用于大容量噬茵体抗体库的表达载体的构建及鉴定

目的：构建一个适用于大容量抗体库的噬菌体抗体表达载体。方法：通过插入人工合成寡核苷酸、PCR介导的定位突变等技术，将载体p3MH进行改造，使之更适于构建大容量抗体库。通过噬茵体抗体的表达、ELISA及细胞内重组试验鉴定所获得的表达载体。结果：通过插入loxp511和1oxp序列，将Lac启动子更换为阿拉伯糖启动子、改造抗体基因克隆位点等，将p3MH改造成pAL。经检测pAL可以表达具有功能的Fab噬菌体抗体，其表达调控更为严密，可以在cre^ 细菌胞内发生预期的loxp-cre介导的定位重组。结论：所获得的表达载体pAL适用于构建大容量Fab噬菌体抗体库。     

抗HBsAg人IgG在CHO细胞中表达的影响因素探讨

目的 探讨CHO－HB2细胞株表达抗HBsAg人IgG的影响因素。方法 观察CHO－HB2细胞表达抗休的稳定性,不同培养基以及添加剂的效用,细胞接种密度和培养持续时间的选择。金属离子Zn^2 诱导表达的作用,以及滚瓶的培养效果。结果 CHO－HB2细胞的亚克隆株F4经液氮冻存半年多复苏后,在无氨甲喋呤（MTX）的培养基中连续传代第2个月,抗体表达量开始下降,5个月时接近用（MTX）施加选择压力前的基础水平、在培养其中添加多种氨基酸和维生素,并加入适量的Zn^2 诱导金属硫蛋白启动子,可使表达量明显增加。滚瓶培养可进一步增加抗体的表达量,在无蛋白的无血清培养基中的表达量,从6．2mg/L提高到28mg/L。结论 应及时用MTX对细胞株进行再加压筛选,以保持细胞稳定表达抗体的能力。通过优化培养条件,使用完全无蛋白的无血清培养基,可收到较好的效果,且有利于表达抗体的纯化。     

错配PCR致突变的实验条件研究

目的：对目前常用的致突菌株和PCR随机突变方法进行评价。方法：用单链抗体表达质粒转化致突菌株XL1-Red，转种传代7d，选取克隆测定DNA序列。用错配PCR在相同基因中引入突变，比较不同Mg^2 浓度、不同dNTP的浓度、不同dITP等条件下所致突变率。结果：在XL1－Red菌株中转种7d（约50代）后，测定突变率＜0.1%。在错配PCR中，增加Mg^2 浓度可提高突变率，增加dTTP和dCTP浓度的致突变效果优于增加dATP和dGTP的效果。在dITP配以低浓度的dATP或dGTP时突变率较低，使用5mmol/L MgCl2、0.5mmol/L MnCl2、1mmol/L dTTP和dCTP的条件下，经2轮PCR（共60个循环）突变率可＞2％。其突变类型有明显偏向性，以A／T的突变为主，转移多于颠换。结论：用致突菌株引入的突变率过低，不适用于抗体亲和力成熟，错配PCR在合适条件下可达到2％以上突变率，适用于随机突变抗体库的构建，但其突变类型有偏向性，应予以考虑。     

非胰岛素依赖型糖尿病患者血清内洋地黄素浓度的变化

探讨血清内洋地黄素浓度与糖尿病之间的关系。结果表明,非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)患者内洋地黄素水平为(0.49±0.16)μg/L,明显高于正常人(0.22±0.11)μg/L(P<0.01).提示内洋地黄素可能参与糖尿病患者并发心血管疾病的发病机制。并发心血管病的NID-DM患者内洋地黄素浓度为(0.52±0.18)μg/L,亦明显高于无并发症的患者(0.43±0.10)μg/L(P<0.05),进一步提示糖尿病患者容易并发心血管疾病的机制之一可能是内洋地黄素的释放增多。结果还显示,内洋地黄素水平与病程无关。内洋地黄素是通过其缩血管效应和刺激平滑肌增生作用促进糖尿病并发的心血管疾患的发生、发展。     

重组人铜锌超氧化物歧化酶对辐射损伤小鼠免疫细胞的影响

为评价重组人铜锌超氧化物歧化酶(rhCuZnSOD)的抗辐射应用价值,并探索其最佳给药时间,本研究观察了受r线照射前后不同时段给药对小鼠免疫细胞及有关指标的影响.结果显示:rhCuZnSOD可增强受照小鼠刀豆蛋白A诱导的脾T淋巴细胞的增殖反应,提高受照小鼠自然杀伤细胞的活性,并可升高受照小鼠脾淋巴细胞、血白细胞和相对淋巴细胞计数,延长受照小鼠30天平均生存时间及降低30天平均死亡率.其中以辐射前后联合用药的防御和治疗效果最好.本研究结果表明:rhCuZnSOD作为抗辐射药物具有一定的实用价值.     

中药降糖通脉宁对糖尿病患者血清超氧化物歧化酶的影响

应用中药降糖通脉宁治疗糖尿病患者，测定用药前后血清超氧化物歧化酶活性和过氧化脂质水平。结果表明，糖尿病患者的血清ＳＯＤ活性与正常人相比明显降低，而血清ＬＰＯ含量明显升高，提示糖尿病的发生发展与ＳＯＤ的活性下降有关。     

抗HBsAg人IgG表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

尝试将一株来源于人源性噬菌体抗体库的抗ＨＢｓＡｇ人Ｆａｂ,转换成完整的抗ＨＢｓＡｇ人ＩｇＧ。方法：采用重叠ＰＣＲ方法,在抗ＨＢｓＡｇ人Ｆａｂ的Ｖｋ和ＶＨ基因的５’端接上合工合成的人ｋ链的前导序列,构建表达完整ＩｇＧ１的真核表达载体,转染ＣＨＯ（ＤＨＦＲ＾－）细胞,用ＥＬＩＳＡ、ＲＴ－ＰＣＲ和免疫印迹检测抗ＨＢｓＡｇ人ＩｇＧ的表达,通过ＤＨＦＲ／ＭＴＸ体系及金属离子诱导提高Ｉｇ表达。结果：获得表达量     

抗重组人Cu／Zn SOD单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

抗重组人Ｃｕ／Ｚｎ　ＳＯＤ单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立陈晓穗，赵丽，王晶翼，骆训一，谢邦铁，刘晓琳，李战青，陈宇萍（海军总医院分子生物学研究室，北京１０００３７）超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）是一种有前途的药用酶。美国ＦＤＡ已批准ＳＯＤ在炎症、再灌注性损伤...