应用亲和层析分离纯化人小脑乙酰胆碱酯酶的初步研究

目的分离纯化人小脑乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）。材料和方法采用ＣｏｎＡ和民Ｂ１０亲和层析法纯化人小脑ＡＣｈＥ。以纯化的人小脑ＡＣｈＥ为免疫原，免疫６只ＢＡＬＢ／ｃ小鼠制备小鼠抗人小脑ＡＣｈＥ抗血清，并检测其与电鳐ＡＣｈＥ和人红细胞膜ＡＣｈＥ。Ｅ的交叉免疫反应性。结果ＳＤＳ－ＰＡＧＥ还原状态下呈一条主带，相对分子质量为６７０００，比活性为３７３Ｕ／ｍｇ。结论免疫亲和层析法操作简单，可快速纯化人小脑ＡＣｈＥ。     

单克隆抗体F36/22分离和检测小鼠移植性乳腺肿瘤抗原的研究

作者应用免疫印迹法检测到单克隆抗体F36/22能识别小鼠移植性乳腺癌抗原.用SepharoseCL-4BA单克隆抗体F36/22免疫亲和层析法分离纯化了BALB/c小鼠移植性乳腺肿瘤抗原,固相放射免疫法检测纯化188.4倍,SDS-PAGE及免疫印迹检测其分子量为60kd。     

小鼠H-2抗原的提取与纯化

为建立一种简易获取较大量纯化小鼠组织相容性抗原（Ｈ－２抗原）的方法，采用去污剂溶解小鼠脾细胞膜，单克隆抗体亲和层析法纯化获取小鼠Ｈ－２抗原。结果：电泳显示纯化物为４５ｋｄ（重链）和１２ｋｄ（轻链）两条带，且该纯化物具有明显的免疫学及生物学活性（效价１６４０）。结论：这种亲和层析法纯化的组织相容性抗原，可用于器官移植研究及组织相容性抗原的免疫功能研究。     

抗钙调素单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备及鉴定抗钙调素单克隆抗体。方法 以碳化二亚胺法将钙调素—卵清蛋白偶联物作为免疫原，采用常规免疫方法免疫BALB／C小鼠，杂交瘤技术制备抗牛脑钙调素单克隆抗体。酶联免疫吸附法(ELISA)检测，应用硫酸铵盐析法和离子交换层析法进行抗体纯化。分别采用免疫印迹、免疫酶斑点法鉴定抗钙调素单克隆抗体的性质。结果 脾细胞与骨髓瘤细胞的融合率为85％。阳性克隆率为0．35％，获得两株动物钙调素单克隆抗体，抗体效价为1：1000，对钙调素有较强的专一性。结论 此研究制备出了高特异性、高亲和力及高效价的抗牛脑钙调素单克隆抗体。     

用McAb和病人血清对不同发育阶段曼氏血吸虫糖蛋白活性的检测

曼氏血吸虫尾蚴糖蛋白用刀豆球蛋白A亲和层析法进行提纯,用此纯化的糖蛋白抗原免疫C_(57) BL/C纯种小鼠,再将X 63-Ag8-653系骨髓瘤细胞与免疫鼠脾细胞融合。用同位     

用羟基磷灰石柱层析纯化抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体(简报)

本文比较了用羟基磷灰石柱层析和DEAE-52纤维素两种方法从小鼠腹水液中纯化抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的结果。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱,紫外分光光度定量分析及放射免疫分析法检测抗体免疫活性的结果表明:(1)羟基磷灰石柱层析法得率高,未见有其它杂蛋白污染,纯化前后的免疫活     

实验性重症肌无力小鼠模型的研究

目的:采用纯化乙酰胆碱受体(acetylcholine receptors, AChR)免疫小鼠建立实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis, EAMG)动物模型.方法:以亲和层析法从电鳐电器官提取和纯化AChR,并用其免疫接种BALB/C和C57BL/6小鼠,观察接种动物的临床症状、电生理变化以及血清AChR抗体水平的情况.结果:与对照小鼠相比,发病小鼠出现临床肌无力症状,重复神经电刺激(repetitive nerve stimulation, RNS)显示动作电位波幅衰减,血清AChR抗体水平升高.结论:用电鳐电器官提纯TAChR作为免疫原,成功诱导产生EAMG小鼠模型,C57BL/6小鼠较BALB/C小鼠易感.     

组织因子单克隆抗体及对照抗体的制备、纯化和鉴定

目的纯化组织因子(TF)单克隆抗体及对照抗体。方法给小鼠腹腔注射杂交瘤8A3和9E10细胞,产生的腹水应用凝胶过滤层析法和Protein A亲和层析法纯化组织因子抗体及对照抗体,并用SDS-PAGE和BCA法检测纯化后单克隆抗体的纯度及蛋白浓度。结果单抗纯化后电泳重链和轻链都呈一条带,TF抗体和对照抗体的最终浓度分别为0.7726mg/ml和0.8592mg/ml。结论应用层析法和凝胶过滤和Protein A亲和分离层析法纯化抗体,能够得到纯度较高的单克隆抗体。     

人骨肉瘤OS-732单克隆抗体的制备及纯化

目的制备、纯化抗人骨肉瘤OS-732单克隆抗体。方法通过杂交瘤细胞腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水,ProteinA-Sepharose CL-4B亲和层析法纯化单抗,SDS-PAGE、免疫组化及ELISA检测该单抗的性质。结果SDS-PAGE鉴定单抗纯度达到93%,ELISA检测抗体免疫活性效价为1×10-7。结论制备、纯化了具有较高纯度及生物活性的的抗骨肉瘤OS-732单克隆抗体,为下一步骨肉瘤靶向治疗打下了基础。     

Slit2-Robo1信号阻断抗体及对照抗体的制备、纯化和鉴定

目的纯化Slit2-Robo1信号阻断抗体(R5抗体)及对照抗体。方法给小鼠腹腔注射杂交瘤3B2.3和CRL-1608细胞,产生的腹水应用凝胶过滤层析法和Protein A亲和层析法纯化R5抗体及对照抗体,并用SDS-PAGE和BCA法检测纯化后单克隆抗体的纯度及浓度。结果单抗纯化后电泳重链和轻链都呈一条带,R5抗体及对照抗体的质量浓度分别为0.986 mg/mL和3.57 mg/mL。结论应用层析法和Protein A亲和层析法纯化抗体,能够得到纯度较高的单克隆抗体。     

狂犬病免疫学诊断实验研究(摘要)

狂犬病免疫学诊断方法目前国内尚未见有文献报导。本研究采用狂犬病标准攻击毒cvs-7株感染小鼠,根据Sokol法提取和纯化狂犬病毒抗原。纯化抗原免疫山羊获得抗血清,经饱和硫酸铵沉淀法和亲和层析法提取和纯     

纯化小鼠腹水中抗富含组氨酸糖蛋白单克隆抗体方法的比较

用羟基磷灰石柱层析法，辛醚－硫酸铵沉淀法以及辛酸－硫酸按沉淀法加羟基磷灰石柱层析法从小鼠腹水中提取纯化抗富含组氨酸糖蛋白单克隆抗体。结果表明，羟基磷灰石柱层析法简便，快速，其单克隆抗体产量和纯度均高，适合大多数实验室采用。     

人红细胞膜胆碱酯酶的分离、纯化及其单克隆抗体的制备

胆碱酯酶(AChE)分为真性胆碱酯酶(EC3·1·1·7)和假性胆碱酯酶(EC3·1·1·8)。两者在底物专一性、组织分布、生理功能等方面皆不相同。我们从人红细胞膜上提取、分离和部分纯化了 AChE 作为抗原,免疫小鼠,经细胞融合,筛选出了几株分泌抗AChE 的杂交瘤株,拟建立人乙酰胆碱酯酶的免疫测定法。现总结如下。     

纯化小鼠腹水中抗富含组氨酸糖蛋白单克隆抗体方法的比较

用羟基磷灰石柱怪析法，辛酸－硫酸铵沉淀法以及辛酸－硫酸铵沉淀法加羟基磷灰石桩层析法从小鼠腹水中提取纯化抗富含组氨酸糖蛋白单克隆抗体。结果表明，羟基磷灰石柱层析法简便、快速、其单克隆体产量和纯度均高，适合大多数实验室采用。     

重组小鼠Fas配体在大肠杆菌中的表达和纯化

获得纯化的由大肠杆菌表达的小鼠Ｆａｓ配体。方法：以质粒ｐＥＴ－１５ｂ为载体,在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）表达小鼠的ＦａｓＬ,用多心螯合亲和层析法纯化。结果：转化菌中,重组质粒是稳定的,异丙基－β－Ｄ硫代半乳糖苷可诱导小鼠ＦａｓＬ的表达,金属螯合亲和层析法可以初步纯化此蛋白。     

细胞型朊蛋白受体或结合蛋白在不同发育阶段小鼠脑内的分布

目的：表达和纯化以朊蛋白（PrP）胞外部分与人IgGFc段构建的融合蛋白PrPFc，并以此为配体蛋白，定位细胞朊蛋白（PrPc）的受体在小鼠不同发育阶段脑内的分布。方法：收集表达PrPFc的细胞培养液，通过蛋白A－琼胆糖柱亲和层析纯化，以PrPFc纯化蛋白在新鲜弱固定的组织切片反应，免疫组织化学法显示受全在脑内分布模式，结果：在正常成年小鼠脑内，细胞型朊蛋白的受体分布以位于大脑皮层（包括新歧层和旧皮层）和纹状体为最多，其次为丘脑，下丘脑及脑干，再次为海马的CA区和齿状回及小脑的蒲肯野和颗粒细胞层，嗅球部位也有一些细胞呈阳性染色；出生后14d小鼠脑出朊蛋白受体与成年动物发布模型式及染色强度皆类似，而出生当日及7d后受体分布与14d和成年动物相似，但染色强度明显较弱，结论：朊蛋白受体（或结合蛋白）在脑组织有广泛分布，朊蛋白与其受体在脑组织中分布相似。     

重组小鼠Fas配体在大肠杆菌中的表达和纯化

目的:获得纯化的由大肠杆菌表达的小鼠Fas配体(Fas ligand, FasL ).方法:以质粒pET-15b为载体,在大肠杆菌BL21( DE3)中表达小鼠的FasL,用金属螯合亲和层析法纯化.结果:转化菌中,重组质粒是稳定的,异丙基-β-D硫代半乳糖苷可诱导小鼠FasL的表达,金属螯合亲和层析法可以初步纯化此蛋白.结论:在大肠杆菌中表达出小鼠的FasL,并得到初步纯化.     

肺癌相关蛋白N35的纯化及鉴定

目的利用免疫亲和层析技术用自行制备的抗人肺癌单克隆抗体N35纯化其相应的肺癌相关抗原N35蛋白并对其进行鉴定。方法培养P35杂交瘤细胞,收集培养上清,利用Protein A-Sepharose CL-4B亲和层析法纯化单抗N35;用纯化得到的单抗与溴化氰活化的Protein A-Sepharose CL-4B制备免疫亲和柱;再将肺腺癌GLC-82细胞的裂解液通过此免疫亲和柱,纯化肺癌相关抗原N35;最后,对纯化得到的N35蛋白进行Western blot鉴定。结果应用Protein A-Sepharose CL-4B亲和层析法纯化得到纯度较高的单抗N35蛋白;应用溴化氰活化的Protein A-SepharoseCL-4B免疫亲和层析法纯化得到相对分子质量80 000的肺癌相关蛋白N35。结论纯化得到的肺癌相关蛋白N35是一种新的肿瘤相关抗原,可为肺癌的生物治疗提供新的靶点。     

制备抗人血清白蛋白抗体的简单高效方法

以简单的酸乙醇法纯化人血清白蛋白(HSA)作为抗原,采用一个高效、经济、快速的免疫方案免疫家兔,得到高效价的抗血清。最后利用ProteinA-Sepharose 4B亲和层析法纯化IgG抗体。     

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及其特性研究

本文采用亲和层析法纯化的甲胎蛋白（ＡＦＰ）抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞系融合，获三株分泌抗人ＡＦＰ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞系。用ＥＬＩＳＡ阻断试验和夹心ＥＬＩＳＡ试验作特异性鉴定，杂交瘤细胞株染色体的众数为１０４条，三株细胞系ＭｃＡｂ均属小鼠ＩｇＧ１型。经体外连续传代３个月及冻存一年复苏后均能持续分泌抗ＡＦＰ抗体。