黄芪多糖对胃癌细胞的生长抑制和促凋亡作用

目的研究黄芪多糖对胃癌细胞的生长抑制及诱导凋亡作用。方法用RPMI1640培养液对低分化人胃腺癌细胞株MKN45、高分化人胃腺癌细胞株MKN28进行传代培养,取对数生长期细胞培养24h后分别予不同浓度的塞来昔布和黄芪多糖,空白阴性对照组只加培养液不加细胞。用噻唑蓝（MTT）法观察黄芪多糖及塞来昔布对胃癌细胞株MKN45和MKN28增殖的影响;用流式细胞术方法测药物作用后细胞凋亡和细胞周期变化。结果黄芪多糖和塞来昔布均可抑制胃癌细胞株MKN45和MKN28的增殖,效应呈浓度和时间依赖性,塞来昔布各浓度组加药24、48 h后,MKN45、MKN28均明显低于空白阴性对照组（P〈0.05,P〈0.01）;而黄芪多糖5～20 mg/mL范围内加药24、48 h后MKN45、MKN28均明显低于空白阴性对照组（P〈0.01）,而黄芪多糖2～2.5 mg/mL浓度组加药48 h MKN28低于空白阴性对照组（P〈0.05）。黄芪多糖可诱导MKN45细胞凋亡,阻滞MKN45细胞周期于G1期,但对MKN28细胞凋亡和细胞周期无明显影响;塞来昔布可诱导MKN45细胞凋亡,但对MKN28细胞凋亡及2种细胞的细胞周期均无明显影响。结论黄芪多糖能抑制胃癌细胞增殖,其机制之一是影响细胞周期使之阻滞于G1期,诱导细胞凋亡。     

胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞周期影响

目的观察胡桃醌对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及细胞周期的影响。方法采用MTT法检测胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞生长抑制作用;采用流式细胞仪检测胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞周期的影响;采用Western Blot检测卵巢癌SKOV3细胞Cyclin D1和Cyclin E的表达。结果与对照组比较,不同剂量胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞具有抑制作用且呈剂量依赖性,IC50为30.13μmol/L,将细胞周期阻滞在G0/G1期。与对照组比较,胡桃醌处理组细胞周期蛋白Cyclin D1表达降低(P0.05),而Cyclin E蛋白表达变化不显著。结论胡桃醌通过抑制Cyclin D1的表达抑制细胞周期G0/G1期阻滞,抑制细胞生长。     

加减血癥汤对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡及周期的影响

目的:探讨加减血癥汤对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:采用甲基噻唑(MTT)比色法和生长曲线测定不同浓度加减血癥汤在不同作用时间内对在体外培养的SGC-7901细胞增殖的影响,同时应用流式细胞术检测凋亡率及细胞增殖周期的变化。结果:加减血癥汤可明显抑制SGC-7901细胞的增殖,并呈时间-剂量依赖性;相同作用时间下,加减血癥汤的浓度越高,对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高,处于G0/G1期的细胞比例逐渐增多,S期细胞比例出现相对减少。结论:加减血癥汤能抑制人胃癌细胞SGC-7901生长,诱导细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于G0-G1期。     

黄芪酵母菌发酵液抗肿瘤活性研究

目的:观察不同剂量的黄芪酵母菌发酵液对体外培养H22细胞增殖及细胞凋亡和细胞周期的影响.方法:采用MTT法测定不同浓度黄芪发酵液作用时间不同(24h、48 h、72 h)对H22细胞的生长抑制作用；采用流式细胞仪PI染色法检测黄芪发酵液对H22细胞周期分布的影响；采用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双标法检测对H22细胞凋亡率的影响.结果:随着黄芪发酵液浓度增大和时间延长,对H22肿瘤细胞的抑制作用也更加明显,72 h时最高抑制率为32.54％；随着黄芪发酵液浓度的增加,Go/G1细胞的比率逐渐增加,高浓度组细胞凋亡率为(15.25±6.07)％.结论:黄芪酵母菌发酵液对H22细胞生长有一定抑制作用,诱导肿瘤细胞发生G1期阻滞,并使细胞凋亡.     

莪术醇对人胚肺成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨莪术醇对人胚肺成纤维细胞增殖抑制作用.方法:MTT法观察莪术醇对人胚肺成纤维细胞增殖的抑制作用;天狼猩红染色法测定细胞胶原的分泌能力,流式细胞术检测细胞周期时相分布.结果:50～200 mg·L-1莪术醇作用细胞后能抑制人胚肺成纤维细胞的增殖和制胶原沉积,以96 h效果最为明显,并阻滞细胞停滞于G0/G1期,降低S期和G2/M期细胞时相比例.结论:莪术醇通过将细胞周期阻滞于G0/G1,减少DNA复制,抑制人胚肺成纤维细胞增殖和细胞分泌胶原.     

中药蛇六谷提取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖影响的实验研究

目的:观察蛇六谷提取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响,探讨其可能的作用机理。方法:采用系统溶剂法初步提取分离蛇六谷不同提取物,运用MTT法和生长曲线法观察不同浓度的各提取物对人胃癌SGC-7901细胞的增殖的影响,流式细胞仪检测蛇六谷石油醚萃取物对该细胞周期分布及凋亡的影响。结果:蛇六谷醇提取物、石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物均具有一定的抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的作用,以石油醚萃取物的抑制作用最为明显,呈现较好的剂量-效应曲线。生长曲线法观察发现蛇六谷石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用有一定的时间-效应曲线;流式细胞仪检测发现蛇六谷石油醚萃取物可阻滞SGC-7901细胞周期于G0/G1期,分析表明其作用机理可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。结论:蛇六谷石油醚萃取物可能是该药抗肿瘤的有效部位之一。     

茅苍术提取物对胃癌BGC-823和SGC-7901细胞增殖抑制作用研究

目的探讨茅苍术提取物对胃癌细胞株BGC-823和SGC-7901的增殖抑制效应。方法采用不同浓度(0.625,1.25,2.55,10 mg.mL-)1茅苍术水提物处理胃癌BGC-823和SGC-7901细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物对细胞的抑制作用;倒置显微镜下观察细胞的形态学改变;Hoechst 33342染色,荧光显微镜观察细胞凋亡形态;应用流式细胞仪观察凋亡过程中的细胞周期变化。结果茅苍术提取物对胃癌BGC-823和SGC-7901细胞增殖均有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性;光镜下可见凋亡细胞的形态学特征性改变;流式细胞仪检测表明经茅苍术提取物处理,BGC-823细胞周期阻滞于S期,SGC-7901细胞周期阻滞于G0/G1期。结论体外实验显示茅苍术提取物能抑制胃癌BGC-823和SGC-7901细胞增殖,可以诱导胃癌细胞凋亡。     

黄芪注射液合用TAM对人乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的:黄芪注射液与TAM合用对雌激素受体阳性人乳腺癌MCF-7细胞增殖凋亡的影响。方法:实验分为空白对照组,TAM对照组和与TAM合用5个不同剂量的黄芪注射液组。MTT法检测增殖,流式细胞仪分析细胞周期,PI染色检测凋亡率,DAN ladder观察凋亡。结果:与TAM合用,各剂量黄芪注射液均呈现抑制MCF-7细胞增殖的效应(P0.05),随着作用时间延长,72 h其效应呈剂量依赖性。高剂量黄芪注射液作用72 h诱导MCF-7细胞凋亡。与TAM合用24 h,2×10-1g/mL剂量组阻滞细胞周期于S期(P0.05),2×10-2g/mL剂量组阻滞细胞周期于G0/G1期(P0.05)。结论:与TAM合用,黄芪可抑制雌激素受体阳性的乳腺癌细胞增殖,一定剂量范围内可诱导其凋亡,阻滞细胞的有丝分裂于S或G2/M期。     

南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞增殖抑制作用的研究

目的:研究南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用和机制。方法:采用MTT法检测南方红豆杉水提物对A549细胞增殖的抑制作用;生长曲线法观察其抑制A549细胞的时间-效应曲线;流式细胞仪检测其对A549细胞周期及凋亡的影响;倒置显微镜及电镜观察其对A549细胞形态的影响。结果:南方红豆杉水提物对A549细胞的增殖有抑制作用;其抑制作用机制为使A549细胞周期出现明显的G0/G1期阻滞,诱导细胞凋亡。结论:南方红豆杉水提物对人肺癌A549细胞的增殖有抑制作用。     

祁连圆柏对人胃癌细胞SGC-7901细胞周期和凋亡影响的实验研究

目的:探讨祁连圆柏体外对人胃癌细胞SGC-7901细胞周期和凋亡的影响。方法:采用MTT显色法,检测不同浓度祁连圆柏醇提物作用不同时间后对SGC-7901细胞增殖的影响;光镜观察凋亡细胞的形态特点;流式细胞术(FCM)检测其诱导细胞凋亡的细胞周期阻滞点;免疫组化SP法检测SGC-7901细胞增殖核抗原PCNA表达及凋亡相关基因蛋白P53、Fas表达。结果:祁连圆柏对SGC-7901细胞增殖有明显的抑制作用,并使G2/M期细胞增多,G0/G1期细胞减少。20μg/ml用药24小时在G1期细胞前出现亚二倍体峰,既"凋亡峰"出现。药物组细胞PCNA表达明显低于空白组,Fas表达明显升高,而P53在诱导前后均无表达。结论:祁连圆柏可抑制SGC-7901细胞增殖及侵袭性并可通过诱导该细胞系凋亡发挥抗肿瘤作用,以上作用均有剂量和时间依赖性;Fas基因激活和G2/M期阻滞可能是诱导人胃癌细胞SGC-7901细胞凋亡的主要机制。     

青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:研究青蒿琥酯对人结肠癌HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响.方法:实验分为10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组,阴性对照组和空白对照组.采用透射电镜和流式细胞仪检测青蒿琥酯对HCT-8细胞的凋亡诱导效果;采用流式细胞仪分析青蒿琥酯对HCT-8细胞周期的影响;采用Western blot印迹法检测青蒿琥酯对细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响.结果:经青蒿琥酯处理后,电镜下可见HCT-8细胞膜皱缩、染色质凝聚、核碎裂、凋亡小体形成.10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组凋亡率分别为17.1％±3.8％,29.5％±5.1％,41.4％±5.8％,显著高于空白对照组5.1％±1.4％.P＜0.05.在20 μmol· L-1青蒿琥酯处理组,HCT-8细胞G0/G1期所占比例随着药物作用时间延长而增加,S期与G2/M期细胞所占比例则下降.10,20,30 μmol·L -1青蒿琥酯处理组Bax蛋白表达水平分别为0.20±0.03,0.40±0.05和0.50±0.08显著高于空白对照组(0.06 ±0.02),P＜0.05;Bcl-2蛋白表达水平未见明显变化,Bcl-2/Bax呈下降趋势.结论:青蒿琥酯可以抑制人结肠癌细胞HCT-8增殖,诱导细胞凋亡,其诱导凋亡作用机制可能与其阻滞结肠癌细胞周期和上调促癌基因Bax表达有关.     

淫羊藿苷对血管平滑肌细胞周期及周期相关蛋白表达的影响

目的 研究淫羊藿苷（icariin．ICA）对同型半胱氨酸（homocysteinemia,HCY）诱导增殖的血管平滑肌细胞（vascular smooth musckle cell．VSMC）细胞周期的影响及其机制。方法建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48h后,用流式细胞仪检测VSMC细胞周期变化及细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1和CDK4的表达。结果0．2mg／L、0．4mg／L ICA组G0／G1期细胞数明显增多,s期细胞数明显减少,与HCY组相比有统计学意义（P〈0．01）;CyclinDl和CDK4的表达量均随ICA剂量增加而减少。结论 ICA桔抗HCY诱导的兔VSMC增殖．其主要机制可能与Cyclin D1及CDK4的低表达所致的细胞周期抑制有关。     

富于T/组织细胞型的弥漫大B细胞性淋巴瘤的误诊分析

目的：探讨富于T细胞/组织细胞型的弥漫大B细胞性淋巴瘤（TCRBCL）的病理形态、预后和免疫组化的特点及鉴别诊断。方法：根据WHO淋巴瘤分类（2008版）的标准对4例TCRBCL进行临床、组织病理和免疫组化分析,应用全自动免疫组化仪（DAKO）检测瘤细胞及背景细胞的免疫表型,抗体包括CD20,CD79a, CD3,CD15,CD68,CD30、CD10,BCL-6,CD21。结果：少量肿瘤性大细胞分布于小淋巴细胞及组织细胞背景中,免疫组化肿瘤性大细胞CD20阳性,背景小细胞CD3阳性,组织细胞CD68阳性。结论：TCRBCL是一个独立的组织学类型,是弥漫大B细胞性淋巴瘤的形态学变异体,易误诊为霍奇金淋巴瘤、反应性淋巴组织增生、淋巴瘤样肉芽肿病等,诊断应结合形态学和免疫表型特征。     

健脾化瘀方对胃癌细胞SGC-7901凋亡和周期的影响

目的:观察健脾化瘀方体外对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:①采用MTT法观察不同浓度健脾化瘀方体外对人胃癌细胞株SGC-7901增殖的抑制作用;②用Annexin V/PI荧光双染法检测健脾化瘀方诱导肿瘤细胞进入凋亡的影响;③用流式细胞仪检测健脾化瘀方对SGC-7901细胞周期的阻滞效应。结果:①健脾化瘀方能抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖,随着药物浓度的增大以及作用时间的延长,其对细胞的抑制率也明显增强,呈现剂量及时间依赖性。②当2mg/ml和4mg/ml健脾化瘀方作用于人胃癌SGC-7901细胞48h可显著诱导细胞凋亡的产生。③细胞周期方面,健脾化瘀方作用于人胃癌细胞SGC-7901后G2/M期比例与阴性对照组相较显著上升,G0/G1期稍有上升,而S期比例下降,表明细胞被阻滞于G2/M期。结论:健脾化瘀方可明显抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖作用并能够诱导该细胞凋亡,改变细胞周期。     

细胞凋亡机制概述

细胞凋亡是一种重要的生物学过程,是在基因调控下所发生的一系列细胞主动死亡过程。就近几年细胞凋亡信号传递机制、酶学机制以及基因调控机制的研究作一概述。     

细胞凋亡机制概述

细胞凋亡是一种重要的生物学过程,是在基因调控下所发生的一系列细胞主动死亡过程。就近几年细胞凋亡信号传递机制、酶学机制以及基因调控机制的研究作一概述。     

通莲Ⅰ号方及其拆方对食管癌Eca109细胞增殖及细胞周期的影响

目的:研究通莲Ⅰ号方及其拆方在不同浓度下对食管癌Eca109细胞形态和生长周期的调节作用;探讨该方抑制食管癌细胞增殖的机制.方法:将Eca109细胞以l x106个／皿密度接种于Φ100 mm培养皿中,以10％小牛血清DMEM培养液培养,37℃,5％饱和湿度的CO2培养箱孵育,细胞贴壁24 h,分别加入浓度为25～3 200 mg·L-1倍比梯度的通莲Ⅰ号方(T)、清热解毒拆方(Q)、活血行气拆方(H)、滋阴养血拆方(Z)等4方提取液,孵育48 h后,MTT比色法检测细胞增殖变化、光镜观察细胞形态、流式细胞技术(FCM)测定细胞周期.结果:T,Q,H的1C50值分别为386,771,729 mg·L-1;与空白对照组(C)相比,T,Q,H3方显著影响Eca109细胞周期变化:G1期细胞所占比率分别为69.43％,60.84％,61.90％.同时,T,Q,H组细胞的S期与C组比较,均有显著性差异(P＜0.05),T方作用最强.而Z方对细胞的抑制作用较弱,与C组无显著性差异.结论:通莲Ⅰ号方通过抑质细胞进入S增殖期从而干预食管癌Eca109细胞生长,各拆方具有协同作用,全方作用最优.     

通莲I号方及其拆方对食管癌Eca109细胞增殖及细胞周期的影响

目的: 研究通莲I号方及其拆方在不同浓度下对食管癌Eca109细胞形态和生长周期的调节作用;探讨该方抑制食管癌细胞增殖的机制。 方法: 将Eca109细胞以1×10⁶个/皿密度接种于Φ100 mm培养皿中,以10％小牛血清DMEM培养液培养,37 ℃,5%饱和湿度的CO₂培养箱孵育,细胞贴壁24 h,分别加入浓度为25~3 200 mg·L^-1倍比梯度的通莲I号方(T)、清热解毒拆方(Q)、活血行气拆方(H)、滋阴养血拆方(Z)等4方提取液,孵育48 h后,MTT比色法检测细胞增殖变化、光镜观察细胞形态、流式细胞技术(FCM)测定细胞周期。 结果: T,Q,H的IC₅₀值分别为386,771,729 mg·L^-1;与空白对照组(C)相比,T,Q,H 3方显著影响Eca109细胞周期变化:G1期细胞所占比率分别为69.43%,60.84%,61.90%。同时,T,Q,H组细胞的S期与C组比较,均有显著性差异(P<0.05),T方作用最强。而Z方对细胞的抑制作用较弱,与C组无显著性差异。 结论: 通莲I号方通过抑制细胞进入S增殖期从而干预食管癌Eca109细胞生长,各拆方具有协同作用,全方作用最优。     

中药胃康宁对胃癌细胞生长与胃癌细胞周期调控因子的影响

目的 观察中药胃康宁含药血清对胃癌细胞生长与胃癌细胞周期调控因子CyclinD2、CyclinE、Cdk2（Cyclin dependant kinase2,CDK2）Cdk4、Cdk6和p16^INK4a、p27^KIP1mRNA及其蛋白表达的作用。 方法 分别将高、中、低不同剂量的中药胃康宁制剂对SD大鼠进行灌胃,制备含药血清,然后分别用不同剂量含药血清培养胃癌细胞,用流式细胞仪检测细胞周期的变化;采用免疫组织化学SABC法及RT-PCR法检测各组胃癌细胞中CyclinD2、CyclinE、Cdk2、Cdk4、Cdk6和p16^INK4a、p27^KIP1蛋白和mRNA的表达。 结果 中药胃康宁能将增殖过程中的MGC-803胃癌细胞阻滞于G0-G1期,使之不进入或延迟进入S期（即DNA合成期）,抑制胃癌细胞的生长;免疫组化法结果显示,与空白对照组比较,中药胃康宁高、中剂量组CyclinE和Cdk2,CyclinD2和Cdk4、Cdk6蛋白均有明显升高,而p27KIP1、p16INK4a蛋白则显著降低（P＜0.01）;RT-PCR结果显示,中药胃康宁高、中剂量组均能明显降低CyclinD2、CyclinE、Cdk2和Cdk4、Cdk6 OPTD值,同时升高p27KIP1、p16INK4a OPTDI值（P＜0.01）。 结论 中药胃康宁可抑制胃癌细胞促细胞周期相关因子CyclinD2、CyclinE、Cdk2、Cdk4和Cdk6的表达,同时增强胃癌细胞周期抑制因子p27^KIP1、p16^INK4a的表达,这可能是中药胃康宁抑制胃癌细胞生长的作用机制。     

白花丹素对人舌癌Tca细胞增殖及凋亡作用的探讨

目的 探讨白花丹抑制舌癌细胞Tca的增殖及对细胞凋亡的影响.方法 将舌癌细胞Tca按5×10(3)个/孔的浓度接种于96孔细胞培养板,置于37℃,5% CO2的培养箱中预培养24 h,待细胞80%长满孔底,24 h后将白花丹分别按0.025,0.1,0.2,0.3 mg/ml和0.4 mg/ml分别加入各培养组中,每组5复孔.置37℃、5% CO2培养箱中培养.分别培养48,72,96,120 h后,用酶标仪在490 nm下,MTT染色法测定细胞增殖情况,计算白花丹对肿瘤细胞的抑制率.同时,Hoe-chest33342荧光染色法测定细胞核变化情况,观察细胞凋亡的形态学变化情况.结果 随着白花丹浓度的增大和作用时间的延长,白花丹对人舌癌细胞增殖的抑制作用越明显.当药物浓度达0.4 mg/ml时,培养48 h时与其他各组比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01),当药物浓度在0.3 mg/ml细胞培养达96h时,与小于0.3 mg/ml和小于96h培养时间的其他各组比较均有显著性差异(P<0.05),说明此点是白花丹有效成分抑制肿瘤细胞的一个关键点.细胞培养72 h后Hoechst33342染色发现,随着药物浓度的不断增加,凋亡细胞的数量越来越多.当药物浓度达到0.4 mg/ml时,镜下几乎很少见到完整的细胞核出现,相反出现了大量的细胞和碎片和不完整的细胞核.结论 白花丹提取物可以有效抑制肿瘤细胞增长,导致肿瘤细胞大量地细胞凋亡,说明其在肿瘤治疗中具有很大的应用价值.