广西746例疑似肠道病毒感染病例病原学监测分析

目的了解广西肠道病毒的感染情况,为制定预防和控制肠道病毒感染策略提供依据。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法,对广西746例疑似肠道病毒感染者咽拭子、疱疹液和粪便标本共1062份进行肠道病毒、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（CoxA16）核酸检测。结果共检出485份肠道病毒核酸阳性,阳性率为45.67％,其中EV71核酸阳性187份,阳性率为17.61％,40份为CoxA16核酸阳性标本,阳性率为3.77％。结论1062份标本中EV71核酸的阳性率高于CoxA16;粪便和疱疹液标本的阳性检出率高于咽拭子标本的阳性检出率;CoxA16和EV71是引起儿童手足口病的主要病原体,要加强对CoxA16和EV71的的鉴别诊断。     

2010年桂林市手足口病病原体检测结果分析

目的 分析桂林市临床诊断手足口病病例标本的病原体检测结果,为手足口病的防控工作提供科学依据.方法 对2010年收集的1230份粪便和肛拭子标本,采用实时荧光PCR(RT-PCR)方法进行肠道病毒通用(EV-U)、EV71、COXA16型的特异引物扩增检测.结果1230份标本中检出EV-U阳性734份,阳性率为59.67%,EV71 阳性495份,阳性率为40.24%,COXA16阳性33份,阳性率为2.68%,其他肠道病毒阳性206份,阳性率16.75%.结论 桂林市2010年流行手足口病病原体主要是肠道病毒EV71血清型.     

辽阳市手足口病患者标本肠道病毒检测结果

目的 通过对辽阳市2016年手足口病的临床诊断病例的咽拭子标本和粪便标本进行肠道病毒核酸检测和病毒分离培养,比较不同病毒分型下两种标本类型阳性率的差异,探究不同类型标本对手足口病实验室诊断的指导意义。方法 收集107例辽阳市2016年手足口病的临床诊断病例的咽拭子和粪便标本,提取样本核酸,用实时定量PCR法检测肠道病毒通用引物、肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型,通过McNemar检验以及Kappa检验对检测结果进行统计学分析。结果 配对采集病例两种类型标本共214份,肠道病毒通用引物、肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型的咽拭子标本核酸检测阳性率分别为48.6%、8.4%、22.4%;粪便标本的核酸检测阳性率分别为59.8%、11.2%、18.7%。PE、EV71病毒的粪便标本的检出率均大于咽拭子标本的检出率,但CV-A16病毒的粪便标本的检出率却小于咽拭子标本的检出率。其他肠道病毒的咽拭子标本和粪便标本的病毒检出率差异有统计学意义（P<0.05）,粪便标本肠道病毒检测阳性率高于咽拭子标本,同时显示较差的一致性（P<0.05）。结论 在手足口病实验室肠道病毒检测中,粪便标本的肠道病毒检测阳性率高于咽拭子标本,今后的手足口病防治工作中为提高标本检测阳性率,若时间紧迫应首先考虑选择采集粪便标本加以检测。     

深圳地区手足病肠道病毒5'端非编码区部分基因克隆和序列分析

目的:分析深圳地区手足口病病人肠道病毒(EV)5'端非编码区(5'UTR)部分基因序列,了解本地区手足口病病人EV感染的基因型.方法:设计特异性引物,建立检测EV的RT-PCR方法,对临床疑诊为EV感染的病人的粪便和/或咽拭子、脑脊液标本进行检测,并对5例典型手足口病病人中分离株的PCR阳性扩增产物进行克隆和序列测定.结果:分离出的5株EV 5'UTR基因的核苷酸同源性为85.5%～99.3%,与EV71 BrCr原株、CVA9、CVA16和CVB3同源性为86.3%～93.3%.结论:深圳地区手足口病EV 5'UTR与几种常见的肠道病毒血清型同源性均较高,提示可能存在多种基因型的肠道病毒感染.     

2009年湖南省哨点医院手足口病病原学检测与分析

目的 针对2009年湖南省哨点医院手足口病(HFMD)实验室检查结果进行分析,为湖南省HFMD的综合防治提供参考资料. 方法 收集湖南省2009年4～12月份监测哨点医院HFMD病例送检的咽拭子、粪便、疱疹液等标本,用RD、Hep-2细胞进行病毒分离,应用RT-PCR技术检测肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CVA16)、非EV71和CVA16的其它肠道病毒(EV). 结果 374例HFMD患者的551份各类样本中EV71病毒、CVA16病毒、EV71和CVA16病毒以及EV的检出率分别为:35.02%、12.30%、0.27%、25.40%.三种不同型别肠道病毒的在全年中交替变更;病例人群男性高于女性(1.99∶1),其中1～2岁儿童是病例数和重症病例数最多年龄段;52例HFMD重症病例中,EV71的检出率高于CVA16(P<0.01);对不同类型的阳性标本进行病毒分离,共获67份阳性毒株,包括EV71型43株,CVA16型5株,EV型16株,混合毒株3株(EV71+CVA16型1株,EV71+EV型1株,CVA16+EV型1株).不同类型标本的肠道病毒阳性检出率和阳性检出构成差异均有显著性(P<0.05),粪便标本的检测阳性率和分离率最高. 结论 EV71型是2009年湖南省HFMD流行的主要致病病毒,同时也是引起手足口重症病例和死亡病例的主要毒株类型.     

湘潭市手足口病病原学实验室检测分析

目的:根据手足口病病原学检测结果分析该病流行特征,同时评估从不同部位采集样品的阳性检出率,为手足口病的防控提供科学依据。方法:临床诊断为手足口病例的咽拭子标本,疱疹液标本,粪便标本,采用实时荧光(定量)PCR进行检测,对总肠道病毒阳性的标本,进行EV71和CA16分型,检测结果分组统计分析。结果:在652份监测病例样品中,总肠道病毒阳性样品446份,其中EV71阳性199份,占44.52%;CA16阳性176份,占39.37%;其它型肠道病毒阳性71份,占15.97%。在103份重症病例样品中,总肠道病毒阳性91份,其中EV71阳性77份,占84.62%,CA16阳性3份,占3.29%,其它型肠道病毒阳性10份,占10.10%。结论:湘潭市手足口病流行病原以EV71型和CA16型交替流行;重症病例主要由EV71引起;疱疹液,粪便标本的阳性检出率高于咽拭子。     

湖南省2008年手足口病流行病学特征分析

目的 分析湖南省2008年手足口病疫情流行病学特征,明确手足口病痛原体主要型别,为制定预防控制措施提供依据.方法 采用描述性流行病学方法分析疲情三间分布特征;采集手足口病临床诊断病例的疱疹液、咽拭子、肛拭子、粪便等标本,应用RT-PCR方法检测原始样本和分离阳性毒株中的EV、EV71和CoxA16病毒的核酸,用RD、Hep-2细胞对粪便标本进行病毒分离.结果 湖南省2008年共报告27 133例手足口病病例,死亡11例,报告发病率为42.66/10万;全年每月均有病例报告,其中5～7月为发病高峰.病例广泛分布于全省121个县市区,以散发为主.病例男女性别比1.81:1;以5岁以下年龄组儿童为主,占总病例数的89.43%,其中3岁以下(含3岁)4-龄组儿童占总病例数的79.33%.采集了标本的719例病例中,肠道病毒检出阳性率为42.56%,其中EV71阳性者占总阳性的78.10%,且一般(轻症)病例肠道病毒检出阳性率(42.11%)与重症和死亡病例肠道病毒检出阳性率(51.43%)差异无统计学意义(χ2=1.18,P=0.28),但一般(轻症)病例中EV71病毒检出阳性率(32.31%)与重症和死亡病例EV71病毒检出阳性率(51.43%)差异有统计学意义(χ2=5.48.P=0.02).病例咽拭子、疱疹液、粪便或肛拭子检出的阳性率较高,均在50.00%以上,而脑脊液、血液样本中未检出阳性.59份临床诊断病例粪便样本中分离出肠道病毒10株,其中EV71型病毒7株,CoxA16型病毒3株.结论 手足口病在湖南省境内常年发生,5～7月是高发时期;病原体主要为EV71型肠道病毒,易导致重症病例甚至死亡病例;咽拭子、疱疹液、粪便/肛拭子是手足口病实验室诊断较敏感标本.     

1起由肠道病毒CA6引起的手足口病聚集性疫情的病原学鉴定

目的对2015年6月开封市1所幼儿园发生的1起由CA6型肠道病毒引起的手足口病聚集性疫情进行病毒型别快速鉴定。方法采集病例及密切接触者的粪便标本,运用荧光定量PCR方法进行总肠道病毒、CA16、EV71和CA6检测,并采用半巢式PC R方法进行肠道病毒VP1序列扩增,对目的条带测序鉴定肠道病毒型别。结果 24例病例24份标本中22份标本检出总肠道病毒阳性,36名密切接触者36份标本中有10人10份标本检出阳性,肠道病毒阳性率分别为91.67%和27.78%,其中分别有22例病例和6名密切接触者CA6阳性,阳性率分别为91.67%和16.67%,所有标本CA16和EV71检测阴性。6例病例和3名密切接触者的9份标本半巢式PCR扩增阳性,测序结果显示VP1序列均为CA6。结论开封市此次发生在幼儿园的1起手足口病聚集性疫情由肠道病毒CA6型引起;荧光定量PCR与半巢式PCR扩增肠道病毒VP1序列能快速准确的鉴定CA6型肠道病毒。     

2010年桂林地区手足口病病原体检测的临床分析

目的:对2010年3月23日～12月31日收集的桂林市区及辖区十二县手足口病病例的1132份粪便样本进行病原体检测.方法:采用实时荧光探针PCR(RT-PcR)对全部粪便样本进行肠道病毒通用(EV-U)、EV71、COXA16型的特异引物扩增检测.结果:EV-U阳性671份,阳性率为59.27%,EV71 346份,阳性率为30.56%,COXA1630份,阳性率为2.65%.结论:桂林地区2010年流行手足口病病原体主要是肠道病毒EV71血清型.COXA16血清型存在多个肠道病毒血清型.     

昆明市2008年儿童手足口病的病原学调查

目的 对昆明市2008年4～6月手足口病流行时期该病患儿进行病原学调查,了解导致本次流行的肠道病毒感染情况.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,对25例临床诊断为手足口病患儿的咽拭子,疱疹液及尿液标本进行肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型RNA的检测.结果 25例患儿共采集58份标本,其中咽拭子21份、疱疹液12份、尿液25份,检测结果13例患儿为CoxA16阳性,阳性率为52%;5例患儿EV71阳性,阳性率为20%;两者之比为2.6:1;咽拭子标本检出率为11/21(52.38%),疱疹液标本检出率9/11(81.82%),尿液标本中未检出病毒.结论 所检测2008年昆明市儿童手足口病标本中以CoxA16感染为主,EV71也有散发病例,但未发现重症感染患儿;CoxA16和EV71感染患儿的表现相似,临床难以鉴别;本次实验疱疹液的病毒检出率较高.     

双重实时荧光RT-PCR法检测肠道病毒方法的建立及应用

目的 建立检测肠道病毒(EV)和肠道病毒71型(EV71)的双重实时荧光RT-PCR法.方法 设计特异性引物和探针,建立双重实时荧光RT-PCR反应体系,绘制标准曲线,对该方法的灵敏度、精密度等进行评价.收集109例临床手足口病患者粪便和咽拭子标本用该法进行检测,并与EV71商品化试剂盒检测结果进行比较.结果 双重荧光PCR法建立的EV和EV71标准曲线相关系数(r)均为0.998;该法检测EV和EV71的灵敏度分别达到0.5 TCID50/mL和0.05 TCID50/mL;检测EV和EV71的批内精密度均小于3％,总精密度均小于或等于4％;对肠道病毒及其他人类非肠道病毒进行检测,显示了良好的特异性.109例临床样本用该法检测出84例EV病毒阳性样本,其中EV71阳性56例,EV71总阳性率为51.4％;与单重荧光PCR商品化试剂盒的检测结果完全一致(P=1.000).结论 建立的双重实时荧光RT-PCR法灵敏度高、稳定性好,对手足口病的早期高通量快速诊断具有重要意义.     

新生儿咽拭子检测在诊断单纯疱疹病毒先天性感染中的意义

目的以巢式PCR检测新生儿脐带血中单纯疱疹病毒1型(HSV-1)gD基因和HSV-2 gG基因并用测序确认的结果为参比,分析利用新生儿咽拭子检测相应病毒基因在诊断新生儿HSV先天性感染中的意义。方法采集顺产新生儿抗凝脐带血35份,同时采集咽拭子35份。采用检测HSV-1 gD基因和HSV-2 gG基因的PCR法检测新生儿脐带血和咽拭子标本DNA,阳性扩增结果确认后,比较咽拭子检测与脐带血检测结果,以及咽拭子检测特异性、灵敏度、阳性预测值和阴性预测值4个指标,分析新生儿咽拭子检测能否为诊断HSV先天性感染提供依据。结果 35份脐带血中HSV-1阳性率28.6%(10/35),咽拭子HSV-1阳性率25.7%(9/35),两者差异无统计学意义。脐带血中HSV-2阳性率22.8%(8/35),咽拭子HSV-2阳性率28.6%(10/35),两者差异无统计学意义。HSV-1两种标本检测一致率68.6%;HSV-2两种标本一致率77.1%。咽拭子HSV-1、HSV-2检测灵敏度分别为40.0%和62.5%,特异性分别为80.0%和84.6%,阳性预测值分别为44.4%和50.0%,阴性预测值分别为76.9%和88.0%。结论以新生儿脐带血单核细胞中HSV-1 gD基因和HSV-2 gG基因检测结果为参比,新生儿咽拭子检测与脐带血检测具有较高的一致性,表明咽拭子检测用于新生儿HSV先天性感染诊断具有重要的临床应用价值。     

一步法RT-PCR检测手足口病EV71、CA16病毒核酸

目的检测手足口病病原核酸,了解濮阳市手足口病病因和不同标本检测状况。方法对濮阳市辖区内手足口病43例住院患者的咽拭子、疱疹液和血清样本进行一步法RT-PCR检测。结果 43例患者的72份标本中,病原核酸EV71阳性23份,阳性率为31.94%。其中,咽拭子阳性率为39.53%(17/43),疱疹液阳性率为66.67%(6/9),血清阳性率为0%(0/20),CoxA16未检出。结论濮阳市手足口病流行由肠道病毒EV71引起,不同标本中疱疹液和咽拭子病毒含量多。     

2009-2011年广州市手足口病病原学分析

目的了解2009-2011年广州市手足口病病例标本中病原学分类情况。方法采集临床诊断为手足口病患者的粪便、咽拭子及肛拭子标本,用荧光定量PCR法同时检测总肠道病毒、CoxA16和EV71。结果广州市手足口病的流行每年有1个高峰和1个次高峰。第1个高峰4～8月的病原体为CoxA16、EV71和其他肠道病毒同时存在,次高峰为11月～次年1月,病原体主要为CoxA16。结论 CoxA16、EV71和其他肠道病毒为广州市近年手足口病的主要病原。     

麻疹患儿粪便麻疹病毒核酸的检测及临床意义

目的：探讨麻疹患儿肠道排毒情况和粪便病毒核酸快速检测的临床意义。方法38例临床诊断麻疹患儿,入院时均有发热、皮疹等麻疹感染症状。在入院2d内同时采集咽拭子和粪便标本。标本在冷链条件下送传染病诊治国家重点实验室,采用RT- PCR法检测麻疹病毒核酸及Ct值。同时对部分咽拭子和粪便标本扩增均阳性的PCR产物进行基因测序。结果38例患儿粪便麻疹病毒核酸阳性37例,占97.4%,Ct值23.8±3.04;咽拭子病毒核酸阳性35例,占92.1%,Ct值28.0±4.0。两者阳性率比较,差异无统计学意义（χ^2=0.029,P＞0.05）;两组Ct值比较,差异有统计学意义（t=5.23,P＜0.05）。3例患儿咽拭子和粪便标本的麻疹病毒基因型（均为H1a基因亚型）和核苷酸序列完全一致。结论粪便病毒核酸快速检测与咽拭子标本具有相同的临床诊断价值,粪便病毒核酸拷贝数高于咽拭子病毒核酸,且粪便标本的采集具有方便、无痛苦,依从性好,不易受人为因素的影响,值得推广。     

2012-2018年西宁地区手足口病病原检测结果分析

目的分析2012-2018年西宁地区手足口病病原学特点,为手足口病防控提供科学依据。方法应用实时荧光RT-PCR法对2012-2018年西宁地区疑似手足口病病例咽拭子标本进行肠道病毒71型(enterovirus 71,EV 71)、柯萨奇病毒A组16型(coxsackie virus A16,Cox A16)和非EV 71/非Cox A16的其他肠道病毒(其他EV)进行核酸检测,并对结果进行分析。结果共检测标本2855份,检出核酸阳性标本2176份,病毒核酸阳性率为76.22%,其中EV 71、Cox A16和其他肠道病毒核酸阳性率分别为28.68%、25.09%和46.23%,以其他肠道病毒为主要型别。发病人群集中在1~5岁组,构成比为91.04%(1981/2176);男性病例阳性率稍高于女性(χ^2=8.647,P=0.004);全年均有发病,发病高峰在6~7月,具有明显的季节性。结论西宁地区各年手足口病病原谱有所不同,近几年其他肠道病毒所占比例逐渐增大,应加强对EV 71和Cox A16以外其他肠道病毒的监测,为更好地做好手足口病的防控工作提供病原学依据。     

基于定型肠道病毒VP1基因的不同巢式或半巢式PCR评价

目的评价三组基于肠道病毒定型的VP1基因的不同巢式或半巢式PCR方法,建立一种快速、灵敏的分子检测方法用于直接检测临床样品。方法从文献中选出目前常用三组引物,外加一对针对B群肠道病毒改良引物。对代表A群肠道病毒的CVA16毒株和代表B群肠道病毒的CVB5和ECHO20三个毒株分别进行连续10倍稀释至10^-7,对稀释度为10^-3~10^-7的病毒株进行巢式或半巢式PCR。对20份手足口病（HFMD）患儿的粪便样品和16份病毒性脑炎的脑脊液样品进行巢式或半巢式PCR。结果所选三组引物均能检测2.50CCID50/ml CA16病毒;在CVB5和ECHO20检测中,Leitch等设计的引物灵敏度最高,即能够检测含1.12CCID50/ml和1.00CCID50/ml的病毒。在粪便临床样品检测中,Iturriza-Gómara等设计的引物阳性率最高,其中A群肠道病毒检测率为55.0%（11/20）,B群为10.0%（2/20）;而Leitch等设计的引物检测率则为A群为15.0%（3/20）,B群为45.0%（9/20）,其次为Nix等设计的引物检测率为45.0%（其中A群为30.0%,B群为15.0%）,改良的引物为20.0%（4/20）。但脑脊液样品仅有Leitch等设计引物检出,而检出率仅为6.25%（1/16）。结论 Iturriza-Gómara等设计的A群肠道病毒的引物和Leitch等设计的B群的引物组合检测临床样品最佳。     

江苏省手足口病病原阳性检出率相关因素及病原学特征

目的:了解江苏省手足口病(Hand-foot-mouth disease,HFMD)肠道病毒阳性检出率相关因素,并对其EV71病毒的VP1基因特征进行分析?方法:在2008年4~12月份,通过监测哨点医院收集全省手足口病病例的咽拭子?粪便或肛拭子?疱疹液?脑脊液?血清标本,并填写病例相关基本信息?结果:共采集手足口病病例的各种类型标本2 082份,咽拭子?肛拭子?疱疹液?粪便?脑脊液?血清的总肠道病毒阳性检出率分别为53.52%?41.12%?40.74%?27.27%?25.00%?9.80%,EV71阳性检出率分别为47.03%?30.84%?33.33%?22.73%?25.00%?2.94%,CoxA16阳性检出率分别为5.34%?8.41%?3.70%?0.00%?0.00%?6.68%,不同类型标本的肠道病毒阳性检出率和阳性检出构成均有差异(P值均< 0.0001)?总肠道病毒阳性检出率在发病后第2天最高(56.59%),不同发病与采样时间间隔的总肠道病毒阳性检出率和EV71病毒阳性检出率均有统计学意义(P值分别为0.0019?0.0139),而与CoxA16阳性检出率没有统计学意义(P = 0.2558)?总肠道病毒阳性检出率在就诊后第2天最高(59.90%),不同就诊与采样时间间隔的总肠道病毒与EV71病毒阳性检出率有统计学差异(P值分别为0.0228?0.0333),与CoxA16阳性检出率没有统计学差异(P = 0.3958)?分离的4株EV71病毒均为C4.3基因亚群?结论:标本类型?采样与发病时间间隔?采样与诊断时间间隔均与手足口病病例的肠道病毒阳性检出率密切相关,分离的EV71毒株为C4亚型?