肝纤维化大鼠肝组织Smads基因表达状况及意义

目的:研究CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝组织Smad基因表达的变化及其意义.方法:80只健康雄性SD大鼠分为2组:正常组(C组,n=40)和模型组(M组,n=40).以CCl4 sc 法诱导肝纤维化,HE和VG胶原染色观察肝脏胶原沉积情况,原位杂交法及免疫组化法检测肝组织Smads分子表达水平变化.结果:与C组比较,M组大鼠肝脏组织学积分显著增加(3.29±0.68 vs0,P<0.05),平均胶原面积显著增加(290.86±89.37 μm2 vs 56.12±21.45 μm2,P<0.01),肝组织Smad4蛋白表达率较C组明显增加(4.27%±0.43% vs 2.86%±0.86%,P<0.05),而Smad7蛋白表达虽然增加,但水平低下;Smad 3 mRNA表达A值明显增加(0.167±0.092 vs 0.010±0.002,P<0.05),Smad4 mRNA表达A值也明显增加(0.24 1±0.098 vs 0.021±0.004,P<0.05),Smad6、Smad7 mRNA虽然增加,但表达水平仍然低下.结论:实验性大鼠肝纤维化存在肝脏Smads分子表达水平的比例失调,TGF-Smad信号通路可能参与了肝纤维化的形成与发展.     

口服氧化苦参碱对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化血清生化和纤维化指标的影响

目的 研究口服氧化苦参碱对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化血清生化和纤维化指标的影响。方法 140只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(n=20)、CCl4模型组(n=30)、氧化苦参碱预防低剂量组(n=30)、中剂量组(n=30)和高剂量组(n=30)。氧化苦参碱低、中、高剂量组大鼠氧化苦参碱的用量分别为30、60、100mg／kg体重，每日灌胃1次，共12周。血清ALT、GGT、总胆红素、白蛋白水平用全自动生化分析仪检测。血清HA、LN、PⅢNP、Ⅳ型胶原含量分别以RIA和ELISA方法检测。肝组织学检查苏木精—伊红染色观察肝组织炎症和纤维化程度。结果 血清学检测结果表明，氧化苦参碱预防组较对照组肝功能有明显改善，血清肝纤维化指标水平明显降低；组织学检查结果表明，对照组肝脏炎症和纤维化程度明显高于氧化苦参碱预防组。结论 口服氧化苦参碱可改善CCl4诱导的大鼠肝纤维化血清生化和肝纤维化指标。     

小鼠日本血吸虫性肝纤维化组织TGF-β1及Smads的表达

目的:探讨小鼠日本血吸虫病纤维化肝组织中转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2/3、Smad4和Smad7的表达和肝纤维化的发病机制.方法:清洁级6-8 wk龄ICR小鼠80只,雌雄各半,随机分为模型组和正常对照组,用血吸虫尾蚴腹部贴附法制成动物模型,正常组未予处理.感染后wk 4、6、8和12末分批处死2组小鼠且称肝脾质量,取部分肝做病理学观察,HE染色和猩红染色,制作组织芯片,免疫组化检测TGF-β1、Smad2/3、Smad4和Smad7在各细的表达状况.结果:与正常组相比,模型组小鼠肝脾质量和肝指数均高(肝,12 wk:2.99±0.28 g vs 1.83±0.13 g;脾,12 wk:0.87±0.15 g vs 0.14±0.02g;肝指数,12 wk:0.09±0.01 vs 0.04±0.00;均P＜0.01),TGF-β1和Smad2/3表达也均高于正常对照组(TGF-β1.12 wk:0.105±0.008 vs 0.024±0.002;Smad2/3.12 wk:0.094±0.009 vs 0.003±0.001,均P＜0.01),以上指数分别与肝纤维化程度呈正相关(r=0.635,0.482,0.646,0.347,0.662;均P<0.01);Smad4表达高于对照组且随着纤维化的发展表达量在逐渐下降(4wk:0.075±0.011 vs 0.023±0.006.6 wk:0.043±0.008 vs 0.010±0.002.8 wk:0.038±0.009 vs 0.003±0.002.12 wk:0.028±0.004 vs 0.013±0.006;均P＜0.01).Smad7仅8 wk表达增强.结论:TGF-β1和Smad2/3表达增强在肝纤维化的发生中起重要作用,Smad4可能主要在纤维化的早中期发挥效应.     

红景天甙对肝纤维化大鼠肝组织ROCK表达的影响

目的:研究红景天甙对肝纤维化大鼠肝组织ROCK基因表达的影响,了解其干预肝纤维化的机制.方法:健康雄性SD大鼠,随机分为3组:对照组( n = 10),红景天甙干预组( n = 40)和肝纤维化模型组( n = 40).大鼠肝纤维化采用CCl4皮下注射法(300 mL/L,3 mL/kg,每周2次,共8 wk)诱导.红景天甙干预采用腹腔注射法,剂量5 mg/kg,每周2次.肝脏胶原沉积状况采用Masson胶原染色以及HE染色观察,ROCKⅠ、ROCKⅡ表达水平分别采用原位杂交(in situ hybridization,ISH) 和免疫组化(immunohisto chemistry,IH)方法检测.实验图像经电子计算机扫描,数据采用专业图像分析软件统计分析.结果:肝纤维化大鼠肝脏肝细胞坏死、再生明显,假小叶形成,胶原纤维沉积明显增加,肝实质结构紊乱.红景天甙干预组大鼠肝组织胶原沉积明显减少,组织学积分平均胶原面积降低(2.1±0.3 vs 3.6±0.8,74.82±21.51μm2 vs 290.86±89.37 μm2,均P<0.05).与模型组比较,红景天甙干预性治疗组ROCKⅠ,Ⅱ蛋白表达水平均明显下降(0.203±0.068 vs0.357±0.182,0.237±0.056 vs 0.394±0.238,均P<0.05),ROCKⅠ,Ⅱ mRNA表达水平明显下降(0.197±0.019 vs 0.394±0.238,0.185±0.031 vs 0.279±0.112,均P<0.01).结论:红景天甙可能通过调节Rho-ROCK信号传导通路,减少肝脏胶原纤维的合成与沉积,有效干预CCl4诱导的大鼠肝纤维化.     

壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠TβRI/Ⅱ、Smad3、Smad4和Smad7表达的影响

目的:研究壮肝逐瘀煎对肝纤维化(HF)大鼠TβR Ⅰ/Ⅱ、Smad3、Smad4和Smad7表达的影响.方法:Wistar大鼠44只,随机取8只作为正常对照(A)组;余大鼠用CCl4复合因素法进行HF造模,wk 4随机处死4只证实HF形成后随机分为病理模型(B)组、壮肝逐瘀煎治疗(C)组、秋水仙碱对照(D)组、大黄(蠊)虫丸对照(E)组.B组予生理盐水ig,C、D、E组予相应药液ig.6 wk后获取肝组织,HE染色观察HF程度;用免疫组化、图像分析方法对TβR Ⅰ/Ⅱ、Smad3、Smad4、Smad7的组织分布进行半定量分析.结果:与B组比较,C、D、E组肝小叶结构趋于正常,肝组织TβR Ⅰ/Ⅱ、Smad3、Smad4表达显著减少(TβR Ⅰ:2.75±0.10,3.14±0.07,3.44±0.06 vs 5.47±0.13,P<0.01:TβR Ⅱ:1.86±0.12,2.09±0.10,2.53±0.12 vs 3.52±0.15,P<0.01;Smad3:2.28±0.59,3.84±1.11,3.97±0.90 vs 5.65±1.28,P<0.01:Smad4:1.57±0.53,3.15±0.79,3.37±0.78 vs 5.25±1.60,P<0.01),Smad7表达显著增加(3.45±0.58,2.09±0.38,1.75±0.29 vs 0.73±0.34,P<0.01),C组强于D、E组(P<0.01).结论:壮肝逐瘀煎能显著改善HF组织病理变化,其作用机制可能与壮肝逐瘀煎调控TβR Ⅰ/Ⅱ、Smad3、Smad4、Smad7的表达有关.     

氧化苦参碱对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原表达的影响

目的:研究口服氧化苦参碱对CCl4诱导的大鼠肝纤维化组织Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原表达的影响.方法:♂ Wistar大鼠140只随机分为正常对照组(n=20)、CCl4模型组(n=30)、氧化苦参碱预防低剂量组(n=30)、中剂量组(n=30)和高剂量组(n=30).氧化苦参碱低、中、高剂量组大鼠氧化苦参碱的用量分别为30,60,100 mg/kg,每日灌胃1次,共12 wk.肝组织学检查观察肝组织炎症和纤维化程度,免疫组化观察肝组织中Ⅰ,Ⅲ和Ⅳ型胶原的表达,电镜观察肝组织的超微结构变化.结果:组织学检查结果表明对照组肝脏炎症和纤维化程度明显高于氧化苦参碱预防组;免疫组化检测表明预防对照组大鼠肝内有大量Ⅰ,Ⅲ和Ⅳ型胶原沉积,其中Ⅲ型和Ⅳ型胶原的沉积形成肝窦毛细血管化,而氧化苦参碱预防组肝内胶原沉积较少,无明显的肝窦毛细血管化形成;电镜学检查证明氧化苦参碱预防组肝细胞损伤程度较对照组显著减轻.结论:口服氧化苦参碱可减少CCl4诱导的大鼠肝纤维化组织中胶原的表达,对肝纤维化有预防作用.     

肝纤维化能够保护小鼠抵抗D-GalN/LPS诱导的致死性损伤

目的:证明四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的肝纤维化小鼠对致死性D-氨基半乳糖/脂多糖(D-galactosamine and lipopolysaccharide,D-GalN/LPS)攻击的耐受性.方法:建立CCl4诱导的肝纤维化小鼠模型,于纤维化6 wk时以致死剂量的D-GalN(700 mg/kg)/LPS(50μg/kg)进行攻击,以同样处理的正常小鼠作为对照,即实验共分为4组:正常对照组(Nor)、急性损伤组(Nor+D-GalN/LPS)、肝纤维化组(Fib)、肝纤维化+急性攻击组(Fib+D-GalN/LPS).根据攻击前后小鼠生存率、转氨酶水平及肝组织学的变化来评估正常和纤维化小鼠对致死性D-GalN/LPS损伤的耐受性.结果:生存分析显示,Fib+D-GalN/LPS组的生存率显著高于Nor+D-GalN/LPS组(100%vs20%).血清转氨酶结果表明,Fib+D-GalN/LPS组肝损伤程度明显轻于Nor+D-GalN/LPS组,其sALT水平分别为(6630 U/L±1675 U/L)和(22429 U/L±5446 U/L)(P<0.01).接受攻击的纤维化和正常小鼠的sALT分别升高了14.3倍和455.9倍.肝组织学检查结果也证明,接受致死性D-GalN/LPS攻击的纤维化小鼠的肝损伤较同样处理的正常小鼠明显减轻.结论:CCl4诱导的肝纤维化可保护小鼠抵抗致死性D-GalN/LPS损伤的攻击.     

选择性iNOS抑制剂对肝硬化大鼠门脉高压性胃黏膜病变的影响

目的:探讨选择性诱导型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍(aminoguanidine,AG)对肝硬化大鼠门脉高压性胃黏膜病变的防治作用及其机制.方法:将SD大鼠30只随机分为对照组( n =10)、模型组( n = 10)和AG组( n = 10),予400mL/L CCl4皮下注射12 wk建立肝硬化大鼠模型,AG组为皮下注射CCl4同时予AG饮用.观察比较各组大鼠胃黏膜形态及组织学变化,应用免疫组化法检测胃黏膜诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,并测定胃黏膜溃疡指数、门静脉压力.结果:AG组胃黏膜病变程度较模型组减轻,溃疡指数明显低于模型组(3.00±2.31 vs 10.60±3.47,P<0.01);模型组胃黏膜iNOS吸光度、面密度值均较对照组增高(0.64±0.04 vs 0.25±0.03;0.344±0.068 vs 0.017±0.008,均P<0.01),AG组胃黏膜iNOS吸光度值、面密度值(0.46±0.09,0.159±0.021)均较模型组明显下降(均P<0.01).AG组门脉压力较模型组降低.结论:AG可在一定程度上减轻门脉高压性胃黏膜病变,其机制可能主要通过抑制胃黏膜iNOS表达.     

α-2a干扰素对大鼠肝组织bcl-2基因表达的影响及意义

目的:探讨α-2a干扰素(IFNα-2a)对大鼠肝组织bcl-2基因表达的影响和对肝纤维化的作用及其机制.方法:将SD大鼠随机分成纤维化模型组(A组,CCl4诱导形成大鼠肝纤维化模型),对照组(B组)及IFNα-2a干预组(C组).用RT-PCR法检测各组大鼠肝脏bcl-2的表达,常规HE和网状纤维染色检测肝组织标本.结果:C组纤维化程度及肝细胞脂肪变性较A组显著减轻,但肝组织炎症改变无显著差异性.C组bcl-2基因蛋白表达显著低于A组(P<0.01),但显著高于B组bcl-2基因蛋白表达的量(P<0.01).结论:IFNα-2a能够阻断CCl4诱导的肝纤维化和减少肝脂肪变性.其机制与bcl-2基因表达有关,可能通过调节bcl-2基因表达与HSC凋亡,从而阻断肝纤维化和减少肝脂肪变性.     

Nrf2在肝纤维化小鼠肝细胞中的核转移

目的:研究肝纤维化小鼠肝细胞中核因子相关因子-2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)核转移情况.方法:实验小鼠随机分为正常对照组(normal control,NC组)、模型组,每组8只.模型组腹腔注射四氯化碳(CCl4)石蜡油溶液建造肝纤维化模型,NC组给予同体积矿物油腹腔注射,共10wk.收集肝脏标本HE染色及Masson染色观察肝脏炎症和纤维化程度;Western blot检测细胞内Nrf2、醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase,Nqo1)总蛋白及Nrf2核蛋白表达情况.结果:随CCl4肝损伤时间延长,组织病理学结果显示模型组明显炎症反应及纤维间隔形成;Western blot结果显示,与NC组Nrf2、Nqo1总蛋白及Nrf2核蛋白表达量分别为0.490±0.088、0.430±0.057、0.370±0.022比较,模型组为0.790±0.045、0.720±0.040、0.670±0.044显著增高,差异具有统计学意义(F=2.027、0.772、1.552,P<0.05).结论:肝纤维化小鼠肝细胞中Nrf2核转移增多并上调细胞保护性蛋白Nqo1表达.     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.