急性肾衰大鼠肾小管上皮细胞TSP1表达及凋亡的意义

急性肾衰(acute renal failure,ARF)的发病机制尚不清.研究表明,肾小管上皮细胞的凋亡在多种肾脏病中发挥重要作用,TSP1的表达异常参与多种细胞凋亡的调控.但是ARF时肾小管上皮细胞的凋亡、TSP1的表达尚不清楚.为此,我们利用甘油诱导大鼠ARF,观察ARF时肾小管上皮细胞的凋亡及TSP1的表达情况,并利用纯化的TSP1与大鼠肾小管上皮细胞体外共同培养后检测肾小管上皮细胞凋亡.旨在探讨二者在ARF发病中的意义.     

肾衰合剂对急性肾功能衰竭大鼠促肾脏修复作用及其机理初探

目的动态观察中药复方肾衰合剂对急性肾功能衰竭（ARF）大鼠肾脏修复的影响.方法雄性SD大鼠分为4组,除正常组外,其余大鼠均予肌肉注射甘油造成ARF模型,同时正常组、模型组予生理盐水,西药组予维拉帕米、中药组予肾衰合剂灌胃.观察各组大鼠1～5天肾功能、肾脏病理、肾组织表皮细胞生长因子（EGF）mRNA、增殖细胞核抗原（PCNA）表达的变化.结果（1）肾功能：模型组及两用药组第1天时血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）显著增高（与正常组比较,P＜0.01）,但中药组、西药组大鼠SCr上升幅度较模型组低（P＜0.05）;中药组大鼠第3天时肾功能优于模型组和西药组（P＜0.01）,至第5天时接近正常组.（2）肾脏病理：中药组大鼠各期肾组织病变均较模型组轻,尤其在第3天时（约中期）可见部分肾小管细胞再生,至第5天（约恢复期）肾组织重建良好,且明显优于西药组.（3）免疫组化及原位杂交：中药组大鼠第3天时肾小管上皮细胞EGF mRNA、PCNA的表达显著增高,与同期其他组比较差异有显著性（P＜0.05）.结论肾衰合剂通过促进肾小管上皮细胞EGF mRNA的表达,促进肾脏组织的再生修复,缩短了ARF的病程.     

细胞凋亡在雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤中的作用及其发生机制

目的观察雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤情况,研究细胞凋亡在雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤中的作用及其发生机制。方法大鼠分别单次ip给予雷公藤甲素1、2 mg/kg,给药后48 h心脏采血,检测血浆尿素氮(BUN)与肌酐(Scr)水平;肾脏HE染色,光镜下观察肾组织形态学改变;应用原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测肾组织细胞凋亡情况;利用免疫组织化学染色法结合计算机图像分析技术检测肾组织内凋亡相关蛋白的表达情况,并利用RT-PCR技术测定肾组织内凋亡相关蛋白调控基因的表达。结果雷公藤甲素2个剂量组均可见大量肾小管上皮细胞凋亡,且高剂量的作用显著大于低剂量,细胞凋亡与肾功能改变相关;肾组织中Bax、Bid、Bad、Fas以及FasL蛋白表达明显增多,且呈剂量依赖性,而Bcl-2的表达未见明显改变。结论一次性ip大剂量雷公藤甲素会在短时间(48 h)内造成严重的肾损伤,肾小管上皮细胞凋亡是雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤的重要组织学基础之一,且Bcl-2家族以及Fas/FasL在雷公藤甲素诱导的肾小管上皮细胞凋亡的过程中起重要作用。     

加味附子理中免煎颗粒对急性马兜铃酸肾病 大鼠细胞凋亡的影响

目的:通过研究加味附子理中免煎颗粒对急性马兜铃酸肾病(AAN)大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响探讨其治疗急性AAN的作用机制。方法:将90只SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、强的松组、中药+强的松组,其中正常组10只,其余各组均为20只。模型组、中药组、强的松组及中药+强的松组按100 mg.kg-1.d-1剂量予马兜铃酸A纯品连续ig 3 d建立AAN模型;从实验第6天开始,中药组予加味附子理中免煎颗粒(按生药量计为3.55 g.kg-1.d-1,10 mL.kg-1.d-1)ig,强的松组予强的松(0.5 mg.kg-1.d-1)ig,中药+强的松组予加味附子理中免煎颗粒(3.55 g.kg-1.d-1)+强的松(0.5 mg.kg-1.d-1)ig,模型组和正常组则予蒸馏水10 mL.kg-1.d-1 ig;连续给药3周后处死各组大鼠。以RT-PCR检测各组大鼠肾组织Bcl-2mRNA,Bax mRNA的表达,免疫组化法及Western blot法检测各组大鼠肾组织Bcl-2,Bax蛋白的表达,原位末端标记法(TUNEL)检测肾小管上皮细胞凋亡。结果:模型组大鼠肾组织Bcl-2 mRNA和蛋白表达明显减少,而Bax mRNA和蛋白表达增多;与模型组比较,中药组、强的松组和中药+强的松组均能不同程度增加Bcl-2 mRNA和蛋白的表达,降低Bax mRNA和蛋白的表达,差异均有统计学意义(P<0.05);其中以中药+强的松组的作用最佳(P<0.05)。TUNEL结果显示,正常组大鼠肾小管可见少量凋亡细胞,模型组则有大量凋亡的肾小管上皮细胞,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,中药组、强的松组和中药+强的松组凋亡细胞数均减少(P<0.05);而中药+强的松组凋亡细胞数减少最为明显(P<0.05)。结论:肾小管上皮细胞凋亡参与了急性马兜铃酸肾病的发病,加味附子理中免煎颗粒能减轻急性马兜铃酸肾病大鼠肾小管上皮细胞的凋亡,但联合强的松治疗疗效更佳。     

通心络胶囊对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨通心络胶囊对大鼠肾缺血再灌注损伤(R IR I)的保护作用及其可能的作用机制。方法将30只雄性W istar大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和缺血再灌注+通心络预处理组,各10只。缺血再灌注组和缺血再灌注+通心络预处理组采用无损伤动脉夹夹闭大鼠双侧肾蒂45 m in,再灌注24 h的方法制成急性肾缺血再灌注损伤(AR IR I)模型,其中缺血再灌注+通心络预处理组术前喂通心络7 d。假手术组仅游离双侧肾蒂,暴露60 m in后再关闭切口。光镜下观察细胞结构改变;测定血肌酐(Cr);苏木精-伊红(HE)染色观察肾小管损伤程度;免疫组化图像分析光镜下Bc l-2阳性表达;一步法TUNEL细胞凋亡检测(TUNEL法)肾小管上皮细胞中凋亡阳性细胞;激光共聚焦显示肾小管上皮细胞凋亡情况。结果缺血再灌注组和缺血再灌注+通心络预处理组Cr及肾小管损伤评分较假手术组高(P0.05);缺血再灌注+通心络预处理组Cr及肾小管损伤评分较缺血再灌注组低(P0.01)。假手术组肾小管上皮细胞Bc l-2有少量表达;缺血再灌注组Bc l-2在肾小管上皮细胞的表达较假手术组增加(P0.05);缺血再灌注+通心络预处理组Bc l-2在肾小管上皮细胞的表达较缺血再灌注组增加(P0.01)。缺血再灌注组凋亡阳性细胞数明显多于假手术组(P0.05),多见于肾小管,尤其是远端小管细胞,少数见于近端小管,而肾间质、肾小球极少见;缺血再灌注+通心络预处理组阳性细胞数明显少于缺血再灌注组(P0.01)。结论通心络胶囊对大鼠AR IR I具有保护作用,其作用机制可能是通过上调Bc l-2在肾小管上皮细胞的表达,抑制肾小管上皮细胞凋亡而实现的。     

肾衰合剂对急性肾衰竭大鼠肾脏超微结构的影响及作用机理研究

目的 观察中药复方“肾衰合剂”对ARF大鼠的防治作用，并揭示该方药的作用机理。方法 除正常对照组外，予肌注甘油造模，同时分正常组、模型组、西药维拉帕米组、中药肾衰合剂4组灌胃。观察造模24h大鼠各项指标的变化。结果 肾衰合剂及维拉帕米均能显著改善ARF大鼠的肾功能，一定程度上保护初发期ATN时肾小管上皮细胞超微结构；同时SSM显著降低血清TNF—α浓度，其作用明显优于维拉帕米。结论 肾衰合剂通过拮抗肾小管上皮细胞钙超载、抑制炎症介质释放达到减轻肾组织病变、防治A1N的功效。     

醋酸铅致大鼠肾小管上皮细胞凋亡及中药干预作用

目的:探讨核因子ΚB p65(NF-ΚB p65)、p53在铅中毒导致的大鼠肾小管凋亡细胞的高表达及中药的干预作用。方法:40只大鼠随机分为5组:对照组、病理组、中药高、低剂量组、依地酸钠钙(EDTA)组。除对照组外,其他4组饮水中均添加0.02%醋酸铅,中药高剂量组(3.5g.kg-1.d-1)、低剂量组(0.7g.kg-1.d-1)灌服驱铅丸,EDTA组以每日EDTA加普鲁卡因按50.0mg/kg肌肉注射。连续60天后观察肾组织的细胞凋亡,RT-PCR检测肾组织NF-ΚB p65、p53 mRNA表达;免疫组化方法检测肾组织NF-ΚB p65蛋白表达,WesternBlot方法检测肾组织p53表达。结果:经统计,与对照组比较,病理组细胞凋亡、NF-ΚB p65及p53 mRNA和蛋白表达均显著增高(P<0.01),与病理组比较,各干预组尿铅、血铅含量显著降低(P<0.05),中药高、低剂量干预组肾小管上皮细胞凋亡显著降低(P<0.01),NF-ΚB p65及p53 mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:铅通过诱导的大鼠肾小管上皮细胞NF-ΚB p65、p53高表达而促进细胞凋亡,中药驱铅丸能抑制NF-ΚB p65、p53的表达增高而减轻肾小管凋亡程度。     

芪泽汤对慢性肾功能衰竭大鼠 内质网应激相关凋亡分子表达的影响

目的:探讨芪泽汤对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠内质网应激(ERS)相关凋亡分子表达的影响.方法:2.5％腺嘌呤ig24 d建立SD大鼠肾衰模型.分为5组:正常组、模型组、尿毒清组(2.5 g·kg-1·d-1)、芪泽汤高、低剂量组(50.4,12.6g·kg-1·d-1),每组10只.造模同时各治疗组ig给药,干预24 d后,观察体重变化,全自动生化分析仪检测大鼠血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr),应用TUNEL法检测肾组织细胞凋亡,Western blot检测CHOP( C/EBP-homologous protein)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12( Caspase-12)肾内表达水平.结果:模型组BUN(17.21±4.63) mmol·L-1,SCr( 67.00±25.62) μmol·L-1较对照组BUN(4.19±0.77) mmol· L-1,SCr( 15.89±2.62)μmol·L-1明显升高(P ＜0.01);TUNEL结果显示空白组肾小管上皮细胞有少量凋亡,而模型组细胞凋亡数明显增多(P＜0.01);模型组CHOP,Caspase-12表达显著增强(P＜0.01).芪泽汤低剂量和尿毒清能抑制慢性肾功能衰竭大鼠肾小管上皮细胞凋亡和CHOP,Caspase-12表达(与模型组相比较P＜0.05).结论:芪泽汤低剂量能保护腺嘌呤导致的大鼠肾损害,可能与其抑制ERS相关凋亡分子CHOP,Caspase-12高表达有关.     

广防己提取物致大鼠慢性肾间质纤维化的机制研究

目的：探讨广防己提取物（RAFE）所致的大鼠慢性肾间质纤维化的作用机制。 方法：用广防己提取物（200 mg·kg^-1·d^-1）和马兜铃酸（AA,10.0 mg·kg^-1·d^-1）给予大鼠间断灌胃22周,造成大鼠慢性间质纤维化模型,通过免疫组化方法观察肾小管上皮细胞转分化标志性蛋白角蛋白(CK)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和波形蛋白(Vimentin)以及致纤维化因子-转化生长因子（TGF-β₁）在大鼠肾小管间质的表达。 结果：经图像分析, RAFE和AA组肾小管上皮细胞CK较对照组表达减弱,而α-SMA在肾小管上皮细胞及肾间质细胞呈弱阳性表达、Vimentin表达较对照组明显增多；同时RAFE和AA组大鼠肾小管TGF-β₁表达较对照组明显增多,各项指标统计学均有显著性差异。 结论：RAFE参与了肾小管上皮细胞转分化,促进了大鼠慢性肾小管上皮纤维化的发生,其中TGF-β₁对肾小管上皮细胞转分化起到重要作用。RAFE所致大鼠慢性肾小管上皮细胞转分化机制与AA作用相似。     

刺芒柄花素对单侧输尿管梗阻大鼠ASK1、JNK蛋白表达的影响

目的探讨刺芒柄花素对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠凋亡信号调节激酶1(ASK1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白表达的影响。方法制备单侧输尿管梗阻诱导肾间质纤维化动物模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利组及刺芒柄花素高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)组;术后14 d处死大鼠并采集血清检测血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平;采用HE染色观察大鼠肾脏的病理改变及评定肾小管损伤指数;Masson染色观察肾间质胶原沉积的面积;采用Western blotting免疫印迹法检测肾组织ASK1、JNK蛋白表达水平;采用TUNEL法检测肾小管上皮细胞的凋亡。结果与模型组比较,各治疗组大鼠血清Scr、BUN水平均显著降低(P0.05、0.01);肾小管损伤指数、肾间质胶原分布相对面积均显著降低(P0.05、0.01);肾组织ASK1、JNK蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01);肾小管上皮细胞凋亡指数显著降低(P0.05、0.01)。刺芒柄花素高剂量组各项指标优于依那普利组。结论刺芒柄花素能够抑制UUO模型大鼠ASK1、JNK蛋白表达水平,阻止细胞凋亡,从而减缓梗阻性肾病病理进程的发生和发展。     

杏丁对过氧化氢诱导肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的 观察杏丁对过氧化氢 (H2O2) 诱导肾小管上皮细胞(NRK52E)凋亡的抑制作用及其作用机制.方法 将人肾小管上皮细胞分成:对照组,H2O2(400μmol/L),杏丁+ H2O2组,杏丁组,各组细胞培养至80%～90%汇合时加入相应药物干预,采用H2O2诱导肾小管上皮细胞凋亡模型,用细胞生长曲线检测细胞生长情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,并采用 RT-PCR 检测Survivin mRNA表达.结果 杏丁可以抑制H2O2诱导的细胞凋亡,并降低细胞凋亡率,增加Survivin mRNA表达.结论 杏丁显著抑制H2O2诱导的细胞凋亡,其抗细胞凋亡作用可能与其增加Survivin表达活化有关.     

益肾通络方抑制EGFR及下游信号途径对膜性肾病大鼠肾脏保护作用的研究

目的探究益肾通络方对膜性肾病大鼠肾组织表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)及足细胞和肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法 SD大鼠尾ⅳ阳离子牛血清白蛋白(cationic bovine serum albumin,C-BSA)建立膜性肾病大鼠模型,给予益肾通络方和盐酸贝那普利进行干预,检测各组大鼠24 h尿蛋白(urinetotal protein,UTP)、血清中白蛋白(albumin,ALB)和总胆固醇(total cholesterol,TC)水平;观察各组大鼠肾组织病理变化;采用TUNEL法检测各组大鼠肾组织足细胞和肾小管上皮细胞凋亡情况;采用免疫组化法检测各组大鼠肾组织磷酸化EGFR (p-EGFR)和剪切型半胱氨酸蛋白酶-3 (cleaved Caspase-3)的表达情况;采用Western blotting法检测各组大鼠肾组织p-EGFR、Ras相关的C3 肉毒素底物 1 (Ras-related C3 botulinum toxin substrate l,Racl)、c-jun、c-fos、FasL 和 cleaved Caspase-3 蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠24 h UTP以及血清中TC水平明显升高(P0.01),ALB水平显著降低(P0.01);肾小球基底膜、足细胞结构发生改变;肾组织足细胞和肾小管上皮细胞凋亡明显增多(P0.01);肾组织p-EGFR、Racl、c-jun、c-fos、FasL和cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型组比较,益肾通络方中、高剂量组大鼠24 h UTP以及血清中TC水平明显降低(P0.01),ALB水平明显升高(P0.01);肾组织病理损伤得到改善;肾组织足细胞和肾小管上皮细胞凋亡明显减少(P0.05、0.01),肾组织p-EGFR、Racl、c-jun、c-fos、FasL和cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P0.05、0.01)。结论益肾通络方可以减轻膜性肾病大鼠肾脏病理损伤,抑制肾组织足细胞和肾小管上皮细胞凋亡,其机制可能与抑制EGFR及下游Racl/c-jun、c-fos/FasL信号途径有关。     

大黄素对高糖介导的大鼠NRK52E TSP1和TGF-β1表达的影响

目的:探讨大黄素对高糖介导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)血小板反应蛋白1(thrombospondin-1,TSP1)和转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)表达的影响.方法:在NRK52E体外培养的基础上,观察高糖(30mmol/L)诱导下低、中和高浓度的大黄素(10ug/ml、20ug/ml和40ug/ml)对NRK52E TSP1、TGF-β1的mRNA和蛋白表达的影响.采用Real Time PCR检测TSP1、TGF-β1 mRNA表达,采用Western blot检测TSP1、TGF-β1蛋白表达.总TGF-β1和活性TGF-β1检测采用ELISA法.结果:与空白对照组比较,高糖(30mmol/L)明显上调了NRK52E TSP1的mRNA表达(3.34±0.18 vs 1.12±0.13; P＜20.05)、伴有TGF-β1的mRNA表达增加(3.52±0.22 vs 1.24±0.09; P＜20.05).同时高糖(30mmol/L)也上调了TSP1蛋白表达(0.5184±0.0736 vs 0.1204±0.0376; P＜20.01),伴有TGF-β1蛋白表达的增加(0.5698±0.0324 vs 0.1032±0.0322; P＜20.01).与高糖阳性对照组比较,中浓度和高浓度大黄素明显抑制了高糖(30mmol/L)诱导的TSP1、TGF-β1的mRNA(P＜20.05;P＜20.01 )和蛋白表达(P＜0.05;P＜20.01 ).中浓度大黄素干预组总的TGF-β1含量和活性TGF-β1含量均减少,(P＜20.05);高浓度大黄素干预组总的TGF-β1含量和活性TGF-β1含量均明显减少(P＜20.01).结论:大黄素能抑制大鼠肾小管上皮细胞TSP1、TGF-β1的mRNA和蛋白表达,并下调总的和活性TGF-β1.     

益肾通络方下调ADAM17介导的EGFR表达干预膜性肾病肾小管上皮细胞凋亡研究

目的 探讨解整合素金属蛋白酶17（a disintegrin and metalloproteinase 17,ADAM17）介导的表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）激活与膜性肾病（membranous nephropathy,MN）肾小管上皮细胞凋亡的关系及益肾通络方的干预作用。方法 尾iv阳离子牛血清白蛋白（cationic bovine serum albumin,C-BSA）构建MN大鼠模型,给予益肾通络方干预4周。实验结束后观察大鼠肾脏病理变化和肾小管上皮细胞凋亡情况;采用Western blotting和qRT-PCR法检测肾组织ADAM17、肝素结合性表皮生长因子（heparin-binding epidermal growth factor,HB-EGF）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）以及磷酸化表皮生长因子受体（phosphorylated epidermal growth factor receptor,p-EGFR）蛋白及mRNA表达情况。结果 与对照组比较,模型组大鼠肾脏病理改变严重,肾小管上皮细胞凋亡增多（P<0.01）,肾组织ADAM17、p-EGFR、HB-EGF、TNF-α蛋白及mRNA表达显著升高（P<0.01）。与模型组相比,益肾通络方组大鼠肾脏病理有所改善,肾小管细胞凋亡减少（P<0.01）,肾组织ADAM17、EGFR、HB-EGF、TNF-α蛋白及mRNA表达显著降低（P<0.01）。结论 MN大鼠肾组织ADAM17表达增多,释放活化HB-EGFR、TNF-α增多,进而激活相应受体EGFR,EGFR活化进一步诱导肾小管上皮细胞凋亡及肾脏纤维化。益肾通络方可以通过降低MN大鼠肾组织剪切酶ADAM17表达,减少HB-EGFR、TNF-α的脱落活化,从而减少EGFR激活,以达到减少肾小管上皮细胞凋亡、延缓肾脏纤维化的作用。     

关木通所含马兜铃酸对大鼠肾小管凋亡及Caspase-3表达的影响

目的研究关木通所含马兜铃酸(AA)对肾小管上皮凋亡及凋亡信号蛋白Caspase-3表达的影响。方法将雄性Wistar大鼠46只随机分为关木通组与对照组。关木通组按AA20mg·kg-·1d-1灌胃关木通浸膏,对照组灌胃饮用水。于用药第4、8、12周分批处死动物,取肾组织行HE、PAS、Masson染色,肾脏病理分析肾小管间质损伤程度,TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡,免疫组化检测PCNA、Caspase-3表达。结果关木通组出现急性小管间质损害,随着用药时间延长,肾小管间质损害程度加重;TUNEL染色显示第4～8周时凋亡指数升高,第12周时凋亡指数下降;PCNA主要表达于损伤的肾小管,其增殖指数在第4周和第8周时显著升高,但第12周时下降;Caspases-3表达水平在8周前显著增高,主要表达在损伤小管及浸润的炎细胞,第12周时表达水平下降。对照组肾小管偶见凋亡细胞,增殖指数维持在一定水平,Caspases-3有少许表达。结论关木通所含马兜铃酸可引起肾小管损害,早期主要为肾小管损伤、凋亡,并伴随Caspase-3表达水平升高,后期则以小管坏死、萎缩和间质纤维化为特点,Caspase-3表达略下降,且肾小管再生修复能力下降。     

加味附子理中免煎颗粒治疗急性马兜铃酸肾病机理的研究

目的 探讨加味附子理中免煎颗粒治疗急性马兜铃酸肾病的作用机制.方法 将90只SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、泼尼松组、中药+泼尼松组,其中正常组10只,其余各组均为20只.模型组、中药组、泼尼松组及中药+泼尼松组按100mg/kg·d剂量予马兜铃酸A纯品连续灌胃3d建立急性马兜铃酸肾病模型;从实验第6天开始,中药组予加味附子理中免煎颗粒(10 ml/kg·d)灌胃,泼尼松组予泼尼松(0.5 mg,/kg·d)灌胃,中药+泼尼松组予加味附子理中免煎颗粒(10ml/kg·d)+泼尼松(0.5 mg/kg·d)灌胃,模型组和正常组则予蒸馏水10 ml/kg·d灌胃;连续给药3周后处死各组大鼠.以免疫组化法检测各组大鼠肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),以RT-PCR检测各组大鼠肾组织Bcl-2 mRNA、Bax mRNA的表达,Western blot(蛋白印迹法)法检测细胞色素C的表达,原位末端标记法(TUNEL)检测肾小管上皮细胞凋亡.结果 模型组大鼠肾组织SOD表达明显减少,而MDA水平增高,Bcl-2mRNA表达明显减少,而Bax mRNA表达增多,细胞色素C显著增多,可见大量凋亡的肾小管上皮细胞(P＜0.01).中药组、泼尼松组和中药+泼尼松组均能不同程度增加SOD的表达,降低MDA的水平,提高Bcl-2 mRNA的表达,降低BaxmRNA的表达;减少细胞色素C的释放并减少肾小管上皮细胞的凋亡,与模型组比较(P ＜0.05或P＜0.01).作用强度由大到小依次为中药+泼尼松、泼尼松、中药(P ＜0.05或P＜0.01).结论 肾小管上皮细胞凋亡参与了急性马兜铃酸肾病的发病,加味附子理中免煎颗粒可以从线粒体途径抑制肾小管上皮细胞的凋亡达到治疗作用,但联合泼尼松治疗疗效更佳.     

红细胞生成素对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织补体C3及肾小管上皮间充质转分化的影响

 目的 探讨红细胞生成素对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏纤维化的影响及其机制。方法 建立单侧输尿管梗阻大鼠模型,并把实验动物分成假手术组（对照组）、单侧输尿管梗阻组、单侧输尿管梗阻大鼠红细胞生成素小剂量治疗组（100 u·kg^-1·d^-1红细胞生成素,小剂量组）和单侧输尿管梗阻大鼠红细胞生成素大剂量治疗组（1 000 u·kg^-1·d^-1红细胞生成素,大剂量组）。在单侧输尿管梗阻术后第3~14天隔天腹膜内注射红细胞生成素,所有大鼠在第14天处死;观察肾组织病理变化;免疫组化检测各组大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白、上皮细胞钙黏蛋白和补体C3的表达。结果 与单侧输尿管梗阻组比较,单侧输尿管梗阻大鼠用红细胞生成素治疗后,梗阻侧肾脏胶原纤维含量明显减少,且大剂量红细胞生成素治疗组减少更明显。与对照组比较,单侧输尿管梗阻组大鼠梗阻侧肾脏肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白大量表达,肾小管上皮细胞钙黏蛋白表达明显减弱,并可见肾小管上皮细胞大量表达C3。与单侧输尿管梗阻组比较,单侧输尿管梗阻大鼠用红细胞生成素治疗后,梗阻侧肾脏肾小管上皮细胞C3和α-平滑肌肌动蛋白表达明显减弱,上皮细胞钙黏蛋白表达明显增强,以上改变在大剂量红细胞生成素治疗组更加明显。结论 红细胞生成素可抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮间充质转分化,减轻肾间质纤维化,这种作用可能与其抑制肾小管上皮细胞补体C3的表达有关。     

人参皂苷Rg1对尿蛋白诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷的单体成分Rg1对尿蛋白(Upro)诱导的肾小管上皮细胞HK2凋亡的作用及机制.方法:体外培养的HK2细胞,用MTT法选择尿蛋白诱导HK2细胞凋亡的适合浓度,将肾小管上皮细胞HK2分为对照组、模型组、Rg1+Upro组、肝细胞生长因子(HGF) +Upro组,检测线粒体膜电位(JC-1)及Rg1的干预作用.结果:一定浓度的尿蛋白能够诱导HK2细胞凋亡,而人参皂苷Rg1能稳定HK2细胞的线粒体膜电位,显著抑制尿蛋白诱导的细胞凋亡(P＜0.05).结论:肾小管上皮细胞凋亡是尿蛋白损伤的一种重要形式,人参皂苷Rg1可以稳定细胞线粒体膜电位,从而抑制尿蛋白诱导细胞凋亡而起到肾小管上皮细胞的保护作用.     

红花黄色素对实验性肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的:探讨红花黄色素对实验性肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法:选取45只雄性SD大鼠作为探讨对象,随机分为单侧输尿管梗阻模型组(A组)、假手术组(B组)和红花黄色素联合单侧输尿管梗阻治疗组(C组),红花黄色素剂量为每天5mg/kg,在大鼠造模之前1d予以腹腔注射,所有大鼠在术后10d处死,并比较三组大鼠肾间质纤维化和肾小管上皮细胞凋亡情况。结果:A组和C组大鼠可见显著肾间质纤维化变化,并发现凋亡细胞;与A组比较,C组大鼠肾间质纤维化改变程度显著减轻(P0.05)。结论:采用红花黄色素腹腔注射疗法有助于保护大鼠肾间质纤维化,该作用机制为对肾小管细胞凋亡。     

益气解毒方对糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞线粒体自噬作用机制

目的:研究益气解毒方对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾小管上皮细胞线粒体自噬作用机制。方法:采用DN大鼠模型,观察益气解毒方对DN的治疗作用。采用苏木素伊红(HE)染色法观察给药后DN大鼠肾脏病理变化,透射电镜观察DN大鼠肾小管上皮细胞线粒体自噬体情况。采用蛋白免疫印迹法检测肾组织中微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associatedprotein1lightchain 3Ⅱ,MAP1LC3-Ⅱ,LC3-Ⅱ),自噬标志物p62蛋白(sequestosome-1,p62),促凋亡蛋白Nix(Bcl-2/E1B 19 k Da-interacting protein 3-like,Nix)的表达,并应用实时荧光定量PCR测定Nix mRNA的表达。结果:与模型组比较,益气解毒方能够增加DN大鼠体重,改善DN大鼠血尿素氮(BUN),血肌酐(SCr),血糖(GLU),甘油三酯(TG)及总胆固醇(CHOL),白蛋白(Alb)等血、尿生化指标(P0.01),并且能抑制由DN导致的肾小管上皮细胞线粒体过度自噬,显著降低LC3-Ⅱ,p62,Nix蛋白的表达(P0.01),同时降低Nix mRNA的表达(P0.01)。结论:益气解毒方对DN有较好的治疗效果,这可能与其调节DN肾小管上皮细胞线粒体自噬紊乱有关。