抗Ⅳ型胶原酶单抗3G11及其F(ab')2与Fab'片段的抗肿瘤作用

目的 研究抗Ⅳ型胶原酶单抗3G11及其F（ab’）2、Fab’片段对小鼠肝癌22（H22）及小鼠lewis癌肺转移的治疗作用。方法 ELISA实验检测3G11及其片段与多种肿瘤细胞及Ⅳ型胶原酶的免疫反应性,明胶酶谱法测定其对HT-1080细胞分泌Ⅳ型胶原酶活性的影响,MTT法测定其对H22细胞的细胞毒作用。用小鼠肝癌22及小鼠Lewis肺癌模型评价单抗3G11及其片段抑制肿瘤生长及抗肿瘤转移活性。结果 单抗3G11及其片段对多种肿瘤细胞及Ⅳ型胶原酶均呈阳性反应,单抗3G11抑制肿瘤细胞HT-1080分泌Ⅳ型胶原酶的活性。单抗3G11对H22细胞有微弱的细胞毒作用。单抗3G1130mg／kg对小鼠移植性肝癌的抑制率为51．8％,F（ab＇）210mg/kg为49．9％,Fab’20mg／kg为39．3％。F（ab’）2片段10mg／kg对小鼠lewis癌肺转移的抑制率为76％。结论 抗Ⅳ型胶原酶单抗3G11及其片段对小鼠移植性肝癌22生长以及对小鼠lewis癌肺转移有中度抑制作用,可能用于研制抗体靶向药物。     

抗Ⅳ型胶原酶单链抗体scFv(3G11)在大肠杆菌的表达及其抗肿瘤活性

目的制备抗IV型胶原酶单链抗体(scFv),用于构建小型化抗肿瘤抗体靶向药物。方法构建重组表达质粒pET-scFv,并在大肠杆菌进行诱导表达。SDS-PAGE和Western-blot法对表达蛋白进行鉴定,分步透析复性。ELISA法、免疫细胞化学染色法检测scFv对靶抗原和肿瘤细胞的结合活性,明胶酶谱法检测对IV型胶原酶活性的抑制作用。Boyden Chamber法测定对肿瘤细胞侵袭的影响。动物试验肿瘤模型检测在小鼠体内的抗肿瘤活性。结果表达的单链抗体scFv(3G11)以包涵体的形式存在,经变性和复性后,对抗原IV型胶原酶和肿瘤细胞的免疫反应呈阳性,抗体亲和常数为6×107/mol/L。不仅可以抑制HT-29细胞和HT-1080细胞分泌的Ⅳ型胶原酶活性,还可以体外抑制肿瘤细胞的侵袭,抑制程度与浓度呈剂量依赖关系。scFv(3G11)4mg/kg对小鼠移植性肝癌H22的抑瘤率为49.4%(P<0.01)。结论scFv(3G11)保留了完整抗体的抗原结合和抑制活性,能够与肿瘤细胞特异性结合,并在小鼠体内有中度抑瘤效果。scFv(3G11)的相对分子质量远小于完整抗体,可作为肿瘤靶向药物的理想载体。     

抗Ⅳ型胶原酶单链抗体scFv(3G11)联合顺铂的抗肿瘤活性

目的 研究抗Ⅳ胶原酶基因工程单链抗体scFv(3G11)联合顺铂的抗肿瘤效果.方法 明胶酶谱法、Western-blot法研究顺铂对肿瘤细胞分泌Ⅳ胶原酶蛋白的影响,MTT法、实验动物肿瘤模型研究scFv(3G11)与顺铂联合在体外和体内试验中的抗肿瘤效果.结果 顺铂可抑制肿瘤细胞分泌的Ⅳ胶原酶活性,scFv(3G11)与顺铂联合在体外试验中可抑制人肝癌BEL-7402细胞的生长,体内试验中对小鼠移植性肝癌H22有显著的抑制作用,药物相互作用指数(CDI值)＜1.结论 scFv(3G11)和顺铂联合应用对肝癌的治疗有协同作用.     

抗总黄曲霉毒素单克隆抗体2G2 F(ab'')2片段的特性

目的:研究经无花果蛋白酶酶切后所得的抗总黄曲霉毒素单抗2G2 F(ab′)2片段的特性,为研制开发特异性、灵敏度较高的黄曲霉毒素B1抗独特型单克隆、多克隆抗体提供科学依据.方法:在制备出抗总黄曲霉毒素单克隆抗体2G2株及其2G2 F(ab′)2片段的基础上,采用非还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(非还原SDS-PAGE)和酶联免疫吸附法(ELISA)对单抗2G2及其F(ab′)2片段的特性进行研究并加以比较.结果:单抗2G2 F(ab′)2片段和单抗2G2的相对分子质量分别为105 000和180 000.单抗2G2 F(ab′)2片段和单抗2G2的比效价分别为3.33和1.25.单抗2G2 F(ab′)2片段的最低检出限和达到50%竞争抑制率时的检出限分别为0.17 μg/L和0.67μg/L,单抗2 G2的分别为0.47 μg/L和1 92 μg/L.单抗2G2 F(ab′)2片段的亲和力常数为2.95×10-9 mol/L,单抗2G2的亲和力常数为1.52×10-10 mol/L.结论:单抗2G2 F(ab′)2片段灵敏度优于完整抗体,可利用其生产特异性和灵敏度较高的黄曲霉毒素B1抗独特型多克隆和单克隆抗体.     

应用平阳霉素与单克隆抗体Fab′片段偶联物抑制肝癌生长与肿瘤肝转移

目的　研制一种具有抑制肝癌生长和肿瘤肝转移作用的单克隆抗体Fab′片段与平阳霉素（PYM）偶联物。方法　以胃蛋白酶酶解结合二巯基苏糖醇（DTT）还原法制备单抗Fab′片段;以葡聚糖T-40（dextran T-40）为中介体制备Fab′片段和PYM偶联物Fab′-PYM;用间接ELISA法、2,3,5-氯化三苯基四氮唑 （TTC）抑菌效价检测法,克隆形成法及动物移植性肿瘤模型测定Fab′-PYM偶联物在体外的生物学活性与在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果　Fab′-PYM与BEL-7402、肝癌22（H22）及HT-29细胞呈免疫学阳性反应, 但与KB细胞无反应;偶联物中PYM的抑菌活性为游离PYM的15%;Fab′-PYM对体外培养的BEL-7402细胞、HT-29细胞和KB细胞的50%抑制浓度（IC50）分别为0.02、0.08及0.50 μmol/L;静脉注射10 mg/kg Fab′-PYM偶联物和PYM皮下接种对小鼠肝癌22的抑瘤率分别为86%和62%;腹腔注射,10 mg/kg Fab′-PYM偶联物和PYM对小鼠脾内接种的结肠癌26肝转移的抑制率分别为91%和62%。结论　Fab′-PYM偶联物具有比游离平阳霉素更强的抑制肝癌生长与肿瘤肝转移作用。     

癌平消抑制肿瘤增殖作用实验研究

[目的]探讨癌平消的抑制肿瘤增殖作用.[方法]分别采用S180肉瘤、H22肝癌及Lewis肺癌瘤株制作小鼠肿瘤模型,观察癌平消对肿瘤增殖的抑制率和生存时间.[结果]分别以13.0,6.5 g/kg剂量的癌平消灌胃给药,对小鼠移植性S180肉瘤增殖的抑制率分别为34.2%,28.1%,对小鼠移植性H22肝癌实体瘤增殖的抑制率分别为50.8%,40.8%,对Lewis肺癌实体瘤增殖的抑制率分别为74.2%,57.0%,H22肝癌腹水型小鼠的生存时间明显延长,与模型组比较均有显著性差异.[结论]癌平消具有较好的抑制肿瘤增殖作用.     

强力霉素对实验性小鼠肺纤维化的抑制作用

目的 探讨具有Ⅳ型胶原酶抑制活性的抗感染抗生素强力霉素对博来霉素诱发的小鼠肺纤维化的抑制作用。方法 采用明胶酶谱法测定强力霉素对HT-1080细胞分泌Ⅳ型胶原酶及酶活性的影响,采用气管内灌注博来霉素的方法复制小鼠肺纤维化模型,采用生化方法测定肺组织中羟脯氨酸含量,采用病理组织学结合图像分析方法观察评价小鼠肺组织纤维化程度。结果 强力霉素在体外能抑制HT-1080细胞分泌Ⅳ型胶原酶,0．1mg／ml、0．05mg／ml强力霉素能显著抑制HT-1080细胞MMP-9和MMP-2的分泌。强力霉素对于已外泌的Ⅳ型胶原酶的活性也有抑制作用。生化检测结果表明：100mg／kg的强力霉素可以显著减少博来霉素诱导的小鼠肺部羟脯氨酸的含量,在实验第21天检测其含量是博来霉素模型组的35％,两者相比有显著性差异（P〈0．01）。病理组织学观察和图像分析结果进一步表明：强力霉素治疗组在小鼠左肺叶发生纤维化的面积比率、肺泡间隔所占面积比率和有核细胞计数都明显少于博来霉素模型组;100mg／kg强力霉素组与3mg／kg的醋酸泼尼松龙治疗组治疗效果相近。结论 强力霉素可抑制Ⅳ型胶原酶的活性,对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化有抑制作用。     

抗Ⅳ型胶原酶抗体Fv片段与力达霉素融合蛋白的免疫活性

目的 融合蛋白Fv-LDP是通过基因工程方法制备,其抗体部分为抗Ⅳ型胶原酶抗体3G11的单链抗体scFv,相当于"弹头"的载体部分为力达霉素辅基蛋白LDP.本实验研究了融合蛋白Fv-LDP的免疫学活性.方法 采用间接ELISA方法和免疫细胞荧光方法检测融合蛋白Fv-LDP的免疫学活性,明胶酶谱实验观察融合蛋白Fv-LDP对肿瘤细胞分泌明胶酶的影响,重组基膜侵袭实验分析融合蛋白Fv-LDP对肿瘤细胞侵袭能力的影响,通过制备兔抗Fv-LDP多抗,应用免疫组织化学技术检测融合蛋白Fv-LDP与人乳腺癌组织的免疫反应性.结果 融合蛋白Fv-LDP与Ⅳ型胶原酶、纤维肉瘤HT-1080细胞、结肠癌HT-29细胞、肺癌PG细胞等均具有免疫反应性,3种细胞中以HT-1080细胞的相对亲和力最高,其次是PG细胞,HT-29细胞.免疫细胞荧光结果显示,肿瘤细胞HT-1080胞质着绿色荧光,表明融合蛋白Fv-LDP结合于肿瘤细胞的胞质部位.融合蛋白Fv-LDP可有效抑制肿瘤细胞分泌明胶酶,可明显抑制肿瘤细胞对人工基膜的侵袭,并呈剂量依赖性.人乳腺癌组织免疫组化结果显示,融合蛋白Fv-LDP与乳腺痛癌细胞胞质部位结合,阳性着色部位与MMP-9抗体的染色一致.结论 融合蛋白Fv-LDP基本保留了完整单抗3G11对明胶酶的免疫活性,又囚其携带有"弹头"的载体蛋白LDP,可以用烯二炔发色团进行强化,因此,有可能用于制备抗肿瘤抗体药物.     

应用平阳霉素与单克隆抗体Fab片段偶联物抑制肿癌生长与肿瘤肝转移

目的 研制一种具有抑制肝癌生长和瘤肝转移作用的单克隆抗体Fab 片段与平阳霉素（PYM）偶联物。方法 以胃蛋白酶酶解结合二巯基苏糖醇（DTT）还原法制备单抗Fab片段。以葡聚糖T－40（ 拒T－40)为中介体制备Fab片段和PYM偶联物Fab-PYM;用间接ELISA法,2,3,5－氯化三苯基四氮唑（TTC）抑菌效价检测法,克隆形成法及动物移植性肿瘤模型测定F -PYM偶联物在体外的生物学活性与在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果： Fab-PYM与BEL－7402,肝癌22（H22）及HP－29细胞呈免疫学阳性反应,但与KB细胞无反应;偶联物中PYM的抑菌活性为游离PYM的15％,Fab-PYM对体外培养的BEL－7402细胞,HT－29细胞和KB细胞的50％抑制浓度（IC50）分别为0．02,0．08及0．50umol/L;静脉注射10mg/kg Fab-PYM偶联物和PYM皮下接种对小鼠肝癌22的抑瘤率分别为86％和62％,腹腔注射,10mg/kg Fab-PYM偶联物和PYM对小鼠脾内接种的结肠癌26肝转移的抑制率分别为91％和62％,结论 Fab-PYM偶联物具有比游离平阳霉素更强的抑制肝癌生长与肿瘤肝转移作用。     

力达霉素构建的小型化单克隆抗体免疫偶联物的抗肿瘤作用

目的研制一种具有高效、小型化特点的抗肿瘤单克隆抗体(单抗)免疫偶联物.方法以化学偶联法制备抗肿瘤抗生素力达霉素(LDM)与单抗Fab＇片段的偶联物Fab＇LDM.以非还原型SDS-PAGE法确定偶联物的相对分子质量;ELISA法、四氮唑蓝(MTT)法、克隆形成法及小鼠移植性结肠癌26(C26)模型观察Fab＇-LDM偶联物的抗肿瘤作用.结果 Fab＇-LDM偶联物的相对分子质量(Mr)约为65 000,Fab＇与LDM的偶联分子比为11;偶联物与BEL-7402及C26细胞均呈免疫学阳性反应,但与KB细胞无反应;Fab＇-LDM对靶细胞BEL-7402的杀伤作用比游离LDM强13倍,对C26细胞的杀伤作用比LDM强5.5倍,但对非靶细胞KB的作用与LDM相当.动物试验结果表明,0.05 mg/kg、0.1 mg/kg和0.2 mg/kg剂量Fab＇-LDM偶联物对小鼠移植性结肠癌26的抑瘤率分别达80%、92%和94%,而0.1 mg/kg剂量游离LDM的抑瘤率为77%;同时偶联物治疗组动物生存时间较对照组延长.偶联物的抑瘤作用强于等剂量游离LDM(P＜0.01).结论以高效抗肿瘤抗生素LDM为"弹头"药物,可与单抗活性片段构建成具有良好抗肿瘤作用的小型化单抗导向药物.     

^131Ⅰ标记的一种抗植物蛋白抗体及其片段在荷瘤小鼠体内的分布

目的研究131碘标记的抗植物蛋白抗体(131I-anti-plant protein antibody,131I-APPAb)及其片段[131I-F(ab′)2]在荷瘤小鼠体内的生物学分布.方法氯胺-T法将131I标记于APPAb及F(ab′)2分子上.成年昆明种小鼠,于前肢根部皮下接种H22肝癌瘤细胞使其荷瘤,随机分组.尾静脉注射131I-APPAb或131I-F(ab′)2 185KBq(0.2ml*每鼠).于注药后12、24和48 h分别处死动物,取血液、心、肝、脾、肾、肌肉和肿瘤组织,用r计数器测量各组织放射性.结果各组织中以肿瘤组织放射性摄取率(%ID*g-1)最高,不同组不同时相131I-F(ab′)2的%ID*g-1均高于131I-APPAb,而且131I-F(ab′)2的摄取速度也较131I-APPAb快,12 h即达到最大值,131I-APPAb则需48 h.肿瘤组织对正常组织的摄取比值(T/NT)在3～6之间.血液中的放射性浓度较高,T/NT比值也低.结论肿瘤组织中131I-APPAb和131I-F(ab′)2的摄取明显高于正常组织,131I-F(ab′)2的摄取速度快,这为肿瘤的免疫诊断和免疫治疗研究提供一种新途径.     

131I标记的一种抗植物蛋白抗体及其片段在荷瘤小鼠体内的分布

目的研究131碘标记的抗植物蛋白抗体(131I-anti-plant protein antibody,131I-APPAb)及其片段[131I-F(ab′)2]在荷瘤小鼠体内的生物学分布.方法氯胺-T法将131I标记于APPAb及F(ab′)2分子上.成年昆明种小鼠,于前肢根部皮下接种H22肝癌瘤细胞使其荷瘤,随机分组.尾静脉注射131I-APPAb或131I-F(ab′)2 185KBq(0.2ml*每鼠).于注药后12、24和48 h分别处死动物,取血液、心、肝、脾、肾、肌肉和肿瘤组织,用r计数器测量各组织放射性.结果各组织中以肿瘤组织放射性摄取率(%ID*g-1)最高,不同组不同时相131I-F(ab′)2的%ID*g-1均高于131I-APPAb,而且131I-F(ab′)2的摄取速度也较131I-APPAb快,12 h即达到最大值,131I-APPAb则需48 h.肿瘤组织对正常组织的摄取比值(T/NT)在3～6之间.血液中的放射性浓度较高,T/NT比值也低.结论肿瘤组织中131I-APPAb和131I-F(ab′)2的摄取明显高于正常组织,131I-F(ab′)2的摄取速度快,这为肿瘤的免疫诊断和免疫治疗研究提供一种新途径.     

熊胆粉对小鼠肝癌H22的抑制作用及量效关系研究

目的:研究熊胆粉对小鼠肝癌H22的抑制作用及量效关系,为新药开发确立最佳剂量.方法:建立小鼠体内移植性肿瘤细胞H22模型,熊胆粉分为100、200、400、800、1 600 mg/kg 5个剂量组,每日灌胃给药1次,连续12 d.停药后24h颈椎脱臼处死荷瘤小鼠,剥离肿瘤组织,分别取瘤、胸腺、脾、肝称重.结果:熊胆粉100、200、400、800、1 600 mg/kg剂量组对肝癌H22的抑瘤率分别为36.00％、52.81％、61.44％、51.39％、45.96％;各剂量组对肝癌H22小鼠的体质量、胸腺指数、脾指数及肝指数均无明显影响.结论:熊胆粉对小鼠肝癌H22具有明显的抑制作用,其抗肝癌H22的3个最佳剂量为200、400、800 mg/kg.     

抗抗总黄曲霉毒素单抗F(ab’)2多克隆抗体的制备及特性

目的:以抗总黄曲霉毒素单抗2G2株F(ab’)2片段作为免疫原制备抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体。方法:制备抗总黄曲霉毒素单抗2G2株F(ab’)2片段,分别用F(ab’)2片段和F(ab’)2-KLH免疫日本大耳白兔,制备抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体。采用ELISA检测该抗体替代黄曲霉毒素B1(AFB1)的情况,并分析与其他单克隆抗体的交叉反应情况。用该多克隆抗体免疫BALB/C小鼠,采用间接非竞争ELISA检测小鼠血清,鉴定该抗体的亚型。结果:由2G2株F(ab’)2片段所得的抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体纯化后,替代游离AFB1达到20%、50%和80%竞争抑制时的质量浓度分别为1、4和25mg/L,分别相当于0.47、2.74和16.00μg/L游离AFB1;该抗体替代AFB1包被抗原达到20%、50%和80%竞争抑制时的质量浓度分别为1、4和19mg/L,分别相当于0.33、1.35和5.45μg/L游离AFB1。小鼠生物鉴定显示该多克隆抗体为Ab2β型。结论:成功制备了抗抗总黄曲霉毒素单抗独特型多克隆抗体,为研制AFB1无毒检测试剂盒提供了依据。     

猫人参注射液抗肝癌作用和对免疫功能的影响

目的:初步探讨猫人参注射液抗动物移植性肝癌及其对荷瘤小鼠免疫功能的影响.方法:体内抗肿瘤实验采用液下接种肿瘤细胞及实体瘤称重的方法,腹腔接种肿瘤液观察荷瘤动物存活率,采用3H-TdR掺入法检测猫人参注射液对荷瘤小鼠脾T淋巴细胞转化功能和NK细胞活性的影响;流式细胞仪检测荷瘤小鼠T细胞亚群.结果:猫人参注射液100g/kg、50g/kg、25g/kg连续尾静脉注静10天后,对小鼠皮下移植性H22肝癌的抑瘤率分别为62.16%、35.14%、17.13%,有较明显的剂量依赖性(P＞0.05).剂量为100g/kg时抗肿瘤作用较理想,且可延长腹水型肝癌小鼠的生存期,对H22肝癌小鼠脾脏(胸腺)指数、脾淋巴细胞转化指数、T细胞CD4 /CD8 比值有升高趋势,略高于生理盐水组(P＜0.05),CTX对荷瘤小鼠细胞免疫功能则有明显的抑制作用(P＞0.05).结论:猫人参注射液具有良好的抗肝癌作用.     

内折香茶菜素D抗肿瘤作用的研究

目的:研究内折香茶菜素D(以下简称内折素D)对动物移植性肿瘤的作用以及对机体免疫状态的影响。方法:以动物移植性肿瘤艾氏腹水癌(ECA),肉瘤S180,肝癌(HCA),Lewis肺癌为模型,以5_Fu为阳性对照组,以生理盐水为阴性对照组,观察12.5 mg/kg和25 mg/kg内折素D的抗肿瘤作用,并采用小鼠溶血素实验和小鼠迟发性变态反应实验观察内折素D对机体免疫状态的影响。结果:内折素D与阴性对照组相比在体外对ECA肿瘤细胞有较强的杀伤力,在体内对S180实体型和腹水型肿瘤,HCA实体型和腹水型肿瘤以及Lewis肺癌实体型肿瘤均有较强的抑制作用,与阳性对照组相比,对机体免疫状态无明显影响。结论:内折素D具有较强的抗肿瘤作用,且对机体免疫状态无明显影响。     

内折香茶菜乙素抗肿瘤作用的实验研究

目的:研究内折香茶菜乙素(以下简称内折乙素)对动物移植性肿瘤的作用以及对机体免疫状态的影响.方法:以动物移植性肿瘤艾氏腹水癌(ECA)、肉瘤180(S180)、肝癌(HCA)、Lewis肺癌为模型,以5-Fu为阳性对照组,以生理盐水为阴性对照组,观察12.5 mg/kg和25mg/kg内折乙素的抗肿瘤作用,并采用小鼠溶血素实验和小鼠迟发性变态反应实验观察内折乙素对机体免疫状态的影响.结果:内折乙素与阴性对照组相比在体外对ECA肿瘤细胞有较强的杀伤力,在体内对S180实体型和腹水型肿瘤,HCA实体型和腹水型肿瘤以及Lewis肺癌实体型肿瘤均有较强的抑瘤作用,与阳性对照组相比,对机体免疫状态无明显影响.结论:内折乙素具有较强的抗肿瘤作用,且对机体免疫状态无明显影响.     

H22肝癌与Lewis肺癌荷瘤小鼠证候特征比较研究

目的比较H22肝癌与Lewis肺癌C57BL/6N荷瘤小鼠证候及其差异。方法分别在雄性C57BL/6N小鼠右腋下接种H22肝癌腹水和Lewis肺癌瘤组织单细胞悬液,并设立正常对照组,采用小鼠四诊工作站平台与方法收集小鼠四诊信息,并进行计量辨证。结果接种第11~21天,Lewis肺癌小鼠肿瘤增长与小鼠死亡速度较H22肝癌小鼠速度快,第21天H22肝癌与Lewis肺癌小鼠存活比例分别为43.75%(7/16)和25.0%(5/20)。H22肝癌与Lewis肺癌荷瘤小鼠均自发形成了常见虚证,其中Lewis肺癌小鼠证候出现早,程度重,发展快。结论H22肝癌与Lewis肺癌C57BL/6N荷瘤小鼠与人类类似,存在着证候的自然发生与演变,可模拟临床肿瘤证候的发生与演变,用于辨证论治的实验研究;而本文所采用的计量化辨证有助于荷瘤小鼠个体化辨证论治,以及疾病和辨证论治客观化、计量化的疗效评价。     

枸杞多糖对小鼠移植性肝癌抑制作用的实验研究

目的 探讨枸杞多糖对小鼠移植性肝癌的抑制作用。方法 采用皮下接种法制备小鼠移植性肝癌（H₂₂肝癌细胞株）模型,随机将96只小鼠分成对照组、模型组、枸杞多糖高、中、低剂量（20、10、5 mg/kg）组、环磷酰胺（20 mg/kg）组。观察枸杞多糖对荷瘤小鼠死亡率、肿瘤体积、肿瘤质量及肿瘤细胞密度、核分裂像、肿瘤坏死程度及间质淋巴细胞浸润、纤维组织增生情况的影响。结果 20、10、5 mg/kg的枸杞多糖能明显降低移植性肝癌小鼠的死亡率（P＜0.05）,减小肿瘤细胞的体积和质量（P＜0.05）,抑瘤率分别为42.23%、25.10%和9.16%;同时20、10 mg/kg的枸杞多糖能不同程度地降低肿瘤细胞密度（P＜0.05）,减少肿瘤细胞的核分裂像计数（P＜0.05）,增加肿瘤细胞坏死程度、间质淋巴细胞浸润和纤维组织增生（P＜0.05）。结论 枸杞多糖对小鼠移植性肝癌有一定的抑制作用。     

单克隆抗体TNT-1的纯化、F(ab)_2片段化及其免疫活性的测定

TNT-1是-种鼠IgG_2a单抗,已用于肿瘤病人的临床试验。本文将介绍从腹水中进一步纯化TNT-1的方法及制备其F(ah′)_2片段的条件。经Protein A亲和柱层析从小鼠腹水中提取出的lgG,再通过阳离子交换树脂柱Mono S,用缓冲液A(20 mmol/L MES,pH6.3)和缓冲液B(lmol/L NaCI),在快速蛋白液相色层(FPLC)系统上进行梯度洗脱分离,可制得纯净的TNT-1抗体,其免疫活性可达80％～85％;经纯化的TNT-1,用胃蛋白酶消化,制备F(ah′)~2片段,其消化条件是:酶的用量为抗体的1/250,pH3.8,温度37℃,时间4～5 /小时。消化后的混合物,用protein A亲和结合法除去完整的IgG,其余的F(ab′)_2和Fab、Fc等片段,在Mono S柱上,按前述的条件分离。产物TNT-1或F(ah′)_2的免疫活性,用标记抗体和过量抗原结合的方法测定;分高纯化过程中的洗脱峰,用间接免疫荧光技术监测其活性。结果戾明,TNR-1的F(ab′)_2片段的制备是成功的,色层分离纯化的方法简便而有效,并已成功地应用于批量生产。