脑源性神经营养因子对体外培养大鼠胚脑皮质神经元缺氧的保护作用

目的探讨脑源性神经营养因子（BDNF）对体外培养大鼠胚脑皮质神经元在低氧适应过程的保护作用。方法对胚鼠皮质神经元进行体外培养,观察透射电镜下缺氧诱导大鼠胚脑皮质神经元损伤的超微结构变化;采用MTT比色法检测正常对照组（A组）、不同缺氧时间点皮质神经元缺氧对照组（B组）及缺氧培养前24h和缺氧即刻加入不同剂量外源性BDNF实验组（C组）神经细胞存活率差别;4’、6-二脒基-2-苯基吲哚盐酸染色法结合凋亡细胞的原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果遭受缺氧损伤的大鼠胚脑皮质神经元超微结构显示缺氧可以诱导神经细胞坏死、凋亡和混合型细胞死亡;以神经元缺氧最为敏感的0～10h为研究时间,C组在缺氧0～6h时细胞活性显著高于缺氧对照组B组（P〈0．05）。凋亡神经细胞百分率低于缺氧对照组B组（P〈0．05）。结论缺氧可诱导体外培养大鼠胚脑皮质神经元死亡,早期加入外源性BDNF可以使神经元对低氧的耐受性增强而发挥其对神经元的保护作用。     

八肽胆囊收缩素对新生小鼠大脑皮层神经元生长的影响

目的：探讨八肽胆囊收缩素（octa-peptide cholecystokinin,CCK8）对体外培养的新生小鼠大脑皮层神经元生长的影响。方法：原代培养新生小鼠大脑皮层神经元,采用烯醇化酶（neuron-specific enolase,NSE）免疫细胞化学染色法鉴定皮层神经元,培养24h的皮层神经元随机分为对照组和CCK8刺激组（终浓度为10-7mol/L）,作用24h、48h、72h、96h后,倒置相差显微镜下行动态观察,MTT法检测细胞的生长活性并以OD值绘制生长曲线。结果：CCK8处理后,有突起的神经元数目增加,存活时间延长,同一时间点的细胞活性明显增强,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：CCK8能促进皮层神经元的生长,延长其存活时间。     

EGCG对体外培养胚鼠皮层神经细胞的保护作用

目的观察表没食子儿茶酚没食子酸酯(EGCG)对体外培养的胚鼠皮层神经细胞生长的影响。方法离体培养昆明种小鼠胚鼠大脑皮层神经细胞,至第5天加入不同浓度的EGCG(1、5、10、20、40、60、80和100μmol/L),通过倒置相差显微镜和NSE免疫细胞化学染色法进行神经元形态观察,应用中性红比色法和MTT法测定神经细胞的存活数和细胞活性。结果EGCG实验组培养48h后,与对照组比较,能明显促进神经细胞存活及突起生长,可增加神经细胞的存活数,提高神经细胞内酶的活性,尤其在10～40μmol/L的浓度范围内差异较显著(P<0.01)。结论在5～100μmol/L的浓度范围内,EGCG均有一定的促细胞生长作用,可增加神经细胞的存活数,提高神经细胞内酶的活性。     

脑缺血灶周围组织提取液对培养神经元的神经营养作用

本文用线栓法制备鼠右侧大脑中动脉闭塞模型，分离新生鼠前脑皮质、基底节神经元进行原代培养，以维持神经元存活的总数和长出神经突出超过１００μｍ的神经元数目分别来反映脑缺血灶周围组织提取液（ＩＢＴＥ）中神经营养因子（ＮＴＦｓ）和促进神经元突起生长的神经营养因子（ＮＰＦｓ）的存在及其活性。结果显示：缺血对侧ＢＴＥ和ＩＢＴＥ维持神经元存活的总数和长出神经突超过１００μｍ的神经元数目均较空白对照组明显增加（Ｐ＜０．０１）；ＩＥＴＥ的这种作用较缺血对侧脑组织提取液的作用更为显著；随着缺血后时间的延长，ＩＢＴＥ的神经营养活性有增加趋势。结果提示ＩＢＴＥ含有维持体外培养的神经元存活（ＮＴＦｓ）和促进神经突起生长（ＮＰＦｓ）的神经营养因子的存在。这对脑缺血后神经元的损伤修复可能起重要作用。     

大鼠胚胎小脑提取液对培养脊髓神经细胞的作用

目的：探讨不同胎龄大鼠小脑提取液（ＣＥ）对体外培养脊髓神经细胞的影响。方法：制备不同蛋白浓度的１４,１６,１８,２０ｄ胎鼠（Ｅ１４,Ｅ１６、有８、Ｅ２０）ＣＥ〈加入原代培养的Ｅ１６胎鼠脊髓神经细胞中,２４ｈ后以微量快速自动比色法检测细胞活性。结果：实验组各胎龄ＣＥ均能促进培养脊髓神经元的存活,并有蛋白浓度依赖关系,与对照组及其它各实验组相比有极显著性差异,Ｅ１４和Ｅ１８ＣＥ分别在蛋白浓度为０．２０     

大黄素、川芎嗪对中分子物质损伤人胚大脑皮层神经元影响的实验研究

目的研究大黄素、川芎嗪对中分子物质引起大脑皮层神经元损伤的保护作用。方法在人胚大脑皮层神经元培养体系中，加入不同浓度的大黄素、川芎嗪及主要中分子物质损伤组份（MMSⅢ）进行四唑嗅蓝（MTT）快速自动微显比色分析测A值及自动速率法测乳酸脱氢酶（LDH）漏出量实验。结果①10μg／ml浓度的大黄素、川芎嗪加入体外培养的人胚大脑皮层神经元后，A值与LDH漏出量均与对照组无显著性差异，此浓度对神经元无损伤作用。②10μg／ml浓度的大黄素与MMS见共同加入体外培养的人胚大脑皮层神经元，A值与LDH漏出量均与损伤对照组有显著差异，川芎嗪则无显著差异。结论大黄素对大脑皮层神经元有免受MMSⅢ损伤而具保护作用，川芎嗪则无保护作用。     

急性热应激小鼠大脑皮层神经元NOS活性的变化

【目的】研究急性热应激后小鼠大脑皮层神经元一氧化氮合酶活性的时程变化。【方法】建立小鼠急性热应激模型，采用NADPH—d组织化学，研究热应激后0，1，3，6，12，24，48h小鼠皮层NADPH—d阳性神经元数量。【结果】热应激后1，3，24h组NADPH．d阳性神经元数量比对照组明显减少，差异有显著性（P〈0．05）。热应激后12h组NADPH—d阳性神经元数量比对照组明显升高，差异有显著性（P〈0．05）。0．6，48h组NADPH—d阳性神经元数量与对照组比较差异无显著性（P〉0．05）。【结论】热应激后大脑内一氧化氮合酶活性的变化与热应激后脑损伤有密切关系。     

大鼠胚胎小脑提取液对培养脊髓神经细胞的作用

为探讨不同胎龄大鼠小脑提取液(CE)对体外培养脊髓神经细胞的影响,制备不同蛋白浓度的14d、16d、18d和20d胎鼠(E14,E16,E18,E20)CE,加入原代培养的E18胎鼠脊髓神经细胞中,24h后以微量快速自动比色法检测细胞活性。结果显示,实验各胎龄CE均能促进培养脊髓神经元的存活,并有蛋白浓度依赖关系,与对照组及其它各实验组相比有极显著性差异(P<0.01),E14和E18CE分别在蛋白浓度为0.20mg/ml和0.40mg/ml时有最大神经营养活性。结果提示CE对培养脊髓神经细胞具有明显的营养作用,为利用胚胎小脑移植修复脊髓损伤提供了实验依据。     

鸡胚内神经营养活性物质的提取及其生物活性

 【目的】从鸡胚内提取具有神经营养生物活性的组分。【方法】分别取胚龄为E10、E16、E19的鸡胚，匀浆离心后，上清超滤，获得5个组分，即相对分子质量Mr〈3×10^3、Mt=3×10^3～〈10×10^3、Mt=10×10^3～〈30×10^3、Mr=30×10^～≤50×10^3与Mr〉50×10^3。采用新生大鼠海马神经元与鸡胚背根节体外培养方法，观察各组分的促神经元存活及突起生长的作用。用MTT法测定神经元的活性。【结果】胚龄E16与E19的鸡胚内相对分子质量M〉50×10^3的组分有明显的促进海马神经元细胞存活、分化和突起生长及鸡胚背根节突起生长的作用。【结论】鸡胚内含有较强的促进神经元存活、分化与突起生长的神经营养活性物质。     

复方白花前胡液对拟缺血诱导的神经细胞凋亡的影响及其机制研究

[目的]探讨复方白花前胡液对拟缺血诱导的神经细胞凋亡的影响及其作用机制。[方法]培养的细胞随机分为空白对照组、模型组、复方白花前胡液大剂量组、复方白花前胡液中剂量组,每组10孔。将培养的神经元细胞采用缺氧罐和无糖Earle＇s液进行缺氧／缺糖处理3h,再复氧复糖24h后,显微镜下观察培养的海马神经元细胞的形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,并分别检测乳酸脱氢酶含量及细胞游离钙的含量。[结果]1．复方白花前胡液中、高浓度实验组细胞凋亡率分别下降至（21．4±3．9）％、（23．6±2．8）％,与模型组相比差异有显著性意义（P〈0．01）。2．各复方白花前胡液纽在不同时点LDH释放率与模型组相比降低明显,差异有显著性意义（P〈0．05）。3．复方白花前胡液实验组与模型组比较缺氧／缺糖培养3h,复氧复糖24h胞内Ca^2＋浓度下降,差异有显著性意义（P〈0．05）。[结论]复方白花前胡液能使神经细胞具有抗缺氧／缺糖损伤作用。     

谷氨酸对培养大鼠皮层神经细胞的毒性作用

目的 探讨谷氨酸对体外培养的大鼠皮层神经细胞的损伤作用。方法 在对体外新生大鼠（0－1d)大脑皮层神经细胞进行原代培养的基础上，分组加入不同浓度的谷氨酸作用10min,24h后测定细胞死亡率、乳酸脱氢酶（LDH）和超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量。结果 大鼠皮层神经细胞在50μmol/L谷氨酸作用10min后，细胞死亡率和LDH活性增加，SOD活性降低，神经细胞MDA含量增高。随着谷氨酸浓度的增加，上述变化更明显。结论 谷氨酸可损伤培养大鼠皮层神经细胞，这种作用在某种程度上由氧自由基介导。     

依达拉奉影响缺血性神经元TNF-α和TGF-β1表达过程的实验研究

目的：观察依达拉奉（edaravone，E）对局部短暂性脑缺血再灌注模型ICR小鼠海马CAl区TNF-α和TGF-β1表达过程的影响并探讨其作用机制。方法：夹闭ICR小鼠左颈内动脉近端20min后恢复灌流，分别于第8，24，48h,4、7、14天取材并进行TNnd和TGF-β1免疫组化染色和常规HE染色，比较光镜下假手术组、缺血／再灌注组（模型组）、治疗组（缺血／再灌注＋依达拉奉组）海马CA1区TNF-α和TGF-β1表达细胞数和存活神经细胞数（平均灰度值表示）。结果：①治疗组和模型组海马CAl神经细胞存在早期TNF-α表达，治疗组中表达较模型组低（8、24、48h，P〈0．01）、4天后表达消失。②该区神经细胞的TGF-β1表达过程各不相同：模型组早期表达低于假手术组（8、24、48h，P〈0．01），晚期高于假手术组（4、7、14天，P〈0．01）；治疗组为持续高表达，早期显著高于模型组（8、24、48h，P〈0．01），也显著高于假手术组（8、24、48h，P〈0．01）：晚期高表达与模型组相似，显著高于假手术组（7、14天，P〈0．01）。③缺血后该区的神经细胞存活表现：模型组中存活细胞显著少于假手术组（7、14天，P〈0．01），而治疗组神经细胞丢失不明显，存活细胞数高于模型组（7、14天，P〈0．01）、与假手术组差别无显著性（7、14天，P〉0．05）。结论：早期依达拉奉治疗显著改变局灶性短暂脑缺血再灌注小鼠海马CA1区TNF-α和TGF-β1表达过程，降低TNF-α的早期活性表达，提高TGF-β1早期表达水平，且神经细胞无明显丢失，有脑保护意义。依达拉奉治疗作用可能和缺血／缺氧后神经细胞TNF-α和TGF-β1活性表达过程有关。     

不同时间脑室注射BDNF对大鼠脑缺血再灌注损伤氧化应激及神经细胞凋亡的影响

目的：比较大鼠脑缺血再灌注（I／R）损伤前后不同时间脑室内注射外源性脑源性神经营养因子（BDNF）对脑缺血再灌注后氧化应激及神经细胞凋亡的影响．方法：采用大鼠大脑中动脉线栓法建立局灶性脑I／R损伤模型,分别于缺血前12,6h、缺血即刻（0）及再灌注6,12h经侧脑室注射0．5μgBDNF．观察指标为超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及脑皮层凋亡神经细胞,每组随机取一术侧大脑皮层行常规透射电镜标本制备,观察脑组织超微结构的改变．结果：与I／R组比较,BDNF侧脑室给药各组脑组织SOD活性明显增强,MDA含量明显降低,给药各组中脑皮层神经细胞凋亡指数均明显降低（P〈0．05或P〈0．01）;以BDNF缺血前12,6h给药组脑组织SOD活性较高、MDA含量以及神经细胞凋亡指数较低（P〈0．05或P〈0．01）．透射电镜观察,I／R组缺血侧脑皮层神经细胞染色质浓缩、集聚或边集化,部分崩解,胞质肿胀、扩张,线粒体肿胀,线粒体嵴断裂甚至消失．部分凋亡细胞裂解成小碎片,由膜结构包裹部分细胞核和细胞质而形成凋亡小体;而BDNF给药各组缺血侧脑皮层神经细胞超微结构损伤改变不大或仅有轻微改变,胞质相对比较均匀,染色质轻度聚集,核仁存在,线粒体结构基本正常或仅轻微改变．结论：不同时间脑室内注射BDNF对大鼠局灶性脑I／R损伤均有不同程度的保护作用,此作用可能与BDNF能够增加体内抗氧化物质SOD的活性并能抑制脑缺血再灌注后神经细胞凋亡等因素有关,其中以缺血前应用的脑保护效果较为明显．     

活血效灵丹对脑出血兔血脑屏障及脑组织超微结构的影响

目的 研究脑出血后应用活血效灵丹对血脑屏蔽（BBB）及脑组织超微结构的影响。方法 以胶原酶诱导家兔脑出血模型，观察不同时间（6h,24h)活血交灵丹灌胃对血肿周围脑组织伊文斯兰（EB）含量及超微结构的影响。结果 （1）模型组脑组织EB含量在第4，7天均较正常对照组明显增高（P＜0．05－0．01），且血肿侧明显高于对侧（P＜0．001）；6h,24h治疗组血肿周围脑组织EB含量在造模后第4，7天均较模型组降低（P＜0．01－0．05），但6h治疗组和24h治疗组相比，EB含量下降的程度无明显差别（P＞0．05）。（2）模型组神经元，胶质细胞及其亚细胞结构和毛细血管均可见明显损害，治疗组均有不同程度的减轻，6h治疗组的效果优于24h治疗组。结论 脑出血后应用活血效灵丹具有保护BBB和脑组织超微结构的作用；超早期（6h)用药对BBB的保护作用无明显优势，但有利于减轻神经细胞超微结构的损害。     

己酮可可碱对新生大鼠缺血缺氧性脑病的干预作用

目的观察己酮可可碱（PTX）对新生大鼠缺血缺氧性脑病（HIE）模型的干预作用。方法建立新生大鼠HIE模型，72只出生7d的Wistar大鼠随机分为假手术组，HIE模型组和PTX组，于缺血缺氧后72h取左脑，测定脑组织水含量、大脑皮层神经细胞内游离钙离子浓度、SOD、MDA、NOS及NO。结果与HIE模型组相比，PTX组脑组织含水量、游离钙离子浓度和MDA、NOS以及NO水平均显著降低（P〈0．05；P〈0．01；P〈0．05；P〈0．05；P〈0．05），SOD水平显著升高（P〈0．05）。结论PTX对新生大鼠缺血缺氧后脑组织有保护作用，其机制可能与PTX改善能量代谢及减少局部细胞毒性物质有关。     

银杏叶提取物对实验大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的影响

目的 观察银杏叶提取物（EGb761)对实验大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的影响，探讨EGb761对脑外伤的治疗作用。方法 采用Feeney法自由落体撞击脑损伤动物模型，将90只大鼠随机分为研究组及对照组，在损伤后15min,60min及24h分别腹腔注射EGb761及生理盐水。第5天用TUNEL法测定神经细胞原位凋亡、大脑半球含水量、光镜下观察细胞形态学改变。结果 与对照组比较，大鼠脑外伤后15min及60min给予EGb761能显著降低神经细胞凋亡率和脑组织含水量（P＜0．05），外伤后24h给药，神经细胞凋亡率和脑组织含水量差异无显著性（P＞0．05）。结论 EGb761有抗大鼠脑外伤后神经细胞凋亡及减轻脑水肿的作用，但应在外伤后尽早用药。     

异丙酚、氯胺酮对大鼠大脑皮层星形胶质细胞缺氧复氧损伤的影响

目的观察异丙酚和氯胺酮对缺氧复氧大鼠大脑皮层星形胶质细胞损伤的影响。方法取新生2～3dWistar大鼠大脑皮层星形胶质细胞，原代纯化培养3周。将细胞分为正常对照组（Nor组），缺氧6h后复氧24h组（Ano组），加异丙酚50μmol／L缺氧6h后复氧24h组（Pro组），加氯胺酮50μmol／L缺氧6h后复氧24h组（Ket组），加异丙酚和氯胺酮各50μmol／L缺氧6h后复氧24h组（PK组）。检测皮层星形胶质细胞内游离钙浓度（[Ca^2＋]i）、凋亡及丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）活性，并观察细胞形态学的改变。结果与Nor组比较，Ano组细胞大量凋亡，[Ca^2＋]i和MDA含量升高，SOD和GSH活性均降低（均P〈0．01），未凋亡的星形胶质细胞增生肥大。与Ano组比较，Pro组、Ket组和PK组凋亡均明显减少，[Ca^2＋]i和MDA含量降低，SOD和GSH活性均有不同程度的恢复和升高（P〈0．05，P〈0．01），细胞无明显增生肥大。Pro组和Ket组间比较差异无统计学意义（P〉0．05），Pro组和Ket组分别与PK组比较差异有统计学意义（均P〈0．01）。结论异丙酚和氯胺酮均可通过抑制缺氧复氧损伤大鼠海马星形胶质细胞内钙超载和脂质过氧化反应，清除自由基而发挥保护作用，且两者有协同作用。     

钙通道阻断剂治疗外伤性脑水肿的机理

通过大鼠神经细胞培养模型及脑外伤模型，观察了钙通道激动剂及钙通道阻断剂对培养神经元钙离子通道电流（ICa）的影响，检测了外伤后脑组织含水率、脑脊液中兴奋性氨基酸（EAA）含量及分离神经元ICa的变化，以及尼莫地平对其影响。结果显示，BayK8644、Glu、Asp可使培养神经元ICa增加，并存在明显的剂量依赖关系。尼莫地平对ICa有明显抑制作用。外伤后脑组织含水率、脑脊液EAA含量均较对照组明显增加（P＜0．05），用尼莫地平治疗后两者均明显下降（P＜0．05）。尼莫地平使伤侧分离神经元ICa下降明显大于健侧（P＜0．05）。结果证明，尼莫地平能减轻脑水肿、抑制脑外伤后EAA释放及直接减少神经元钙通道电流（Ca2+内流），明确了钙通道阻断剂治疗外伤性脑水肿的部分机理。     

三七总皂苷对氧糖剥夺的皮质神经元损伤的保护作用

目的：研究三七总皂苷（PNS）对氧糖剥夺的皮质神经元损伤的保护作用。方法：采用原代培养的大鼠大脑皮层神经细胞,经不同浓度的PNS预处理后,建立氧糖剥夺（OGD）模型,2小时后复氧复糖,模拟再灌注模型。通过MTT比较神经元的存活情况,并测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的活性变化,以及Bcl-2蛋白表达的变化。结果：OGD作用120分钟后细胞活性明显下降,细胞内SOD活性下降,MDA含量升高。PNS 25、50mg/L能明显提高细胞的存活率,SOD活性回升,MDA含量趋向正常,Bcl-2蛋白含量增加。结论：PNS对缺氧缺糖条件下的大鼠皮层神经细胞有保护作用,其保护作用可能与其抑制神经细胞脂质过氧化反应、提高Bcl-2蛋白表达有关。     

大鼠脑内成分对体外培养的成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的研究大鼠脑组织固有成分对体外培养的成骨细胞增殖、分化和矿化的影响，探讨合并脑外伤骨折愈合加快的可能原因。方法提取大鼠全脑、灰质、白质、垂体、肌肉、肝脏、大鼠血清等．制成匀浆提取液．体外培养大鼠成骨细胞．与空白培养液作对照观察大鼠各组织提取液对成骨细胞增殖、分化和矿化的作用。结果对成骨细胞增殖的影响：脑内灰质和白质成分较其他提取液显著促进成骨细胞增殖（P〈0．01）。其中灰质成分最为明显；对成骨细胞分化的影响：灰质，白质，血清成分对成骨细胞ALP活性的影响明显较其它各组高（P〈0．01），其中灰质成分为最高（P〈0．01）；对成骨细胞矿化的影响：肌肉组轻度抑制成骨细胞矿化结节形成（P〈0．05），其他各组无显著性差别。结论大鼠脑组织中灰质和白质能显著促进成骨细胞增殖和分化．尤以灰质为最强，但并不能明显促进成骨细胞矿化。脑外伤后脑组织内固有成分释放入血可能和合并脑外伤的骨折愈合加速有一定关系。