Effects of cadmium on hepatocellular DNA damage, proto-oncogene expression and apoptosis in rats

Objective To study the effects of cadmium on hepatocellular DNA damage,expression of proto-oncogenes c-myc,c-fos,and c-jun as well as apoptosis in rats. Methods Cadmium chloride at the doses of 5,10,and 20 μmol/kg was given to rats by i.p. and there were 5 male SD rats in each group. Hepatocellular DNA damage was measured by single cell gel electrophoresis(or comet assay),while expression of proto-oncogenes c-myc,c-fos,and c-jun in rat hepatocytes were measured by Northern dot hybridization. C-Myc,c-Fos,and c-Jun were detected with immuno-histochemical method. Hepatocellular apoptosis was determined by TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick End Labelling) and flow cytometry. Results At the doses of 5,10,and 20 μmol/kg,cadmium chloride induced DNA damage in rat hepatocytes and the rates of comet cells were 50.20%,88.40%,and 93.80%,respectively. Results also showed an obvious dose-response relationship between the rates of comet cells and the dose of cadmium chloride(r =0.9172,P<0.01). Cadmium chloride at the doses of 5,10,and 20 μmol/kg induced expression of proto-oncogenes c-myc,c-fos,and c-jun. The positive brown-yellow signal for c-myc,c-fos,and c-jun was mainly located in the cytoplasm of hepatocytes with immunohistochemical method. TUNEL-positive cells were detected in cadmium-treated rat livers. Apoptotic rates(%) of cadmium-treated liver cells at the doses of 5,10,and 20 μmol/kg were(17.24 ±2.98),(20.58±1.35),and(24.06±1.77) respectively,being significantly higher than those in the control. The results also displayed an obvious dose-response relationship between apoptotic rates and the dose of cadmium chloride(r=0.8619,P<0.05). Conclusion Cadmium at 5-20 μmol/kg can induce hepatocellular DNA damage,expression of proto-oncogenes c-myc,c-fos,and c-jun as well as apoptosis in rats.     

丹龙醒脑方对脑缺血再灌注大鼠半暗带区神经细胞凋亡与即早基因表达的影响

目的：探讨丹龙醒脑方对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮质半暗带（ischemic penumbya, IP）区神经细胞凋亡与即早基因c-fos、c-jun、c-myc表达的关系。方法将48只雄性SD大鼠随机均分为假手术组,脑缺血再灌注（模型）组,尼莫地平组及丹龙醒脑方小、中、大剂量组（丹小组、丹中组、丹大组）。后五组用线栓法制备大脑中动脉栓塞再灌注（MCAO/R）模型,再灌注24 h进行神经功能缺损评分后,取缺血侧大脑皮质,采用原位末端标记法（TUNEL）检测凋亡的神经细胞,免疫组化法分别检测c-fos、c-jun、c-myc蛋白。结果与假手术组比较,其余各组的神经功能缺损评分、神经细胞凋亡指数（AI）及c-fos、c-jun、c-myc蛋白的积分光密度（IOD）值均升高,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,尼莫地平组和丹龙醒脑方各剂量组的神经功能缺损评分、神经细胞AI及c-fos、c-jun、c-myc蛋白的IOD值均减小,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;尼莫地平组、丹龙醒脑方各剂量组组间比较,各指标差异均无统计学意义（P>0.05）。结论丹龙醒脑方能显著降低脑缺血后神经功能缺损和减少神经细胞凋亡,其机制可能与下调即早基因c-fos、c-jun和c-myc的表达有关。     

大鼠脑损伤时神经细胞c-fos 、c-jun和c-myc基因表达变化

目的观察大鼠脑损伤后不同时间皮质神经细胞早期快反应基因c-fos 、c-jun和c-myc表达变化.方法应用Northern杂交、原位杂交和免疫组织化学方法检测皮质神经细胞中c-fos、c-jun和c-myc的表达.结果脑损伤后15 min,伤侧皮质神经细胞出现上述3种基因mRNA的表达,随时间的延长,表达逐渐增加,于伤后3 h达高峰并持续至伤后24 h,伤后72 h恢复至对照水平.c-fos和c-jun蛋白表达亦于伤后15 min出现,c-myc蛋白表达于伤后30 min出现,并均于伤后3 h达高峰,持续至伤后6 h,伤后24 h表达消失.结论脑损伤后上述3种基因表达特点与其它脑损害不同,可能与损伤机制和继发性神经细胞损害有关.     

c-fos、c-jun、c-myc蛋白表达与垂体腺瘤侵袭性的研究

目的　同时检测c fos、c jun、c myc基因蛋白在垂体腺瘤中表达及特点 ,探讨它们与肿瘤侵袭性的关系。方法　 6 0例垂体腺瘤分为侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤两组 ,采用免疫组化EnVision法检测c fos、c jun、c myc基因蛋白。结果　c fos、c jun在侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,c myc在侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达阳性率高于非侵袭性垂体腺瘤 ,有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;c fos、c jun、c myc三者同时在侵袭性垂体腺瘤中的蛋白表达阳性率高于非侵袭性垂体腺瘤 ,有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论　c myc蛋白在侵袭性垂体腺瘤中高表达 ,可能影响其生长及生物学行为 ,c myc可做为衡量垂体腺瘤侵袭性的一个参考指标。     

自体静脉移植术后血管平滑肌细胞内c-fos、c-myc和c-jun的表达

目的探讨自体静脉移植术后血管平滑肌细胞(VSMC)早期应答基因的变化。方法利用显微外科技术制作64只大鼠颈动脉自体静脉移植模型,采用免疫组织化学染色方法观察VSMC增殖与c-mycc、-fosc、-jun的变化。结果手术后2 h即可出现c-myc、c-fos、c-jun阳性表达,且c-fosc、-jun于移植后6 h达到高峰,c-myc于手术后1周达到高峰。结论c-mycc、-fosc、-jun表达状态与VSMC的增殖状态密切相关,对VSMC的增殖起到调控作用,尤其是始动阶段。     

Ｓtat3磷酸化与c—fos和c—jun蛋白表达在肝细胞癌发生中的作用

Expression of phosphorylated Stat3 (p-Stat3), c-fos and c-jun proteins was detected by immunohistochemical technique in 55 hepatocellular carcinomas (HCC) and their surrounding liver tissues. The results showed that the positive rates and signal intensity of p-Stat3, c-fos and c-jun protein in HCCs were significantly higher than those in pericarcinomatous tissues. The expressive intensity of c-fos and c-jun proteins was positively related to p-Stat3 expression in HCCs, whereas the positive correlation of expressive intensity was only observed between c-jun protein and p-Stat3 in pericarcinomatous tissues. The data suggest that the phosphorylation of Stat3 may be an early event in hepatocarcinogenesis; the overexpression of p-Stat3 protein, which activates c-fos and c-jun genes, may contribute to malignant transformation of hepatocytes; hepatocytes which expressed p-Stat3, c-fos or c-jun proteins may be potentially malignant pre-cancer cells in pericarcinomatous liver tissues.     

硒锌对大鼠肾脏氧化应激、细胞凋亡和增殖周期的影响

将亚硒酸钠和硫酸锌配伍制备低剂量 (0 .1mg/ kg体重 Na2 Se O3 和 14.8mg/ kg体重 Zn SO4· 7H2 O)和高剂量 (0 .2 mg/ kg体重 Na2 Se O3 和 2 9.6 mg/ kg体重 Zn SO4· 7H2 O)硒锌制剂 ,通过灌胃方式给予 Wistar大鼠 ,6个月后用 TUNEL 法和流式细胞术检测大鼠肾脏细胞凋亡和细胞增殖周期的变化。结果表明 ,低剂量和高剂量硒锌均能明显诱导大鼠肾脏细胞凋亡 ,低剂量硒锌对细胞增殖周期不产生明显影响 ,而高剂量硒锌使 G2 / M期细胞减少 ,DNA相对含量下降。研究提示 :一定剂量硒锌能有限改善机体抗氧化能力 ,但仍可诱导肾脏细胞凋亡并影响 DNA合成 ,使细胞滞留于 S期 ,改变细胞增殖周期     

Stat3磷酸化与c-fos和c-jun蛋白表达在肝细胞癌发生中的作用

利用SP免疫组织化学技术检测 5 5例肝细胞癌 (HCC)及其癌旁组织中p Stat3(Tyr70 5 ) ,c fos和c jun蛋白的表达。结果显示 :HCC中p Stat3,c fos和c jun蛋白阳性率和阳性强度均高于癌旁组织 (P <0 .0 1) ,且p Stat3与c fos和c jun蛋白表达强度均呈明显正相关 ,而在癌旁组织中p Stat3仅与c jun蛋白表达相关 ,提示Stat3蛋白的磷酸化可能是HCC发生的早期事件 ,并通过激活c jun和c fos基因使肝细胞恶性转化 ;癌旁肝组织中 ,p Stat3,c jun或c fos呈阳性表达的肝细胞可能是一种具有恶性潜能的癌前细胞群。     

异丙酚麻醉对大鼠海马各区c-fos、c-jun基因及蛋白表达的影响

目的观察不同浓度异丙酚静脉全身麻醉对大鼠海马各区c-fos、c-jun基因及蛋白表达的影响。方法 40只Wistar大鼠随机分成4组:空白对照组(A组)、小剂量异丙酚组(50 mg/kg,B组)、中等剂量异丙酚组(100 mg/kg,C组)和大剂量异丙酚组(150 mg/kg,D组)。采用反转录-聚合酶联反应和蛋白印迹方法检测大鼠海马各区c-fos、c-jun基因及蛋白的表达水平。结果 A组大鼠海马CA1区和DG区c-fos、c-jun基因表达水平为(0.32±0.06,0.27±0.05;0.37±0.07,0.28±0.07),c-fos、c-jun蛋白表达水平为(0.47±0.12,0.41±0.10;0.51±0.14,0.44±0.09);B组大鼠海马CA1区和DG区c-fos、c-jun基因表达水平为(0.54±0.11,0.41±0.10;0.61±0.12,0.44±0.12),c-fos、c-jun蛋白表达水平为(0.75±0.24,0.72±0.21;0.82±0.27,0.68±0.17);C组大鼠海马CA1区和DG区c-fos、c-jun基因表达水平为(0.87±0.23,0.75±0.18;0.92±0.27,0.72±0.21),c-fos、c-jun蛋白表达水平为(1.07±0.37,1.01±0.32;1.12±0.38,0.97±0.25);D组大鼠海马CA1区和DG区c-fos、c-jun基因表达水平为(1.22±0.30,0.96±0.24;1.31±0.34,0.95±0.28),c-fos、c-jun蛋白表达水平为(1.43±0.41,1.38±0.39;1.46±0.41,1.31±0.33)。大鼠海马CA1区和DG区c-fos、c-jun基因和蛋白的表达水平随着异丙酚麻醉药物作用浓度的增加显著性升高(P<0.05);海马CA3区未发现异丙酚对c-fos、c-jun基因和蛋白表达水平的影响。结论异丙酚可能通过影响c-fos、c-jun基因及蛋白的表达,从而发挥抑制中枢神经系统的作用,且此作用部位存在明显的差异性。     

自发性高血压大鼠颈动脉血管平滑肌中抑癌基因P53和原癌基因c-jun、c-fos、c-myc mRNA表达的研究

目的探讨自发性高血压大鼠颈动脉中抑癌基因P53和原癌基因c-jun、c-fos、c-myc mRNA的表达.方法用逆转录聚合酶链式反应检测两种基因的表达水平.正常雄性大鼠作为对照组.结果 SHR颈动脉中,抑癌基因P53和原癌基因c-jun、c-fos、c-myc均有高表达,较WKY差异有显著性(P<0.05).结论自发性高血压大鼠颈动脉组织中抑癌基因P53和原癌基因c-jun、c-fos、c-myc均有高表达,癌基因的活化可能与自发性高血压大鼠颈动脉血管重构有关.     

Studies on hepatocyte apoptosis,proliferation and oncogene c-fos expression in carbon tetrachloride-induced cirrhotic rat liver

Ａｐｏｐｔｏｓｉｓｈａｓｂｅｅｎｉｎｔｅｎｓｉｖｅｌｙｓｔｕｄｉｅｄｉｎｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ,ｄａｔａａｂｏｕｔｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｌｉｖｅｒｃｉｒｈｏ－ｓｉｓａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｓ...     

硒对氟诱导的大鼠口腔粘膜细胞和肝细胞DNA损伤的作用

目的 :研究硒对氟中毒诱导的大鼠口腔粘膜细胞和肝细胞DNA损伤的作用。方法 :选用雄性SD大鼠 ,氟中毒组大鼠饮用含 15 0mg·L-1氟化钠 (NaF)的蒸馏水溶液 ,硒氟联合作用组大鼠饮用含 15 0mg·L-1氟化钠(NaF)和 2mg·L-1亚硒酸钠 (Na2 SeO3 )的蒸馏水溶液 ,染毒 4周 ,用单细胞凝胶电泳检测细胞DNA损伤。结果 :氟中毒能明显诱导大鼠口腔粘膜细胞和肝细胞的DNA损伤 ,总损伤细胞百分率分别为 5 0 .2 0 %和 4 4 .80 % ,而硒对氟造成的口腔粘膜细胞和肝细胞DNA损伤具有明显的拮抗作用 ,总损伤细胞百分率分别为 14 .6 0 %和 12 .6 0 %。结论 :硒对氟中毒引起的大鼠口腔粘膜细胞和肝细胞DNA损伤具有明显的拮抗作用。     

肝脏缺血再灌注对即早基因c-fos、c-jun表达影响的研究

目的研究大鼠肝脏缺血再灌注中即早基因(c-fos,c-jun)表达的变化,以探讨其在细胞增殖和细胞凋亡中作用.方法选用大鼠原位肝部分缺血再灌注模型,缺血60min,于复灌后0、0.5、1、2、4、8、12和24h取材,RT-PCR检测不同时间点c-fos、c-jun mRNA的表达;应用流式细胞仪检测Ki-67抗原和Sub-G1,分别作为细胞增殖与细胞凋亡(Ap指数)的定量分析指标.结果血清ALT、AST随着复流时间的延长逐渐增高,在4 h左右达最高峰,而后渐下降,至24 h达到基线水平;Ki67在复灌后1 h开始增高,持续到24 h;在复灌后肝细胞凋亡率Ap指数也逐渐增高,峰值于复灌后12 h出现;再灌注后0.5～2.0 hc-fos和c-jun的表达均增高,1 h达高峰;4h后只有c-jun有持续较高的表达,c-fos的表达开始下降.结论缺血再灌注过程中,肝细胞的凋亡与增殖是同时存在的.c-fos和c-jun在再灌注早期和后期两种不同的表达模式提示:c-fos和c-jun共表达可能与组织修复有关,而c-jun的持续高表达可能引起细胞的凋亡.     

食管癌中癌基因产物c-fos,c-jun的表达及意义

目的探讨癌基因c-fos、c-jun表达产物与食管癌的发生、发展及预后的关系。方法用免疫组化SABC法,以兔抗c-fos、c-jun抗体标记90例食管癌和30例食管上皮不典型增生。观察其分化程度和组织学类型,食管癌的表达及阳性率比较。结果c-fos、c-jun阳性反应见于不典型增生上皮和食管癌组织,不典型增生上皮c-fos、c-jun阳性率分别为70.0%和50.0%,癌组织为58.8%和48.9%;食管癌表达的阳性率与癌组织分化程度和组织学类型有关（P〈0.05）。结论提示c-fos、c-jun过量表达可发生在不典型增生的食管上皮和食管癌组织。     

不同剂量法舒地尔对压力负荷心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响

目的从细胞凋亡角度探讨不同剂量法舒地尔(fasudil)对升主动脉缩窄压力超负荷心力衰竭大鼠的影响及作用机制。方法采用升主动脉缩窄术建立大鼠心力衰竭模型。观察不同剂量fasudil治疗心力衰竭时对心肌细胞凋亡指数(AI)、bcl-2、c-myc蛋白表达水平的影响。结果fasudil干预心功能不全可以使心肌细胞凋亡指数降低,使bcl-2蛋白表达水平上调,c-myc蛋白表达水平降低,且剂量大时效果更明显。结论fasudil能有效减少心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡指数,使bcl-2蛋白表达水平上调,c-myc蛋白表达水平降低,防治心力衰竭,这是其治疗心力衰竭的重要机制之一,且剂量大时更明显。     

姜黄素诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡以及对c-myc、caspase-3表达的影响

目的 探讨姜黄素诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡及其对C-myc、Caspase-3表达的影响。方法 姜黄素处理A375细胞，MTT法检测细胞的牛长活性，应用倒置显微镜和透射电镜进行形态学观察．采用Annexin V／PI双染法和DAN片段化分析检测细胞凋亡，SABC免疫组化法和原位杂交检测细胞内c-myc、Caspase-3表达水平：结果姜黄素能抑制A375细胞增殖，并呈剂量和时间依赖性：经30μmol／L姜黄素处理A375细胞48h，细胞旱现凋亡形态学改变。DAN片段化分析可见到明显的DNA梯带形成；流式细胞仪定量检测出20μmol／L以上浓度姜黄素诱导细胞凋亡的发生率较对照组有显著性差异。c-myc表达水平减少，而Caspase-3表达增加。结论 姜黄素能抑制A375细胞增殖和诱导其凋亡，c-myc和Caspase一3基因可能参与凋亡过程。     

甲醛致雌性小鼠卵巢细胞DNA损伤及Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨甲醛致小鼠卵巢细胞DNA损伤效应及对Bcl-2和Bax表达的影响与其相关作用的机制。方法采用单细胞凝胶电泳方法,检测甲醛染毒(剂量分别为0.3、1.2、4.8 mg/kg)后小鼠卵巢细胞DNA损伤情况,采用免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax的表达。结果甲醛致卵巢组织结构损伤,染毒浓度越高,病理损害越明显;卵巢细胞Bcl-2下调,Bax表达上调,并有量-效关系,甲醛染毒各组Bcl-2和Bax表达的相对灰度值较对照组均有差异(P<0.01);试剂量范围内,小鼠卵巢细胞彗星率随甲醛染毒剂量增加而增高(P<0.05),其彗星尾长随甲醛染毒剂量增加而缩短,尤其高甲醛染毒组更短(P<0.01)。结论甲醛能致卵巢细胞DNA损伤效应,损伤小鼠卵巢的结构,使卵巢细胞凋亡增加,Bcl-2表达下调、Bax表达上调;Bcl-2和Bax表达的变化可能是诱导凋亡的机制。     

Inhibitory effects of selenium on telomerase activity and hTERT expression in cadmium-transformed 16HBE cells

Objective To investigate the effects of sodium selenite on telomerase activity and expression of hTERT mRNA in cadmium-transformed 16HBE cells.Methods Telomerase activity and expression of genes were measured after cultured cadmium-transformed 16HBE cells were exposed to sodium selenite at different doses(0.625,1.25,2.50,5.00 μmol/L)for 24 hours.Results Selenium decreased telomerase activity in cadmium-transformed 16HBE cells.There existed an obvious dose-effect relationship between the selenium concentration and these changes.The expression of hTERT and c-myc mRNA also decreased but the expression of mad1 mRNA increased after exposure to selenium for 24 hours.No difference was found in expression of hTRF1 and hTRF2 mRNA after incubated with sodium selenite for 24 hours,compared with control group.Conclusion Selenium inhibits telomerase activity by decreasing hTERT and c-myc mRNA expression and increasing mad1 mRNA expression in cadmium-transformed 16HBE cells and selenium concentration is significantly correlated with these changes.