不同剂量BMSC尾静脉输注对小鼠肺组织纤维化的影响

目的 研究经尾静脉输注不同剂量的骨髓间充质干细胞(BMSC)对小鼠肺纤维化的影响.方法 体外培养雄性转红色荧光蛋白(RFP)基因FVB小鼠BMSC.将24只FVB雌性受体小鼠随机分为正常组、模型组、BMSC治疗1组(BMSC 1组)和BMSC治疗2组(BMSC 2组)(n=6).模型组、BMSC 1组和BMSC 2组小鼠分别经气管内注射博莱霉素制备肺纤维化模型.建模24 h后,BMSC 1组和BMSCs 2组小鼠分别经尾静脉注射BMSC 1×106/只和2×106/只.于建模后第21天处死所有小鼠,制备小鼠肺组织标本.光学显微镜观察病理学变化;激光共聚焦显微镜和免疫组织化学法进行RFP(+)BMSC分布观察和RFP定量分析;免疫组织化学法检测肺表面活性物质蛋白A(SP-A)表达;碱水解法测定羟脯氨酸(Hyp)含量;Real-time PCR检测转化生长因子-β(TGF-β)和血小板衍生生长因子(PDGF)mRNA表达.结果 小鼠肺组织纤维化程度,BMSC 1组较模型组显著减轻,而BMSC 2组较模型组明显加重.BMSC 2组在肺间质纤维化活跃区域可见大量RFP(+)BMSC且其形态类似成纤维细胞.SP-A表达,正常组＞BMSC 1组＞BMSC 2组和模型组(均P<0.05),而BMSC 2组与模型组比较差异无统计学意义(P＞0.05).Hyp含量,正常组＜BMSC 1组＜模型组＜BMSC 2组(P<0.01,P<0.05);TGF-β和PDGF mRNA表达,BMSC 2组＞BMSC 1组＞模型组＞正常对照组(均P<0.05).结论 适量的BMSC尾静脉输注能有效减轻博来霉素诱导的小鼠肺纤维化,而过量的BMSC则可能使其病变加重.     

生存素修饰的骨髓间充质干细胞抑制小鼠肺纤维化

目的 研究经尾静脉移植携带生存素(survivin)基因的骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cell,BMSC)对小鼠肺纤维化的影响.方法体 外构建培养经慢病毒转染绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)及生存素基因的C57BL/6小鼠BMSC-survivin以及经慢病毒转染GFP的C57BL/6小鼠BMSC,并应用流式细胞术比较2种细胞的体外凋亡率.6～8周龄C57BL/6小鼠48只,博莱霉素5 mg/kg气管内灌注制备小鼠肺纤维化模型.随机分为3组:BMSC-survivin组、BMSC组、模型组；造模24 h后,3组分别经尾静脉注射BMSC-survivin、BMSC和生理盐水.每组于第7、28天各处死8只小鼠.肺组织作病理学检查,免疫组织化学法检测肺表面蛋白A的表达；ELISA法测定血清中羟脯氨酸(Hyp)的含量；PCR法检测TGF-31和MMP-9 mRNA表达情况.结果 BMSC及BMSC-survivin细胞凋亡率分别为(14.466±1.953)％和(7.718±0.493)％,给予BMSC干预的小鼠肺病理改变较对照组轻,BMSC-survivin组、BMSC组、模型组肺组织羟脯氨酸含量第7天分别为(0.106 ±0.012)、(0.245±0.009) μg/mL和(0.324 ±0.002) μg/mL,第28天分别为(0.457 ±0.006) 、(0.752 ±0.012) μg/mL和(1.372±0.035) μg/mL;BMSC-survivin组、BMSC组、模型组肺组织SP-A含量第7天分别为(0.718 ±0.018)、(0.669 ±0.013)和(0.581±0.027),第28天分别为(0.433±0.012)、(0.372±0.039)和(0.277±0.013)；各时间点,BMSC-survivin组TGF-β1 mRNA、MMP-9 mRNA含量较BMSC组和模型组低,BMSC组较模型组低(P＜0.05).结论 外源性的BMSC可以减轻肺纤维化,生存素基因能够抑制BMSC的凋亡,延长BMSC减轻肺纤维化的作用.     

小青龙汤对肺纤维化大鼠肺组织的改善作用及机制研究*

目的观察小青龙汤对肺纤维化大鼠肺组织病理变化及肿瘤坏死因子-α（TNF-a）、转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响并探讨其作用机制。方法选取SPF级Wistar雄性大鼠60只，随机数字表法将大鼠分成4组，正常组、模型组、阳性对照组、小青龙汤组，除正常组外，其他3组大鼠制备肺纤维化模型，造模后第2天给药，阳性对照组大鼠灌胃3.15 mg/kg强的松药液，小青龙汤组大鼠灌胃270 mg/kg的小青龙汤药液，正常组和模型组大鼠灌胃等剂量生理盐水，1次/d，连续给药14 d。观察组大鼠一般状况、体质量、肺组织病理变化和肺组织TGF-β1、TNF-α表达。结果给药后第7天、第14天，和正常组相比，模型组大鼠体质量降低；和模型组相比，阳性对照组、小青龙汤组大鼠体质量升高，差异有统计学意义（P<0.05）；和正常组相比，模型组大鼠肺纤维化病理积分升高；和模型组相比，阳性对照组、小青龙汤组大鼠肺纤维化病理积分降低，差异有统计学意义（P<0.05）；和正常组相比，模型组大鼠肺组织TNF-α、TGF-β1表达升高；和模型组相比，阳性对照组、小青龙汤组大鼠肺组织TNF-α、TGF-β1表达降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论小青龙汤可改善肺纤维化大鼠肺组织病理变化，其作用机制可能和降低肺组织TGF-β1、TNF-α表达有关。     

辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏TGF-β系统的影响

目的：探讨辛伐他汀对糖尿病大鼠肾脏转化生长因子β1（TGF-β1）和转化生长因子βⅡ型受体（TβⅡR）表达的影响及其肾脏的保护机制。方法：SD大鼠单次腹腔注射55mg/kg链脲佐菌素(STZ )制备糖尿病大鼠模型。糖尿病大鼠随机分成糖尿病组、辛伐他汀治疗组［4mg/(kg·d)］和正常对照组。用免疫组织化学，RT-PCR和Western印迹法检测16周大鼠肾脏TGF-β1和TβⅡR表达的变化。结果：与正常对照组比较，糖尿病组和辛伐他汀治疗组TGF-β1和TβⅡR表达均增加（P<0.05）。治疗组TGF-β1和TβⅡR表达显著低于糖尿病组（P<0.05）。结论：辛伐他汀可以通过下调TGF-β1和TβⅡR的表达，抑制TGF-β系统信号通路的过度激活，减少糖尿病大鼠尿蛋白，延缓肾脏病变的进展。     

糜酶抑制剂对肺纤维化的干预作用及其机制研究

目的 观察糜酶抑制剂对博莱霉素（BLM）致大鼠肺纤维化模型干预作用及对糜酶、转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA表达的影响,并探讨糜酶参与肺纤维化的机制。方法 健康SD雌性大鼠60只随机分3组：正常对照组（生理盐水）、模型组（博莱霉素）、干预组（博莱霉素＋糜酶抑制剂）,每组20只。分别在第7、14、21、28天处死,每组检测5只大鼠,观察支气管肺组织病理改变,支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞计数及分类,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测肺组织糜酶和TGF β1mRNA表达的含量。结果 ① 干预组、模型组较对照组肺泡炎程度明显加重,但干预组和模型组相差不明显;② 干预组、模型组较对照组纤维化明显增高,干预组较模型组纤维化明显减轻;③ 干预组和模型组大鼠的BALF中白细胞总数、巨噬细胞、中性粒细胞及淋巴细胞构成与对照组差异有统计学意义（P＜0,01）,干预组的中性粒细胞在第7和14天比模型组减少（P＜0,01,P＜0,05）;④ 模型组和干预组肺组织中糜酶、TGF-β1的mRNA的表达持续增强,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0,01）,干预组比模型组表达明显减少（P＜0,01）。结论 糜酶抑制剂能减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,其主要机制是通过下调糜酶、TGF-β1的mRNA的表达发挥作用。     

雾化吸入布地奈德干预肺纤维化大鼠及其机制的实验研究

目的：探讨雾化吸入布地奈德对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的影响及其可能机制。方法：45只SD雌性大鼠随机分为3组（各组15只）：对照组、模型组和干预组,肺纤维化模型行气管内滴入博莱霉素造模。干预组造模后第7天雾化吸入布地奈德,模型组和对照组雾化吸入等量生理盐水,雾化后第7天、第14天、第28天各组随机处死5只动物并分别保存肺组织,HE和Masson染色判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度;免疫组化染色测定肺组织转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）的表达水平;RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平。结果：肺组织病理学观察显示对照组肺泡炎和肺纤维化程度明显轻于模型组和干预组,干预组较模型组有明显改善;模型组和干预组肺组织中TGF-β和CTGF水平较对照组均有明显增高（P<0.05）,但干预组较模型组表达减少（P<0.05）;模型组Ⅰ、Ⅲ型胶原表达明显高于对照组（P<0.05）,而干预组较模型组表达明显减少（P<0.05）。结论：布地奈德具有明显的抗纤维化作用,机制可能为通过抑制细胞因子的表达而减少肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原的生成,最终抑制肺纤维化。     

LRC5调节转化生长因子-β1诱导的肝星状细胞活化及逆转对肝纤维化的影响

背景　肝纤维化是多种慢性肝病的共同病理改变。在肝纤维化过程中,转化生长因子-β1（TGF-β1）高度表达,诱导肝星状细胞（HSC）活化并促进纤维化的进展。NLRC5作为最主要的核苷酸结合寡聚化结构域NOD样受体（NLRs）家族成员,是炎症途径中的重要负性调节因子。有证据表明,NLRC5是肝纤维化及其逆转的关键调节因子,可以通过调节炎症信号和肝纤维化反应参与肝纤维化的发展及逆转。目的　探讨NLRC5在TGF-β1诱导的HSC活化及逆转中的作用,并分析其与肝纤维化的关系。方法　2018年3-7月选取24只8周龄雄性C57BL/6小鼠（体质量15~20 g）,根据随机数字表法分为实验组、正常对照组和逆转组,每组8只。实验组和逆转组建立肝纤维化模型,然后处死小鼠,进行HE、Masson染色和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化,观察各组肝纤维化程度;检测小鼠肝组织NLRC5及其mRNA、磷酸化抑制蛋白α IκBα（P-IκBα）、IκBα、胞质p65、核p65水平。体外培养LX-2细胞,将培养的细胞分为对照组、TGF-β1组及TGF-β1+MDI组;检测各组LX-2细胞中α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原α1（Col1α1）及其mRNA水平,NLRC5及其mRNA水平。siRNA干扰NLRC5后,将激活的LX-2细胞分为NLRC5-siRNA组、Control-siRNA组及正常细胞组,检测NLRC5及其mRNA、α-SMA、Col1α1、P-IκBα、IκBα、胞质p65、核p65。结果　HE染色结果显示正常对照组肝细胞索排列整齐,无坏死变性、炎性细胞浸润现象;实验组小鼠肝组织存在点状坏死和再生现象,可见脂肪变性、气球样变性;逆转组可见肝脏恢复红润,结构趋于正常。Masson染色结果显示与正常对照组相比,实验组小鼠镜下可见大量蓝色胶原纤维;而逆转组胶原纤维增生相比实验组有一定程度的改善。实验组小鼠肝组织中α-SMA阳性细胞比例高于正常对照组和逆转组（P<0.05）。实验组小鼠肝组织中NLRC5、NLRC5 mRNA水平高于正常对照组、逆转组（P<0.05）。实验组小鼠肝组织P-IκBα、核p65水平高于正常对照组及逆转组,胞质p65水平低于正常对照组及逆转组（P<0.05）。TGF-β1组LX-2细胞的α-SMA、Col1α1及其mRNA水平均高于对照组、TGF-β1+MDI组（P<0.05）。TGF-β1组LX-2细胞中NLRC5及其mRNA水平高于对照组、TGF-β1+MDI组（P<0.05）。NLRC5-siRNA组NLRC5水平（0.679±0.045）低于Control-siRNA组（1.260±0.071）（P<0.001）。NLRC5-siRNA组α-SMA、Col1α1及其mRNA水平低于Control-siRNA组,高于正常细胞组（P<0.05）。NLRC5-siRNA组P-IκBα和核p65水平高于正常细胞组和Control-siRNA组,胞质p65水平低于正常细胞组和Control-siRNA组（P<0.05）。结论　NLRC5可调节TGF-β1诱导的HSC活化和细胞外基质（ECM）合成,并可以调节和干扰与肝纤维化相关的关键过程,其可能通过核因子（NF）-κB信号通路在调节肝纤维化进展及逆转中起关键作用。     

丹酚酸B对人肺成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白表达的影响及其机制

目的：观察丹酚酸B（Sal B）对人肺成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1) / Smad信号通路相关蛋白表达的影响,探讨其抑制TGF-β1活化肺成纤维细胞作用的信号机制。方法：体外培养人胚肺成纤维细胞MRC-5,随机分为对照组（未加入TGF-β1或Sal B）、 Sal B(10 μmol•L^-1)组、 TGF-β1(10 μg•L^-1)组和TGF-β1（10 μg•L^-1）+ Sal B（10μmol•L^-1）组。Western blotting 法检测各组细胞内p-Smad2、p-Smad3、TGF-βⅠ型受体（TβRⅠ）和Smad7蛋白表达。结果：与对照组比较,TGF-β1组细胞内p-Smad2、p-Smad3和TβRⅠ蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）,Smad7蛋白表达水平明显下降（P<0.05）;与对照组比较, Sal B组细胞内p-Smad2、p-Smad3、TβRⅠ和 Smad7蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）;与TGF-β1组比较,TGF-β1 + Sal B组细胞内p-Smad2、p-Smad3和TβRⅠ蛋白表达水平均下降（P<0.05）,Smad7蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：Sal B能够通过抑制肺成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路,从而发挥其抑制TGF-β1活化肺成纤维细胞的作用。     

麦门冬汤对肺纤维化模型大鼠肺组织转化生长因子β1和基质金属蛋白酶9及基质金属蛋白酶组织抑制剂1表达的影响研究

目的　探讨麦门冬汤对肺纤维化模型大鼠转化生长因子β1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和基质金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP-1）表达和肺组织病理变化的影响。方法　2016年11月—2017年10月,选取80只雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为4组,每组各20只。空白组予蒸馏水1.1 ml/100 g灌胃;模型组造模24 h后予蒸馏水1.1 ml/100 g灌胃;麦门冬汤组造模24 h后予麦门冬汤（1.1 g?ml-1?100 g-1）,1次/d灌胃治疗;泼尼松组造模24 h后予泼尼松（5 mg/kg）,1次/d灌胃治疗。每组分别于造模后第7、14天处死10只大鼠取肺组织,HE和Masson染色法评估肺组织肺泡炎症和纤维化程度,免疫组化法检测TGF-β1、MMP-9、TIMP-1表达水平。结果　麦门冬汤组第7天肺实质内表现为细支气管上皮细胞肿胀,出现空泡变化,呈轻、中度肺泡炎改变;第14天可见炎症、纤维化程度增加。模型组肺组织结构紊乱,小血管周围见深蓝色成熟胶原纤维的显著沉积,在第14天尤为明显,其中肺泡间隔和肺泡壁明显增厚,肺间质中胶原纤维增厚。但麦门冬汤组及泼尼松组第7、14天胶原纤维沉积较为缓慢。第7、14天,麦门冬汤组肺泡炎症积分及纤维化程度均低于模型组,TGF-β1、MMP-9和TIMP-1表达水平均低于模型组（P<0.05）,而与泼尼松组无差异（P>0.05）。结论　麦门冬汤在肺纤维化模型大鼠中显示出缓解肺泡炎症和抗纤维化特性,其机制可能是抑制肺组织中TGF-β1、MMP-9与TIMP-1表达水平,从而调整细胞外基质的异常代谢。     

吡非尼酮下调NOX4减轻由博来霉素诱导的小鼠肺纤维化

目的 观察NOX4在博来霉素诱导的小鼠纤维化肺中的表达及其意义,探讨PFD对NOX4表达的影响。方法 72只C57健康雌性小鼠采用数字表法随机分为PFD干预组(A组)、模型组(B组)、正常对照组(C组)3组,每组各18只。采用气管内注入博来霉素(3.5mg/kg)的方法构建小鼠肺纤维化模型。小鼠肺组织行病理切片HE和Masson染色,检测肺组织羟脯氨酸(Hyp)含量,免疫组织化学方法检测NOX4在肺组织中的表达。结果 Masson染色显示:造模后B组于第7天、第14天、第28天3个时间点肺纤维化评分较C组均增加(P<0.05);A组肺纤维化评分较B组降低(P<0.05)。造模第7、14、28天3个时间点B组肺组织Hyp含量较C组均增高(P<0.05);A组肺组织Hyp含量较B组减低(P<0.05)。免疫组化显示造模第7、14、28天3个时间点B组小鼠肺组织均可见在气道平滑肌细胞、上皮细胞、肺泡上皮细胞,以及血管平滑肌细胞、内皮细胞,肺成纤维细胞中NOX4广泛的强表达;C组NOX4表达较B组弱(P<0.05);A组NOX4表达较B组减弱(P<0.05)。结论 NOX4在肺组织广泛表达,其表达上调可能与博来霉素诱导的肺纤维化形成相关。PFD可下调NOX4表达,提示NOX4有望成为治疗肺纤维化的新靶点。     

骨髓间充质干细胞移植对矽肺大鼠肺纤维化的作用

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对矽肺大鼠肺组织纤维化的影响.方法 将42只SD雌性大鼠分为A、B、C、D组.A、B和C组采用暴露式气管内一次性缓慢注入二氧化硅(SiO2)混悬液建立矽肺大鼠模型,D组则注入生理盐水.B、C组分别于造模后6 h或第42天经尾静脉注射BMSCs.第14天,A、B和D组分别处死大鼠各6只,第56天各组分别处死6只.HE染色观察肺组织形态学变化,ELISA检测肺组织羟脯氨酸(Hyp)水平.结果 A组在造模后第14天,肺组织病理改变以急性炎症反应为主,第56天以纤维化为主;B、C组病理改变均较同时期A组轻;D组未见明显异常.肺组织中Hyp水平,A、B和C组均较D组明显升高(P=0.000);B、C组与A组比较,在BMSCs治疗后第14天均明显减低(P=0.000、0.035),B组在治疗后第56天仍明显减低(P=0.016).结论 不论在以肺泡炎为主还是在以纤维化为主的病理阶段予BMSCs移植,均可以延缓矽肺大鼠肺纤维化的病理进程.     

抑制Notch1/Jagged1通路可促进大鼠骨髓间充质干细胞"归巢"并改善哮喘

目的 观察间充质干细胞（BMSCs）归巢调节哮喘Th1/Th“2 漂移”与Notch1/Jagged1通路的关系。方法 20只SD大鼠用随机数字表法均分为4组：正常对照组（NC）、模型对照组（MC）、BMSCs移植组（BMSCs）、BMSC+Notch抑制剂组。采用卵清蛋白致敏和激发建立哮喘模型,尾静脉注射BMSCs。HE染色观察肺组织病理形态学,酶联免疫吸附法检测肺组织白介素（IL）-5、IL-13、IFN-γ,RT-PCR法检测肺组织Notch1、Jagged1基因表达,免疫荧光染色检测支气管上皮细胞中CXCR4蛋白表达,免疫印迹法检测肺组织T-bet、GATA-3、Notch1、Jagged1蛋白表达。结果 与NC组比较,MC组IFN-γ、T-bet蛋白表达降低,IL-5、IL-13、GATA-3蛋白表达升高,Notch1、Jagged1mRNA和蛋白表达升高（P<0.05或P<0.01）。与MC组比较,BMSCs组、BMSCs+Notch抑制剂组CXCR4、IFN-γ、T-bet蛋白表达量显著升高,BMSCs组Notch1、Jagged1 蛋白表达降低,BMSCs+Notch抑制剂组IL-5、IL-13、Notch1、Jagged1mRNA和蛋白降低（P<0.05或P<0.01）。与BMSCs组比较,BMSCs+Notch抑制剂组CXCR4、IFN-γ表达升高,IL-13、Notch1mRNA表达降低（P<0.05）。结论 BMSCs向哮喘肺组织归巢对Th1/Th2“漂移”产生调节作用,Notch1/Jagged1通路可能参与其过程。     

蒿鳖养阴软坚方通过激活Nrf2/NQO1信号通路抑制肝纤维化发生

目的:探讨蒿鳖养阴软坚方通过激活Nrf2/NQO1信号通路对四氯化碳复合因素所致大鼠肝纤维化的抑制作用。方法:选用健康Wistar大鼠作为研究对象,将大鼠随机分为正常组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和秋水仙碱组。除正常组大鼠外,其余大鼠均给予自制高脂饲料饲养,每周两次皮下注射40%CCl₄花生油混合溶液,隔日灌胃给予30%乙醇,各给药组每日灌胃给药的同时给予正常组和模型组以等容积的蒸馏水,直至造模时间（共6周）结束后,乌拉坦麻醉大鼠并收集肝组织标本,比色法检测肝组织中羟脯氨酸（Hyp）的含量,免疫组织化学法检测各组大鼠肝组织中Nrf2和NQO1的分布情况,Western blot法检测各组大鼠肝组织中Nrf2和NQO1的表达水平。结果:与正常组相比,模型组Hyp含量明显升高（P<0.05）;各给药组的Hyp含量显著低于模型组,且肝组织中Nrf2和NQO1的表达水平显著升高（P<0.05）。结论:蒿鳖养阴软坚方可以通过激活Nrf2/NQO1通路,上调Nrf2和NQO1的表达,降低肝组织中Hyp的含量,从而发挥抑制由四氯化碳复合因素所致大鼠肝纤维化的作用。     

微波对骨折愈合过程中骨髓间充质干细胞迁移能力的影响

目的 探讨微波电疗法对骨折愈合过程中骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移能力的影响.方法 将30只SD大鼠建骨折模型后随机分成两组(对照组、实验组各15只),实验组微波治疗30 d,对照组不予治疗,采用X线平片观察第10天及第30天两组大鼠骨折愈合的情况;另取3只SD大鼠分离BMSC体外培养,对照组正常培养,实验组进行0.5 W/cm2微波照射60 min,采用划痕实验、transwell小室实验评价两组BMSC的迁移能力;采用Western-blot检测两组BMSC中HIF-1、VEGF、FGF、PDGF、IGF-1的表达.结果 X线平片结果表明照射第10天对照组与实验组射线相对密度分别为(0.81±0.10)和(0.94±0.13),差异有统计学意义(P=0.02),而第30天两组分别为(0.96±0.12)和(0.99±0.09),差异无统计学意义.划痕实验对照组距离基线迁移距离(192±15)μm,实验组迁移距离(430±21) μm,差异具有统计学意义(P=0.01).Transwell小室实验对照组迁移细胞数(68±18)个,实验组迁移细胞数(112±25)个,差异具有统计学意义(P=0.02).Western blot结果表明,与对照组比较,实验组BMSC中HIF-1及VEGF表达显著升高(均P＜0.05),而FGF、PDGF、IGF-1表达两组间差异不显著.结论 微波可能通过促进骨髓间充质干细胞迁移而影响骨折愈合.     

Combinatorial effects of NaomaiYihao Capsules(脑脉一号胶囊) and vascular endothelial growth factor gene-transfected bone marrow mesenchymal stem cells on angiogenesis in cerebral ischemic tis sues in rats

OBJECTIVE:To investigate the combinatorial effects of Naomai Yihao(NMYH) Capsules(脑脉一号胶囊) and vascular endothelial growth factor(VEGF) gene-transfected bone marrow mesenchymal stem cells(BMSCs) on angiogenesis in cerebral ischemic tissues in rats and the mechanism.METHOD:BMSCs were isolated and cultured from bone marrow by an adherence method.Then,BMSCs were transfected with the eukaryotic expression plasmid pEGFP-VEGF 165 by positive ionic liposome transfection.A rat model of middle cerebral artery occlusion(MCAO) was established.Rats were allocated to six groups:model,BMSC,VEGF gene-transfected BMSC transplantation(BMSC/VEGF),NMYH,combined NMYH and BMSC/VEGF(combined treatment group) and sham operation groups.The behavioral rating score(BRS) of rat and the expression of CD34 and VEGF in brain tis sue were measured by immunohistochemistry on days 7,14 and 21 after reperfusion.Angiogenesi was observed and evaluated with laser scanning confocal microscopy.RESULTS:The BRS of rats in NMYH,BMSC transplan tation and combined treatment groups was significantly lower than that of the model group(P< 0.001),with no significant difference between NMYH and transplantation groups(P=0.619).The expression of CD34 andVEGF in NMYH,transplanta tion and combined treatment groups increased(P< 0.001),with a significant difference between NMYH and transplantation groups(P<0.001).The blood vessel area in NMYH,transplantation and com bined treatment groups was significantly increased(P<0.05),without a significant difference between NMYH and transplantation groups(P=0.873).CONCLUSIONS:VEGF gene-transfected BMSCs im prove angiogenesis in the cerebral ischemic area NMYH Capsules promote angiogenesis in MCAO rats treated with BMSC transplantation,which show an improved BRS.The mechanism of angio genesis may be related to up-regulation ofVEGF ex pression.     

外源性肺表面活性物质对离体鼠肺缺血再灌注损伤的作用

目的观察外源性肺表面活性物质(PS)对实验性肺缺血再灌注损伤的防治效果并探讨其发生机制.方法将30只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组(n=10)、缺血再灌注组(n=10,I/R组)和缺血再灌注PS干预组(n=10,PS组).建立大鼠离体肺缺血再灌注损伤模型,分别测定缺血2 h再灌注2 h(I/R组)及缺血2 h气管内注入PS后再灌注2 h(PS组)的肺动脉压、肺湿/干重比;免疫组织化学方法测定肺组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和肺表面活性蛋白A(SP-A)的变化;光、电镜观察肺病理学改变.结果I/R组肺动脉压和肺湿/干重比显著高于PS组(P＜0.01),且PS组出现大量eNOS、SP-A阳性反应信号,与I/R组相比差异有显著性(P＜0.05).显微、超微结构证实给予PS后肺血管内皮及肺泡上皮的病理变化明显减轻.结论离体大鼠肺缺血后再灌注前给予PS可显著减轻再灌注后肺水肿,降低肺动脉压.其作用机制可能与PS减少SP-A破坏,进而刺激eNOS产生有关.     

Effect of oxymatrine on the p38 mitogen-activated protein kinases signalling pathway in rats with CCl4 induced hepatic fibrosis

Background Recent studies have suggested that p38 mitogen-activated protein kinases （MAPK） signalling pathway plays an important role in hepatic fibrosis. This study explored the antifibrotic effect of oxymatrine on tetrachloromethane induced liver fibrosis in rats and its modulation on the p38 MAPK signalling pathway. Methods One hundred and twenty healthy male Sprague-Dawley rats were randomly assigned to six groups： normal （n=20）, induced fibrosis （n=20）, colchicine （n=20） and three treatment groups of oxymatrine （n=20x3）. We obesrved changes in deposition of collagen, hyaluronic acid （HA）, laminin （LN）, collagen type IV （CIV）, procollagen III （PCIll） and hydroxyproline （Hyp）, a-smooth muscle actin （α-SMA） and phosphor-p38 （pp38）. Results The relative indicators of changes in histopathology, HA, LN, CIV, PCIII, Hyp, a-SMA and pp38 were raised significantly in the induced fibrosis group （P〈0.01 vs normal group）. The semiquantitative hepatic fibrosis staging scores of middle dose group and high dose group were decreased （P 〈0.05 and P 〈0.01 respectively vs the induced fibrosis group）, as was the average area of collagen in rats＇ liver, the concentrations of serum HA, LN, CIV, PCIII and liver tissue homogenate Hyp. The gene expression of α-SMA mRNA was considerably decreased in the treated animals, as was the protein espression of pp38 protein. Conclusions Oxymatrine is effective in reducing the production and deposition of collagen in the liver tissue of experimental rats in ways which relate to modulating the fibrogenic signal transduction via p38 MAPK signalling pathway.     

盐酸戊乙奎醚对急性坏死性胰腺炎肺损伤大鼠HMGBI、SP-A表达的影响

目的:观察盐酸戊乙奎醚(PHCD)对大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤高迁移率族蛋白B1(HMGBl)、肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)表达的影响,探讨PHCD对急性坏死性胰腺炎肺损伤大鼠的治疗价值。方法:随机将100只SD大鼠分成模型组(急性坏死性胰腺炎组)和PHCD组。两组分别制模后随机再分为6h、12h、24h、36h、48h亚组,每组10只。采用酶联免疫吸附法测定血清HMGB1、SP-A浓度和肺泡灌洗液(BALF)中SP-A浓度。结果:PHCD组各时间点血清HMGB-1、SP-A浓度均较ANP组相同时间点明显降低(P均<0.01),同时PHCD组BALF中SP-A浓度显著增高(均P<0.01)。结论:PHCD通过抑制血清HMGB1、SP-A的表达,增加BALF中SP-A的表达,对大鼠急性坏死性胰腺炎肺损伤具有疗效。     

Effects of insulin-like growth factor binding protein-related protein 1 in mice with hepatic fibrosis induced by thioacetamide

Background Insulin-like growth factor binding protein-related protein 1 （IGFBPrP1） can activate hepatic stellate cells and increase extracellular matrix （ECM） in vitro. However, the effects of IGFBPrP1 in mice with hepatic fibrosis, and the mechanisms of these effects, are currently unknown. We aim to address these issues in this study. Methods Intraperitoneal injection of thioacetamide （TAA） is a classic method for establishing a mouse model of hepatic fibrosis. Using this model, we administered anti-IGFBPrP1 antibody, again via intraperitoneal injection. The morphological changes of liver fibrosis were observed with both HE and Masson stainning. The immunohistochemical assays and Western blotting were used to measure changes in IGFBPrP1, a-smooth muscle actin （a-SMA） and ECM in liver tissues, and the expression of transforming growth factor-β1 （TGF-β1） and Smad3. Data were statistically analyzed using one-way analysis of variance （ANOVA）, the SNK-q test for inter-group differences. Results The Masson staining analysis showed that compared with normal control group, content of collagen fiber in TAA5w group was significantly increased （P 〈0.01）, and it was significantly decreased in TAA5w/alGFBPrP1 group compared with in TAA5w group （P 〈0.01）. The expression of hepatic IGFBPrP1, a-SMA, TGF-β1, Smad3, collagen 1 and fibronectin （FN） was significantly up-regulated in the TAA5w group （P 〈0.01）. Anti-IGFBPrP1 treatment reversed these changes （P 〈0.01）. Conclusions IGFBPrP1 plays an important role in the development of hepatic fibrosis. Anti-IGFBPrP1 prevents fibrosis in mice by suppressing the activation of hepatic stellate cells, inhibiting the synthesis of major components of the ECM （namely, collagen I and FN）. The mechanism for this suppression of fibrosis is associated with the TGF-β1/Smad3 signaling pathways.     

PDGF/ROCK通路在AcSDKP抑制大鼠矽肺纤维化形成中的作用

目的:探讨血小板源性生长因子/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(PDGF/ROCK)通路在肺纤维化发病机制中的作用以及N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)能否通过对PDGF/ROCK的调节而发挥抗矽肺纤维化作用。方法:采用非暴露式气管二氧化硅混悬液灌注法制备大鼠矽肺模型。60只SPF级健康成年Wistar 大鼠随机分为模型对照4周组、模型对照 8 周组、矽肺模型 4 周组、矽肺模型 8 周组、AcSDKP 治疗组和AcSDKP预防治疗组,每组10 只。免疫组织化学染色法检测各组大鼠肺组织中phospho-PDGFR-β的表达与分布,Western blotting法检测各组大鼠肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、PDGFR-β、phospho-PDGR-β、ROCK、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达。 结果:与相应模型对照组比较,矽肺模型组大鼠肺组织中α-SMA、PDGFR-β、phospho-PDGFR-β、ROCK以及Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);形态学检测可见较多的phospho-PDGFR-β阳性表达细胞分布在矽结节与间质纤维化区域。与矽肺模型4周组和模型8周组比较,AcSDKP 治疗组和预防治疗组大鼠肺组织中α-SMA、PDGF-β、phospho-PDGFR-β、ROCK、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);免疫组织化学染色,phospho-PDGFR-β蛋白表达明显减少。 结论:PDGF介导的ROCK信号转导通路可能通过促进大鼠肌成纤维细胞转化而促进矽肺大鼠肺组织中的胶原合成,进而促进矽肺纤维化的形成。AcSDKP 可能通过PDGF/ROCK通路抑制矽肺大鼠肺内肌成纤维细胞的分化,减少其胶原的合成与分泌,进而发挥抗矽肺纤维化的作用。