补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠海马区血管新生的影响

目的:探讨补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠海马区血管新生的影响。方法:采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型,将动物随机分为正常组、假手术组、模型组、尼莫地平组和补阳还五汤组,给予不同处理,分别于1 d、7 d、14 d和28 d处死动物,采用免疫组织化学法观察海马区血管新生情况。结果:正常脑内海马区存在一定的Brd U、v WF阳性细胞,脑缺血7 d达高峰,然后逐渐下降;补阳还五汤组可显著增强Brd U的表达,在第7 d、14 d时明显多于其他各组(P0.05)。结论:补阳还五汤可促进局灶性脑缺血大鼠海马区血管新生。     

补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注大鼠行为学及脑梗死体积的影响

目的:研究补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植对局灶性脑缺血再灌注大鼠行为学及脑梗死体积的影响。方法:用右侧大脑中动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,检测脑梗死体积,并比较其神经功能行为积分。结果:移植组与联合组均能够使大鼠神经功能损害评分降低,以联合组第7d恢复最为明显(P0.05)。脑组织切片经TTC染色,可见右侧大脑中动脉供血区出现大小不等的梗死灶,MSCs组及补阳还五汤联合MSCs组与缺血再灌注组比较有显著意义(P0.01),前两者之间比较无显著性意义(P0.05)。结论:补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植可减少局灶性脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积,改善脑缺血后神经行为症状。     

补阳还五汤对脑梗死大鼠内源性神经干细胞增值分化作用的研究

目的:研究补阳还五汤对内源性神经干细胞(NSC)归巢缺血脑组织的作用。方法:将240只雄性大鼠随机分为模型组、假手术组、补阳还五汤治疗组、正常对照组,采用线栓法制作脑梗死模型,分别给予不同处理,于术后1、3、7、14、21、28天6个时间点分批处死大鼠。用免疫组织化学方法检测各组大鼠海马区Brd U标记的阳性细胞情况和梗死区域及相对应区域的Neu N标记的阳性细胞情况。结果:正常组和假手术组大鼠的海马区可见到少量的Brd U标记阳性细胞,与模型组脑缺血区域相对应区域可见大量的Neu N标记阳性细胞,差异均无明显统计学意义(P0.05),与假手术组相比,模型组和补阳还五汤治疗组大鼠Brd U标记阳性细胞数目增多,Neu N标记阳性细胞数目减少,差异均具有统计学意义(P0.05),与模型组相比,补阳还五汤治疗组大鼠Brd U、Neu N标记阳性细胞数目均增多,且第7天时Brd U标记阳性细胞数目达到高峰,第14天时Neu N标记阳性细胞数目达到高峰,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:补阳还五汤可以诱导脑梗死大鼠内源性神经干细胞的增殖分化,在一定程度上具有促进神经再生的作用。     

补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠神经干细胞移植后Bag-1表达的影响

目的:探讨补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠神经干细胞移植后凋亡相关基因Bag-1的影响。方法:SD大鼠80只,雌雄各半,复制局灶性脑缺血大鼠模型,造模后按神经功能缺损评分进行分级,随机分为5组,每组15只,分别于移植后7 d、14 d、28 d观察神经功能评分,采用补阳还五汤超微饮片与传统饮片予以干预,于相应时间点处死大鼠后采用免疫组化法检测凋亡基因Bag-1。结果:单纯移植组、移植加中药组大鼠神经功能得到明显恢复,Bag-1蛋白表达上升显著,在各时间点(7 d、14 d、28 d)与模型组比较差异有统计学意义(P0.05或P0.01),模型加移植加补阳还五汤超微饮片组促进神经功能积分的恢复及上调Bag-1蛋白表达作用优于模型加移植加补阳还五汤传统饮片组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:补阳还五汤可促进神经功能的恢复,上调Bag-1蛋白表达,且超微饮片组的作用较传统饮片组更加显著。     

补阳还五汤对脑梗死大鼠内源性神经干细胞的影响

目的:研究补阳还五汤对脑梗死大鼠内源性神经干细胞(neural stem cell,NSC)的干预作用。方法:将240只雄性大鼠随机分为模型组、假手术组、补阳还五汤组、正常对照组,采用线栓法制作脑梗死模型,分别给予相应处理,于术后1 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d 6个时间点分批处死大鼠。用免疫组织化学方法检测各组大鼠海马区Nestin标记的阳性细胞情况和梗死区域及相对应区域的MBP标记的阳性细胞情况。结果:正常对照组和假手术组大鼠的海马区可见到少量的Nestin标记阳性细胞,而脑缺血大脑皮质和相对应区域可见大量的MBP标记阳性细胞,两组差异均无统计学意义(P>0.05);与假手术组相比,模型组和补阳还五汤组大鼠Nestin标记阳性细胞数目明显增多,MBP标记阳性细胞数目明显减少,差异均具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,补阳还五汤组大鼠Nestin、MBP标记阳性细胞数目均增多,差异均具有统计学意义(P<0.05),且第7 d时Nestin标记阳性细胞数目达到高峰,第14 d时MBP标记阳性细胞数目达到高峰。结论:补阳还五汤可以促进脑梗死后内源性神经干细胞的增殖和分化,提示此为其促进受损神经再生的机制之一。     

补阳还五汤对急性脑缺血大鼠血管新生影响的实验研究

目的探讨补阳还五汤对急性脑缺血大鼠血管新生的影响。方法采用大脑中动脉线栓法建立急性脑缺血大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和尼莫地平组,给予不同处理,给药7d后处死大鼠,采用免疫组织化学法观察脑缺血区微血管密度（MVD）的变化及脑组织血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达情况,同时评价动物神经功能。结果与模型组比较,补阳还五汤组能改善模型大鼠的神经功能缺失症状,MVD显著升高,并增强VEGF和bFGF的表达。结论补阳还五汤可促进急性脑缺血大鼠缺血区血管新生,增强脑组织VEGF和bFGF的表达,可能是其抗脑缺血的作用机制之一。     

补阳还五汤联合间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠bFGF mRNA表达的影响

目的探讨补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对脑缺血损伤的神经保护机制。方法将48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、MSCs移植组(MSCs组)、补阳还五汤联合MSCs移植组(联合组),每组12只。建立局灶性脑缺血再灌注模型,MSCs组、联合组从尾静脉注入MSCs,联合组并给予补阳还五汤,给药10天后检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因表达情况。结果 MSCs组与联合组均能上调大鼠脑组织bFGFmRNA表达水平,与模型组和假手术组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),联合组表达明显高于MSCs组(P<0.05)。结论补阳还五汤联合MSCs移植能通过上调脑组织bFGFmRNA表达水平,促进内源性神经营养因子bFGF基因表达而起对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注后星形胶质细胞connexin43影响机制的研究

目的:探讨补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注后星形胶质细胞缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)的影响机制。方法:运用线栓法建立大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,补阳还五汤治疗1 d后ELISA法检测细胞因子[白细胞介素-1 beta,(IL-1β)和白细胞介素-10,(IL-10)]的表达,通过使用NF-κB激动剂增强炎症反应后,比较海马CA1区Cx43的表达,同时,使用HE染色观察细胞形态学改变。在补阳还五汤治疗7 d后,免疫组织化学染色法观察b FGF的表达情况,联合使用b FGF中和抗体后比较各组海马CA1区Cx43的表达同时HE染色观察细胞形态学改变。结果:同模型组相比,补阳还五汤组脑缺血再灌注1天后,IL-1β减少IL-10增加(P0.05);联合使用NF-κB激动剂后补阳还五汤对海马CA1区Cx43的下调作用被抑制(P0.05),HE染色显示联合组较补阳还五汤组神经元损伤加重。脑缺血7 d时补阳还五汤增强b FGF和Cx43的表达;联合使用b FGF中和抗体后海马CA1区Cx43的表达较补阳还五汤组降低(P0.05),HE染色显示同补阳还五汤组比,联合组神经元状态更差。结论:补阳还五汤在脑缺血后1 d可能是通过抑制炎症下调Cx43发挥保护作用,而在脑缺血后7 d可能通过上调b FGF增强Cx43促进修复。     

补阳还五汤联合脂肪来源干细胞移植对脑缺血大鼠神经功能的影响

目的 探讨补阳还五汤联合脂肪来源干细胞（ADSCs）移植对脑缺血损伤大鼠的神经保护作用.方法 采用线栓法制备大鼠脑缺血模型,大鼠随机分为假手术组、模型组、ADSCs移植组（移植组）、补阳还五汤联合ADSCs移植组（联合组）.各组又分7、14、21d 3个时间点的亚组,观察各组大鼠不同时间点的神经功能评分、脑梗死面积及脑组织病理形态学变化.结果 与模型组比较,移植组、联合组大鼠造模后14、21d神经功能评分均显著降低（P＜ 0.05或P＜ 0.01）,且联合组大鼠21d神经功能评分明显优于移植组（P＜0.05）;各时间点移植组与联合组大鼠脑梗死面积明显小于同时相的模型组（P＜0.01）,且14、21 d联合组优于移植组（P＜0.05）;造模后HE染色显示模型组大鼠脑组织缺血周边神经元数量减少,细胞明显水肿,治疗后脑组织损伤明显减轻,联合组的病理损伤最轻.结论 补阳还五汤联合ADSCs移植能减轻脑缺血后神经功能损伤,具有脑保护作用.     

补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠神经干细胞移植后凋亡相关基因表达的影响

目的:探讨补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠神经干细胞移植后凋亡相关基因Bag-1、Bcl-2表达的影响。方法:选取SD大鼠,复制局灶性脑缺血大鼠模型,按神经功能缺损评分进行分层,随机分为模型组、空白移植组、移植组、补阳传统饮片组、补阳超微饮片组,每组15只,分别于细胞移植后7、14、28d观察神经功能评分,采用补阳还五汤超微饮片与传统饮片予以干预,于相应时间点处死大鼠后采用免疫组化法检测凋亡基因Bag-1、Bcl-2的表达。结果:补阳传统饮片组、补阳超微饮片组大鼠神经功能得到明显恢复,Bag-1、Bcl-2蛋白表达上升显著,在各时间点(7、14、28d)与模型组比较差异均有统计学意义(P0.01或P0.05);补阳超微饮片组促神经功能积分的恢复及上调Bcl-2、Bag-1蛋白表达作用优于补阳传统饮片组,差异有统计学意义(P0.01或P0.05)。结论:补阳还五汤可促进神经功能的恢复,上调Bag-1、Bcl-2蛋白表达,且超微饮片的作用较传统饮片更加显著。     

Notch信号传导系统在补阳还五汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经修复中的调节作用

目的:探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠不同时期海马CA4区Hes1和Hes5表达的影响,阐明Notch信号传导系统在补阳还五汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经修复作用中的调节作用。方法:清洁级SD大鼠63只随机分为补阳还五汤组(Group BYHWT)、脑缺血再灌注损伤模型组(Group CIRI)、假手术组(Group Sham)。采用大脑中动脉阻塞线拴法(MCAO法)建立BYHWT组和CIRI组的局灶性脑缺血再灌注大鼠模型。脑缺血2 h,分别再灌注10 d、19 d和28 d,采用免疫组化SP法检测海马CA4区Hes1和Hes5表达的阳性细胞数目,并进行单因素方差分析(one way ANOVA),两组间均数差异性比较采用t检验。结果:术后10 d和19 d,CIRI组大鼠海马CA4区的Hes1和Hes5阳性细胞密度较Sham组大(P0.01)。BYHWT组大鼠海马CA4区Hes1和Hes5阳性细胞密度较CIRI组及Sham组都大(P0.01);而在术后28 d,则显著低于CIRI组与Sham组(P0.01)。CIRI组和BYHWT组术后19 d大鼠海马CA4区阳性细胞密度分别较术后10天增加(P0.01);而术后28天阳性细胞密度较术后19天降低(P0.01)。结论:补阳还五汤在脑缺血再灌注损伤早中期通过上调大鼠海马CA4区Hes1和Hes5的表达,而在晚期通过下调其表达,而对局灶性脑缺血再灌注损伤产生神经修复作用,该作用的发挥可能是通过控制Hes1和Hes5的表达水平来调控Notch信号传导系统,进而调节NSCs的增殖与分化。     

补阳还五汤对局灶性脑缺血后星形胶质细胞谷氨酰胺合成酶的影响

目的观察补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后不同时间点谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)的影响。方法改良线栓法建立大脑中动脉栓塞/再灌注模型,术后进行补阳还五汤灌胃,每天2次,模型组给予等量的生理盐水。分别于第1天、第3天、第5天和第7天灌注取材,采用免疫荧光染色法检测各组大鼠星形胶质细胞GS的表达,免疫荧光双染确定GS的细胞定位。结果同假手术组相比,模型组海马CA1区GS的表达显著下降;同模型组相比,补阳还五汤组可显著提高海马CA1区GS表达,其中第3天和第5天GS达到最高水平。免疫荧光双染表明GS主要表达于星形胶质细胞。结论补阳还五汤可以提高大鼠脑缺血后海马CA1区星形胶质细胞GS的表达,从而增强星形胶质细胞转运谷氨酸的能力。     

壮药壮通饮对大鼠内源性脑神经干细胞归巢后神经元功能的影响

目的:观察壮药复方壮通饮对脑梗死模型大鼠内源性神经干细胞归巢后神经元功能的影响。方法:240只大鼠分为模型组、假手术组、壮通饮治疗组、正常组,采用线栓法制作脑梗死模型,于术后1、3、7、14、21、28d这6个时间点分批处死大鼠。用免疫组化法检测大鼠海马区Brd U、Nestin和梗死区域及相对应区域的MBP、SYN的阳性细胞数目。结果:模型组脑缺血区域相对应区域MBP、SYN阳性细胞大量表达,正常组和假手术组海马区少量Brd U、Nestin阳性细胞。模型组和壮通饮治疗组Brd U、Nestin阳性细胞表达增多,MBP、SYN阳性细胞表达减少。壮通饮治疗组Brd U、Nestin、MBP、SYN阳性细胞表达量多于模型组,Brd U、Nestin阳性细胞表达在第7天达到高峰,MBP、SYN阳性细胞表达于第14天达到高峰。结论:壮通饮可以促进脑梗死后内源性神经干细胞的增殖,诱导分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞,并发挥正常的神经功能。     

补阳还五汤对Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马NSCs增殖中的作用

目的探讨Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖中的作用及补阳还五汤促神经再生的机制。方法采用大脑中动脉阻塞法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)复制小鼠脑缺血模型,将野生型(wild type,WT)和小凹蛋白-1基因敲除小鼠(caveolin1 gene knockout,Cav1 KO)分别随机分为假手术组、模型组、补阳组,每组12只,腹腔注射Brd U标记增殖细胞,干预7 d后,采用免疫荧光Brd U/Nestin双标法检测小鼠缺血侧海马NSCs增殖情况,Western blot法检测Notch1、NICD、Hes1蛋白表达,Real time PCR法检测Notch1、Hes1m RNA表达。结果 MCAO法成功复制了小鼠脑缺血模型;WT模型组、补阳组和KO模型组、补阳组缺血侧海马Brd U/Nestin双标阳性细胞,Notch1、NICD、Hes1蛋白表达及Notch1、Hes1m RNA表达均增加,与相应假手术组比较,差异有统计学意义(P0.01,P0.05),同时,WT模型组要高于KO模型组(P0.05),WT补阳组要高于WT模型组和KO补阳组(P0.01,P0.05)。结论Cav1/Notch1/Hes1通路在小鼠脑缺血后海马NSCs增殖中发挥重要调控作用;通过上调Cav1/Notch1/Hes1通路活性是补阳还五汤促进缺血海马神经再生作用机理之一。     

补阳还五汤对脑出血大鼠血肿周围新生血管整合素αvβ3和β3亚基表达的影响

目的 通过观察益气活血中药补阳还五汤对脑出血大鼠血肿周围新生血管内皮整合素αvβ3和整合素β3亚基表达的影响,探讨益气活血法治疗脑出血的作用机制。方法 150只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、益气组、活血组、益气活血组（补阳还五汤）,通过立体定位向脑内苍白球注入Ⅶ型胶原酶0.5 U建立脑出血模型。假手术和模型组灌服蒸馏水,余各组灌服补阳还五汤及其益气组分、活血组分药物。运用免疫组织化学方法,并对结果进行半定量分析,检测各组术后3、7、14、21、28d各时点血肿周围新生血管内皮整合素αvβ3和整合素β3亚基的时空表达。结果 除假手术组,各组新生血管内皮整合素αvβ3和β3亚基的表达趋势大致相近,7d时各组表达达到高峰,益气活血组高峰延长至14 d,且各时点的表达较模型组增高(P＜0.05)。结论 补阳还五汤通过益气活血作用,能调节脑出血大鼠血肿周围新生血管整合素αvβ3和β3亚基的表达;通过参与脑出血后的血管新生,影响微血管系统重建,从而达到修复损伤组织的目的。     

补阳还五汤对脑缺血大鼠神经功能及细胞形态的影响

目的:探讨补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用。方法:189只大鼠随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组,每组63只,常规饲养1周后,采用线栓法制备脑缺血大鼠模型。补阳还五汤组动物于术后2 h后开始给药,给药剂量为5 g.kg-1.d-1,每日ig 1次。各组又分为三个亚组即分别于给药后7,14,21 d 3个时间点处死动物,观察各组不同时间点的脑梗死面积、神经功能评分及脑组织形态学变化。结果:各时间点补阳还五汤组脑梗死面积明显小于同时相模型组,其神经功能评分也均较模型组,差异具有统计学意义(P<0.05);且补阳还五汤组海马和皮质细胞形态明显改善,细胞排列较模型组整齐。结论:补阳还五汤促进脑缺血损伤后神经恢复和组织修复,具有脑保护作用。     

补阳还五汤对慢性脑缺血大鼠脑组织形态学的影响

目的:探讨补阳还五汤对慢性脑缺血大鼠脑组织形态学的影响。方法:SD大鼠,采用双侧颈总动脉结扎法复制慢性脑缺血大鼠模型。大鼠随机分为5组,即假手术组(给予等体积的生理盐水)、模型组(给予等体积的生理盐水)、补阳还五汤低剂量组[中药低剂量组,剂量为20 g/(kg·d)]、补阳还五汤高剂量组[中药高剂量组,剂量为40 g/(kg·d)]、阳性对照组[金纳多组,剂量为0.045 g/(kg·d)],每组10只大鼠,连续给药4周。结果:HE染色及焦油紫染色显示慢性脑缺血大鼠模型脑组织疏松,顶叶皮质轻度缺血性改变,神经元减少,细胞排列松散,海马CAI区神经细胞数目明显减少,排列紊乱;而各给药组大鼠脑组织损伤程度、细胞减少数目均有所缓解。结论:补阳还五汤能保护慢性脑缺血大鼠海马CAI区神经细胞,改善神经细胞的死亡。     

补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用研究

目的:探讨补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用线栓法制造大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,给药组给予补阳还五汤原方剂量的水煎液,每日一次,连续灌胃7d;模型组与假手术组均给予同体积生理盐水。测定SOD、GST和GSH-PX活性以及血清中MDA含量。结果:补阳还五汤可以显著提高脑缺血再灌注大鼠SOD、GST、GSH-PX的活性,明显抑制MDA的生成。结论:补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,抗氧化作用是其发挥脑缺血保护作用的机制之一。     

补阳还五汤干预下骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对于脑缺血大鼠神经修复的影响

目的观察中药复方补阳还五汤干预下骨髓间充质干细胞（MSCs）对于缺血性大鼠模型神经修复的影响。方法分空白对照,假手术组,移植组,药物干预移植组。观察12h、2d、7d3个时间点大鼠神经元阳性率及神经生长相关蛋白（GAP-43）的表达。结果药物干预移植组3个时间点神经元阳性表达均高于干细胞移植组,GAP-4312h开始升高,2d达到高峰,7d开始逐渐下降,药物干预移植组表达高于干细胞移植组（均P＜0．05）。结论中药复方补阳还五汤能够提高骨髓基质干细胞移植神经元的阳性表达率。增加神经生长蛋白的表达,促进相关损伤神经的修复。     

星蒌承气汤和补阳还五汤对脑缺血大鼠海马神经元损伤的影响

目的:通过观察和比较星萎承气汤和补阳还五汤对脑缺血大鼠海马神经元的保护作用,明确两方治疗脑缺血的时相性特点.方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、星蒌承气汤和补阳还五汤组;线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞;大鼠给药剂量为尼莫地平10.8 mg·kg-1、星蒌承气汤5.0 g·kg-1、补阳还五汤13.0 g·kg-1,造模前4d灌胃用药,脑缺血术后每天用药1次;大鼠分别于1,3,7d进行神经功能评分后取脑,测定脑组织含水量和脑梗死面积,观察海马神经元密度和病理损伤.结果:模型组大鼠神经功能明显降低(18.00±0.00 vs 7.43±1.27,8.86±1.34,10.25±1.03)、脑组织含水量增多(71.00±1.33)％ vs (79.85±1.73)％,( so.84±0.98)％,(82.86±1.15)％、脑梗死面积增大(0.00±0.00)％vs(16.73±1.13)％,(17.89±1.54)％,(19.32±1.21)％、海马神经元密度减小(153.57±15.62,118.71±9.98,79.38±6.02)、脑组织病理损伤加重;各用药组的神经功能、脑含水量、神经元密度和脑组织病理损伤均较模型组改善,尼莫地平组3d和7d、各中药组的脑梗死面积较模型组减小;与尼莫地平组比较,补阳还五汤各组的神经评分增高,7d的脑含水量减少、病理损伤减轻,两方药组的海马神经元密度增大;补阳还五汤组7d的神经功能(13.29±1.11)、脑含水量(77.94±2.00)％、海马神经元密度(124.29±11.64)、脑组织病理损伤均较星蒌承气汤改善明显.结论:星蒌承气汤和补阳还五汤对脑缺血海马神经元受损均具有保护作用,二者在缺血早期(1d和3d)的作用未见明显差异,但随着缺血时间的延长(7 d),补阳还五汤方显示出更为全面和显著的神经保护和功能修复作用.