羊藿苷抑制大鼠静脉血栓形成及对血液流变学的影响

目的:研究淫羊藿苷对大鼠静脉血栓形成的影响,并探究其作用机制。方法:建立大鼠静脉血栓模型和血瘀模型,将实验大鼠分为淫羊藿苷低、中、高剂量组,分别测定血栓质量、凝血时间、优球蛋白溶解时间(ELT)和血液流变学等参数指标。结果:静脉血栓模型大鼠,淫羊藿苷低、中、高剂量(5、10、20 mg/kg)能明显降低静脉血栓质量、全血黏度、红细胞压积和红细胞聚集指数(P0.05或P0.01),抑制腺苷二磷酸(ADP)诱导的大鼠血小板聚集(P0.05);中、高剂量淫羊藿苷能明显缩短ELT,延长凝血活酶时间、凝血酶原时间和凝血酶时间(P0.05或P0.01)。血瘀模型大鼠,淫羊藿苷高剂量组的全血黏度、血浆黏度、红细胞压积和血沉均明显低于模型组(P0.05或P0.01),淫羊藿苷中剂量组的低切全血黏度、中切全血黏度、血浆黏度和血沉明显低于模型组(P0.05或P0.01),而淫羊藿苷低剂量虽有改善,但除血浆黏度及血沉外,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:在一定剂量下,淫羊藿苷能够抑制大鼠静脉血栓的形成,具有改善血液流变学性质、增加纤溶活性及抑制血小板聚集的作用。     

淫羊藿苷对大鼠颈总动脉内膜损伤后骨桥蛋白表达的影响

目的:研究淫羊藿苷对大鼠颈动脉内膜损伤后新生内膜内骨桥蛋白表达的影响.方法:取大鼠42只,随机分为正常对照组6只,模型组和淫羊藿苷高、低剂量组( 120,60 mg· kg -1)各12只.后3组建立鼠颈动脉球囊损伤术后狭窄模型,淫羊藿苷组术前6d开始给予淫羊藿苷灌胃至实验结束;模型对照组以等体积生理盐水灌胃.术后14d和28 d分批处死动物.取各组实验动物颈动脉损伤段,常规石蜡切片,免疫组织化学S-ABC法检测骨桥蛋白(OPN)的表达;RT-PCR检测OPN mRNA的表达.结果:在球囊损伤后14,28 d时,淫羊藿苷高、低剂量组OPN mRNA的表达14 d时为(0.58±0.01),(0.42±0.02),28 d时为(0.28±0.02),(0.33±0.03),明显低于模型组14 d(0.71 ±0.02),28 d(0.62±0.01);高、低剂量组之间无明显差异.淫羊藿苷高、低剂量OPN蛋白表达量14 d时为(20.21±3.67),(32.53±12.16),28 d时为(26.14±4.64),(24.16±11.35),明显低于模型组14 d(71.24±13.25),28 d(46.13±12.31),均P＜0.01.结论:淫羊藿苷在动脉损伤后可调控OPN的表达,抑制平滑肌细胞的迁移,从而减轻球囊损伤后新生内膜的增生.     

从ERα/RANK通路探讨淫羊藿苷抑制破骨细胞分化作用

目的:通过检测淫羊藿苷对破骨细胞诱导分化过程中雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα),核转录因子-κB受体(receptor activator of nuclear factor-κB,RANK)mRNA表达的影响,探讨淫羊藿苷抑制破骨细胞分化作用机制。方法:50μg·L~(-1)核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)体外诱导RAW264.7细胞分化成破骨细胞,利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和骨吸收陷窝对破骨细胞进行鉴定。用不同浓度的淫羊藿苷(1×10-5,1×10-6,1×10-7mol·L~(-1))分别处理5 d和9 d后,进行TRAP染色和骨吸收陷窝分析,处理6 d后,利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9),组织蛋白酶K(cathepsin-K,CK),TRAP,ERα,RANK mRNA表达水平,用雌激素受体阻断剂ICI182780阻断雌激素受体通路验证淫羊藿苷对ERα/RANK通路的调节作用。结果:与RANKL诱导组比较,淫羊藿苷可以显著抑制破骨细胞形成数量和骨吸收陷窝数(P0.05,P0.01),同时显著下调破骨细胞MMP-9,CK,TRAP,RANK mRNA表达水平(P0.05,P0.01),上调ERαmRNA表达水平(P0.05)。ICI182780可抑制淫羊藿苷上调破骨细胞的ERαmRNA表达水平和下调RANK mRNA表达水平的作用(P0.05)。结论:淫羊藿苷能抑制RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化和骨吸收活性,该作用可能通过上调破骨细胞的ERαmRNA表达进而下调RANK mRNA表达实现的。     

单体及复方中的淫羊藿苷在骨质疏松模型大鼠体内代谢及组织分布的比较

目的:比较骨质疏松模型大鼠分别灌胃给予淫羊藿苷单体及补肾壮骨复方(淫羊藿、鹿茸、牡蛎微粉)后,淫羊藿苷在不同时间点在大鼠各组织中的分布情况及其代谢行为的差异。方法:健康SPF级雌性大鼠行去双侧卵巢手术3个月后,骨质疏松症模型成立。按118mg·kg-1灌胃给予骨质疏松模型大鼠淫羊藿苷单体及补肾壮骨复方后,于40min,1.5,4,24 h取各组织,经生物样品预处理后,利用HPLC法测定各组织中各成分的浓度。色谱柱Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm,5μm)柱温35℃;流动相A(甲醇)-B(0.2%H3PO4水),流速1.0mL·min-1进行梯度洗脱;检测波长为270nm。结果:淫羊藿苷在大鼠体内分布广泛,在肾、肝、脾、肌肉等组织中分布浓度较高,并且与其代谢产物共存于组织中。复方组与单体组对相同组织于相同时间比较结果。肌肉:淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅱ、淫羊藿素在肌肉中的分布浓度较高,消除亦较缓慢,且淫羊藿素4,24h,淫羊霍次苷在4 h组间比较差异显著(P<0.05)。肾:淫羊藿苷在40min,4,24 h组间比较差异显著(P<0.05),代谢产物淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿素在24h组间比较差异显著(P<0.05)。肝脏:淫羊藿苷、淫羊藿素在4,24 h组间比较差异显著(P<0.05)。结论:淫羊藿苷在复方配伍环境下的体内分布与单体状态比较,总体呈现吸收分布较缓慢,在体内作用时间较长,消除较慢,可能与复方中化学成分之间相互协同或拮抗作用有关,或与中医"君臣佐使"、"七情和合"等配伍理论有关。     

淫羊藿苷对D-半乳糖诱导的脑衰老模型小鼠p53/p21信号通路的影响

目的:观察淫羊藿苷对脑衰老模型小鼠p53/p21信号通路的影响,并探讨淫羊藿苷抗衰老的可能机制。方法:将实验小鼠随机分为空白组、模型组、淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组,除空白组外,其他各组通过D-半乳糖诱导建立脑衰老模型。淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组灌胃淫羊藿苷药液,空白组和模型组灌胃等体积生理盐水。用Morris水迷宫评价各组小鼠的学习记忆能力;用ELISA检测各组小鼠血清中T-AOC、GSH-PX、GSH-ST、MDA的表达。用Real time-PCR和免疫组化检测各组小鼠海马中p53和p21的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠上平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间都明显增加(P0.01),而小鼠穿越平台次数和目标象限时间则明显较少(P0.01)。与模型组相比,淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组小鼠上平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间均有所较少(P0.01,P0.05),而小鼠越平台次数和目标象限时间有所增加(P0.01,P0.05)。与空白组比较,模型组小鼠血清中T-AOC、GSH-PX、GSH-ST明显降低(P0.01),而MDA明显升高(P0.01);与模型组比较,淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组小鼠血清中T-AOC、GSH-PX、GSH-ST均有不同程度升高(P0.01,P0.05),而MDA则有所降低(P0.01)。与空白组比较,模型组小鼠海马中p53、p21 mRNA和蛋白表达水平升高(P0.01)。与模型组比较,淫羊藿苷低剂量组和淫羊藿苷高剂量组小鼠海马中p53、p21 mRNA和蛋白表达水平降低(P0.01,P0.05)。结论:淫羊藿苷具有延缓衰老作用,其机制可能与其抑制衰老信号通路p53/p21有关。     

淫羊藿苷对骨髓增生异常综合征模型大鼠骨髓细胞凋亡的影响

目的探讨单味中药提取物淫羊藿苷对骨髓增生异常综合征(MDS)模型大鼠骨髓细胞凋亡的影响。方法通过复制骨髓增生异常综合征(MDS)大鼠模型,用淫羊藿苷溶液灌胃。实验结束后,检测大鼠外周血象、骨髓象,骨髓细胞总凋亡率。结果淫羊藿苷组外周血白细胞计数、血红蛋白含量、红细胞计数灵敏、血小板计数高于模型生理盐水组,且有显著差异(P<0.01);各模型组大鼠外周血和骨髓均能见到不同程度的病态造血,骨髓细胞凋亡指数显著升高,与空白对照组相比有极显著差异;淫羊藿苷组骨髓细胞凋亡指数比模型生理盐水组低,两组间有极显著性差异(P<0.001)。结论淫羊藿苷有升高MDS模型大鼠外周血象、改善骨髓病态造血、降低骨髓细胞凋亡率的作用。     

淫羊藿苷与锌盐结合物的制备及其对雄性大鼠性腺发育和分泌功能的影响

目的制备淫羊藿苷与锌盐(本实验选用氯化锌)的结合物,研究雄性大鼠性腺发育和分泌功能与淫羊藿苷锌的关系。方法利用淫羊藿苷的羧基与锌离子进行化学反应(摩尔比为1∶3),得到淫羊藿苷-锌结合物。将实验大鼠适应性饲养3 d后,以20 min/d的运动量对其进行为期3 d的饲养,淘汰个别不适应游泳训练的大鼠,再将剩余大鼠随机分为5组:静止对照组(Control)、运动对照组(Exercise)、低剂量淫羊藿苷锌运动组(L-E组)、中剂量淫羊藿苷锌运动组(M-E组)和高剂量淫羊藿苷锌运动组(H-E组),每组8只,根据1 mL/100 g的灌胃量,每组每天分别以NS、NS、60mg/kg淫羊藿苷锌、120 mg/kg淫羊藿苷锌和180 mg/kg淫羊藿苷锌进行灌胃。游泳训练42 d后,处死大鼠,称重睾丸、精囊腺、前列腺并计算各自指数,检测肝或肌组织匀浆中肝糖原、肌糖原含量。结果 L-E组和H-E组大鼠睾丸重量有少量提升; L-E组大鼠精囊重量显著提高; M-E组因该组动物状态较差,体质量减轻,前列腺重量降低,其余各组大鼠前列腺重量均无明显影响;静止对照组肝糖原、肌糖原储量较高,游泳运动后,运动对照组大鼠肝糖原、肌糖原储量降至最低。给予不同浓度的淫羊藿苷锌后,大鼠糖原储备量增加,以H-E组增高最为显著。结论不同浓度的淫羊藿苷锌对大鼠性腺发育及分泌功能各有影响,适量摄取淫羊藿苷锌能促进大鼠性腺发育,提高分泌功能。     

淫羊藿苷对维生素D缺乏大鼠肾上腺皮质维生素D轴及VDR蛋白表达的影响

目的:观察淫羊藿苷对维生素D缺乏大鼠肾上腺皮质维生素D轴的影响。方法:选用60只雄性SD大鼠,随机分为:正常组;模型组(生理盐水4.0 mL·kg~(-1)·d~(-1)灌胃);淫羊藿苷高剂量组(120 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃);淫羊藿苷中剂量组(60 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃);淫羊藿苷低剂量组(30 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃);维生素D组(30ng·kg~(-1)·d~(-1)灌胃)。造模1月后,药物干预2月,酶联免疫法(ELISA法)检测血清25(OH)D_3、1,25(OH)D_3。免疫组化检测VDR蛋白表达。Real-Time PCR法检测肾上腺皮质维生素D受体(VDR)、25-羟维生素D_3-24-羟基化酶(CYP24A1)、25-羟维生素D1α-羟化酶(CYP27B1)mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组血清25(OH)D_3、1,25(OH)D_3含量下降(P0.05);淫羊藿苷干预后血清25(OH)D_3、1,25(OH)D_3含量均上升(P0.05)。免疫组化显示,与正常组比较,模型组VDR蛋白表达下降(P0.05);经淫羊藿苷干预后,表达上升(P0.05)。Real-Time PCR显示,经淫羊藿苷干预后,表达量上调(P0.05),除VDRmRNA外,CYP24A1mRNA与CYP27B1mRNA变化趋势均与维生素D组表现一致。模型组基因表达均高于正常组(P0.05),Real-Time PCR检测结果与免疫组化检测的蛋白表达不完全一致。结论:淫羊藿苷可能调节维生素D轴促进VDR蛋白表达改善维生素D缺乏。     

基于PTEN/PI3K/Akt/mTOR 信号通路探讨淫羊藿苷联合地塞米松对阿霉素诱导足细胞损伤的保护作用及机制

目的 探讨淫羊藿苷联合地塞米松对阿霉素诱导足细胞损伤的保护作用及分子机制。方法 体外培养大鼠肾小球足细胞,阿霉素诱导建立足细胞损伤模型,分为：空白组、模型组、淫羊藿苷联合地塞米松组及氯喹组。免疫荧光法测定足细胞特异性骨架蛋白synaptopodin的表达;转染mRFP-GFP-LC3双荧光自噬指示体系,激光共聚焦显微镜观察足细胞内自噬流的强弱;透射电镜观察足细胞内自噬体、自噬溶酶体的变化;Western Blot法检测足细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62及自噬信号通路蛋白PTEN、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的表达。结果 与模型组比,淫羊藿苷联合地塞米松组的synaptopodin的表达升高（P<0.05）;足细胞内自噬流水平、自噬体及自噬溶酶体数量均增加（P<0.01）; LC3-Ⅱ、PTEN的表达上调（P<0.01）,但p62、pPI3K、p-Akt、p-mTOR的表达下调（P<0.01）。与淫羊藿苷联合地塞米松组比,氯喹组synaptopodin的表达降低（P<0.05）;足细胞内自噬流的水平降低;自噬体数量增加（P<0.05）,自噬...     

淫羊藿苷基于ERα-Wnt/β-catenin信号通路对骨质疏松大鼠成骨分化的影响及机制研究

目的:探讨淫羊藿苷基于ERα-Wnt/β-catenin信号通路对骨质疏松大鼠体内成骨分化的影响及作用机制。方法:80只雌性SD大鼠随机分为4组:假手术+生理盐水组(Sham-Veh)20只,假手术+淫羊藿苷组(Sham-Icariin)20只,去势+生理盐水组(Ovx-Veh)20只,去势+淫羊藿组(Ovx-Icariin)20只。分别在术后4周、8周进行Micro-CT相关参数(Tb.N、Tb.Th、Tb.Sp、BV、BV/TV及BMD)、RT-PCR相关指标(ALP、COL-1、OPG/RANKL、OCN、Run X2、ERα和GAPDH)及染色(β-catenin免疫荧光染色、HE染色及TRAP染色)评价。结果:骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨体积(BV)、骨与组织体积比(BV/TV)及骨密度(BMD)在术后4周和8周时,淫羊藿苷组均高于生理盐水组,差异具有统计学意义(P0.05);而骨小梁间距(Tb.Sp)在术后4周和8周时,淫羊藿苷组均低于生理盐水组,差异具有统计学意义(P0.05)。淫羊藿苷组在ALP、COL-1、OCN、Run X2和ERα方面均高于生理盐水组,差异具有统计学意义(P0.05);而淫羊藿苷组在OPG/RANKL方面低于生理盐水组,差异具有统计学意义(P0.05)。淫羊藿苷组(Sham+Ovx)的β-catenin免疫荧光染色明显多于生理盐水组(Sham+Ovx);在HE染色方面,淫羊藿苷组(Sham+Ovx)的骨组织明显多于生理盐水组(Sham+Ovx);而在TRAP染色方面,淫羊藿苷组(Sham+Ovx)的破骨细胞明显少于生理盐水组(Sham+Ovx)。结论:淫羊藿苷在大鼠体内可以通过ERα-Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs的成骨分化,促进骨生成,并可通过ERα相关的OPG/RANKL/RANK系统抑制破骨细胞的生成,抑制骨吸收。     

淫羊藿苷促SD大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化作用的实验研究

目的观察淫羊藿苷促SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)骨向分化的作用特点。方法 (1)采用机械分离及全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,氨基安替吡啉测酚法检测不同浓度的淫羊藿苷在第3、6、9、12、15、18、21天对细胞上清液中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,采用茜素红染色法检测各浓度组BMSCs矿化情况,观察不同浓度的淫羊藿苷促BMSCs骨向分化的作用。(2)将BMSCs细胞分为空白对照组、成骨诱导组及淫羊藿苷组(0.5μg/m L),在培养第7、14、21天检测各组细胞上清ALP活性,并于第14及21天分别检测各组细胞ALP阳性染色率与矿化结节数,同时采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测3个不同时间点各组细胞中核心结合蛋白因子(Runt-related transcripition factor-2,Runx2)及骨钙素(Osteocalcin)mRNA的表达水平。结果 (1)0.05~5.0μg/m L淫羊藿苷均可明显提高细胞上清液中ALP活性,其中0.2~2.0μg/m L浓度组细胞结节数亦明显增加(P0.01)。(2)淫羊藿苷促BMSCs骨向分化时,Runx2 mRNA表达水平及ALP活性均先升后降;Osteocalcin mRNA表达水平则持续上升(P0.01);与成骨诱导组比较,作用14天后,淫羊藿苷组ALP活性及ALP阳性染色率均明显提高(P0.05,P0.01)。结论淫羊藿苷通过上调Runx2基因的表达,促使BMSCs向成骨细胞分化,并通过增加细胞ALP分泌及Osteocalcin基因的表达,促进细胞矿化的发生,从而促使新生成骨细胞的成熟。