血管内皮生长因子在放射损伤小鼠骨髓基质细胞中的表达

目的 探讨辐射对小鼠骨髓基质细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及凋亡率变化。方法 采用RT—PCR和Western blot方法，初步检测了昆明小鼠经6．0Gy^60Coγ射线全身照射后小同时间骨髓基质细胞VEGF mRNA和蛋白表达水平的变化；并用流式细胞术检测相应时间的骨髓基质细胞凋亡率。结果 辐射损伤后，小鼠骨髓基质细胞VEGF表达在mRNA水平和蛋白水平均显著降低，骨髓基质细胞凋亡率显著升高；随时间延长，骨髓基质细胞VEGF表达有所恢复，凋亡率也逐渐降低，但14d时仍未恢复正常。结论 6．0Gy^60Coγ射线可抑制骨髓基质细胞VFGF表达，引起细胞凋亡。说明辐射所致骨髓微环境损伤与基质细胞中VEGF表达异常有关。     

野生型p53基因转染卵巢癌SKOV-3细胞对放疗敏感性的影响

目的 探讨γ射线照射抑制平滑肌细胞（SMC）增殖的信号传递途径。方法 培养的动脉平滑肌细胞分别接受吸收剂量为3.5、7．0、14Gy^60Coγ射线照射后，以^3H-TdR掺入法测定平滑肌细胞增殖程度，放射活性法测定蛋白激酶C（PKC）及丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）活性。结果 7．0、14Gy^60Coγ射线能明显抑制平滑肌细胞增殖，同时有MAPK、PKC活性明显降低。结论 7．0、14Gy^60Coγ射线抑制血管平滑肌细胞增殖可能是通过降低MAPK、PKC活性途径实现的。     

3.5Gyγ射线照射对小鼠骨髓蛋白质表达的影响

目的观察3．5Gyγ射线照射对小鼠骨髓蛋白质表达的影响，为阐明射线损伤骨髓细胞的分子机理提供理论和实验依据。方法采用3．5Gy^60Coγ射线全身一次性照射小鼠。利用蛋白质组织学技术分离、分析和鉴定小鼠骨髓细胞差异蛋白质。结果3．5Gyγ射线可使小鼠骨髓细胞蛋白质18个上调，6个下调，这些蛋白质多与细胞的生长和分化有关。结论γ射线影响骨髓蛋白质表达，并可能由此抑制骨髓的造血功能。     

四物汤对3种血虚证动物细胞周期的影响

目的系统考察60Coγ-射线、环磷酰胺和综合放血法致血虚证小鼠模型骨髓细胞周期变化的特点。方法采用60Coγ-射线照射、环磷酰胺腹腔注射和综合放血法制作血虚证动物模型,检测对小鼠骨髓细胞周期的影响,同时观察四物汤给药后对其影响。结果射线损伤所致血虚证小鼠骨髓细胞中G2/M期比例先升高后降低,环磷酰胺损伤所致血虚证小鼠骨髓细胞中G2/M和S期细胞先升高后降低;综合放血组小鼠骨髓细胞的S期细胞数先升高后降低;四物汤可以促进射线损伤致血虚证小鼠骨髓细胞G0/1期进入S期的作用。3种模型都先后出现了G2/M期阻滞,以γ-射线照射组出现最早,与照射组不同的是环磷酰胺组与综合放血组在造模后都先后在第3、7天出现了S期细胞峰值。结论3种模型骨髓细胞周期都出现了G2/M期阻滞,但S期的变化存在明显不同,四物汤可以促进射线损伤致血虚证小鼠骨髓细胞G0/1期进入S期的作用。     

60Coγ射线对hOGG1低表达细胞株放射敏感性的影响

目的研究^60 Co γ射线对DNA碱基切除修复基因hOGG1低表达细胞株放射敏感性的影响.方法以A549细胞和通过稳定转染hOGG1核酶而获得的hOGG1低表达的A549-R细胞为研究对象,用MTT法测定不同剂量γ射线照射后两种细胞的存活率;单细胞凝胶电泳检测^60 Coγ射线处理后两种细胞DNA损伤与修复的差异;流式细胞术检测照射后两种细胞的周期分布、凋亡率和细胞增殖指数.结果照射后两种细胞的存活率均随照射剂量的增加而下降,但A549-R细胞组的存活率显著低于相同剂量组的A549细胞（P＜0.05）;所设剂量均可诱导细胞DNA损伤,但DNA迁移长度和彗星细胞率在两种细胞间差异无统计学意义（P＞0.05）;损伤后的修复在两种细胞间差异有统计学意义（P＜0.05）,A549-R细胞的修复能力远远低于A549细胞.流式细胞术检测结果表明：照射后两种细胞都表现为G0/G1期细胞阻滞,细胞凋亡随照射剂量的增加而增加,细胞增殖指数随照射剂量的增加而降低,这些变化均以A549-R细胞更为明显.结论hOGG1低表达使得细胞DNA修复能力降低,细胞周期阻滞于G0/G1期、细胞增殖减慢、凋亡增加、存活率下降,从而使细胞对^60Coγ射线的放射敏感性增强.     

慧星电泳用于肿瘤细胞辐射敏感性检测的研究

目的：探讨彗星电泳方法检测肿瘤细胞对γ射线的辐射敏感性的可行性。方法：以自行设计的图像分析系统，用彗星电泳方法检测4种人肿瘤细胞受γ射线照射后细胞初始DNA损伤，以及细胞径30min修复时DNA损伤残余率；用细胞集落存活法检测2Gy γ射线照射后细胞存活率。结果：4种肿瘤细胞初始DNA损伤与辐射敏感性无关，2Gyγ射线照射后4种细胞存活率（SF2）与细胞经30min修复后的DNA损伤残余率相关明显（r=-0.87)，结论：本实验方法有可能成为一种快速、准确检测肿瘤细胞内在辐射敏感性的方法。     

γ射线照射对兔眼损伤效应的实验研究

目的 观察胰高血糖素样肽－2对放射损伤小鼠小肠肠粘膜屏障和消化吸收功能恢复的影响。方法 昆明种小鼠经8Gy^60Coγ射线全身性一次照射后随机分为放射损伤对照组和胰高血糖素样肽－2处理组，设1、3、5d3个时相点，检测肠通透性、血浆内毒素含量、葡萄糖吸收能力及肠上皮蔗糖酶和乳糖酶活性变化。结果 8Gy ^60Coγ射线照射后1、3、5d肠通透性和葡萄糖吸收能力、蔗糖酶、乳糖酶活性分别显著高于和低于正常对照组（P＜0．01或P＜0．05），血浆内毒素含量在1、3d时显著高于正常对照组（P＜0．01或P＜0．05）；胰高血糖素样肽－2处理组肠通透性、血浆内毒素含量、葡萄糖吸收能力和蔗糖酶、乳糖酶活性分别在3d和5d时恢复正常。结论 胰高血糖素样肽－2可促进放射损伤小鼠肠粘膜屏障和消化吸收功能的恢复。     

淫羊藿甙对辐照小鼠的抗凋亡作用与半胱天冬酶活性的相关性研究

目的：观察淫羊藿甙抗辐射损伤作用，并探讨其抗辐射损伤机制。方法：KM种小鼠于60Coγ射线照射前48，24h及照后即刻灌胃淫羊藿甙，剂量分别为1，10，100mg/kg，照射剂量8．0Gy，观察受照射小鼠30d存活率和死亡动物平均存活时间。另外观察淫羊藿甙对l锄种小鼠受5．5Gy 60Coγ射线照射后小鼠胸腺、脾脏和骨髓细胞凋亡率、半胱天冬酶-3(caspase-3)和半胱天冬酶-8(caspase-8))活性的影响。结果：中剂量淫羊藿甙组30d存活率较照射对照组提高50％，死亡动物平均存活时间延长2．5d。照射对照组胸腺、脾脏和骨髓细胞在照射后6，12和24h均有凋亡。胸腺和脾脏于照射后12h凋亡率最高，骨髓于照后6h凋亡率最高。照射24h后，3种组织的凋亡串均明显降低。中剂量淫羊藿甙可降低照射后6，12h胸腺、脾脏、骨髓细胞凋亡率和照射后24h脾脏、骨髓细胞凋亡率，抑制照射后6hcaspase-3活性，对半胱天冬酶-8活性无影响。结论：淫羊藿甙具有抗辐射损伤作用，其机制之一可能是通过抑制caspase-3活性降低细胞凋亡率。     

阿多拉扶正霖对钴辐射诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的影响

目的 观察小鼠受钴(~(60)Co)γ射线照射前后,分别口服阿多拉扶正霖(ADL)冲剂,对诱发骨髓嗜多染红细胞微核的影响。方法 将昆明种小鼠随机分成对照组、~(60)Coγ射线照射A组、ADL预防组、~(60)Coγ射线照射B组和ADL治疗组,每组16只,雌雄各半。以ADL 6g/kg体重每天灌胃1次,连续8天。ADL预防组与A组于第9天照射,第10天处死;ADL治疗组与B组于第1天照射,第10天处死。~(60)Coγ射线照射剂量为2.0Gy,全身1次照射。小鼠处死后制作骨髓片,常规染色与计数。结果 无论是ADL预防组还是治疗组,微核率均比相应的~(60)Coγ射线照射组低,有非常显著性差异(P<0.01),两个~(60)Coγ射线照射组之间和两个ADL组之间,差异均不显著(P>0.05)。结论 ADL可在短期内恢复由~(60)Coγ射线造成的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率的上升,提示ADL有抗辐射损伤的作用。     

白藜芦醇促进γ射线照射小鼠造血系统损伤修复的作用

目的观察白藜芦醇对60Coγ射线照射小鼠造血系统损伤修复的影响。方法 ICR小鼠随机分成5组,即正常对照组、照射对照组以及白藜芦醇50、100、200 mg.kg-1照射组,照射前3 d灌服给药,每天1次。除正常对照组外,所有小鼠60Co射线全身5.5 Gy辐照1次,照射后第7天小鼠取骨髓细胞和脾脏,对骨髓单个核细胞和脾集落形成单位进行计数,测定骨髓细胞DNA含量和细胞周期。结果与正常对照组比较,照射对照组小鼠骨髓单个核细胞数和骨髓细胞DNA含量显著降低（P〈0.05）,脾集落形成单位数和S和G2/M期细胞百分率显著增多（P〈0.05）;与照射对照组比较,白藜芦醇100、200 mg.kg-1照射组小鼠照射骨髓单个核细胞数、骨髓细胞DNA含量、脾集落形成单位数和S和G2/M期细胞百分率显著增多（P〈0.05）,白藜芦醇50 mg.kg-1照射组有增多趋势。结论白藜芦醇可以促进60Coγ射线照射小鼠造血系统损伤的恢复,防护效果与给药剂量相关。     

重组质粒p-Egr-p16的构建及在SMMC-7721细胞中的辐射诱导表达

目的 构建重组质粒p-Egr-p16并探讨在SMMC-772l细胞中的辐射诱导表达及抗肝癌的作用。方法 用双酶切、粘端连接的方法构建了含有辐射诱导特性的早期反应因子Egr—1和p16的p-Egr-p16的质粒载体，以脂质体介导的方法，将重组载体导人人肝癌SMMC-772l细胞，采用RT-PCR的方法检测了不同剂量^60Coγ射线照射转染后的人肝癌细胞p16基因转录水平的变化和2Gy照射后不同时间的p16基因转录水平的变化。结果经研究证实，1～6Gy照射后p16的转录水平高于对照，在2～4Gy照射后达到峰值，2Gy照射后不同时间均有所增高，在照射后24h增高最明显。结论 2Gy^60Coγ射线照射后p16基因转录水平在2～24h呈现时问依赖性的增高，在24h增高最明显，48和72h逐渐降低，但仍高于对照组。提示^60Coγ射线可激活早期反应生长因子Egr-1，从而介导其下游基因p16的表达增强。     

预缺氧对急性放射小鼠存活和染色体损伤的影响

目的：观察间歇性预缺氧对急性放射小鼠的存活和染色体损伤的影响；方法：实验动物随机分为5组，按不同时间进行间歇性预缺氧后予以6Gy的^60COγ射线照射，照后21小时取部分小鼠的股骨骨髓观察其染色体畸变率和微核细胞形成率，并观察其余小鼠20天的存活率，计算平均存活时间；结果：经预缺氧5天后照射的小鼠与单纯照射小鼠相比，平均存活时间延长，染色体畸变率和微核细胞形成率均降低；结论：间歇性预缺氧对急性放射损伤有一定的保护作用。     

节律基因mPeriod2过表达对体外Lewis肺癌细胞γ射线敏感性的影响

目的评价mPeriod2(mPer2)基因转染后过表达对小鼠Lew is肺癌细胞(LLCs)60Coγ-射线放射敏感性的影响。方法采用脂质体介导方法将mPer2基因转染至LLC细胞,以空白组及空载体质粒pcD-NA3.1为对照,采用RT-PCR及流式细胞术检测mPer2基因在LLC细胞中的表达,给予60Coγ-射线4Gy单次照射后,流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡,采用增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化、细胞集落形成实验检测细胞增殖及存活情况。结果60Coγ-射线照射后,与转染空载体质粒组及空白组比较,转染mPer2基因细胞表现为G2/M期阻滞,凋亡率下降(contro l:8.10±0.03;pcDNA3.1-vector:11.20±0.07;pcDNA3.1-mPer2:4.40±0.02;P<0.05),细胞克隆形成增加(contro l:14%;pcDNA3.1-vec-tor:11%;pcDNA3.1-mPer2:32%;P<0.01)及PCNA阳性表达增加(contro l: ,pcDNA3.1-vector: ,pcDNA3.1-mPer2: ,P<0.05)。结论节律基因mPer2过表达使60Coγ-射线照射的小鼠Lew is肺癌细胞凋亡下降,细胞增殖明显,降低了该细胞对放射损伤的敏感性。     

巢式PCR分析电离辐射诱导人外周血线粒体DNA4977bp缺失

目的 探索对不同剂量电离辐射诱导的人外周血线粒体DNA4977bp缺失进行分析的方法。方法 采用3对引物对γ射线诱导的人外周血线粒体DNA缺失进行PCR扩增，建立对人线粒体DNA4977bp缺失进行分析的巢式PCR方法．扩增线粒体DNA缺失区片段，纯化PCR产物进行测序。采集5例正常人外周血进行0～5Gy^60Coγ射线的外照射，利用巢式PCR技术，分析^60Coγ射线照射后外周血有核细胞中线粒体DNA4977bp缺失的发生情况。结果 用建立的巢式PCR方法可在受到照射的外周血样品中检测到mtDNA4977bp缺失。所有外周血样本在照射前均无线粒体DNA4977bp缺失，1～5Gy^60Coγ线照射后均诱导出此缺失。结论 本研究所建立的巢式PCR方法可用来分析电离辐射诱导的人外周血淋巴细胞线粒体DNA4977bp缺失。     

巨噬细胞和MMP-9对肺成纤维细胞增生及合成Ⅳ型胶原的作用

目的探讨放射性肺纤维化早期启动的发生机制。方法灌洗收集经^60Coγ射线照射后的Wistar大鼠肺泡巨噬细胞制备条件培养液，刺激培养的人肺成纤维细胞增生，用MTT法检测细胞增生活力，Western blot检测细胞合成Ⅳ型胶原含量的改变，酶谱分析检测细胞基质金属蛋白酶-9的活性。结果经条件培养液刺激后，人肺成纤维细胞的增殖活力明显增加，在48～72h之内作用明显HLF合成Ⅳ型胶原增多，12h达高峰，随后有所下降；12h后基质金属蛋白酶．9活性开始增高，于48h达高峰，72h开始下降。结论20Gy^60Coγ射线能刺激AM分泌某些细胞因子促进肺间质成纤维细胞增生及合成Ⅳ型胶原，与此同时后者能激活基质金属蛋白酶-9，降解增多的Co Ⅳ，参与肺损伤早期的重建过程。     

低剂量辐射对环磷酰胺所致DNA损伤的影响

目的研究低剂量γ射线预照射对大剂量环磷酰胺化疗所致外周血淋巴细胞DNA损伤及遗传物质损伤的影响。方法昆明种雄性小鼠随机分为空白对照组、荷瘤对照组（假照组）、荷瘤低剂量照射组（LDR组）、荷瘤环磷酰胺化疗组（CTX组）和荷瘤低剂量照射联合化疗组（LDR＋CTX组）。常规饲养1周后，于左腹股沟皮下各接种S180肉瘤细胞（空白对照组除外），接种后第8和11天对LDR组和LDR＋CTX组小鼠给予75mGy-γ射线全身照射，照射后30h分别给予CTX组和LDR＋CTX组小鼠腹腔注射环磷酰胺3．0mg；第13天处死所有小鼠，分别取血，采用单细胞凝胶电泳法检测外周血淋巴细胞DNA损伤；采用骨髓嗜多染红细胞微核率（MNF）检测遗传物质损伤。结果①环磷酰胺化疗后DNA损伤程度较空白对照及荷瘤对照组均显著增加；环磷酰胺化疗前给予75mGy-γ射线照射，则可显著降低大剂量环磷酰胺化疗所致的DNA损伤。②大剂量环磷酰胺化疗后小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率较空白对照组及单纯荷瘤组有显著增加（P〈0．01）；环磷酰胺化疗前给予75mGy-γ射线照射则可降低环磷酰胺所致微核率的增加，但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论①大剂量环磷酰胺化疗可引起外周血淋巴细胞DNA损伤；化疗前给予75mGy-γ射线照射对DNA损伤可能产生一定的保护作用。②环磷酰胺有强大的致突变作用，可导致骨髓嗜多染红细胞微核率显著增加，75mGy-γ射线预照射对大剂量环磷酰胺化疗的遗传学毒性未表现出明显的保护作用。     

用染色体畸变研究AT细胞系辐射敏感性和适应性反应

目的探讨毛细血管扩张运动共济失调症(ataxiatelangiectasia,AT)细胞系的辐射敏感性和对低剂量辐射能否诱导细胞遗传学适应性反应。方法用2cGy60Coγ射线预先照射进入G1期的AT5B1VA(AT)细胞和GM0639(GM)细胞,培养6h后再照射1.0Gy或3.0Gy60Coγ射线,分析染色体畸变。结果G1期的GM细胞在预照射2cGy60Coγ射线的诱导剂量后能非常显著地降低随后照射1.0Gy或3.0Gy60Coγ射线诱发的染色体畸变率,染色体畸变的观察值非常显著地低于预期值(P<0.001),而对AT细胞则没有观察到这种现象,染色体畸变的观察值与预期值差异无统计学意义(P>0.05);另外,1.0Gy或3.0Gy60Coγ射线诱发AT细胞的各种畸变率(包括着丝粒畸变、无着丝粒畸变和染色单体型畸变)均显著地高于GM细胞(P<0.001)。结论低剂量电离辐射不能诱导AT细胞产生细胞遗传学适应性反应;AT细胞对电离辐射诱发染色体畸变高度敏感,可能是由于不能正确修复DNA双链断裂的结果。     

重离子12C6+对60Coγ射线诱发淋巴细胞微核效应的比较研究

目的 比较重离子束^12C^6 对^60Coγ射线照射人离体血诱发淋巴细胞微核的效应。方法 用^60Coγ射线和地面加速器产生的重离子^12C^6 (平均LET为36．70keV/μm)，不同剂量照射离体人血，用CB微核法观察双核淋巴细胞的微核，计算重离子束^12C^6 对^60Coγ射线的相对生物效能。结果 在0-6 Gy剂量范围内，重离子束^12C^6 对^60Coγ射线的相对生物效能在4．19～1．78之间，平均为2．56。结论 重离子束^12C^6 比^60Coγ射线有更高的生物效应。     

Notch信号在放射损伤小鼠骨髓基质细胞中的表达

目的探讨小鼠骨髓基质细胞放射损伤后Notch信号的表达。方法应用小鼠骨髓基质细胞体外放射损伤模型，采用RT-PCR检测了小鼠骨髓基质细胞Notch1、Jagged1、Hes1基因的表达。结果正常小鼠骨髓基质细胞中未见Notch1受体、Notch1配体Jagged1、Notch通路活化的下游基因Hes1mRNA的表达，给予^60Coγ射线照射后2h即可见上述基因的表达，照射后4h达高峰，8～12h恢复正常。各组间比较，差异有统计学意义（P〈0．001）。结论γ射线作用于小鼠骨髓基质细胞后有Notch通路的活化。Notch通路参与了小鼠骨髓基质细胞的放射损伤过程。     

辐射小鼠骨髓CD34~ 细胞的变化及其意义

目的　研究γ射线照射后C5 7小鼠骨髓中CD34 细胞的数量变化规律及其意义。方法　流式细胞仪测定CD34 细胞在骨髓有核细胞中的比例 ;AnnexinV FITC试剂盒检测骨髓细胞的凋亡 ;细胞固定后PI染色测定细胞周期。结果　①CD34 细胞在骨髓有核细胞中的比例随照射剂量的加大而降低 ,在 5 5Gy照射后 14d内小鼠CD34 细胞的减少表现为持续性 ;②小鼠照射后6h骨髓细胞凋亡率最高 ,以 5 5Gy照射组最为明显 ;③ 5 5Gy照射后小鼠骨髓细胞周期紊乱。 结论　γ射线损伤骨髓中的干祖细胞 ,造成骨髓中干祖细胞的数量减少 ,其途径之一是诱导骨髓细胞凋亡。