249例外分泌源性胰腺癌临床病理和免疫组化研究

目的探讨外分泌源性胰腺癌病理形态学特征及相关基因产物表达和意义.方法对249例胰腺癌按WHO标准进行病理组织学分类,同时对发病年龄、性别、肿瘤部位和侵袭转移等进行分析.应用EnVision免疫组化技术,对167例胰腺癌和101例癌旁胰腺组织p53、p14ARF、p21wAF1、ATM、MDM2、p33ING1基因表达蛋白进行了检测.结果249例胰腺癌中,男:女=2.04:1,40岁以上占94%,肿块3 cm以上占65.9%,胰头部位占71.1%,导管腺癌占81.1%,发现6例黏液性非囊性癌.伴有十二指肠浸润、局部淋巴结和(或)远处转移者占32.5%,伴有周围神经浸润者占44.97%.免疫组化显示癌组织p53阳性率为57.5%,p14ARF阳性率35.3%,p21WAF1阳性率39.5%,ATM阳性率67.7%,MDM2阳性率64.1%,p33ING1阳性率77.2%.61例有随访资料,患者平均存活1 6个月.结论胰腺癌侵袭转移发生率高,特别是周围神经浸润可能为预后差的重要原因之一.6种肿瘤基因产物免疫组化检测结果显示,胰腺癌的发生发展过程涉及多种基因的异常,是一个复杂的分子事件.     

胰腺癌的当代治疗

胰腺癌是消化系统常见肿瘤,在西欧和美国,胰腺癌位居恶性肿瘤死亡的第四位.在我国胰腺癌的发病率原来很低,近年来逐年增多,据上海、天津统计,胰腺癌的死亡率在15 a前占第10位,近年来升到第5位.几乎所有患者在诊断明确的同时已是晚期或有转移.胰腺癌的特点是病程短,进展快,死亡率高.文献报道该病五年生存率＜4%,中位或平均生存期4mo～6 mo[1].     

胰腺癌中nm23基因的表达

目的探讨nm23基因及蛋白在胰腺癌中的表达水平及其与转移的关系.方法用Northern blot 分析、原位杂交及免疫组织化学法分别对16例正常胰腺及29例胰腺癌中的nm23基因及蛋白的表达进行检测.结果 nm23在胰腺癌组织中的表达高于正常胰腺组织,无转移的胰腺癌组织nm23表达高于有转移的胰腺癌组织.结论 nm23与胰腺癌的转移和恶化密切相关.     

石蜡包埋胰腺癌组织中DPC4第5/6、7、9、10外显子基因改变的检测

目的研究石蜡包埋胰腺癌组织中DPC4第5/6、7、9、10外显子基因的改变.方法用聚合酶链反应单链构象多态性分析(PCR-SSCP)银染技术检测46例石蜡包埋胰腺癌组织及癌旁正常胰腺组织中DPC4基因的缺失和突变.结果 5例胰腺癌未扩增出DPC4条带,DPC4基因第5/6、7、9、10外显子的纯合性缺失率为10.9%(5/46);1例胰腺癌可见异常泳动带,基因突变率为2.2%(1/46).结合以前实验,DPC4基因所有外显子的纯合性缺失率为39.1%(18/46),基因突变率为23.9%(11/46),总改变率为58.7%(27/46).27例有基因改变的胰腺癌除1例外均为中、低分化腺癌,中、低分化组与高分化组之间的差异有显著性(P<0.01).结论 DPC4作为一种抑癌基因,其改变在胰腺癌的形成中可能起重要的作用.DPC4基因改变与胰腺癌细胞分化程度密切相关.     

运动相关蛋白-1对胰腺癌转移的调控作用

目的探讨运动相关蛋白-1(MRP-1)基因的表达与胰腺癌转移的关系.方法用原位杂交及免疫组织化学技术对7例正常胰腺组织及22例胰腺癌患者组织中MRP-1 mRNA和蛋白表达进行分析.结果原位杂交分析显示,原发性胰腺癌组织中有14例(63.6%)MRP-1阳性表达,其中10例为中～强阳性表达,明显高于正常组织(3/7,42.9%);在13例有转移的淋巴结及远处器官转移的原发性胰腺癌中,MRP-1 mRNA阳性表达显著低于9例无转移的原发性胰腺癌(P ＜ 0.05),免疫组织化学检测结果也与其一致.结论 MRP-1表达在胰腺癌的抗转移中具有一定的作用.     

胰腺癌细胞株基因组纯合子缺失的检测

目的 通过基因芯片筛查,以期发现胰腺癌新的纯合子缺失基因.方法 应用Affymetrix公司的GeneChip(R) Human Mapping 100K Mapping microarray芯片,检测AsPC-1、BxPC-3等共21株人类胰腺癌细胞株的纯合子缺失区域,筛选这些区域中可能与胰腺癌发生和发展有关的基因,用PCR扩增方法验证.结果 21株胰腺癌细胞共计发现60个纯合子缺失区域,以9p21.3出现的频率最高,达47.6%(10/21).其中25个区域无已知基因,其余区域含有1～4个候选基因.选择26个可能与胰腺癌发生发展有关的基因,行42个PCR反应,35个反应无条带出现,证实为纯合性缺失,芯片的准确度为83.3%.结论 应用高解析度的单核苷酸多态性基因芯片检测到胰腺癌新的纯合子缺失位点,为今后进一步发现新的胰腺癌抑癌基因提供线索.     

胰腺癌肿瘤基因标记物的研究现况

手术切除是胰腺癌惟一治愈手段,然而,85%的胰腺癌患者在就诊时已属晚期或发生远处转移,手术切除率较低,故胰腺癌的早期诊断具有非常重要的意义。胰腺癌患者血清中含有较多的肿瘤标记物,临床应用较多的是CA19-9、CA242及癌胚抗原(CEA)等。然而,现阶段血清学肿瘤标记物由于灵敏度及特异性尚未尽如人意,故临床急需有效的联合检测以提高其早期诊断率,改善整体治疗效果。     

892例胰腺癌的临床诊断与治疗分析

目的 探讨胰腺癌的临床特征,为胰腺癌的早期诊断提供依据.方法 回顾性分析解放军总医院和沈阳军区总医院1994年1月至2006年12月收治的892例连续性胰腺癌患者的临床资料.结果 首发症状以上腹痛为主,占57.5%,其次为黄疸、腹胀、腰背痛、消瘦等;次发症状以消瘦、黄疸常见.B超、CT、MRI诊断率分别为84.4%、91.5%、85.7%,漏诊率分别为12.7%、5.1%、8.2%,误诊率分别为3.0%、3.4%、6.1%.387例患者(43.4%)被误诊,平均误诊时间为(4±3.2)个月;常见的误诊疾病为胃病、胆系疾病、胰腺炎等,占84.8%.333例患者(37.3%)获得病理诊断.TNM分期:Ⅰ期98例(11.0%),Ⅱ期158例(17.7%),Ⅲ期94例(10.5%),Ⅳ期502例(56.3%),无法分期40例(4.5%).胰腺癌治疗:手术切除113例(12.7%);解除胆道梗阻者(包括手术内引流、ERCP胆道支架、PTCD、ENBD等)389例(43.6%);癌灶局部治疗者130例(14.6%);放疗113例(12.7%);化疗112例(12.6%);未进行任何治疗者206例(23.1%).结论 胰腺癌早期诊断和治疗仍较困难,误诊、漏诊发生率较高,对胰腺癌的临床研究和医疗卫生管理亟待加强.     

CEA、CA19-9、CA50水平与胰腺癌分期和肿瘤大小的关系

目的 探讨血清肿瘤标志物CEA、CA19-9、CA50水平与胰腺癌分期和肿瘤大小的关系.方法 分别测定35例胰腺癌和36例慢性胰腺炎患者血清CEA、CA19-9与CA50水平.外科手术和(或)病理学判定TNM分期和肿瘤大小,分析两者之间的关系.结果 血清CEA、CA19-9、CA50对胰腺癌诊断的敏感性分别为42%、82%、74%.特异性分别为75%、83%、77%.Ⅲ + Ⅳ期的CA19-9和CA50水平明显高于Ⅰ + Ⅱ期患者(P ＜ 0.05),CEA超过正常值者仅见于Ⅲ期以上胰腺癌患者.TS3 + TS4组的CEA、CA19-9、CA50水平比TS1 + TS2组明显增高(P ＜ 0.05).结论 胰腺癌血清CEA、CA19-9、CA50水平与胰腺癌分期和肿瘤大小有一定相关性,对手术前判断胰腺癌的可切除性有一定的参考价值.     

Smac/DIABLO和bcl-2在胰腺癌中的表达及意义

目的探讨线粒体促凋亡因子Smac/DIABLO和凋亡抑制基因bcl-2的表达情况及其与胰腺癌患者临床病理特征的关系。方法应用荧光实时定量RT-PCR及免疫组织化学技术分别检测正常胰腺组织、胰腺癌组织Smac/DIABLO及bcl-2的表达。结果 Smac/DIABLO mRNA在正常胰腺组织中的表达高于胰腺癌(P<0.05)。在胰腺癌组织中,Smac/DIABLO mRNA在Ⅰ～Ⅱ期患者癌组织标本中的表达明显高于Ⅲ～Ⅳ期(P<0.05)。正常胰腺组织中导管上皮细胞bcl-2染色阳性8例(80.00%)。48例胰腺癌bcl-2蛋白阳性表达35例(72.92%),低于正常胰腺组织阳性表达率(80.00%),但二者无统计学差异(P>0.05)。结论 Smac/DIABLO表达的降低与胰腺癌的发生、发展可能密切相关。     

Bmi-1在胰腺癌组织中的表达及其意义

目的 检测Bmi-1在胰腺癌组织中的表达,分析其与胰腺癌临床病理特征之间的关系.方法 实时荧光定量PCR法检测22例手术切除的新鲜胰腺癌组织及配对癌旁组织中Bmi-1 mRNA的表达;免疫组织化学法检测61例胰腺癌石蜡块标本中Bmi-1、p16蛋白的表达,并分析与临床病理指标的关系.结果 22例胰腺癌组织中Bmi-1 mRNA的相对表达量为0.314±0.040,与配对的癌旁组织0.143±0.056的表达量相差显著(P＜0.01).61例胰腺癌组织中36例(59.0%)Rmi-1蛋白表达阳性,34例(55.7%)p16蛋白表达缺失.胰腺癌组织Bmi-1的阳性表达与淋巴结转移相关(P=0.025);p16的表达缺失与淋巴结的转移(P=0.020)及肿瘤分化程度(P=0.018)相关;Bmi-1蛋白表达与p16蛋白表达呈负相关(P=0.033).结论 Bmi-1在胰腺癌组织中表达增加,它可能通过抑制p16表达调控胰腺癌的恶性生物学行为.     

胃癌的内科治疗进展

胃癌在世界范围内发病率男性占第二位,女性占第三位,我国早期胃癌占其手术治疗总数平均仅占10%左右,四分之三患者就诊时已属进展期胃癌,其术后5年生存率仅30%～40%左右.对失去手术切除机会、术后复发或转移患者应选择以下内科治疗①化疗化疗取得一些新进展,主要有术前、术中、术后化疗、腹腔化疗、腹腔温热低渗灌注化疗、腹腔免疫化疗、腹腔动脉插管化疗和超选择胃左、胃右、胃十二指肠动脉插管及栓塞化疗.静脉化疗EAP报道有效率可达52%.②放疗胃癌对放疗不甚敏感,尤其是印戒细胞癌和粘液腺癌,不过,未分化、低分化、管状腺癌和乳头状腺癌还是有一定的敏感性.放疗包括术前、术中、术后放疗,主要采用钴或直线加速器产生γ射线进行外照射,多提倡术前及术中放疗.③生物治疗代表性的有单细胞因子和多细胞因子疗法,IL-2/LAK疗法、TIL/IL-2疗法、单细胞抗体导向抗胃癌疗法、胃癌疫苗、主动性特异性免疫疗法及基因治疗.作者率先在国内(1991年)采用CDDP+TNFα腹腔内免疫化疗78例胃癌术后伴腹水患者,对腹水有效率为78.3%.④营养治疗胃癌患者营养不良,是造成患者死亡的主要原因之一,蛋白质是决定其存活的关键,静脉高营养及胃肠内营养支持可改善其生活质量.⑤中西医结合治疗作者等采用化疗与中药扶正抗癌冲剂治疗Ⅲ～Ⅳ期368例胃癌患者,术后五年生存率达73.8%,中位生存期为54.8mo±3.18mo,明显高于单纯化疗.通过中西医结合达到治疗胃癌的最佳疗效.     

凋亡抑制蛋白XIAP在胰腺癌组织中的表达及意义

目的 通过检测XIAP在胰腺癌中的表达,探讨其对胰腺癌发生、发展的可能作用及临床意义.方法 应用免疫组化SP法检测10例正常胰腺组织、14例胰腺良性病变和42例胰腺癌组织中XIAP的表达,并分析其与胰腺癌临床病理参数的关系.结果 XIAP在正常胰腺组织、胰腺良性病变及胰腺癌中均有表达.正常胰腺组织中,高表达占20%,良性病变中占21.4%,而胰腺癌中,高表达占59.5%,较前二者均有显著性差异(P ＜ 0.05).42例胰腺癌组织中,XIAP表达强度与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度、临床分期及淋巴结转移均无显著相关.结论 XIAP在正常胰腺组织、胰腺的良性病变及胰腺癌中均有表达,但在胰腺癌中呈高表达,表明XIAP在胰腺癌的发生中起到一定作用;XIAP的表达与胰腺癌各项临床病理参数无相关性.     

DPC4基因对人胰腺癌细胞JF305增殖的影响

目的研究肿瘤抑制基因DPC4(deleted in pancreatic carcinoma)对人胰腺癌细胞系JF305增殖能力的影响.方法将携带DPC4基因的真核表达载体转入JF305细胞内,经G418筛选获得DPC4稳定表达细胞株,免疫细胞化学和RT-PCR法检测转染前后细胞内DPC4的表达.用MTT法、细胞计数法和流式细胞仪测定细胞生长曲线、细胞周期、细胞贴壁率和细胞克隆形成率.比较转染前后细胞增殖能力的变化.结果未转染及转染空质粒的JF305细胞无DPC4的表达,转染pBK-CMV-DPC4的JF305细胞可检测到DPC4的表达,且其细胞增殖能力较前明显下降(P < 0.001),细胞倍增时间显著延长(由11.8 d延长至18 d),细胞贴壁率和克隆形成率均明显下降(P < 0.0001),G1期细胞所占比例明显增加(P < 0.0001),G2/M期细胞所占比例明显下降(P < 0.0001).结论无DPC4表达的胰腺癌细胞株JF305可转基因获得DPC4稳定表达,DPC4转基因后可抑制其增殖能力,细胞G1期延长,G2/M期缩短.DPC4有望成为胰腺癌基因治疗新的候选基因.     

外周血SARP2基因甲基化检测对胰腺癌的诊断价值

目的 探讨胰腺癌患者外周血DNA中SARP2基因甲基化对胰腺癌的诊断价值.方法 收集12例原发性胰腺癌、10例慢性胰腺炎和6例健康志愿者外周静脉血,提取血清游离DNA,经亚硫酸氢盐修饰后,行SARP2基因第一外显子区域的BSP扩增和测序.结果 12例胰腺癌外周血DNA、10例慢性胰腺炎外周血DNA中分别有10例(83%)和4例(40%)检测出明显的SARP2基因甲基化改变.胰腺癌患者外周血中SARP2基因第一外显子区CpG位点甲基化率为16.8%;慢性胰腺炎患者的甲基化率为10.4%,健康志愿者为2.2%.3组间的SARP2 CpG岛甲基化率差别非常显著(P<0.01或P<0.05).结论 胰腺癌患者外周血DNA中可以检测到SARP2甲基化改变,SARP2甲基化的检测对胰腺癌的诊断可能有潜在的临床价值.     

胰腺癌与癌基因及抑癌基因

胰腺癌临床起病隐匿,恶性程度高,早期诊断困难,出现临床症状时多属晚期。近年来尽管手术方法及辅助治疗得到改进和提高,但预后仍较差。随着现代分子生物学技术的发展,对胰腺癌的发生、侵袭和转移机制的研究已进入基因水平。胰腺癌的发生和其他恶性肿瘤一样是由多基因异常改变的结果,尤其是癌基因的激活和抑癌基因的失活,现就近年来与胰腺癌发生、发展密切相关的癌基因和抑癌基因做一回顾。     

胰腺细针穿刺活检组织K-ras突变检测的诊断价值

目的 检测内镜超声引导下细针穿刺穿刺物中K-ras基因的突变,探讨其对胰腺癌早期诊断的价值.方法 收集27例胰腺癌、9例其他恶性肿瘤及14例良性胰腺占位患者的细针穿刺物,应用肽核酸(PNA)钳制PCR法检测K-ras突变.结果 胰腺癌患者K-ras突变阳性率为88.9%,其他恶性肿瘤为44.4%,良性胰腺占位为35.7%,胰腺癌与其他两种病变差异显著(P=0.013,P=0.001).胰腺癌与其他恶性肿瘤比较,K-ras基因突变的敏感性、特异性、阳性预测率、阴性预测率、准确率分别为88.9%、55.6%、85.7%、62.5%、80.6%,差异显著(P=0.013);与良性胰腺占位病变比较,分别为88.9%、64.3%、82.8%、75.0%、80.5%,差异亦显著(P=0.001).联合穿刺物细胞学检查和K-ras基因突变检测,胰腺癌的阳性率高达96.3%.结论 胰腺组织穿刺物的K-ras基因突变检测可提高胰腺癌诊断的阳性率.     

Bax、Bcl-2及FHIT在胰腺癌中的表达及意义

目的研究胰腺癌组织及细胞中Bax/Bcl-2蛋白和FHIT mRNA的表达,探讨FHIT与凋亡相关因子在胰腺癌中的关系.方法应用ABC免疫组织化学方法检测胰腺癌细胞和组织标本中Bax与Bcl-2蛋白,RT-PCR检测其中FHIT mRNA的表达.结果 38例胰腺癌中Bax蛋白阳性17例(45%),Bcl-2蛋白阳性表达22例(58%),FHIT mRNA异常表达为21例(56%).转染有外源性FHIT的1990细胞(1990 pFHIT)Bax表达阳性率有升高,Bcl-2/Bax比值下降.结论 Bax、Bcl-2及FHIT都通过调控凋亡参与胰腺癌的病理过程.FHIT诱导凋亡可能与Bax上调表达有关.     

胰腺癌患者血浆k-ras基因与肿瘤标志物联合检测及其意义

目的 :了解胰腺癌患者血浆中肿瘤标志物水平和k ras基因突变情况 ,评价基因突变与肿瘤标志物联合检测对胰腺癌患者的诊断价值。方法 :收集经手术或病理确诊为胰腺恶性疾病患者 2 1例 ,ELISA检测血浆CA19 9、CA2 42、CA5 0、CEA水平 ,PCR RFLP检测k ras基因突变 ,并与 11例胰腺良性疾病患者对照。结果 :胰腺癌患者血浆中k ras基因突变率 73.7%,胰腺良性疾病k ras基因无突变。k ras基因突变检测的敏感性与特异性分别为 6 1.9%和10 0 %,血浆k ras、CA19 9、CA2 42联合检测的敏感性和特异性分别为 85 .7%和 71.9%。结论 :联合检测血浆中k ras基因与肿瘤标志物可提高胰腺癌诊断的敏感性 ,对胰腺癌筛查、诊断与鉴别诊断有一定的临床意义。