柱前衍生化HPLC-MS/MS法测定人血浆中5-HT、AD和NA方法的建立

目的建立衍生化高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中5-羟色胺（5-HT）、肾上腺素（AD）和去甲肾上腺素（NA）质量浓度。方法采用Ultimate C18 (50 mm×4.6 mm, 5 μm)色谱柱,流动相为乙腈∶水∶甲酸为95∶5∶0.05（V∶V∶V）,流速为0.2 mL/min,柱温为室温。检测方式为多反应离子监测,正离子模式,电喷雾离子源。血浆样品经沉淀蛋白后,在pH 10.5条件下与丹酰氯发生衍生化反应,产物经乙酸乙酯萃取浓集后进样。结果标准曲线线性范围为2.5~200 ng/mL;日内精密度相对标准偏差（RSD）为1.33%~8.13%,日间RSD 2.86%~7.73%,均小于9%;方法回收率95.44%~109.71%,基质效应4.86%~12.81%。结论本法简单、快速,可用于人血浆中5-HT、AD和NA质量浓度测定和研究。     

LC-MS/MS法测定人血浆中辛伐他汀浓度

目的：建立测定人血浆中辛伐他汀浓度的LC-MS/MS测定方法,并研究辛伐他汀片在人体内的药代动力学。方法：血浆样品经乙酸乙酯萃取后,在正离子检测方式下选择多反应监测扫描方式进行质谱分析。结果：血浆中的内源性物质对样品测定无干扰,专属性良好。辛伐他汀的线性范围为0.1~10ng/mL,最低定量限为0.1ng/mL,平均提取回收率为81.4%,日内、日间精密度和准确度均符合生物样品分析的要求。测定的辛伐他汀片在人体内T1/2为（2.46±1.25）h;Tmax为（1.96±1.00）h;Cmax为（1.70±1.48）ng/mL;AUC0-24为（7.08±5.27）ng.h/mL;AUC0-∞为（8.11±5.83）ng.h/mL。结论：该方法操作简便、灵敏度高、重现性好,可以满足本实验低浓度药物测定及药代动力学研究。     

LC-MS/MS法测定人血浆中辛伐他汀浓度

目的:建立测定人血浆中辛伐他汀浓度的LC-MS/MS测定方法,并研究辛伐他汀片在人体内的药代动力学。方法:血浆样品经乙酸乙酯萃取后,在正离子检测方式下选择多反应监测扫描方式进行质谱分析。结果:血浆中的内源性物质对样品测定无干扰,专属性良好。辛伐他汀的线性范围为0.1~10ng/mL,最低定量限为0.1ng/mL,平均提取回收率为81.4%,日内、日间精密度和准确度均符合生物样品分析的要求。测定的辛伐他汀片在人体内T1/2为(2.46±1.25)h;Tmax为(1.96±1.00)h;Cmax为(1.70±1.48)ng/mL;AUC0-24为(7.08±5.27)ng.h/mL;AUC0-∞为(8.11±5.83)ng.h/mL。结论:该方法操作简便、灵敏度高、重现性好,可以满足本实验低浓度药物测定及药代动力学研究。     

去甲肾上腺素联合氢化可的松琥珀酸钠治疗感染性休克的临床效果

目的探讨去甲肾上腺素联合氢化可的松琥珀酸钠治疗感染性休克的临床效果。方法选取2017年2月至2018年10月南阳医学高等专科学校第一附属医院收治的78例感染性休克患者,按照治疗药物将患者分为两组,每组39例。两组患者入院后充分液体复苏,接受纠正酸碱失衡、扩容、抗感染等常规治疗,去甲肾上腺素组患者接受去甲肾上腺素静脉滴注治疗,联合组患者在此基础上增加氢化可的松琥珀酸钠静脉滴注治疗。比较两组疗效及血清炎症因子水平。结果联合组患者治疗总有效率高于去甲肾上腺素组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后24 h,两组患者血清CRP、TNF-α水平低于治疗前,IL-10水平高于治疗前,联合组患者血清CRP、TNF-α低于去甲肾上腺素组,IL-10水平高于去甲肾上腺素组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论去甲肾上腺素联合氢化可的松琥珀酸钠可有效提高感染性休克治疗效果,减轻患者体内炎症反应。     

小剂量氢化可的松对顽固性感染性休克患者去甲肾上腺素使用率及乳酸清除率的影响

目的观察小剂量氢化可的松对顽固性感染性休克患者去甲肾上腺素使用率及乳酸清除率的影响,以期为临床工作提供理论帮助。方法选择68例顽固性感染性休克患者,依入院顺序分为两组,对照组34例只应用常规治疗,观察组34例在常规治疗基础上加用小剂量氢化可的松治疗,观察两组治疗中去甲肾上腺素使用率及乳酸清除率的特点。结果观察组患者的疗效明显优于对照组、去甲肾上腺素的使用率明显低于对照组、乳酸清除率明显高于对照组。结论小剂量氢化可的松可以有效的减少顽固性感染性休克患者去甲肾上腺素的使用率,提高乳酸的清除率,进而有效调节内环境,临床中可以积极应用。     

血浆甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素诊断嗜铬组织来源肿瘤的意义

目的探讨血浆甲氧基肾上腺素（MN）和甲氧基去甲肾上腺素（NMN）诊断嗜铬组织来源肿瘤（嗜铬细胞瘤）的意义。方法选择2003年5月—2008年12月上海交通大学医学院附属瑞金医院具有嗜铬细胞瘤筛查指征的患者,高效液相色谱分析法检测并比较嗜铬细胞瘤和非嗜铬细胞瘤患者以及嗜铬细胞患者手术前后血浆NMN和MN水平,受试者工作特征（ROC）曲线评价血浆NMN和MN诊断嗜铬细胞瘤的敏感度和特异性。结果 259例嗜铬细胞瘤患者和4387例非嗜铬细胞瘤患者入选本研究。NMN和MN的ROC曲线下面积分别为0.989±0.005和0.783±0.019;嗜铬细胞瘤与非嗜铬细胞瘤患者血浆NMN[（2930.56±4166.56）pg/mL和（70.48±25.07）pg/mL]和MN[（585.68±1368.75）pg/mL和（45.61±42.63）pg/mL]比较,差异均具有统计学意义（P=0.00）;血浆NMN在130pg/mL时诊断嗜铬细胞瘤的敏感性和特异性分别为95.4%和90.0%,血浆MN在83pg/mL时诊断敏感性和特异性分别为51.4%和90.0%。69例嗜铬细胞患者手术前后NMN[（3145.8±3651.86）pg/mL和（233.1±934.92）pg/mL]和MN[（653.7±1053.12）pg/mL和（47.56±25.82）pg/mL]比较,差异均具有统计学意义（P=0.00）。结论血浆NMN和MN水平可作为嗜铬细胞瘤的一线筛查指标,术后血浆NMN和MN水平可反映手术效果和早期发现肿瘤转移或复发。     

HPLC法测定尿素氢化可的松乳膏中氢化可的松的含量

目的：建立测定尿素氢化可的松乳膏中氢化可的松含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Hypersil ODS（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相为甲醇-水（50：50）,流速为1.0 ml/min,氢化可的松的检测波长为245 nm,柱温为30℃,进样量为20μl。结果：氢化可的松在3.15～22.05μg/ml（r=0.999 9）的范围内,线性关系良好。平均回收率为99.8%（RSD=1.74%）。结论：方法快速灵敏、结果准确,可用于氢化可的松乳膏的质量控制。     

UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中古伦宾浓度及药动学研究

目的:建立一种灵敏度高、重复性好的UPLC-MS/MS法用于定量测定大鼠血浆中古伦宾浓度,并观察古伦宾在大鼠体内的药代动力学。方法:血浆样品由甲醇沉淀蛋白法处理后,经Waters BEH C18柱,乙腈-水作为色谱分离流动相,采用电喷雾离子源(ESI+)串联质谱检测,多反应离子监测(MRM)模式进行定量分析。结果:血浆中古伦宾在1.225~2 500 nmol/L内线性关系良好,最低检测限为1.22 nmol/L,日内与日间精密度均小于15%,提取回收率在85%~115%之间,均符合药代动力方法学分析要求。结论:本研究建立的UPLC-MS/MS方法操作简便、灵敏、快速、专属性强,可用于血浆中古伦宾的含量测定及其在大鼠体内的血浆药动学研究。     

大鼠皮下氢化可的松浓度在线检测方法的建立

目的利用微透析采样技术和高效液相色谱-质谱(LC-MS/MS)检测方法,建立大鼠皮下局部药物浓度氢化可的松(HC)的检测方法。方法采用微透析方法对大鼠皮下进行透析采样,以5%乙醇-Ringer’s液作为灌流液,并建立LC-MS/MS对样品中HC浓度进行检测。结果采用离子对m/z 363.2→121.1进行HC定量分析,在0.5～1000 ng/ml范围内,浓度峰面积呈现良好的线性关系,日间及日内精密度、准确度均在15%以内,无明显的基质效应。微透析实验方法的探针回收率较高,达到59%。结论本研究所建立的实验方法,专属性好,灵敏度高,可成功用于大鼠皮下HC含量测定。     

LC-MS/MS法定量检测恩格列净原料药中杂质的含量

目的：建立一种LC-MS/MS法用于定量检测恩格列净原料药中杂质X（简称EPLZ-X）的含量。方法采用Thermo BDS C18（4.6 mm ×100 mm,2.4μm）色谱柱,以乙腈-水（75∶25,V/V）为流动相,流速0.7 ml/min。质谱扫描方式选用正离子模式,用于定量的多反应监测（MRM）离子对为m/z 785→m/z 475（CE为43 V）和m/z 785→m/z 418（CE为50 V）。结果在0.5~100.6 ng/ml范围内线性关系良好,低、中和高浓度质控样品的日内精密度分别为5.9%、5.4%和7.9%。日间精密度分别为6.3%、11.8%和10.7%,加样回收率分别为105.1%、109.8%、102.6%,最低定量下限为0.5 ng/ml。结论使用此法成功测定了3批原料药中该杂质的含量,均符合要求（不得超过60×10-6 g）。本法专属性强,灵敏度高,可用于其他批次样品的分析。     

HPLC-MS/MS测定大鼠血浆及组织中盐酸戊乙奎醚浓度

目的 建立用高效液相色谱质谱联用(HPLC-MS/MS)技术测定大鼠血浆、脑组织及肺组织中戊乙奎醚浓度的方法.方法 大鼠血浆、脑组织及肺组织样品中戊乙奎醚及内标苯海拉明经石油醚:乙醚(70:30)提取后,采用HPLC-MS/MS技术进行测定.以Allure C_(18)(50×2.1 mm,5 μm)为色谱柱,以甲醇:5 mmol/L醋酸胺:三乙胺=90:10:0.05(甲酸调pH5.8)为流动相进行分离,检测离子为质荷比(m/z)316.2/128.3(戊乙奎醚),256.3/167.1(内标).结果 标准曲线线性范围为血浆0.391～200 ng/mL,脑组织及肺组织0.391～100 ng/mL.预处理回收率为血浆67.32%～70.80%,肺组织84.99%～89.27%,脑组织76.86%～81.98%;方法 回收率为血浆97.66%～99.97%,肺组织96.55%～101.65%,脑组织95.18%～100.21%;日内精密度RSD分别为:血浆1.94%～2.93%,肺组织1.73%～3.70%,脑组织2.35%～2.79%;日间精密度RSD分别为:血浆3.00%～3.85%,肺组织2.86%～3.94%,脑组织2.77%～5.00%;血浆和组织样品保存于-30℃低温冰箱7、21 d,分别测定浓度以考察稳定性,RSD分别为:血浆1.52%～5.26%,肺组织1.88%～2.93%,脑组织2.22%～3.76%;反复冻融1次和2次测定样品浓度,血浆RSD为0.38%～3.55%,肺组织为2.79%～9.60%,脑组织为1.35%～2.29%.结论 成功建立HPLC-MS/MS法测定大鼠血浆及组织中戊乙奎醚浓度的方法 ,该法简便、准确、重现性好,可用于盐酸戊乙奎醚药动学和生物利用度研究.     

正相HPLC-MS/MS测定人血浆中多奈哌齐对映体浓度

目的建立正相高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定人血浆中多奈哌齐(DN)对映体的方法,并进行方法学验证。方法采用正己烷∶异丙醇(98∶2,V/V)作为萃取剂进行样品浓集,选用CHIRALCEL OJ-H手性柱(250mm×4.6mm,5μm)作分析柱,流动相为正己烷∶正丙醇∶二乙胺=60∶40∶0.1(V∶V∶V),流速为0.5mL/min,柱温为38℃。以多反应监测(MRM)方式进行定量检测,利多卡因为内标,按内标法定量。结果左旋DN(S-DN)、右旋DN(R-DN)对映体的保留时间分别为15.56和18.41min。S-DN的线性范围为0.051～7.596ng/mL,R-DN的线性范围为0.049～7.404ng/mL,线性良好(r>0.99)。S-DN和R-DN的方法回收率分别为95.10%～103.70%、93.58%～98.00%;预处理回收率分别为58.42%～61.08%、53.24%～61.87%;日内精密度(RSD)分别为8.35%～11.28%、6.78%～11.58%;日间RSD分别为5.82%～9.02%、6.87%～9.19%。结论建立的正相HPLC-MS/MS测定人血浆多奈哌齐对映体血药浓度具有快速、简便、灵敏、准确等优点,适用于多奈哌齐对映体的人体药动学研究。     

HPLC-MS/MS法测定血浆中华法林对映异构体浓度

目的 建立高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定人血浆中华法林对映异构体的浓度。方法 以乙酸乙酯为萃取剂,采用MS Chiral? MS-OD(50×2.1 mm, 3 μm)为手性柱,流动相为甲醇∶水∶甲酸=85∶15∶0.05,流速为0.18 mL/min。采用负离子模式,电喷雾离子源（ESI）,以萘普生为内标定量,华法林和内标的检测离子对质荷比分别为（m/z）307.2→160.9和（m/z）228.9→185.1。结果 R-华法林批内精密度,其相对标准偏差(RSD)为3.2%~5.8%,批间RSD为2.5%~5.1%;方法回收率(96.1±5.6)%~(105.4±4.7)%,提取回收率80.7%~84.4%,内标基质效应校准后的基质效应RSD<10%;S-华法林批内精密度RSD为3.7%~5.2%,批间RSD为3.2%~4.8%;方法回收率(98.3±5.1)%~(103.7±3.8)%,提取回收率81.3%~84.6%,内标基质效应校准后的基质效应RSD<10%。最低定量限均为0.1 μg/mL。结论 本文建立的方法准确、灵敏、可靠,可用于人血浆中华法林对映体的拆分和血药浓度的测定。     

LC-MS/MS法测定人血浆中替诺福韦质量浓度及其生物等效性研究

目的 建立液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法测定人血浆中替诺福韦质量浓度，并应用于高脂餐后及空腹口服国产和进口替诺福韦二吡呋酯片的生物等效性研究。方法 采用四周期随机交叉自身对照试验设计，24例健康男性受试者高脂餐后及空腹分别单剂量口服国产和进口替诺福韦二吡呋酯片300 mg，LC-MS/MS法测定血浆中替诺福韦质量浓度，Winnonlin6.3软件计算主要药动学参数，并评价两种替诺福韦二吡呋酯片餐后及空腹服用的生物等效性。结果 替诺福韦血浆标准曲线在3.13～500 ng/mL范围内线性良好；批内、批间精密度相对标准偏差（RSD）均小于5.43%，回收率高且样品稳定性好。无论是高脂餐后给药还是空腹给药，药时曲线下面积AUC0-t、AUC0-∞和峰浓度（Cmax）的 90%置信区间均在80.00%～125.00%范围内，达峰时间（Tmax）经非参数秩和检验，不同制剂间差异无统计学意义（P＞0.05），两生物制剂等效。结论 所建立的LC-MS/MS方法适用于人血浆中替诺福韦质量浓度的测定，国产替诺福韦二吡呋酯片与进口制剂生物等效。     

液相色谱-质谱联用法测定人血浆中法莫替丁胶囊含量及其生物等效性评价

 目的  建立快速灵敏的液相色谱-质谱联用(LC/MS/MS)法测定人血浆中法莫替丁的含量,并比较两种法莫替丁胶囊在健康人体内的药动学及生物等效性。  方法  血浆样品中的蛋白经甲醇白沉淀处理后,采用LC/MS/MS系统分析,色谱柱为Venusil XBP苯基桩(100 mm×2.1 mm,5 μm),以0.1%甲酸水溶液-甲醇(体积分数为60∶40)为流动相,通过电喷雾离子化四级杆串联质谱,以多反应监测(multiple-reaction monitoring,MRM)方式进行检测;采用DAS 2.1.1软件进行药动学参数的数据处理。  结果  此法在标准曲线范围2.5~250.0 ng/mL(r=0.999 9)内线性良好,最低定量限为2.5 ng/mL;定量限、低、中、高浓度的方法回收率为97.23%~99.64%,批内和批间精密度RSD值为2.30%~4.32%,且提取回收率稳定并均大于80%;基质效应为89.01%~95.73%。两种胶囊的血药浓度-时间曲线基本一致,主要药动学参数c_max、AUC_0-t、AUC_0-∞差异均无统计学意义,tmax经非参数法检验差异无统计学意义。  结论  采用此方法测定血浆药物浓度时,灵敏度高、准确度和精密度好,样品处理简单,分析测试速度快;试验胶囊的相对生物利用度为91.5%±24.5%(n=23,AUC_0~t)或90.7%±24.5%(n=23,AUC_0~∞),统计分析表明两种胶囊生物等效。     

LC／MS／MS测定犬血浆中氯米帕明浓度及体内药动学

目的：建立液相色谱-串联质谱法测定犬血浆中氯米帕明（Clomipramine）。方法：色谱柱为ZorbaxExtend—C18柱（150mm×4．6mm,5μm,美国Agilent公司）;C18保护柱（4．0mm×3．0mm,5μm,迪马公司）;流动相为乙腈-10mmol／L醋酸铵-甲酸（60：40：0．1,V／V／V）;流速为0．5ml／min;进样量为20μl;柱温为20℃;采用三重四极杆串联质谱仪,ESI电离源,以选择反应监测方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m／z315．2,86．1（氯米帕明）和m／z285．1～86．2（内标异丙嗪）。500μl血浆样品经正己烷液提取后蒸干,流动相复溶,进行分析。结果：测定血浆中氯米帕明的线性范围为1～500ng／ml,定量下限为1ng／ml;日内、日间精密度RSD均小于15％,准确度在85％。115％范围内．符合《中国药典》2010年版二部的规定．结论：本方法可用干氯米帕明的女体内药代动力学研究。     

HPLC-MS／MS同时测定血浆中九种胆汁酸亚组分浓度

目的：建立高效液相色谱．串联质谱（HPLC．MS／MS）法测定胆酸、脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸、石胆酸、甘氨胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺脱氧胆酸、牛磺鹅脱氧胆酸九种胆汁酸亚组分浓度的方法。方法：采用色谱柱LunaC18 （2）柱（150×4．6mm,5ixm）,柱温30℃,流动相以10mmol／L乙酸氨为流动相A、乙腈-甲醇（3：1）为流动相B梯度洗脱,流速：0．6mL／min,血浆样品经乙腈沉淀蛋白后进样,MRM模式定量。结果：HPLC-MS／MS法测定胆汁酸九种亚组分浓度的最低检测限为0．50-8．00ng／mL;日内和日间变异系数均小于10％;回收率在92．75％-110．07％之间。结论：所建HPLC-MS／MS法灵敏、准确,重现性好,适用于测定血浆中九种胆汁酸亚组分含量,能够为临床及科学研究提供可靠的数据参考。     

HPLC-MS/MS测定人血浆中伏立康唑质量浓度及其生物等效性研究

目的 建立高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）法测定人血浆中伏立康唑的方法,并进行伏立康唑片生物等效性研究。方法 采用双周期随机交叉自身对照试验设计,48例健康男性受试者分别单次空腹口服两种伏立康唑片200 mg,采用HPLC-MS/MS法测定人血浆中伏立康唑质量浓度,以WinNonlin?6.1软件计算主要药动学参数,并评价两种伏立康唑片的生物等效性。结果 伏立康唑标准曲线范围均为1~5 000 ng/mL,日内及日间精密度〔相对标准偏差（RSD）〕均小于11%,准确度在100.00%~109.73%之间,以内标基质效应校准后的伏立康唑基质效应RSD小于15%,萃取回收率大于50%,各项稳定性考察结果合格。伏立康唑峰浓度(Cmax)和药-时曲线下面积(AUC0-t、AUC0-∞)的90%置信区间在80.00%~125.00%等效区间之内,受试制剂与参比制剂间达峰时间(Tmax)差异无统计学意义(P>0.05)。结论 所建立的HPLC-MS/MS方法可用于人血浆中伏立康唑质量浓度的测定,伏立康唑片受试制剂与参比制剂生物等效。     

Application of UPLC-MS/MS Method for Analyzing B-vitamins in Human Milk

Objective To determine ten B-vitamins in human milk by ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS).
Methods The pretreated human milk samples were adequately separated and quantified within 11 min by UPLC-MS/MS with an Acquity UPLC HSS T3 column (2.1×100 mm, 1.8 μm). The mobile phase was a gradient of 2.5 mmol/L ammonium formate aqueous solution and acetonitrile at a flow rate of 0.35 mL/min. Stable isotope internal standards were used in the analysis, to correct for the method variability, including matrix and ionization effects. The homogenized human milk samples were deproteinzed using methanol, unknown contaminants were extracted with diethyl ether and hydrophobic phase was discarded. The analytes were monitored via ESI+ionization and detected in multiple reaction monitoring (MRM) with three acquisition functions.
Results Calibration curves ranged from 0.5-160 ng/mL (thiamin, riboflavin, biotin, nicotinic acid, pyridoxine, pyridoxamine, pyridoxal), and 2.5-800 ng/mL (pantothenic acid, FAD and nicotinamide) (R2=0.990-0.999). The relative recovery ranged from 80.1% to 120.2%; accuracy was determined to be 98.3% to 108.0%. Intra-day and inter-day variation were 3.4%-19.9% and 5.9%-18.1%, respectively. The limit of quantification (LOQ) for all vitamins was between 0.25 and 3 μg/L.
Conclusion This method was successfully applied for simultaneous analysis of ten B-vitamins in human milk.