牵张激活心肌细胞NK—kB及其调控β—MHC基因表达的研究

目的 探讨牵张刺激引起心肌细胞β－MHC基因重新表达的机制。方法 在硅橡胶模上培养心肌细胞并施加牵张刺激，用免疫组织化学方法检测NF－kB的激活情况，并用图像分析法检测NF－kB在激活与未激活状态下β－MHC蛋白的含量。结果 ①心肌细胞受到应变为20％的牵张刺激5小时后，NF－kB被显著激活，从胞浆移位入胞核。②牵张组心肌细胞与对照组、NAC（N－乙酰半胱氨酸）组和牵张＋NAC组心肌细胞相比，β－MHC含量增加，其它3组β－MHC含量无明显差异。结论 NF－kB信号传统系统参与了牵张诱导的β－MHC基因表达的调控。③     

心元胶囊的药理研究

心元胶囊由首乌、丹参、三七、西洋参等中药组成,临床对治疗和预防冠心病等心血管疾病有肯定疗效。动物试验证明,小鼠灌胃急性毒性试验LD_(50)。为每公斤体重262.95(251.7～274.7)克原生药(相当于临床用药的1143倍。三个剂量组大白鼠90天灌胃长期毒性试验,最高剂量64.3g/kg原生药灌胃给药以及恢复期观察,对动物的行为活动,体重,血象,血生化,脏器指数无影响,主要脏器无组织形态改变。药效学证明15g/kg原生药具有明显的改善结扎麻醉杂种狗冠状动脉心肌缺血后的血流     

节律基因mPeriod2过表达对体外Lewis肺癌细胞γ射线敏感性的影响

目的评价mPeriod2(mPer2)基因转染后过表达对小鼠Lew is肺癌细胞(LLCs)60Coγ-射线放射敏感性的影响。方法采用脂质体介导方法将mPer2基因转染至LLC细胞,以空白组及空载体质粒pcD-NA3.1为对照,采用RT-PCR及流式细胞术检测mPer2基因在LLC细胞中的表达,给予60Coγ-射线4Gy单次照射后,流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡,采用增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化、细胞集落形成实验检测细胞增殖及存活情况。结果60Coγ-射线照射后,与转染空载体质粒组及空白组比较,转染mPer2基因细胞表现为G2/M期阻滞,凋亡率下降(contro l:8.10±0.03;pcDNA3.1-vector:11.20±0.07;pcDNA3.1-mPer2:4.40±0.02;P<0.05),细胞克隆形成增加(contro l:14%;pcDNA3.1-vec-tor:11%;pcDNA3.1-mPer2:32%;P<0.01)及PCNA阳性表达增加(contro l: ,pcDNA3.1-vector: ,pcDNA3.1-mPer2: ,P<0.05)。结论节律基因mPer2过表达使60Coγ-射线照射的小鼠Lew is肺癌细胞凋亡下降,细胞增殖明显,降低了该细胞对放射损伤的敏感性。     

心元对狗血流动力学和心肌耗氧量的影响

本文对一种新的中药复方颗粒一心元进行了药效学研究。通过动物实验证明了心元有扩张冠状动脉，增加冠脉流量，减少心肌耗氧量等作用。因此，心元是一种能有效改善心血管机能和改善心肌能量代谢等作用的新药。     

心元对狗心肌缺血的改善作用研究

心元对心肌缺血引起的心肌收缩力下降和心输出量减少等有改善作用，并抑制缺血所致的血清磷酸酸激酶的升高，减少缺血区组织的范围。     

节律基因mPeriod2对Lewis肺癌细胞生长的影响

目的 研究节律基因mPeriod2(mPer2)对肿瘤细胞的生长抑制及诱导分化凋亡的作用。方法 体外培养Lewis肺癌细胞,使用脂质体包裹法将真核表达质粒pcDNA3．1为基础的mPer2表达质粒(pcDNA3．1-mPer2)转导入Lewis肺癌细胞内;以免疫组化及流式细胞技术检测mPer2表达;通过流式细胞技术检测稳定转染的mPer2阳性表达的Lewis肺癌细胞的生长及凋亡。结果 mPer2表达质粒(pcDNA3．1-mPer2)转染的Lewis肺癌细胞表达PERIOD2蛋白;与对照组比较,其增殖指数下降及凋亡率增加。结论 节律基因mPer2可以抑制肿瘤细胞的生长,增加肿瘤细胞的凋亡率。     

牵张刺激诱导心肌细胞NF—κB激活及其机制研究

目的：探讨牵张刺激对心肌细胞NF－κB的激活作用及激活机制。材料与方法：在硅橡胶膜上培养心肌细胞,在无NAC和有NAC的条件下对细胞施加牵张刺激,用免疫组织化学方法观测NF－κB的激活情况。结果：牵张心肌细胞5小时后,NF－κB被显著激活;15mM N-乙酰半胱氨酸（NAC）阻断牵张诱导的NF－κB的激活。结论：牵张刺激能够诱导心肌细胞NF－κB的激活,活性氧介导了这种激活作用。     

抗心衰液对心肌细胞收缩力的影响

通过在体外培养的心肌细胞中加入不同剂量的抗心衰液来检测给药前和给药后心肌细胞收缩力的大小,以探讨抗心衰液所具有的抗心衰药效作用的机制。结果表明:抗心衰液有增强心肌细胞收缩力的作用,并且药效作用有明显的量效关系,说明抗心衰液的抗心衰作用与增强心肌收缩力、改善心动能有关。     

心衰时α-MHC基因表达水平与心肌收缩力的相互关系研究

为探讨心力衰竭时心肌收缩力降低的分子基础，采用ＤＯＣＡ硅胶管皮下埋入法建立大鼠心力衰竭模型，用α－ＭＨＣ探针分别与心衰及正常心肌组织总ＲＮＡ进行槽缝印渍（Ｓｌｏｔｂｌｏｔ）杂交，研究心衰时心肌收缩蛋白α－ＭＨＣ基因表达的改变及与心肌收缩力改变的关系。结果显示：（１）心衰组大鼠心肌收缩力指标ＬＶＰ和ｄｐ／ｄｔ与正常对照组大鼠相比，分别下降了１９．８７％（Ｐ＜０．０５）和２７．５０（Ｐ＜０．０１）。（２）心衰组大鼠α－ＭＨＣｍＲＮＡ的含量（０．１１±０．０４）低于正常对照组（０．１４±０．０３，Ｐ＜０．０５）。（３）α－ＭＨＣｍＲＮＡ的含量与心肌收缩力的大小存在线性正相关关系（ｒ＝０．４１４３，ｎ＝４３，Ｐ＜０．０５）。结果提示：α－ＭＨＣ基因表达水平的下降是心衰时心肌收缩力减退的分子基础之一。     

核酶切割per基因所致的缓解吗啡成瘾作用研究

目的　探讨 per基因与阿片类成瘾的相关性 ,进而寻找治疗阿片成瘾的基因戒毒疗法。方法　设计并合成特异性 per锤头状核酶基因和 per核酶靶 m RNA组分基因 ,并分别重组入体外转录质粒 ,而后将经体外转录反应得到 per核酶 RNA和地高辛标记的 per核酶靶 m RNA组分。将转录产物混合 ,在不同条件下进行体外切割反应后 ,采用地高辛化学发光法检测 per核酶的体外切割效率。小鼠脑室注射直接导入脂质体包裹的重组质粒 pc DNA3.1- per RZ DNA,按剂量递增法建立吗啡依赖动物模型 ,用纳洛酮催瘾 ,观察戒断反应的变化。结果per核酶对 per核酶靶 m RNA组分的体外切割效率达到 6 0 %。重组质粒组小鼠的刻板跳跃、“湿狗”样抖动和打洞次数与空质粒组、生理盐水组相比明显减少 ,但并不抑制小鼠的体重下降。结论　 per核酶具有体外定点切割 per基因 m RNA组分的活性。经小鼠吗啡成瘾模型检测 ,该重组质粒能成功转染活体小鼠脑细胞并在脑组织内稳定表达 per核酶 ,发挥阻断 per基因表达的作用 ,有效地减轻吗啡成瘾的戒断症状。