己酮可可碱对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤和TGF-β1、FN分泌的影响

目的研究己酮可可碱对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞（HPMC）损伤和TGF-β1、FN分泌的影响。方法采用胰蛋白酶-EDTA消化法,从人腹膜组织中分离间皮细胞,并体外培养HPMC。采用自动生化分析仪检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）水平以示细胞损伤程度 ELISA法检测细胞培养液中TGF-β1、FN的水平。结果与单纯对照组相比,2.5%L-PDS致培养液中LDH水平明显增高（P〈0.01） 同时培养液中TGF-β1、FN蛋白质水平增加。在2.5%L-PDS刺激下,100μg/ml己酮可可碱与下调培养液LDH,提高MTT渗入量,并减少TGF-β1、FN蛋白质水平。结论己酮可可碱可拮抗乳酸盐腹膜透析液致HPMC损伤并下调TGF-β1和FN的表达。     

人参总皂甙对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤的保护作用

目的 :观察人参总皂甙 (GS)对乳酸盐腹膜透析液 (L -PDS)在体外所致的人类腹膜间皮细胞 (HPMC)活力和增殖抑制的影响。方法 :采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞 ,建立稳定的体外培养模型 ;用乳酸脱氢酶 (LDH)的释放和四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT法 )评估细胞的活性及增殖能力。结果 :2 .5 %和 4.2 5 %葡萄糖L-PDS组与对照组相比HPMC的LDH释放增多 ,且两浓度差异无显著性 ;随L -PDS暴露时间的延长 ,HPMC的存活率逐渐降低 ;GS可以减少LDH的释放 ,提高细胞存活率 (P <0 .0 1) ,并能促进HPMC的增殖 (P <0 .0 5 )。结论 :GS对L-PDS体外所致HPMC活力和细胞增殖的抑制具有一定的保护作用。     

罗格列酮对尿酸致腹膜间皮细胞损伤的干预作用

目的观察PPAR-γ激动剂罗格列酮对尿酸致腹膜间皮细胞（HPMC）增殖、损伤作用的影响。方法①细胞培养及分组：待生长状况良好的HPMC株60％-80％细胞贴壁后,无血清培养基同步24h,采用15μmol／L罗格列酮预处理细胞4h后,给予600μmol／L尿酸不同作用时间（24h、48h、72h）进行干预。②指标检测：采用细胞活性检测法检测HPMC增殖情况;采用乳酸脱氢酶测定试剂盒,检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）水平。结果①600μmol／L尿酸作用HPMC24h、48h、72h后,抑制HPMC增殖;与对照组比较,抑制增殖作用明显（P〈0．05）,差异有统计学意义;罗格列酮干预后,各不同时间点,尿酸对HPMC抑制作用减弱。②600μmol／L尿酸作用HPMC24h、48h、72h后,HPMC培养液中LDH水平增高,与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;罗格列酮干预后,各不同时间点,HPMC培养液中LDH水平降低（P〈0．05）。结论罗格列酮能够降低尿酸对HPMC增殖抑制、损伤作用。     

人参总皂甙对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤的保护作用

目的：观察人参总皂甙（GS）对乳酸盐腹膜透析液（L－PDS）在体外所致的人类腹膜间皮细胞（HPMC）活力和增殖抑制的影响。方法：采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型;用乳酸脱氢酶（LDH）的释放和四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）评估细胞的活性及增殖能力。结果：2．5％和4．25％葡萄糖L－PDS组与对照组相比HPMC的LDH释放增多,且两浓度差异无显著性;随L－PDS暴露时间的延长,HPMC的存活率逐渐降低;GS可以减少LDH的释放,提高细胞存活率（P＜0．01）,并能促进HPMC的增殖（P＜0．05）。结论：GS对L－PDS体外所致HPMC活力和细胞增殖的抑制具有一定的保护作用。     

腹透液对大鼠腹膜间皮细胞凋亡和增殖的影响

目的探讨腹透液对腹膜间皮细胞凋亡和增殖的影响。方法采用MTT比色法测定腹透液对体外培养的大鼠腹膜间皮细胞增殖的影响．同时应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果腹透液刺激1h后，体外培养的大鼠腹膜问皮细胞增殖抑制率、G0/G1期细胞比例、早期凋亡率均增高；腹透液中糖浓度越高，刺激时间越长，以上3个指标增高越明显。含4．25％葡萄糖的腹透液刺激3h后，细胞增殖抑制率达44．12％，G0/G1期细胞占71．95％，早期凋亡率达23．59％，远远高于不含糖的阴性对照组和含1．5％糖腹透液组（P〈0．001），也高于4．25％甘露醇组（P〈0．05）。结论高糖腹透液诱导体外培养的腹膜间皮细胞凋亡．抑制其增殖。     

黄芪甲苷对高糖腹透液诱导的腹膜间皮细胞线粒体损伤的干预机制研究

目的?研究黄芪甲苷对高糖腹透液诱导的人腹膜间皮细胞（HPMCs）线粒体损伤的影响,并探讨其干预机制。方法?①人腹膜间皮细胞株（HMrSV5）在RPMI 1640（含1%FCS）培养液中培养24?h后分为6组:空白组:正常培养液2?mL;高糖腹透液组:含4.25% PDS 1?mL+正常培养液1?mL;低剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度10?μmol/mL;中剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度20?μmol/mL;高剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度40?μmol/mL;阳性药对照组:吡菲尼酮50?μmol/mL。②分别采用CCK-8法测定HMrSV5的增殖活性;流式细胞仪检测细胞活性氧族（ROS）水平变化;罗丹明123荧光染色检测HMrSV5膜电位水平变化;JC-1法测定HMrSV5线粒体膜电位的去极化;Western blot检测HPMCs线粒体形态和功能相关蛋白的表达情况。结果?①CCK-8检测结果显示,与模型组相比,黄芪甲苷处理组OD值明显升高,细胞存活率也相应增加,呈浓度依赖性,黄芪甲苷对HPMCs有保护作用;②流式检测提示高糖腹透液刺激后线粒体ROS产生增加,而黄芪甲苷可有效降低ROS水平;③JC-1和罗丹明123染色后流式检测发现随着黄芪甲苷浓度的增加,线粒体膜电位的去极化程度随之减少,同时有效增加线粒体膜电位,线粒体膜通透性降低,黄芪甲苷能部分修复高糖腹透液对线粒体的损伤;④Western blot检测结果显示,黄芪甲苷处理的细胞线粒体分裂蛋白DRP1、FIS1的表达水平明显降低,线粒体外膜结合蛋白OPA1、TOM70的表达水平明显升高。结论?①高糖腹透液能诱导HPMCs线粒体损伤模型;②黄芪甲苷能够通过促进HPMCs线粒体外膜OPA1、TOM70蛋白的表达,降低DRP1、FIS1蛋白表达水平,减少线粒体膜电位去极化,同时有效增加膜电位及降低线粒体膜通透性,进而改善高糖腹透液诱导的HPMCs线粒体氧化应激损伤,保护其结构功能的稳定。      

高糖对人腹膜间皮细胞增殖及损伤作用的影响

目的研究高糖对人腹膜间皮细胞（HPMC）增殖及损伤作用的影响。方法利用HPMC体外培养模型,HPMC分别经含1.5%、2.5%、4.25%葡萄糖的1640培养基培养6、12、24、48 h后,以四甲基偶氮多胍（MTT）法,测定HPMC增殖程度,采用自动生化仪检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）分泌水平。结果不同浓度葡萄与Control组间MTT OD值不同、LDH值亦不同,但时间效应均相近。而不同浓度葡萄糖组间MTT OD值、LDH值均相近、时间效应均相近。结论高糖可抑制HPMC增殖,促进LDH分泌,在腹膜损伤及纤维化进程中起一定作用。     

黄芪注射液对腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞水孔蛋白1表达的影响

【目的】观察黄芪注射液对腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞水孔蛋白1（AQP—1）表达的影响。【方法】选用雄性SD大鼠25只,分正常对照组（N=7）、模型组（N=9）和黄芪组（N=9）。除正常对照组外,其他两组分别腹腔注射含42．5马／L葡萄糖的腹透液和含42．5g／L葡萄糖的愎透液＋黄芪注射液（20mg／mL）,剂量为25mL／d,连续10d。于第11天观察大鼠透析超滤量（UF）与净超滤量（Net UF）、腹膜钠转运（D／P Na）、腹膜组织光镜病理形态及AQP-1免疫组化的表达．【结果】透析液留腹60min时黄芪组UF、Net UF与模型组比较显著增加（P〈0．05）。透析液留腹30min、60min时黄芪组D／P Na较模型组显著减低（P〈0．05）。黄芪组大鼠腹膜层增厚、间皮细胞脱落情况较模型组减轻,AQP—1在腹膜间皮细胞的表达较模型组显著增多（P〈0．05）【结论】黄芪注射液可减轻高浓度葡萄糖腹透液对间皮细胞的损伤,升高AQP—1在腹膜间皮细胞的表达,改善透析液留腹早期跨细胞水转运功能．从而提高腹膜对水的清除．增加透析超滤量。     

腹透液CA125水平与腹膜转运的关系

目的探讨腹透患者检测癌抗原125(CA125)的临床意义以及间皮细胞在腹膜转运中的作用.方法采用4.25%葡萄糖浓度的腹透液对34例腹透患者行腹膜平衡试验,于腹透液留腹4h时采集10mL用放免法测定CA125浓度,并用体表面积校正.收集0、1、4h的透析液及1h的血标本,测定肌酐和葡萄糖浓度,记录净超滤量(nUF),计算4h透析液肌酐与血肌酐浓度之比(D/Pcr)、肌酐转运面积系数(MTACcr)、葡萄糖吸收率(Glu%)、1h透析液钠与血钠比值(D/PNa+)等溶质和液体转运参数.结果腹透液CA125平均浓度为(7.39±4.47)U·mL-1·1.73m-2.腹透液CA125水平与患者腹透龄呈显著负相关(P<0.05);与D/PNa+弱正相关(P<0.05);与溶质转运参数D/Pcr、MTACcr、Glu%、nUF不相关.结论动态观察腹透液CA125水平可间接了解腹膜间皮细胞状态.随着腹透治疗时间的延长,腹膜间皮细胞的数量会逐渐减少.腹透时间皮细胞不是溶质转运的一道重要滤过屏障.     

黄芪注射液拮抗高糖腹膜透析液对腹膜间皮细胞紧密连接的影响

目的：观察高糖腹膜透析液和添加不同剂量黄芪注射液的腹膜透析液对腹膜间皮细胞紧密连接（TJ）形态结构和紧密连接相关蛋白封闭蛋白-1（ZO-1）表达的影响。方法：SD大鼠随机分为4组,腹腔注射生理盐水、高糖腹透液和添加黄芪注射液的腹透液,造模8周后,检测对照组（0.9%生理盐水）、腹透组（含糖4.25%腹透液）、低黄芪组（含糖4.25%、黄芪1%的腹透液）、高黄芪组（含糖4.25%、黄芪2%的腹透液）SD大鼠的腹膜透析超滤量、腹膜对尿素氮和肌酐清除率。并应用光镜、透射电镜和免疫组织化学染色法观察各组的腹膜标本紧密连接结构的改变和ZO-1蛋白水平表达的变化。结果：腹透组和高黄芪组腹膜透析8周腹透液超滤量与对照组相比较明显减少（P〈0.05）;腹透组和高黄芪组腹膜透析8周尿素氮清除率与对照组相比较明显降低（P〈0.05）;各组腹膜间皮细胞均有ZO-1表达,腹透组、高、低黄芪组与对照组相比,ZO-1表达明显减少（P〈0.05）。结论：高糖腹膜透析液对腹膜间皮细胞的紧密连接和ZO-1的表达有负影响,黄芪对腹膜间皮细胞的紧密连接等结构有一定的保护作用,但对ZO-1的表达干预作用不显著。     

乳酸盐腹膜透析液对人腹膜间皮细胞凋亡及bcl-2、bax表达和caspase-3活性的影响

目的： 探讨不同浓度乳酸盐腹膜透析液(L-PDS)对腹膜间皮细胞(HPMC)凋亡和bcl-2、bax表达及caspase-3活性的影响。方法:采用酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型,分别用浓度为1.50%、2.50%和4.25%的L-PDS与HPMC共同培养,同时设对照组。采用流式细胞术检测HPMC凋亡,采用RT-PCR法测定bcl-2及bax mRNA的表达,采用免疫荧光法检测caspase-3的活性。结果:与对照组比较,L-PDS各组HPMC凋亡率增加,bcl-2 mRNA的表达降低,bax mRNA表达升高,caspase-3活性增加,上述指标变化中2.50%及4.25%L-PDS组与对照组比较差异有显著性(P<0.05),4.25%L-PDS组与2.50%L-PDS组比较差异也有显著性(P<0.05),而1.50%L-PDS组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论： L-PDS可诱导HPMC 凋亡,其机制可能是通过对bcl-2及bax mRNA表达的改变以及激活caspase-3活性而实现。     

黄芪对TGF—β1致人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质的影响

OBJECTIVE: To study the effect of huangqi on peritoneal sclerosis and its possible mechanism. METHODS: Isolated human peritoneal mesothelial cells (HPMC) was cultured. Cultured HPMC were treated with F12 without serum (control group), F12 with TGF-beta 1 (TGF-beta 1 group), F12 with TGF-beta 1 and huangqi 100 micrograms/ml (huangqi 1 group), F12 with TGF-beta 1 and huangqi 1 mg/ml (huangqi 2 group). Fibronectin(FN) and plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) were detected by ELISA method. The expression of FN mRNA, PAI-1 mRNA and bFGF mRNA was detected by RT-PCR method. RESULTS: 1. HPMC expressed FN, PAI-1, and bFGF. 2. Fn and PAI-1 significantly increased compared with control with 5 ng/ml TGF-beta 1 stimulated at 24 hours and 48 hours(P < 0.05); 3. The different concentration of huangqi decreased FN and PAI-1 expression compared with TGF-beta 1 group, especially 1 mg/ml huangqi at 24 hours(P < 0.05). 4. FN, PAI-1 and bFGF mRNA expression were higher in 12 hours after stimulation with TGF-beta 1 compared with control. FN, PAI-1 and bFGF mRNA expression were lower in 12 hours after stimulation with different concentration of huangqi (100 micrograms/ml and 1 mg/ml) than those in the TGF-beta 1 group. CONCLUSION: TGF-beta 1 promotes extracellular matrix synthesis and secretion of HPMC. Huangqi partly counteracts the synthesis of human peritoneal mesothelial cell's extracellular matrix by the stimulation of TGF-beta 1.     

丹参黄芪对实验大鼠腹膜透析效能及腹膜超微结构的急性影响

目的：观察丹参,黄芪对腹膜透析效能及腹膜超微结构的影响。方法：通过模拟腹膜透析的动物实验,观察中药对腹膜透析效能的急性影响,并应用扫描电镜观察腹膜超微结构的变化,大鼠分单纯透析液组,丹参组,黄芪组和正常对照组,结果：丹参组,黄芪组净超 量较单纯透析液组显著增加（P＜0．05）,各组腹膜清除率,透析液中蛋白质含量比较,均无显著性差异（P＞0．05）,结论：丹参,黄芪能有效提高净超滤量,丹参,黄芪具有保护腹膜间皮层结构免遭损伤的作用。     

黄芪对TGF-β1致人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质的影响

目的 :探讨黄芪对腹膜纤维化的作用及可能机制。方法 :人腹膜间皮细胞 (HPMC)作体外培养 ,在第三代 ,将细胞转板至细胞融合后 ,将其分为对照组 (F12 ) ,TGF β1组 (F12 +TGF β15ng/ml) ,TGF β1加黄芪 1组(F12加TGF β1加黄芪 ,黄芪终浓度为 10 0 μg/ml,TGF β1加黄芪 2组 (F12加TGF β1加黄芪 ,黄芪终浓度为 1mg/ml) ,分别在 2 4,48h采用ELISA法检测上清液中纤维连接蛋白 (FN)和纤溶酶原抑制剂 (PAI 1)的含量 ;FNmRNA ,PAI 1mRNA和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA的表达采用半定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)检测。结果 :①HPMC表达FN ,PAI 1和bFGF ;②HPMC在 5ng/mlTGF β1刺激下分泌FN及PAI 1明显的增加 ,与对照组比较差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;③HPMC在TGF β1和不同浓度的黄芪刺激后 ,在 2 4h内可使FN及PAI 1减少 ,尤其是PAI 1与TGF β1组比差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。④HPMC经TGF β1作用 12h后 ,FNmRNA ,PAI 1mRNA和bFGFmRNA半定量结果与对照组相比 ,其表达量分别上调 18.5 4%,8.6 %和 6 6 .9%,HPMC经 10 0μg/ml和 1mg/ml黄芪作用 12h后FN ,PAI 1和bFGFmRNA的表达与TGF β1组比较均下调 ,其结果分别为5 .3 %,1.3%,3 .8%和 5 .4%,74.3 %,2 3 .7%。结论 :TGF β1可促进HPMC合成     

氨基胍对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤及血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究氨基胍(AG)对乳酸盐腹膜透析液(L-PDS)致人腹膜间皮细胞(HMrSV5)损伤及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 采用人腹膜间皮细胞株HMrSV5为体外实验模型,分为无血清DMEM培养液对照组、L-PDS组(2.5%L-PDS)、L-PDS+AG组(2.5%L-PDS+10 mmol/L AG)、单纯AG组(终浓度10 mmol/L).各组以上不同干预因素与HMrSV5细胞共孵育.MTT法检测各组细胞增殖、评估细胞活力,Western blot和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF蛋白及mRNA的表达.结果 MTT试验表明,L-PDS组OD值为(0.120±0.019),明显低于对照组的(0.298±0.031),差异有统计学意义(P<0.05);L-PDS+AG组OD值为(0.289±0.022),明显高于L-PDS组,差异有统计学意义(P<0.05).Western blot和RT-PCR结果均表明,与对照组比较,L-PDS组细胞中VEGF蛋白和mRNA表达明显增加,与L-PDS组比较,PDS+AG组VEGF蛋白和mRNA的表达明显减低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 AG可拮抗乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤并下调VEGF的表达.     

乌司他丁预防小鼠术后腹腔粘连实验研究

目的研究乌司他丁预防小鼠术后腹腔粘连的能力.方法以BALB/c小鼠为动物模型,经过一同一标准的腹膜损伤手术后,60只BALB/c小鼠随机分成两组乌司他丁治疗组,生理盐水对照组,分别在关腹前腹腔内灌注乌司他丁及生理盐水.术后20d将小鼠处死,观察腹腔内粘连的情况,通过对粘连的程度、位置以及粘连类型的综合评价得出粘连分数.结果乌司他丁治疗组的平均粘连分数(1.28±0.31)明显低于对照组(2.33±0.47),2～3级粘连发生率(23.3%)比对照组(76.7%)亦有明显减低(P＜0.01).无1例小鼠出现腹壁切口疝.结论乌司他丁能够预防术后腹腔粘连形成,且对伤口愈合无明显影响.     

腹膜炎时腹膜通透性的变化

目的 腹膜透析并发腹膜炎的特征性改变是炎症反应导致腹膜对细胞、蛋白和小分子溶质的通透性增加，但腹膜通透性改变的时间及机制并不清楚，本实验采用兔动物模型研究腹腔感染时腹膜通透性改变的时间依赖关系。方法 我们分别用兔腹腔内注射大肠杆菌(E.coli)4×106CFU制成兔急性腹膜炎动物模型，分别对其感染后8小时(系列一)及感染24小时后(系列二)腹膜通透性的变化进行了研究。结果 系列一结果表明腹腔内注入E.coli4小时起就出现白细胞向腹腔移行和腹膜对蛋白质的通透性增加，然而此时腹膜对肌酐及葡萄糟的通透性无改变。系列二结果表明腹腔内注射E coli24小时后腹膜对肌酐及葡萄糖的通透性增加，而此时腹膜对蛋白的通透性已无明显变化。结论 在兔腹膜炎动物模型中腹膜对小分子物质通透性增加出现在对蛋白质通透性增加之后，说明二者可能通过不同的机制管理。