结缔组织生长因子对石英粉尘诱导人支气管上皮细胞释放IL-17A的影响

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)对石英粉尘诱导人支气管上皮细胞(16HBE)表达白介素17A(IL-17A)水平的影响。方法采用0、12.5、25、50、100μg/ml石英粉尘染毒人支气管上皮细胞(16HBE)24、48 h,采用CCK-8法测定细胞存活率,以荧光定量PCR方法检测细胞内CTGF mRNA相对表达水平;用CTGF siRNA干扰16HBE细胞12 h后,加入0、25、50μg/ml石英粉尘染毒48 h,并设同样剂量石英粉尘染毒的16HBE细胞为对照组,收集细胞上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中IL-17A的含量。结果与24 h染尘组比较,石英粉尘染毒16HBE细胞48 h后细胞毒性作用更明显,其细胞存活率随石英粉尘浓度的增加逐渐降低(P0.05);同时细胞内CTGF mRNA相对表达水平和细胞分泌IL-17A的水平均显著升高(P0.05),且呈剂量-效应关系,50μg/ml染毒组细胞内表达CTGF mRNA和分泌IL-17A的水平达到最高;与同样剂量石英粉尘染毒的16HBE细胞相比,25、50μg/ml石英粉尘诱导CTGF siRNA干扰组细胞分泌IL-17A的水平显著降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论抑制CTGF可显著降低石英粉尘诱导16HBE细胞表达IL-17A的水平,提示CTGF可能参与调节石英粉尘致肺部炎性及纤维化的反应过程。     

长链非编码RNA LOC101927019在PM_(2.5)致16HBE细胞炎症反应中的作用

目的探讨长链非编码(lnc)RNA LOC101927019在大气PM_(2.5)致人支气管上皮细胞(16HBE细胞)炎症反应中的作用。方法将采集的广州市大气PM_(2.5)制备成混悬液染毒16HBE细胞,以荧光定量PCR检测不同浓度(25~100μg/ml)PM_(2.5)染毒细胞炎症因子IL-1β基因及lnc RNA LOC101927019的表达水平。采用RNA干扰技术敲低16HBE细胞中LOC101927019的表达,检测100μg/ml PM_(2.5)染毒si RNALOC101927019-16HBE细胞中IL-1β基因的表达水平。结果与对照组比较,PM_(2.5)染毒16HBE细胞IL-1β及LOC101927019的表达上调(P0.01);与对照组比较,16HBEsi RNALOC101927019细胞LOC101927019的表达明显下降(P0.05);与PM_(2.5)染毒转染阴性对照组相比,PM_(2.5)染毒16HBE-si RNALOC101927019细胞IL-1β基因的表达明显下降(P0.01)。结论 lnc RNALOC101927019在PM_(2.5)暴露染毒的细胞中高表达,敲低lnc RNALOC101927019表达可抑制IL-1β的分泌,lnc RNALOC101927019可能在PM_(2.5)致细胞炎症反应中起促炎作用。     

灰树花多糖D组分对PM_(2.5)引起肺泡巨噬细胞损伤的拮抗作用

目的探讨灰树花多糖D组分(D-fraction)对大气细颗粒物PM_(2.5)染毒后的大鼠肺泡巨噬(NR8383)细胞损伤的拮抗作用。方法分别以不同浓度的SRM 2786悬液(31.25、62.5、125、250和500μg/ml)、不同浓度的D-fraction溶液(1.56、3.125、6.25、12.5、25、50、100、200及400μg/ml)及SRM 2786溶液(浓度为125μg/ml)与不同浓度的D-fraction溶液(3.125、6.25、12.5、25μg/ml)暴露NR8383细胞24 h,同时,设置空白对照(F-12K培养基)组,采用MTT法检测细胞存活率。将125μg/ml SRM 2786悬液分别与不同浓度(3.125、6.25、12.5、25μg/ml)的D-fraction溶液联合暴露NR8383细胞24 h后,采用酶联免疫法(Elisa)检测细胞上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)及白介素1β(IL-1β)三种炎性因子的释放。结果与空白对照组相比,各浓度SRM 2786暴露组NR8383细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P0.01);且随着SRM 2786暴露浓度的升高,NR8383细胞的存活率呈下降趋势。与空白对照组相比,1.56~25μg/ml D-fraction暴露组NR8383细胞的存活率均升高,差异有统计学意义(P0.05);而50~400μg/ml D-fraction暴露组NR8383细胞的存活率均无明显改变。与125μg/ml SRM 2786暴露组相比,125μg/ml SRM 2786+各浓度D-fraction暴露组NR8383细胞的存活率均明显增高;细胞上清液中的TNF-α、IL-6和IL-1β含量均较低,除125μg/ml SRM 2786+3.125μg/ml D-fraction暴露组外,差异有统计学意义(P0.01)。且随着D-fraction暴露浓度的升高,125μg/ml SRM 2786暴露NR8383细胞的存活率及细胞上清液中的TNF-α和IL-1β含量均呈逐渐下降趋势,IL-6含量呈波浪性下降的趋势。结论 PM_(2.5)可显著降低细胞存活率和促进炎性因子的释放,而D-fraction可改善由PM_(2.5)引发的NR8383细胞损伤。     

微囊藻毒素-LR对人支气管上皮细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的研究微囊藻毒素-LR(microcystins-LR,MC-LR)对人支气管上皮细胞(16HBE)凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法将16HBE细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、1、10、20、30、40μg/ml的MC-LR溶液24h后,采用MTT法检测细胞活性。将16HBE细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、2.5、5、10μg/ml的MC-LR溶液培养24、48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白细胞色素C(Cyt-c)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、前凋亡蛋白(Bax)的相对表达量。结果与对照组相比,各浓度MC-LR染毒组16HBE细胞的存活率较低,凋亡率较高,差异均有统计学意义(P0.05);随着MC-LR染毒浓度的升高,16HBE细胞的存活率呈逐渐下降的趋势,凋亡率呈上升趋势;随着MC-LR染毒时间的延长,16HBE细胞的凋亡率均呈上升趋势。当暴露时间一定时,与对照组相比,各浓度MC-LR染毒组16HBE细胞Bax和Cyt-c蛋白的表达水平均升高,Bcl-2蛋白的表达水平均下降(除外2.5μg/ml MC-LR染毒24 h组),差异有统计学意义(P0.05);且随着MC-LR染毒浓度的升高和染毒时间的延长,16HBE细胞Bax和Cyt-c蛋白的表达水平均呈上升趋势,Bcl-2蛋白的表达水平均呈下降趋势。结论 MC-LR能诱导16HBE细胞发生凋亡,并引起Cyt-c和Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低。     

PM_(2.5)通过氧化应激对人支气管上皮细胞JAK/STAT信号通路的影响

目的探讨PM2.5通过氧化应激对人支气管上皮细胞JAK/STAT信号通路和细胞因子的影响。方法利用传统侵入式方法培养支气管上皮细胞16HBE,本次研究共从两方面来进行探讨:(1)探讨PM2.5、氧化应激与JAK/STAT信号通路的关系,设立生理盐水对照组、N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,5 mmol/L)组、50μg/ml PM2.5组、100μg/ml PM2.5组、50μg/ml PM2.5+5 mmol/L NAC组和100μg/ml PM2.5+5mmol/L NAC组,培养24 h后测定细胞内ROS水平和JAK2、STAT3的基因表达。(2)探讨PM2.5、JAK/STAT信号通路和细胞因子的关系,设立生理盐水对照组、6μmol/L AG490组、100μg/ml PM2.5组、6μmol/L AG490+100μg/ml PM2.5组,培养24 h后检测细胞上清液中白介素-6(IL-6)含量。结果染毒24 h后,50μg/ml PM2.5组和100μg/ml PM2.5组16HBE细胞内ROS水平和JAK2、STAT3基因表达均高于生理盐水对照组,PM2.5暴露+NAC保护组ROS水平和JAK2、STAT3的基因表达均低于各自PM2.5暴露组,差异均有统计学意义(P<0.05)。100μg/ml PM2.5组上清液中IL-6含量高于生理盐水对照组,6μmol/L AG490+100μg/ml PM2.5组细胞上清液中IL-6含量低于100μg/ml PM2.5暴露组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 PM2.5能对支气管上皮细胞造成氧化损伤,并可能通过氧化应激调节上皮细胞JAK/STAT信号通路和相关细胞因子的产生。     

纳米氧化锌诱导人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549发生炎性凋亡的研究

目的用纳米氧化锌(ZnO-NPs)刺激体外培养的人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549),探讨其是否发生炎性凋亡。方法用10μg/ml和20μg/ml的ZnO-NPs分别刺激A549细胞8和24h,以磷酸盐缓冲液(PBS)为对照,用乳酸脱氢酶(LDH)活力测定试剂盒和白介素-1β(IL-1β)ELISA试剂盒分别检测细胞培养上清液中的LDH酶活力和IL-1β含量,用半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(caspase-1)活性测定试剂盒检测细胞caspase-1的活性。结果纳米氧化锌作用于A549细胞8h,染毒组和对照组LDH酶活力差异无显著性,与对照组比较,20μg/ml ZnO-NPs染毒组caspase-1活性和IL-1β含量均升高(P<0.05)。ZnO-NPs作用于A549细胞24h时,染毒组和对照组caspase-1活性差异无显著性。染毒组IL-1β含量和LDH酶活力均显著高于对照组(P<0.05)。结论纳米氧化锌(20μg/ml)刺激A549细胞早期caspase-1活性升高,继之IL-1β含量和LDH酶活力升高,可能发生了炎性凋亡。     

大气PM2.5对人支气管上皮细胞内钙稳态的影响

目的研究大气PM2.5对人支气管上皮细胞(16HBE)内钙稳态的影响。方法以50、100μg/ml大气PM2.5对16HBE细胞进行染毒,以生理盐水为对照组,并用终浓度为100μg/ml的钙离子拮抗剂肝素钠进行干预,即设生理盐水对照组、50μg/ml PM2.5组、100μg/ml PM2.5组、肝素钠组、50μg/ml PM2.5+肝素钠组、100μg/ml PM2.5+肝素钠组,分别染毒3、6、24 h后,以流式细胞仪检测细胞内游离钙离子荧光强度。结果 100μg/ml PM2.5染毒16HBE 3 h后,细胞内钙离子荧光强度高于对照组和50μg/ml PM2.5组;当加入胞内游离钙离子拮抗剂肝素钠后,100μg/ml PM2.5+肝素钠组钙离子荧光强度低于100μg/ml PM2.5组。100μg/ml PM2.5染毒16HBE 6 h后,细胞内钙离子荧光强度高于对照组。PM2.5染毒16HBE 24 h后,50μg/ml PM2.5组、100μg/ml PM2.5组、50μg/ml PM2.5+肝素钠组、100μg/ml PM2.5+肝素钠组的细胞内钙离子荧光强度均高于对照组,且100μg/ml PM2.5组细胞内钙离子荧光强度高于50μg/ml PM2.5组。50、100μg/ml PM2.5染毒组随着染毒时间的延长,钙离子荧光强度升高,染毒6、24 h后的钙离子荧光强度均高于染毒3 h后,上述差异均有统计学意义(P0.05)。结论大气PM2.5可能刺激16HBE细胞释放胞内钙库,导致胞内游离钙离子荧光强度增加。     

CircRNA在氧化钕致人支气管上皮细胞炎症反应中的表达

目的研究稀土氧化钕致人支气管上皮细胞(16HBE)炎症反应中circRNA表达变化。方法以CCK-8法测定不同剂量氧化钕(0、40、60、80、100、120μg/ml)混悬液分别处理16HBE细胞24 h和48 h后,检测细胞生存率。以ELISA测定不同剂量氧化钕(0、40、60、80、100、120μg/ml)混悬液处理16HBE细胞48 h后,炎症因子IL-1β和IL-8的表达变化。以80μg/ml稀土氧化钕颗粒混悬液处理16HBE细胞48 h,以微阵列检测其circRNA表达改变,以荧光定量PCR验证10种明显差异表达circRNA。结果与对照组相比,氧化钕混悬液分别处理16HBE细胞24 h和48 h后,细胞生存率均明显降低(P0.01)。与对照组相比,氧化钕混悬液处理48h后IL-1β和IL-8分泌明显增加(P0.01)。ELISA检测结果发现与对照组相比,氧化钕混悬液处理48 h后IL-1β和IL-8分泌明显增加(P0.01)。基因微阵列结果显示有1263种circRNA表达发生改变,其中上调circRNA有247种,下调有1 016种。与对照组比较,hsa_circRNA_0080083相对表达量下调了53.48%(P0.01)。不同剂量氧化钕(0~120μg/ml)混悬液处理16HBE细胞后,hsa_circRNA_0080083表达量和氧化钕染毒剂量呈负相关性(r=-0.968,P0.001)。结论稀土氧化钕致16HBE细胞炎症反应中,circRNA表达谱发生改变,其中hsa_circRNA_0080083下调明显,且有剂量-效应关系。     

Ca2+-JAK1-STAT1信号通路在PM2.5诱导16HBE细胞炎症介质改变中的调控作用

目的探讨PM_(2.5)通过Ca~(2+)-JAK1/STAT1信号通路调控人支气管上皮细胞(16HBE)炎症因子释放,为PM_(2.5)引起呼吸系统炎症疾病发病机制提供参考。方法分别设置生理盐水对照组、100μg/ml肝素钠组、10μmol/L姜黄素(Cur)组、50μg/ml PM_(2.5)组、100μg/ml PM_(2.5)组、50μg/ml PM_(2.5)+100μg/ml肝素钠组、100μg/ml PM_(2.5)+100μg/ml肝素钠组、50μg/ml PM_(2.5)+10μmol/L Cur组、100μg/ml PM_(2.5)+10μmol/L Cur组,作用16HBE细胞3、6和24 h后,用qRT-PCR和Western blot技术分别测定JAK1、STAT1基因和蛋白表达水平,ELISA法分别检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和人高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达水平。结果染毒3、6和24 h后,在50μg/ml PM_(2.5)染毒组和100μg/ml PM_(2.5)染毒组细胞内JAK1、STAT1基因表达水平较生理盐水对照组有升高趋势,仅24 h组JAK1基因差异有统计学意义(P0.05);且细胞内p-JAK1、p-STAT1蛋白表达水平均高于生理盐水对照组,差异具有统计学意义(P0.05);染毒3和6 h后PM_(2.5)+肝素钠染毒组STAT1基因和蛋白表达水平与各自PM_(2.5)染毒组相比出现降低趋势,而染毒24 h后的100μg/ml PM_(2.5)+肝素钠染毒组STAT1基因和蛋白表达水平与其PM_(2.5)染毒组相比出现增高趋势;细胞上清液中,50μg/ml PM_(2.5)和100μg/ml PM_(2.5)染毒组TNF-α、HMGB1和ICAM-1的含量分别不同程度地高于生理盐水对照组、肝素钠组和Cur组;加入干扰剂肝素钠和姜黄素后,TNF-α、HMGB1和ICAM-1的表达水平较各自单独PM_(2.5)染毒组均有一定程度的降低。结论 PM_(2.5)可通过Ca~(2+)-JAK1-STAT1信号通路调控人支气管上皮细胞TNF-α、ICAM-1和HMGB1等炎症因子水平。     

烹调油烟中细颗粒物PM2.5对A-549细胞存活率和IL-10水平的影响

探讨烹调油烟中大气细颗粒物PM2.5(FPCOF)对人肺癌上皮细胞(A-549细胞)抗炎因子IL-10分泌的影响。分别用不同浓度的FPCOF对细胞进行染毒,于12 h、24 h和36 h后用MTT法测细胞存活率;用酶联免疫吸附法测染毒24 h和36 h的细胞上清中IL-10的浓度。结果 :(1)FPCOF作用于A-549细胞24 h和36 h后,细胞存活率随染毒浓度升高而降低,100μg/ml PM2.5+10 mmol/L NAC组存活率高于100μg/ml PM2.5染毒组。(2)FPCOF对A-549细胞作用24 h后,对抗炎因子IL-10的影响不明显;作用36 h后均可见IL-10水平增高,100μg/ml PM2.5+10mmol/L NAC组IL-10浓度低于100μg/ml PM2.5染毒组。提示FPCOF促进A-549细胞中抗炎因子IL-10分泌,其表达要迟于FPCOF对细胞增殖的抑制作用,抗氧化剂NAC对A-549细胞有一定的保护作用。     

铀矿尘对人正常支气管上皮细胞株细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨铀矿尘对人正常支气管上皮细胞株HBE细胞凋亡相关蛋白表达的影响及凋亡的可能机制。方法体外培养HBE细胞,分为对照组、铀矿尘组(12.5、25、50、100、200μg/ml)。细胞染毒12 h后,用MTT法检测HBE细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及细胞色素C(CytC)、半胱天冬酶-3(caspase-3)和半胱天冬酶-9(caspase-9)的蛋白表达。结果当铀矿尘浓度为25~200μg/ml时,HBE细胞存活率均低于对照组,细胞凋亡率和坏死率均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.01)。随着铀矿尘浓度的升高,HBE细胞Bax、Bcl-2、CytC、caspase-3、caspase-9蛋白表达量逐渐增加,均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论铀矿尘对HBE细胞的凋亡作用可能是通过线粒体途径实现的。     

细胞自噬在砷暴露所致肺损伤中的作用

目的探讨细胞自噬在砷暴露所致大鼠肺损伤中的作用。方法 24只无特定病原体(SPF)级健康雄性SD大鼠随机分为4组,即对照组,砷暴露低(10μg/L)、中(100μg/L)、高(1 000μg/L)剂量组,砷暴露组通过自由饮用含Na As O2的水进行染毒,对照组自由饮用不含Na As O2的水,染毒28 d后统一处死。ELISA法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-ɑ、IL-6、IL-8、IL-10的含量。Western blot法检测肺组织中自噬相关蛋白NBR1、p62、LC3Ⅱ表达量。结果砷暴露组大鼠BALF中促炎因子TNF-a、IL6、IL8表达量显著高于对照组(P0.05),且100μg/L组的IL-6最高;砷暴露1 000μg/L组的抑炎因子IL-10含量显著低于对照组(P0.05);与对照组相比砷暴露组大鼠肺组织中p62、NBR1的表达量增加(P0.05),且存在剂量—反应关系;与对照组相比砷暴露组大鼠肺组织中LC3Ⅱ蛋白表达量显著下降(P0.05),且存在剂量—反应关系。结论砷暴露所致大鼠肺损伤中,细胞自噬被抑制时会加重大鼠肺部的炎症损伤,当Na As O2暴露浓度达到100μg/L时,会对大鼠肺组织造成明显的损伤。     

甲基丙烯酸环氧丙酯致人支气管上皮细胞恶性转化研究

目的 研究潜在致癌化学物甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)诱发人支气管上皮细胞恶性转化的作用.方法 分别采用1、2、4、8μg/ml浓度的GMA多次处理人支气管上皮细胞(16HBE),连续动态地观察细胞形态学的改变,通过刀豆凝集素A(conA)试验、软琼脂集落形成试验、电镜扫描和裸鼠体内致瘤性试验观察细胞的恶性转化表型,并运用免疫化学方法对细胞和肿瘤组织来源特性进行鉴定.试验同时设二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组和三甲基胆蒽(MCA)阳性对照组.结果 1～8 μg/ml浓度范围的GMA多次攻击可使16HBE细胞发生恶性转化,转化率随染毒剂量的增加而升高,其中8μg/ml染毒组的转化率(8.48×10-6)与对照组(4.5×10-7)相比差异有统计学意义(P<0.01).转化细胞失去接触抑制呈交错重叠生长并能在软琼脂上形成集落,各剂量组的集落形成率随染毒剂量的增加而升高,其中2、4、8μg/ml染毒组的集落形成率分别为1.20‰、2.35‰和5.70‰,与溶剂对照组(0.30‰)相比差异有统计学意义(P<0.01).转化细胞对conA的凝集敏感性增加,扫描电镜下细胞表面微绒毛增多、变粗、变长.将转化细胞接种于裸鼠皮下可形成肿块,经病理组织学检查诊断为鳞状上皮细胞癌.16HBE细胞和肿块组织经免疫组织化学检测角蛋白呈阳性表达.结论GMA可在体外诱发16HBE细胞发生恶性转化.     

煤焦沥青烟提取物诱导人支气管上皮细胞发生炎性凋亡的研究

目的 探讨煤焦沥青烟提取物(coal tar pitch smoke extract,CTP)刺激人支气管上皮细胞(BEAS-2B)是否发生炎性凋亡(pyroptosis).方法 用l、3μg/ml的CTP分别染毒BEAS-2B细胞8、24 h,以二甲基亚砜(DMSO)为对照,用乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活力测定试剂盒和白细胞介素-1β(Interleukin-1 beta,IL-1β) ELISA试剂盒分别检测细胞培养上清中的LDH活力和IL-1β含量,用半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(caspase-1)活力测定试剂盒检测细胞caspase-1活力.结果 染毒8h,1、3 μg/ml CTP染毒组细胞中caspase-1的活力分别为(9.29±0.30) μmol/ml和(8.67±0.59) μmol/ml,均明显高于DMSO对照组[(7.42±0.59) μmol/ml],差异有统计学意义(P＜0.05);1、3μg/mlCTP染毒组LDH活力和IL-1β含量与DMSO对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).染毒24 h时,1、3μg/ml染毒组与DMSO对照组细胞中caspase-1活力差异无统计学意义(P＞0.05);1、3μg/ml染毒组培养液上清中LDH活力[(1323.03±28.53)、(1148.45±16.42) U/dl]和IL-1β含量[(125.37±25.00)、(92.04±19.09) pg/m]均高于对照组[LDH:(1091.93±26.64) U/dl,IL-1β:(46.20±14.43) pg/ml],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 煤焦沥青烟提取物刺激BEAS-2B细胞早期caspase-1活力升高,继之LDH酶活力及IL-1β含量均增高,可能发生pyroptosis.     

饮水砷暴露大鼠血清炎症因子及肺泡灌洗液中自噬相关蛋白NBR1与P62的表达

目的观察亚砷酸钠对大鼠血清炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和肺泡灌洗液中自噬相关蛋白NBR1、P62的影响。方法将32只健康SPF级雄性SD大鼠按体重随机分为4组,分别为对照(超纯水)组和10、100、1 000μg/L亚砷酸钠染毒组,每组8只。采用自由饮用方式染毒,连续染毒28 d。测定大鼠血清中IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α的浓度和肺泡灌洗液中NBR1和P62的水平。结果与对照组比较,各浓度亚砷酸钠染毒组大鼠血清中IL-1β、IL-6的水平和10、100μg/L亚砷酸钠染毒组大鼠血清中IL-8水平及10μg/L亚砷酸钠染毒组大鼠血清中TNF-α水平较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,大鼠血清中IL-6、IL-8和TNF-α的浓度均呈先升高后下降趋势。与对照组比较,100、1 000μg/L亚砷酸钠染毒组大鼠肺泡灌洗液中NBR1的水平和10、100μg/L亚砷酸钠染毒组大鼠肺泡灌洗液中P62的水平较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,大鼠肺泡灌洗液中NBR1、P62的浓度均呈先升高后下降趋势。亚砷酸钠染毒大鼠血清IL-6与肺泡灌洗液中P62呈正相关(r=0.399,P0.05),血清TNF-α与肺泡灌洗液中NBR1呈正相关(r=0.452,P0.05)。结论炎症因子和细胞自噬参与亚砷酸钠致大鼠肺损伤,大鼠肺部损伤可能与细胞自噬受到抑制和炎症因子增多有关。     

镍精炼烟尘致NIH/3T3细胞NLRP3炎性小体的表达

采用某镍精炼厂沉降尘对NIH/3T3细胞进行染毒,染毒浓度分别为12.5、25、50μg/ml,以未染毒组(0μg/ml)作为对照。染毒48 h后,通过Cell-counting Kit-8实验检测细胞存活率,ROS试剂盒检测细胞内活性氧的生成量,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞内炎性因子NLRP3和ASC的表达水平,ELISA试剂盒检测caspase-1和IL-1β生成量。结果显示,随着染毒浓度的增加,细胞存活率逐渐下降,且差异具有统计学意义(P0.05);细胞内ROS生成量明显增加,NLRP3、ASC表达量不断增加,caspase-1和IL-1β生成量不断增加,且差异均有统计学意义(P0.05)。提示镍精炼烟尘可以激活炎性小体,促使炎性小体相关蛋白表达。     

苦味素受体对PM_(2.5)染毒诱导支气管上皮细胞炎症反应的调节机制

目的探讨苦味素受体(T2Rs)对PM_(2.5)染毒诱导气道炎症反应的调节机制。方法将支气管上皮细胞HBE16分为对照组、PM_(2.5)组(40μg/ml PM_(2.5))、PM_(2.5)+桔梗皂苷组(200 mg/L桔梗皂苷+40μg/ml PM_(2.5))、桔梗皂苷组(200 mg/L桔梗皂苷),经过处理或染毒后,分别采用细胞免疫荧光法、ELISA法和RT-PCR法检测各组支气管上皮细胞T2R14、白细胞介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。结果 PM_(2.5)组细胞IL-4、TNF-α的蛋白表达和mRNA水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.01);T2R14的蛋白表达和mRNA水平变化不明显。桔梗皂苷组细胞IL-4、TNF-α的蛋白表达和mRNA水平明显低于PM_(2.5)组,T2R14的蛋白表达和mRNA水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论中药的苦味成分可引起支气管上皮细胞T2R14激活,抑制慢性炎症气道的炎症因子产生和释放,提示T2R14可能参与苦味物质的抗炎过程。     

大气PM2.5致人支气管上皮细胞DNA损伤的研究

目的研究大气PM2.5对人支气管上皮细胞(16-HBE)DNA的损伤效应。方法将人支气管上皮细胞(16-HBE)分别暴露于8、16、32、64、128μg/ml的广州大气PM2.5 24、48、72 h,采用MTT法测定细胞存活率,彗星试验检测细胞DNA损伤水平。结果染毒24、48、72 h后,64、128μg/ml组细胞存活率均明显低于对照组(P<0.05),各染毒组细胞Olive尾矩均明显高于对照组(P<0.05);72 h各剂量组细胞存活率均低于24 h相应处理组(P<0.05),48、72 h各剂量组细胞Olive尾矩与24 h相比均明显增加(P<0.05);经多重线性回归分析,Olive尾矩(y)与染毒剂量(d)和染毒时间(t)的回归方程为y=-6.481+0.162 d+0.210t(R~2=0.842,P<0.05)。结论大气PM2.5可导致人支气管上皮细胞(16-HBE)DNA损伤,且损伤程度与染毒剂量、时间有一定关联。     

纳米银和银离子对皮肤细胞炎性因子分泌的影响

目的比较纳米银及其释放的银离子对人永生化角质形成(Ha Ca T)细胞炎性因子分泌的影响,并进一步探讨纳米银的吸附作用对炎性因子测定的影响。方法采用不同浓度[0(对照)~100μg/ml]的纳米银染毒Ha Ca T细胞24 h,采用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验测定纳米银的细胞毒性;选择0(对照)、2.5、5、10、20和40μg/ml的纳米银或其释放的银离子[0(对照)、0.05、0.1、0.2、0.4和0.8μg/ml]染毒Ha Ca T细胞24 h,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液中的白细胞介素(IL)-6和IL-8的含量。在无细胞体系中,将终浓度为0(对照)、5、40和100μg/ml的纳米银与IL-6或IL-8标准品溶液混匀静置6 h后离心去除纳米银颗粒,采用ELISA测定上清液中IL-6、IL-8的含量。结果纳米银浓度低于75μg/ml时无明显细胞毒性。与对照组比较,2.5、5、20μg/ml纳米银染毒Ha Ca T细胞IL-6的分泌量和5、10、20μg/ml纳米银染毒Ha Ca T细胞IL-8的分泌量均较高,差异均有统计学意义(P0.01)。与对照组比较,仅0.1、0.8μg/ml银离子染毒Ha Ca T细胞IL-8的分泌量较高,差异均有统计学意义(P0.05);而各剂量银离子染毒Ha Ca T细胞IL-6的分泌量均无明显改变。在无细胞体系中,与对照组比较,40、100μg/ml纳米银暴露后体系中IL-6的含量和100μg/ml纳米银暴露后体系中IL-8的含量均较低,差异均有统计学意义(P0.01,P0.05)。结论本实验条件下低浓度纳米银可诱导Ha Ca T细胞IL-6和IL-8的分泌量增加,其对IL-6分泌量的影响可能与纳米银颗粒密切相关,而对IL-8分泌量的影响可能与悬液中释放的银离子有关;高浓度纳米银对IL-6和IL-8具有吸附性。     

MAPK信号通路在PM2.5致JurkatT细胞细胞因子改变中的调控作用

目的探讨MAPK信号通路对交通相关PM2.5引起JurkatT细胞细胞因子变化的调控作用。方法应用Western-blot方法测定了交通相关PM2.5刺激JurkatT细胞不同时间的磷酸化JNK、P38MAPK和激活蛋白-1(AP-1)蛋白表达,ELISA方法测定了细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)含量。结果 320μg/ml PM2.5刺激Jurkat T细胞24 h后,p-JNK/β-actin灰度比值显著高于生理盐水组,差异有统计学意义,P0.05。80μg/ml、320μg/ml PM2.5组p-p38MAPK/β-actin灰度比值均高于生理盐水组,差异均有统计学意义,P0.05。PM2.5染毒组分别加p-JNK拮抗剂SP600125和p-p38MAPK拮抗剂SB203580后,p-JNK/β-actin和p-p38MAPK/β-actin灰度比值均比正常染毒明显降低,以320μg/ml PM2.5剂量组显著。80μg/mlPM2.5刺激细胞6 h和24 h后,AP-1/β-actin蛋白灰度比值、细胞上清IL-1β含量均比生理盐水组增高,差异有统计学意义(P0.05),80μg/ml PM2.5刺激细胞3 h、6 h和24 h后,细胞上清TNF-α逐渐增高,有明显的时间效应趋势,且与生理盐水组差异有统计学意义(P0.05)。结论交通相关PM2.5可引起Jurkat T细胞炎症细胞因子TNF-α、IL-1β分泌增高,P38MAPK和JNK可通过AP-1调控TNF-α、IL-1β的释放。